用LSD1抑制剂治疗LSD1相关疾病和病症的方法与流程

用lsd1抑制剂治疗lsd1相关疾病和病症的方法
技术领域
1.本发明涉及根据一种或多种特定给药方案使用lsd1抑制剂治疗患有lsd1相关疾病或病症的患者的方法。本发明在多个方面还包括lsd1抑制剂，以及制备此类lsd1抑制剂和组合物的方法，包括包含此类lsd1抑制剂的药物组合物，以及它们的各种用途。


背景技术：

2.组蛋白甲基化修饰是调节基因表达的表观遗传学机制之一。组蛋白甲基化修饰调节各种过程，包括但不限于细胞维持、生长和分化。
3.lsd1(kdm1a)是调节组蛋白甲基化修饰的酶之一，是一种依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸(fad)的组蛋白去甲基酶，主要使组蛋白h3上4位的赖氨酸残基(k4)和9位的赖氨酸残基(k9)去甲基化(非专利文献(npl)1)。lsd1具有这些功能，被认为对基因转录的各个方面都有积极或消极的调节作用，并在正常组织类型中调节干细胞的自我更新和细胞分化。
4.一般来说，细胞自我更新能力或分化的异常被认为会导致细胞恶性转化。因此，在这些过程中起关键作用的lsd1的异常控制可能会导致细胞恶性转化。事实上，就各种实体癌和血癌而言，关于lsd1过度表达与预后的相关性已有许多报道(npl 2)。此外，在来自癌症或非临床模型的细胞系中，lsd1抑制已被报道导致细胞分化诱导、生长抑制和体内抗肿瘤效应(npl 3和npl 4)，这强烈表明lsd1是癌症治疗中的重要靶分子之一。lsd1参与的这些癌症，如小细胞肺癌(sclc)和急性髓系白血病(aml)，预后极差，现有的治疗方法未能使患者获得满意的治疗效果。
5.因此，lsd1抑制药物有望提供基于新的机制来治疗目前尚无治疗方法的难治性癌症的的有效治疗手段。
6.此外，根据一些报道，参与神经元程序和功能的lsd1也可能成为治疗癌症以外疾病的靶点，如阿尔茨海默氏病、亨廷顿氏舞蹈病、rett综合征和其他颅神经疾病(npl 2)；涉及lsd1功能的疱疹病毒感染(npl 5)；和镰状细胞病(npl 6)。
7.已有一些在临床试验中施用lsd1抑制剂的报道。lsd1抑制剂分为两类：共价结合fad的lsd1抑制剂和与底物组蛋白h3竞争的lsd1抑制剂。对于前一种共价型，最典型的给药方案是每日连续施用。例如，在急性髓系白血病的1期研究和骨髓增生异常综合征的1/2期研究中每日连续施用共价型lsd1抑制剂gsk-2879552(glaxosmithkline plc)(npl7)。在实体瘤非小细胞肺癌(nsclc)和结肠癌的1/2期研究中，在21天的周期中每日连续施用另一种共价型lsd1抑制剂incb-59872(incyte corp)，在镰状细胞病的1期研究中则是每日连续施用(npl8)。其他典型的给药方案包括每隔1天或2天间歇施用。例如，在急性髓系白血病的1/2a期研究中，按4周的给药方案施用另一种共价型lsd1抑制剂ory-1001/ro7051790(oryzon genomics)，上述给药方案由4个连续给药5天、随后是两天间隔期期的周期组成(npl9)。在上述incb-59872的研究中，在镰状细胞病的1期研究也采用了每隔一天的给药方案(quaque otra die:qod(npl10))。另一方面，cc-90011是一种独特的lsd1抑制剂，与底物组蛋白h3竞争，药代动力学半衰期长(约71小时，即约3天)，以在28天(4周)的周期内每周给药一次的给
药方案使用(npl 11)。
8.本说明书中所有引用的披露均通过引用明确地全文并入本文。
9.引用列表
10.专利文献
11.ptl 1:wo2017/090756
12.非专利文献
13.npl 1:biochim.biophys.acta,1829(10),pp.981-986(2013)
14.npl 2:epigenomics,7(4),pp.609-626(2015)
15.npl 3:cancer cell,21(4),pp.473-487(2012)
16.npl 4:cancer cell,28(1),pp.57-69(2015)
17.npl 5:sci.transl.med.,6(265),265ra169(2014)
18.npl 6:nat.med.,19(3),pp.291-294(2013)
19.npl 7:nct02177812
20.npl 8:nct02959437
21.npl 9:ash 2016(4060)
22.npl 10:nct03132324
23.npl 11:annals of oncology,volume 30,issue supplement_5,october 2019,mdz256.003,https://doi.org/10.1093/annonc/mdz256.003


技术实现要素：

24.化合物4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈(在本文中称为化合物a)已知是强效的lsd1抑制剂(pl 1)。该化合物是一种与底物组蛋白h3竞争的lsd1抑制剂。本领域尚未描述化合物a的给药方案或剂量方案。
[0025]
解决问题的方案
[0026]
本发明在多个方面包括通过利用特定的给药方案施用有效量的化合物a来治疗有需要的患者中lsd1相关疾病或病症的方法。
[0027]
本技术的发明人已经发现，持续施用化合物a显示出抗肿瘤效果，但同时可能导致一个或多个不良事件或副作用，例如骨髓抑制和/或体重减轻。发明人进行了广泛的研究，结果发现，将化合物a连续施用一段特定的时间，随后为一段特定长度的不施用化合物a的间歇期，在不良事件和副作用更少的同时实现了抗肿瘤效果。本发明基于这一预料不到的令人惊讶的发现。
[0028]
在一实施方式中，治疗患有lsd1相关疾病或病症的患者的方法包括：按照连续每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者。
[0029]
在另一实施方式中，治疗患有lsd1相关疾病或病症的患者的方法包括：按照连续每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所
述患者。
附图说明
[0030]
【图1a】图1a是说明接受给药1周 停1周(1-week on 1-week off)的给药方案的第i组受试者样本中血小板数量的图。左侧空白柱显示试验化合物a 0mg/kg(溶媒作为对照)治疗的动物的值，右侧填充柱显示试验化合物a 16mg/kg治疗的动物的值。“周”列“1”、“2”、“3”和“4”分别显示第8天、第15天、第22天和第29天获得的样本值。误差条：与平均值的标准偏差，ne：未检出。
[0031]
【图1b】图1b是说明接受给药1周 停1周的给药方案的第i组受试者样本中嗜中性粒细胞数量的图。左侧空白柱显示试验化合物a 0mg/kg(溶媒作为对照)治疗的动物的值，右侧填充柱显示试验化合物a 16mg/kg治疗的动物的值。“周”列“1”、“2”、“3”和“4”分别显示第8天、第15天、第22天和第29天获得的样本值。误差条：与平均值的标准偏差，ne：未检出。
[0032]
【图2a】图2a是说明接受给药2周 停1周(2-week on 1-week off)的给药方案的第ii组受试者样本中血小板数量的图。左侧空白柱显示试验化合物a 0mg/kg(溶媒作为对照)治疗的动物的值，右侧填充柱显示试验化合物a 16mg/kg治疗的动物的值。“周”列“2”和“3”分别显示第15天和第22天获得的样本值。误差条：与平均值的标准偏差。
[0033]
【图2b】图2b是说明接受给药2周 停1周的给药方案的第ii组受试者样本中嗜中性粒细胞数量的图。左侧空白柱显示试验化合物a0mg/kg(溶媒作为对照)治疗的动物的值，右侧填充柱显示试验化合物a 16mg/kg治疗的动物的值。“周”列“2”和“3”分别显示第15天和第22天获得的样本值。误差条：与平均值的标准偏差。
[0034]
【图3】图3是异常嗜中性粒细胞系骨髓细胞(箭头所示)的照片。
[0035]
【图4a】图4a是异常巨核细胞的照片。
[0036]
【图4b】图4b是异常巨核细胞的照片。
[0037]
【图5】图5是显示对照组、连续组、第i组和第ii组的肿瘤体积的图。***：p《0.001，dunnett t检验，n.s.：无显著性，aspin-welch t检验，误差条：se：标准误差
[0038]
【图6】图6是显示对照组、连续组、第i组和第ii组的体重变化的图。误差条：se：标准误差；
具体实施方式
[0039]
本发明在多个方面包括通过按照包括连续每日给药一段时间、随后为不给药的特定间歇期的给药方案施用抗肿瘤剂来治疗以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法。在一实施方式中，治疗以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法包括将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈(“化合物a”)或其盐施用于有需要的患者。在一些实施方式中，所述方法涉及按照包括连续每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案施用化合物a或其盐。在一些实施方式中，所述方法涉及按照包括连续每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案施用化合物a或其盐。
[0040]
4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈的结构如下所示：
[0041]
【化合物1】
[0042][0043]
在本技术中，上述化合物被描述为“化合物a”。化合物a被描述为pct公开第wo2017/090756号的实施例化合物37，在此将其公开全部并入作为引证。化合物a可通过本领域的任何已知方法制备，包括但不限于pct公开第wo2017/090756号中所述的方法，在此将其公开全部并入作为引证。
[0044]
本文所述的新治疗方法表现出在实现抗肿瘤效果的同时减少一个或多个不良观察结果(例如副作用、不良反应或不良事件，例如体重减轻和/或骨髓抑制)的效果。在示例实施方式中，施用抗肿瘤剂，持续一周或两周的给药期，随后为持续一周的间歇期。这一令人惊讶和预料不到的发现使得能够在副作用减少的情况下长期施用化合物a，最终有助于延长生存期和/或延长无进展生存期。
[0045]
本文所述的包括连续给药一周、随后为一周间歇期的给药方案在减少一个或多个不良事件或副作用方面表现出优势。
[0046]
另外可选地，本文所述的包括连续给药两周、随后为一周间歇期的给药方案在包括降低毒性的药物安全性方面表现出优势。
[0047]
在本发明中，给药方案不受具体限制，只要其包括一周或两周的连续给药期、随后为一周间歇期即可。当由一周(7天)的连续给药、随后为一周(7天)间歇期组成的两周(14天)的给药方案被定义为一(1)个周期时，该周期可以进行一次或重复两次以上，以治疗疾病或病症。也就是说，可以在一个周期中或多个周期中进行给药，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个周期或更多的特定给药方案。在一些实施方式中，可以在包括多个周期的长时间内进行给药。例如，可以进行具有约13至15个治疗或给药周期的6个月的给药；具有约25或26个治疗周期的1年的给药；具有约75至100个或更多治疗周期的3年的给药。当三周(21天)的给药方案(由两周(14天)给药、和随后的一周(7天)间歇期组成)被定义为一(1)个周期时，该周期可以进行一次或重复两次以上。也就是说，可以在一个周期中或多个周期中进行给药，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个周期或更多的给药方案。在某些情况下，可以以更多的周期进行给药。例如，可以进行具有约10个周期的6个月的给药；具有约20个周期的1年的给药；具有约50至60个周期的3年的给药；或具有更多周期的更长期的给药。
[0048]
此外，在本发明的给药方案中，只要按照一周或两周的连续给药期、随后为一周间歇期的方案继续给药，此后可以停止给药，在一段时间的休药假(不给药)后，可以重新开始给药。类似地，本发明的给药方案可以包括具有多个休药假的方案。在具有休药假的给药方案的一个实施方式中，在休药假之前的给药期和休药假之后的给药期内满足“一周或两周连续给药、随后为一周间歇期”的条件即可。在具有两段休药假的给药方案的另一实施方式中，在第一段休药假之前的给药期内，在两段休药假之间的给药期内，以及在第二段休药假
之后的给药期内，满足“一周或两周连续给药、随后为一周间歇期”的条件即可。在具有两段以上休药假的给药方案的另一实施方式中，在第一段休药假之前的给药期内，在两段相邻休药假之间的给药期内，以及最后一段休药假之后的给药期内，满足“一周或两周连续给药、随后为一周间歇期”的条件即可。休药假的时间不受特别限制，并且可以根据患者的状态等适当地设置。例如，休药假的时间可以在1到35天之间。或者，休药假的时间可以在1到12个月之间。
[0049]
在一些实施方式中，化合物a或其盐每日施用一次或多次。在优选实施方式中，化合物a或其盐每日施用一次。
[0050]
化合物a或其盐的典型日剂量可以在每千克体重100pg到100mg、更典型地在每千克体重10ng至25mg的范围内。更典型地，化合物a或其盐的日剂量可以在每千克体重100ng至20mg的范围内，尽管在需要时可以施用更高或更低的剂量。例如，每日剂量可以为每千克体重1μg至20mg，更典型地，每千克体重10μg至20mg，更典型地，每千克体重100μg至20mg。
[0051]
剂量也可以表示为相对于患者体表面积的给药量(mg/m2)。化合物a或其盐的典型日剂量可以在3700pg/m2至3700mg/m2的范围内，尽管在需要时可以施用更高或更低的剂量。例如，日剂量可以为370ng/m2至925mg/m2，更典型地，3700ng/m2至740mg/m2，尽管在需要时可以施用更高或更低剂量。例如，可以为37μg/m2至740mg/m2，更典型地，370μg/m2至740mg/m2，或3700μg/m2至740mg/m2。
[0052]
本发明的化合物a或其盐可以在单一剂量的范围内口服施用，例如0.05至3000mg。通常，该范围可以为10至1000mg。剂量的典型示例包括10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350、400、450、500、600、700、800、900和1000mg。剂量可以从上述范围(0.05至3000mg)内的任何剂量开始，以例如1mg、5mg、10mg、20mg或50mg的增量或减量逐步地增加或减少。
[0053]
本发明中使用的含有化合物a或其盐的药物组合物可以根据已知技术配制。例如，参见例如，remington’s pharmaceutical sciences,mack publishing company,easton,pa,usa。药物组合物可以是适用于口服、肠胃外、局部、鼻内、支气管内、舌下、眼、耳、直肠、阴道内或经皮给药的任何形式。其中，优选口服给药的实施方式。如果所述组合物拟用于肠胃外给药，则其可配制成静脉内、肌肉内、腹腔内、皮下给药，或通过注射、输注或其他递送方式直接递送至靶器官或组织内。递送可以是通过弹丸式注射(bolus injection)、短期输注或长期输注，也可以是经由被动输送或通过使用合适的输注泵或注射器泵(syringer driver)。
[0054]
本发明中使用的化合物a或其盐可以是晶体形式。单晶和多晶形晶体混合物均包括在化合物a或其盐的范围内。这些晶体可以根据本领域已知的结晶方法通过结晶制备。化合物a或其盐可以是溶剂化物(例如水合物)或非溶剂化物。任何这些形式均包括在本发明的化合物或其盐的范围内。
[0055]
用同位素(例如，3h、
14
c、
35
s和
125
i)标记的化合物a也包括在本发明中使用的化合物a或其盐的范围内。
[0056]
本发明中使用的化合物a的盐指用于有机化学领域的常用盐。这些盐的示例包括碱加成盐和酸加成盐。化合物a的盐优选为药物上可接受的盐。
[0057]
碱加成盐的示例包括碱金属盐，例如钠盐和钾盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；
铵盐；以及有机胺盐，例如三甲胺盐、三乙胺盐、二环己基胺盐、乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、普鲁卡因盐和n，n
’‑
二苄基乙二胺盐。
[0058]
酸加成盐的示例包括无机酸盐，例如盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐和高氯酸盐；有机酸盐，如醋酸盐、甲酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐和三氟醋酸盐；和磺酸盐，如甲磺酸盐、羟乙基磺酸盐、苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐。
[0059]
化合物a的盐的一个例子是苯甲酸的盐或苯甲酸盐。化合物a的盐的另一个例子是甲磺酸盐、乙磺酸盐、苹果酸盐、富马酸盐或甲苯磺酸盐。
[0060]
由于它们优异的lsd1抑制活性，本发明中使用的化合物a或其盐可用作预防和治疗lsd1相关疾病的药物制剂。本发明的给药方案可用于治疗lsd1相关疾病。
[0061]
在本文中可互换使用的术语“lsd1相关疾病或病症”或“以lsd1的表达和/或活性为特征的疾病和病症”的实例包括通过消除、阻止、和/或抑制lsd1功能可以降低其发病率、减轻、缓解、和/或完全治愈其症状的疾病。这些疾病的实例包括但不限于恶性肿瘤等。拟由化合物a或其盐治疗的恶性肿瘤的类型不受特别限制。此类恶性肿瘤的实例包括头颈癌、食管癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊癌、胆道癌、胆管癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸肿瘤、骨肉瘤、软组织肉瘤、白血病、骨髓增生异常综合征、慢性骨髓增生性疾病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、脑瘤、间皮瘤等。优选的实例包括肺癌(如非小细胞肺癌和小细胞肺癌)、白血病和骨髓增生异常综合征。更优选地，实例包括肺癌(非小细胞肺癌、小细胞肺癌等)和白血病。更优选地，实例包括小细胞肺癌(sclc)和急性髓系白血病(aml)。
[0062]
当本发明各方面中使用的化合物a或其盐用作药物制剂时，如果需要，可以添加药物载体，从而根据预防和治疗目的形成合适的剂型。剂型的实例包括口服制剂、注射剂、栓剂、软膏剂、贴剂等。其中，优选口服制剂。这些剂型可以通过本领域技术人员常规已知的方法形成。
[0063]
作为药物载体，可以使用用作制备材料的各种常规有机或无机载体材料。例如，这些材料可以作为赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂或涂层剂混合在固体制剂中；或作为溶剂、增溶剂、悬浮剂、等渗剂、ph调节剂、缓冲剂或光滑剂混合在液体制剂中。此外，如果需要，还可以使用药物制剂添加剂，例如防腐剂、抗氧化剂、着色剂、掩味剂或调味剂以及稳定剂。
[0064]
口服固体制剂的制备如下。在任选地将赋形剂与粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、掩味剂或调味剂等添加到本发明的化合物a后，通过本领域已知的方法将所得混合物配制成片剂、包衣片、颗粒、粉末、胶囊等。
[0065]
赋形剂的实例包括乳糖、蔗糖、d-甘露醇、葡萄糖、淀粉、碳酸钙、高岭土、微晶纤维素和硅酸酐。粘合剂的实例包括水、乙醇、1-丙醇、2-丙醇、单糖浆、液体葡萄糖、液体α-淀粉、液体明胶、d-甘露醇、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基淀粉、甲基纤维素、乙基纤维素、虫胶、磷酸钙、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂的实例包括干淀粉、海藻酸钠、粉状琼脂、碳酸氢钠、碳酸钙、十二烷基硫酸钠、硬脂酸单甘油酯、乳糖等。润滑剂的实例包括精制滑石、硬脂酸钠、硬脂酸镁、硼砂、聚乙二醇等。着色剂的实例包括氧化钛、氧化铁等。掩味剂或调味剂的实例包括蔗糖、苦橙皮、柠檬酸、酒石酸等。
[0066]
当制备用于口服的液体制剂时，可以向化合物a中添加掩味剂、缓冲剂、稳定剂、调味剂等；所得混合物可以根据本领域已知的方法配制成口服液制剂、糖浆、酏剂等。
[0067]
掩味剂或调味剂的实例可以与上述实例相同。缓冲液的实例包括柠檬酸钠等。稳定剂的实例包括黄芪胶、阿拉伯树胶、明胶等。如有必要，出于例如持续作用的目的，可以根据本领域已知的方法，将这些口服给药制剂用肠溶衣或其他包衣涂覆。这些涂覆剂的实例包括羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、聚乙二醇和吐温80(注册商标)。
[0068]
当制备注射剂时，可以向化合物a中添加ph调节剂、缓冲液、稳定剂、等渗剂、局部麻醉剂等；所得混合物可以根据常规方法配制成皮下、肌肉内注射和静脉内注射剂。
[0069]
可用的ph调节剂和缓冲剂的实例包括柠檬酸钠、醋酸钠、磷酸钠等。可用的稳定剂的实例包括焦亚硫酸钠、edta、巯基乙酸、硫代乳酸等。可用的局部麻醉剂的实例包括盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因等。可用的等渗剂的实例包括氯化钠、葡萄糖、d-甘露醇、甘油等。
[0070]
在本发明中使用的这些剂型中的每一种单位剂型加入的化合物a的量取决于施用化合物a的患者的状况、剂型等。一般而言，在口服药剂、注射剂和栓剂的情况下，化合物a的量分别优选为每单位剂型0.05至1000mg、0.01至500mg和1至1000mg。
[0071]
这些剂型的药物的日剂量取决于患者的状况、体重、年龄、性别等，不能一概而论。例如，对于成人(体重：50kg)，化合物a的日剂量通常为0.05至5000mg，优选为0.1至1000mg；优选地，每日以一剂施用，或分两剂到三剂施用。
[0072]
本发明的给药方案可以应用于化合物a或其盐的单一给药。本发明的给药方案可以应用于化合物a或其盐与其他药物的联合给药。当化合物a或其盐与其他药物联合给药时，化合物a或其盐可以与其他药物在同一天或同一时间给药，或化合物a可以与其他药物在不同的天或不同的时间给药。在本发明的化合物a或其盐的给药方案期间，其他这些药物可以连续地、偶尔地或间歇地给药。
[0073]
将化合物a或其盐与一种或多种其他抗肿瘤剂联用可以增强抗肿瘤效果。本发明包括以这种联合方式使用化合物a或盐的给药方案。化合物a或其盐与一种或多种其他抗肿瘤剂的联合形式可以是单一制剂(即，联合药物)或两种或两种以上联合给药的单独的制剂。
[0074]
在本发明中，抗肿瘤效果可以评估为例如肿瘤体积减小、肿瘤生长停滞或生存时间延长。
[0075]
在一实施方式中，给药方案包括施用包括化合物a或其盐与一种或多种其他抗肿瘤剂的组合的抗肿瘤制剂。在另一实施方式中，给药方案包括施用抗肿瘤剂的抗肿瘤效果增强剂，该增强剂包括化合物a或其盐作为活性成分。
[0076]
其他抗肿瘤药物并不受特别限制。实例包括抗代谢物、抗肿瘤抗生素、分子靶向药物、铂类药物和植物生物碱类药物。
[0077]
抗代谢物的实例包括5-氟尿嘧啶(5-fu)，5-氟-2
’‑
脱氧尿苷(fdurd)，替加氟，替加氟(tegafur)和尿嘧啶的组合药物(例如uft)，替加氟、吉美拉西(gimeracil)和奥特拉西(oteracil)的组合药物(例如ts-1)，培美曲塞，三氟尿苷(trifluridine)，三氟尿苷和地匹福林盐酸盐(tipiracil hydrochloride)的组合药物(例如lonsurf)，吉西他滨(gemcitabine)，卡培他滨(capecitabine)，奈拉滨(nelarabine)，氯法拉滨(clofarabine)，阿糖胞苷(cytarabine)，dna甲基化抑制剂(如阿扎胞苷(cytarabine)、地西他滨(decitabine)、cedazuridine和guadecitabine)等，优选阿糖胞苷或dna甲基化抑制
剂(如阿扎胞苷、地西他滨、cedazuridine和guadecitabine)，更优选阿糖胞苷、阿扎胞苷、地西他滨，cedazuridine和guadecitabine。抗代谢物的实例也描述于美国专利8,268,800号中，在此将其全文并入作为引证。
[0078]
抗肿瘤抗生素的实例包括柔红霉素(daunorubicin)、阿霉素(doxorubicin)、氨柔比星(amrubicin)、伊达比星(amrubicin)、表柔比星(epirubicin)，以及类似的蒽环类(anthracycline-based)抗肿瘤抗生素、丝裂霉素c(mitomycin c)、博莱霉素(bleomycin)等，其中优选蒽环类抗肿瘤抗生素，更优选柔红霉素。
[0079]
分子靶向药物的实例包括全反式维甲酸(atra)或其衍生物、人mdm2(小鼠双微基因2(mouse double minute 2))(hdm2；人双微基因2(human double minute 2))抑制剂和hdac抑制剂。
[0080]
全反式维甲酸(atra)或其衍生物优选维甲酸(atra)或他米巴罗汀(tamibarotene)，更优选维甲酸(atra)。在一实施方式中，21天周期或28天周期中每日施用atra，无间歇期。在一实施方式中，atra每日施用两次。
[0081]
人mdm2(hdm2)抑制剂优选为rg7388(ro5503781)、amg-232、ds-3032b、rg7112(ro5045337)、sar405838、mk-8242或1-甲氧基异吲哚啉，例如(2s,3s)-3-(4-氯苯基)-3-[1-(4-氯苯基)-7-氟-5-[(1s)-1-羟基-1-(氧杂环己-4-基)丙基]-1-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-2-基]-2-甲基丙酸或(2s,3s)-3-(4-氯苯基)-3-[1-(4-氯苯基)-7-氟-5-[(1s)-1-羟基-1-(氧杂环己-4-基)丙基]-1-甲氧基-3-氧代-2,3-二氢-1h-异吲哚-2-基]-2-甲基丙酸(如pct公开第wo2018/178691号和美国申请公开第2019/0055215号所述，在此将二者均全文并入作为引证)，更优选rg7388。
[0082]
hdac抑制剂的实例包括伏立诺他(vorinostat)、帕比司他(panobinostat)、罗米地辛(romidepsin)、贝利司他(belinostat)等。
[0083]
分子靶向药物优选为全反式维甲酸(atra)或其衍生物、人mdm2(hdm2)抑制剂、或hdac抑制剂，更优选维甲酸(atra)或rg7388。
[0084]
铂类药物的实例包括奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、顺铂(cisplatin)、奈达铂(nedaplatin)等，其中优选卡铂或顺铂。
[0085]
植物生物碱类药物的实例包括微管抑制剂，例如紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(paclitaxel)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、长春地辛(vindesine)、长春瑞滨(vinorelbine)、和艾日布林(eribulin)，以及拓扑异构酶抑制剂，例如伊立替康(irinotecan，sn-38)、nogitecan和依托泊苷(etoposide)，优选紫杉烷微管抑制剂，例如紫杉醇和多西紫杉醇，或拓扑异构酶抑制剂，例如伊立替康(sn-38)、nogitecan和依托泊苷，更优选紫杉醇、伊立替康(sn-38)或依托泊苷。
[0086]
一种或多种其他抗肿瘤剂优选为抗代谢物、抗肿瘤抗生素、分子靶向药物、铂类药物或植物生物碱类药物，更优选为抗代谢物、抗肿瘤抗生素、全反式维甲酸(atra)或其衍生物、人mdm2(hdm2)抑制剂、hdac抑制剂、铂类药物或植物生物碱类药物，更优选为抗代谢物、抗肿瘤抗生素、全反式维甲酸(atra)或其衍生物、人mdm2(hdm2)抑制剂、铂类药物或植物生物碱类药物，更优选为抗代谢物、抗肿瘤抗生素、全反式维甲酸(atra)或其衍生物、人mdm2(hdm2)抑制剂、铂类药物、拓扑异构酶抑制剂或紫杉烷微管抑制剂，更优选为阿糖胞苷、dna甲基化抑制剂、蒽环类抗肿瘤抗生素、全反式维甲酸(atra)或其衍生物、铂类药物、拓扑酶
抑制剂、或紫杉烷微管抑制剂，更优选为阿糖胞苷、阿扎胞苷、地西他滨、guadecitabine、daunorubicin、维甲酸(atra)、rg7388、卡铂、顺铂、紫杉醇、伊立替康(sn-38)、或依托泊苷。
[0087]
一种或多种其他抗肿瘤剂的制剂还包括用于它们的药物递送系统(dds)制剂。例如，“紫杉醇”包括白蛋白结合的紫杉醇(例如abraxane)、紫杉醇胶束(例如nk105)等；“顺铂”包括顺铂胶束(例如nc-6004)等。
[0088]
本发明的给药方案也适用于预防以lsd1表达为特征的疾病或病症。也适用于手术前或手术后的给药，或作为辅助治疗或辅助后治疗。
[0089]
尽管有所附权利要求，本发明的多个方面和示例性实施方式通过以下条款描述：
[0090]
第[1]条在一实施方式中，预防和/或治疗有需要的患者中以lsd1表达为特征的疾病或病症的方法包括：按照包括每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者。
[0091]
第[2]条在另一实施方式中，第[1]条中描述的方法可以包括基于2周周期的给药方案，所述周期包括连续每日给药持续一周、随后为一周间歇期，并且所述周期进行一次或重复两次以上。
[0092]
第[3]条在另一实施方式中，第[1]或[2]条中描述的方法可以包括将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐每日施用一次，持续一周。
[0093]
第[4]条在另一实施方式中，第[1]、[2]或[3]条中描述的方法可以包括将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐口服施用。
[0094]
第[5]条在另一实施方式中，第[1]、[2]、[3]或[4]条中描述的方法可以用于治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症。
[0095]
第[6]条在另一实施方式中，第[1]、[2]、[3]、[4]或[5]条中描述的方法可以用于治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病。
[0096]
第[7]条在另一实施方式中，第[1]、[2]、[3]、[4]或[5]条中描述的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用。
[0097]
第[8]条在另一实施方式中，治疗患有以lsd1的表达为特征的疾病或病症的患者的方法可以包括：按照包括连续每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者。
[0098]
第[9]条在另一实施方式中，第[8]条中描述的方法可以包括基于3周周期的给药方案，所述周期进行一次或重复两次以上。
[0099]
第[10]条在另一实施方式中，第[8]或[9]条中描述的方法可以包括将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐每日施用一次，持续两周。
[0100]
第[11]条在另一实施方式中，第[8]、[9]或[10]条中描述的方法可以包括将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲
腈或其盐口服施用。
[0101]
第[12]条在另一实施方式中，第[8]、[9]、[10]或[11]条中描述的方法可以用于治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症。
[0102]
第[13]条在另一实施方式中，第[8]、[9]、[10]、[11]或[12]条中描述的方法可以用于治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病或病症。
[0103]
第[14]条在另一实施方式中，第[8]、[9]、[10]、[11]、[12]或[13]条中描述的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用。
[0104]
第[15]条在另一实施方式中，治疗有需要的患者中急性髓系白血病(aml)的方法可以包括：在28天的周期期间在指定日按每日一次将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐作为单一药剂施用于所述患者。
[0105]
第[16]条在另一实施方式中，第[15]条中描述的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐每日施用，持续一周，随后为一周的间歇期。
[0106]
第[17]条在另一实施方式中，治疗有需要的患者中急性髓系白血病(aml)的方法可以包括：在21天的周期期间在指定日按每日一次将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐作为单一药剂施用于所述患者。
[0107]
第[18]条在另一实施方式中，第[17]条中描述的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用两周，随后为一周的间歇期。
[0108]
第[19]条在另一实施方式中，治疗有需要的患者中急性髓系白血病(aml)的方法可以包括：在28天的周期期间在指定日将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐联合每日两次的全反式维甲酸(atra)施用于所述患者。
[0109]
第[20]条在另一实施方式中，第[19]条中描述的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐每日施用，持续一周，随后为一周的间歇期。
[0110]
第[21]条在另一实施方式中，治疗有需要的患者中急性髓系白血病(aml)的方法可以包括：在21天的周期期间在指定日将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐联合每日两次的全反式维甲酸(atra)施用于所述患者。
[0111]
第[22]条在另一实施方式中，第[21]条中描述的方法可以包括治疗有需要的患者中急性髓系白血病(aml)的方法，所述方法可以包括：将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用两周，随后为一周的间歇期。
[0112]
第[23]条在另一实施方式中，降低诊断患有急性髓系白血病(aml)的患者aml复发或死亡风险的方法可以包括：按照包括每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案，
将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者。
[0113]
第[24]条在另一实施方式中，降低诊断患有急性髓系白血病(aml)的患者aml复发或死亡风险的方法可以包括：按照包括每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者。
[0114]
第[25]条在另一实施方式中，降低诊断患有急性髓系白血病(aml)的患者aml复发或死亡风险的方法可以包括：按照包括每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐联合每日两次的全反式维甲酸(atra)施用于所述患者。
[0115]
第[26]条在另一实施方式中，降低诊断患有急性髓系白血病(aml)的患者aml复发或死亡风险的方法可以包括：按照包括每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐联合每日两次的全反式维甲酸(atra)施用于所述患者。
[0116]
第[27]条在另一实施方式中，权利要求15-18中任一项中描述的方法可以将aml复发或死亡的风险降低至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％或至少约25％。
[0117]
第[28]条在另一实施方式中，包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐的化合物的用途可以是用于制造治疗急性髓系白血病(aml)的药物，其中所述药物制备成按照包括每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案施用。
[0118]
第[29]条在另一实施方式中，包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐的化合物的用途可以是用于制造治疗急性髓系白血病(aml)的药物，其中所述药物制备成按照包括每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案施用。
[0119]
第[30]条在另一实施方式中，包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐的化合物的用途可以是用于制造治疗急性髓系白血病(aml)的药物，其中所述药物制备成按照包括每日给药持续一周、随后为一周间歇期，并联合每日两次的全反式维甲酸(atra)的给药方案施用。
[0120]
第[31]条在另一实施方式中，包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐的化合物的用途可以是用于制造治疗急性髓系白血病(aml)的药物，其中所述药物制备成按照包括每日给药持续两周、随后为一周间歇期，并联合每日两次的全反式维甲酸(atra)的给药方案施用。
[0121]
第[32]条本发明在多个方面包括用于预防和/或治疗有需要的患者中以lsd1的表达为特征的疾病或病症的药物组合物，其中所述药物组合物包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐，并按照包括连续每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案施用于所述患者。
[0122]
第[33]条在另一实施方式中，第[32]条中描述的药物组合物可以包括药物载体。
[0123]
第[34]条在另一实施方式中，第[32]条或第[33]条中描述的药物组合物可以按照基于2周周期的给药方案施用，所述周期进行一次或重复两次以上。
[0124]
第[35]条在另一实施方式中，第[32]、[33]或[34]条中描述的药物组合物可以每日施用一次，持续一周。
[0125]
第[36]条在另一实施方式中，第[32]、[33]、[34]或[35]条中描述的药物组合物可以是口服组合物。
[0126]
第[37]条在另一实施方式中，第[32]、[33]、[34]、[35]或[36]条中描述的药物组合物可以用于治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症。
[0127]
第[38]条在另一实施方式中，第[32]、[33]、[34]、[35]、[36]或[37]条中描述的药物组合物可以用于治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病或病症。
[0128]
第[39]条在另一实施方式中，第[32]、[33]、[34]、[35]、[36]、[37]或[38]条中描述的药物组合物可以以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用。
[0129]
第[40]条本发明在多个方面包括用于治疗有需要的患者中以lsd1的表达为特征的疾病或病症的药物组合物，其中所述药物组合物包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐，并且所述药物组合物可以按照包括连续每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案施用于所述患者。
[0130]
第[41]条在另一实施方式中，第[40]条中描述的药物组合物可以进一步包括药物载体。
[0131]
第[42]条在另一实施方式中，第[40]或[41]条中描述的药物组合物可以按照基于3周周期的给药方案施用，所述周期进行一次或重复两次以上。
[0132]
第[43]条在另一实施方式中，第[40]、[41]或[42]条中描述的药物组合物可以每日施用一次，持续一周。
[0133]
第[44]条在另一实施方式中，第[40]、[41]、[42]或[43]条中描述的药物组合物可以是口服组合物。
[0134]
第[45]条在另一实施方式中，第[40]、[41]、[42]、[43]或[44]条中描述的药物组合物可以用于治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症。
[0135]
第[46]条在另一实施方式中，第[40]、[41]、[42]、[43]、[44]或[45]条中描述的药物组合物可以用于治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病或病症。
[0136]
第[47]条在另一实施方式中，第[40]、[41]、[42]、[43]、[44]、[45]或[46]条中描述的药物组合物可以以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用。
[0137]
第[48]条在另一实施方式中，制备用于预防或治疗以lsd1的表达为特征的疾病或病症的药物的方法包括制备包括4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐的组合物，其中将所述药物按照包括连续每日给药持续一周、随后为一周间歇期的给药方案施用于所述患者。
[0138]
第[49]条在另一实施方式中，制备药物的方法可以包括制备第[48]条中描述的组合物，所述组合物可以按照基于2周周期的给药方案施用，所述周期进行一次或重复两次以上。
[0139]
第[50]条在另一实施方式中，制备药物的方法包括制备第[48]或[49]条中描述的组合物，所述组合物可以包括每日施用一次持续一周的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐。
[0140]
第[51]条在另一实施方式中，制备药物的方法包括制备第[48]、[49]或[50]条中描述的组合物，所述组合物可以包括口服施用的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐。
[0141]
第[52]条在另一实施方式中，制备药物的方法包括制备第[48]、[49]、[50]或[51]条中描述的用于治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症的组合物。
[0142]
第[53]条在另一实施方式中，制备药物的方法包括制备第[48]、[49]、[50]、[51]或[52]条中描述的用于治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病或病症的组合物。
[0143]
第[54]条在另一实施方式中，制备药物的方法包括制备第[48]、[49]、[50]、[51]或[52]条中描述的组合物，所述组合物可以包括以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐。
[0144]
第[55]条在一实施方式中，治疗以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法包括：按照包括连续每日给药持续两周、随后为一周间歇期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于有需要的患者。
[0145]
第[56]条在另一实施方式中，治疗第[55]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括：按照基于3周周期的给药方案，将有效量的4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐施用于所述患者，所述周期进行一次或重复两次以上。
[0146]
第[57]条在另一实施方式中，治疗第[55]条或第[56]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐每日施用一次，持续两周。
[0147]
第[58]条在另一实施方式中，治疗第[55]、[56]或[57]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐口服施用。
[0148]
第[59]条在另一实施方式中，治疗第[55]、[56]、[57]或[58]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括治疗以存在肿瘤为特征的疾病或病症。
[0149]
第[60]条在另一实施方式中，治疗第[55]、[56]、[57]、[58]或[59]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括治疗以存在恶性肿瘤为特征的疾病或病症。
[0150]
第[61]条在另一实施方式中，治疗第[55]、[56]、[57]、[58]、[59]或[60]条中描述的以lsd1的表达为特征的疾病或病症的方法可以包括：将4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈或其盐以每千克体重10ng至20mg范围内的每日剂量施用。
[0151]
实施例
[0152]
下面参考实施例更详细地描述本发明。然而，本发明的范围不限于这些实施例。下面通过实施例全面描述本发明；然而，应当理解，本领域技术人员可以进行各种改变和修改。因此，只要这些改变和修改不偏离本发明的范围，它们就包括在本发明中。
[0153]
参考实施例1.间歇给药是试验化合物a更有效的治疗方法，因为化合物a不影响造
血干细胞。
[0154]
使用化合物a的盐酸盐(在参考实施例1中，4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈的盐酸盐)的连续给药，该化合物(为方便起见，将其称为“试验化合物a”)在大鼠、狗和猴子中诱导严重的血小板减少和嗜中性粒细胞减少(数据未显示)。然而，这些毒性在停止给药后恢复。因此，在口服施用化合物a的6周龄雄性crl:cd(sd)大鼠(charles river laboratories japan，inc.)中评估了试验化合物a的间歇性剂量毒性及其可逆性。对于预试验组(给药1周 停1周的给药方案)，进行一个周期的试验化合物a的给药。对于第i组(给药1周 停1周的给药方案)，进行两个周期的试验化合物a的给药，每个周期由每日一次连续7天(1周)的给药期和7天(1周)的间歇期组成。对于第ii组(给药2周 停1周的给药方案)，将试验化合物a每日一次连续给药14天(2周)，并有7天(1周)间歇期。间歇期为恢复期，不给药。将试验化合物a悬浮在5mg/ml羟丙甲纤维素溶液中。在对照组中，将不含试验化合物a的溶媒施用于动物。
[0155]
将试验化合物a以0mg/kg(溶媒作为对照)、4mg/kg(仅用于预试验组)和16mg/kg(用于第i组和第ii组)的剂量施用，剂量体积为5ml/kg。对所有大鼠进行血液学评估和骨髓涂片检查。对于预试验组，在第8天和第15天采集样本。对于第i组，在第8、15、22和29天采集经试验化合物a处理的动物的样本，在第8和29天采集经溶媒处理的动物的样本。对于第ii组，在第15天和第22天采集经试验化合物a处理的动物和经溶媒处理的动物的样本。
[0156]
在血液学检查中，在异氟醚(isoflurane)麻醉下对每只大鼠行剖腹术，并使用带针头的一次性注射器通过后腔静脉采集血液。采集的血液以约1ml的体积分配到含有edta-2k的容器中，以便使用advia2120i多物种血液学系统进行血液学测试。采血后，进行尸体剖检，并从大鼠身上收集骨髓。收集骨髓液，与大鼠血浆混合，用wedge法制作涂片。骨髓涂片样本用may grunwald-giemsa染色，并进行光镜检查。在每个不同的显微镜视野中对所有细胞中的大约200个细胞(差异计数)进行计数，以保持细胞类型的代表性比率。
[0157]
这些研究的所有动物实验方案均由institutional animal care and use committee评判并由机构负责人根据“guidelines for animal experiment of taiho pharmaceutical co.,ltd.”核准。动物的处理根据这些指导适当地进行。
[0158]
在用4mg/kg试验化合物a治疗的大鼠中，试验化合物a的治疗没有导致血小板减少(血小板减少症)和嗜中性粒细胞减少(嗜中性白血球减少症)(数据未显示)。因此，4mg/kg不足以评估间歇性剂量毒性。
[0159]
图1a、图1b、图2a和图2b说明了外周血样本的血液学分析结果。在血液学方面，使用16mg/kg试验化合物a治疗的第i组大鼠在1周后显示出血小板和嗜中性粒细胞的减少(图1a(血小板)和图1b(嗜中性粒细胞)，“1周”列，右侧填充柱)。使用16mg/kg试验化合物a治疗的第ii组大鼠在2周后也显示出血小板和嗜中性粒细胞的减少(图2a(血小板)和图2b(嗜中性粒细胞)，“2周”列，右侧填充柱)。另一方面，在第i组和第ii组大鼠中在停止或中止试验化合物a的给药1周后，血小板和嗜中性粒细胞的数量显著恢复(反弹升高)(图1a(血小板)和图1b(嗜中性粒细胞)，“2周”列，右侧填充柱)；图2a(血小板)和图2b(嗜中性粒细胞)，“3周”列，右侧填充柱)。
[0160]
图3、图4a和图4b说明骨髓涂片分析的结果。在该项考察中，用试验化合物a治疗没有影响到成髓细胞、其他祖细胞和干细胞。在给药期(1周或2周)结束时，嗜中性粒细胞系细
胞，如中幼粒细胞、晚幼粒细胞和成熟嗜中性粒细胞减少(数据未显示)。此外，出现有形状异常的嗜中性粒细胞系骨髓细胞(图3)。与此相比，嗜中性粒细胞系中的早幼粒细胞在同一时期增加。然而，在其他骨髓细胞谱系，如嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞谱系中没有发现。这些发现表明，试验化合物a对嗜中性粒细胞系中从早幼粒细胞到中幼粒细胞的骨髓分化步骤有影响。此外，在血小板系中，在给药期结束时，正常巨核细胞严重减少，脆弱或形态异常的巨核细胞(图4a和4b)显著增加(数据未显示)。停止给药1周后，嗜中性粒细胞系细胞，尤其是成熟嗜中性粒细胞明显增多，异常巨核细胞消失。
[0161]
这些结果表明，试验化合物a在大鼠中诱导骨髓抑制，并对嗜中性粒细胞系和血小板系的骨髓分化步骤有影响。然而，试验化合物a对造血干细胞、祖细胞和成髓细胞没有影响。因此，停止给药1周后，这些骨髓抑制作用消失。最终，具有停药期(至少1周)的间歇给药方案对于试验化合物a管理和控制由连续施用试验化合物a诱导的骨髓抑制非常重要。
[0162]
参考实施例2.小鼠中间歇给药方案的抗肿瘤效果和体重变化(给药1周 停1周的方案和给药2周 停1周的方案是一种非常有用的方法，既能显示抗肿瘤效果，同时又能避免试验化合物a给药产生的毒性)
[0163]
(在参考实施例2中，使用了4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈的苯甲酸盐，为方便起见，将该化合物称为“试验化合物a”。)将人小细胞肺癌(nci-h1417，american type culture collection)细胞植入雄性scid小鼠(charles river laboratories japan，inc.)的右胸。植入肿瘤后，测量肿瘤的长轴(mm)和短轴(mm)，并计算肿瘤体积(tv)。然后，将小鼠分配到各组，使每组的平均tv值相等。进行分组(n＝5)的那一天被视为第0天。准备试验化合物a如下：0mg/kg/天(不含该化合物的溶媒)、100mg/kg/天和150mg/kg/天。从第一天开始，该化合物以0mg/kg/天的剂量口服给药，每日一次，持续3周(对照组)；以100mg/kg/天的剂量连续口服给药，每日一次，持续3周(连续组：给药3周的方案)；以150mg/kg/天的剂量口服给药，每日一次，连续7天(1周)，随后为7天(1周)的间歇期，随后为以150mg/kg/天口服给药连续7天(1周)(第i组：给药1周 停1周的方案)；和以100mg/kg/天口服给药，每日一次，连续2周，随后为7天(1周)的间歇期(第ii组：给药2周 停1周的方案)。化合物a的剂量是每个给药方案的最大耐受剂量(mtd)。评估期设置为21天，最后一个评估日设置为第22天。
[0164]
tv(mm3)＝(长轴
×
短轴2)/2
[0165]
作为给药期间抗肿瘤效果的指标，在各组中依次测量tv(图5)
[0166]
作为给药期间的毒性指标，依次测量体重(bw)，通过以下公式计算相对于第0天体重的平均体重变化[bwc(％)]，直到最后评估日(n：每周两次体重测量的日期；最后测量日对应于第22天，即最后一个评估日)。图6显示结果。
[0167]
bwc(％)＝[(第n天的bw)－(第0天的bw)]/(第0天的bw)
×
100。
[0168]
图5显示抗肿瘤效果。与第0天相比，连续组、第i组和第ii组均在第22天观察到平均tv值的回归，而对照组的平均tv值在给药期间增加了4倍以上。在给药期间，除对照组外，所有组的平均tv值都是相当的。疗效评估如下：给药组的平均tv值在统计学上显著低于对照组的平均tv值(dunnett t检验，p《0.001)(符号***表示观察到与对照组的统计学上显著的差异)。另一方面，当比较间歇给药组(第i组和第ii组)和对照组之间的抗肿瘤效果时，两组之间没有观察到统计学上显著的差异(aspin-welch t检验)。因此，确定存在抗肿瘤效
果，并且效果在所有化合物给药组中均相同。
[0169]
图6显示体重的变化。关于化合物给药对体重的影响，在连续组中观察到体重减轻。另一方面，间歇性给药组，如第i组和第ii组，在第22天没有显示任何体重减轻。因此，与连续每日给药的方案(给药3周)相比，间歇给药方案，如给药1周 停1周的方案和给药2周 停1周的方案，均改善了体重减轻。
[0170]
由于间歇给药组和连续每日给药组的抗肿瘤效果相同，上述结果表明，间歇方案是毒性较小的给药方案。
[0171]
用间歇给药方案施用试验化合物a的方法，例如给药1周 停1周的方案和给药2周 停1周的方案，完全有望成为一种非常有用的方法，其在显示抗肿瘤效果的同时避免因在临床治疗中施用该化合物而产生的毒性。
[0172]
参考实施例3.患有复发性或难治性急性髓系白血病的受试者中试验化合物a与全反式维甲酸的研究
[0173]
(在参考实施例3中，使用4-[5-[(3s)-3-氨基吡咯烷-1-羰基]-2-[2-氟-4-(2-羟基-2-甲基-丙基)苯基]苯基]-2-氟-苯甲腈)或其药学上可接受的盐，为了方便起见，将该化合物称为“试验化合物a”。)
[0174]
这是一项多中心、两部分的1期研究，旨在评估作为单一药剂以及与全反式维甲酸(atra)联合施用的试验化合物a在患有复发性或既往治疗难治性急性髓系白血病(aml)的参与者中的安全性、药代动力学、药效学和初步临床活性。研究持续时间预计约为30个月。
[0175]
[表1]
[0176]
表1
[0177][0178]
研究设计
[0179]
研究类型：介入性
[0180]
预计招募人数：50人
[0181]
分配：非随机化
[0182]
干预模式：顺序分配
[0183]
盲法：无(开放标签)
[0184]
主要目的：治疗
[0185]
官方标题：试验化合物a作为单一药物以及与全反式维甲酸(atra)联合在患有复发性或难治性(r/r)急性髓系白血病(aml)受试者中的安全性、药代动力学和初步活性的1期研究。
[0186]
[表2]
[0187]
表2组和干预措施
[0188][0189]
结果度量
[0190]
主要结果度量：
[0191]
1.安全性：出现治疗紧急不良事件(teae)的参与者数量[时间范围：约30个月]
[0192]
2.安全性：出现不良事件(ae)的参与者数量[时间范围：约30个月]
[0193]
次要结果测量：
[0194]
1.应答率：第2部分中完全缓解(cr)、完全缓解伴不完全血球计数恢复(cri)、部分缓解(pr)和完全缓解伴部分造血恢复(crh)的参与者数量[时间范围：约30个月]
[0195]
2.总生存期：从第一次给药之日起到因任何原因死亡的时间[时间范围：约30个月]
[0196]
3.药代动力学参数：曲线下面积(auc)[时间范围：至第1周期和第2周期的第8天(每个周期28天)]
[0197]
4.药代动力学参数：最大血浆浓度(cmax)[时间范围：至第1周期和第2周期的第8天(每个周期28天)]
[0198]
5.药代动力学参数：最低血浆浓度(cmin)[时间范围：至第1周期和第2周期的第8天(每个周期28天)]
[0199]
6.药代动力学参数：达到最大血浆浓度(tmax)的时间[时间范围：至第1周期和第2周期的第8天(每个周期28天)]
[0200]
7.药代动力学参数：半衰期(t1/2)[时间范围：至第1周期和第2周期的第8天(每个周期28天)]
[0201]
资格标准
[0202]
符合研究条件的年龄：18岁及以上
[0203]
符合研究条件的性别：所有
[0204]
性别相关：否
[0205]
接受健康志愿者：否
[0206]
入选/排除标准
[0207]
入选标准：
[0208]
1.有至少12周的预期寿命并且病情稳定可以完成一个完整周期(4周)的治疗。
[0209]
2.根据世界卫生组织(who)2016年的标准对aml进行组织学确认，且所有其他可得的常规治疗均告失败。
[0210]
3.入组时外周血或骨髓母细胞计数》5％。
[0211]
4.患有以下疾病：
[0212]
a.标准诱导化疗(包括但不限于蒽环类药物和阿糖胞苷联合治疗)难治，或
[0213]
b.在蒽环类药物和阿糖胞苷治疗或干细胞移植(sct)后复发，或
[0214]
c.含有单独或联用的低甲基化药剂的一线治疗方案难治或在该方案后复发。
[0215]
5.东部肿瘤协作组(eastern cooperative oncology group，ecog)体力状态的评分为0到1。
[0216]
6.有足够的肾功能，如血清肌酐≦1.5
×
正常值上限(uln)或血清肌酐清除率(根据标准cockcroft-gault公式)≧60ml/min所示。
[0217]
7.具有足够的肝功能，如下所示：
[0218]
a.天冬氨酸转氨酶(ast)和丙氨酸转氨酶(alt)《3
×
正常值上限(uln)
[0219]
b.ast和alt《5
×
uln(如果考虑白血病器官受累)。
[0220]
8.具有生育潜力的妇女(根据clinical trial facilitation group[ctfg]的建议)不能处于妊娠或哺乳期，并且必须在筛查时妊娠试验阴性。
[0221]
排除标准：
[0222]
1.已知临床活动性中枢神经系统(cns)白血病。
[0223]
2.bcr-abl阳性白血病。
[0224]
3.诊断急性早幼粒细胞白血病(m3 aml或apml或apl)。
[0225]
4.目前需要积极治疗的第二种恶性肿瘤，但对内分泌治疗稳定或有反应的乳腺癌或前列腺癌除外。
[0226]
5.3级或更高级别的移植物抗宿主病(gvhd)，或需要以下任一治疗的gvhd：
[0227]
a.钙调磷酸酶抑制剂，或
[0228]
b.强的松超过5mg/天(注：允许用于其他适应症的任何剂量的强的松)。
[0229]
6.血清总胆红素≧1.5
×
uln(吉尔伯特氏综合征患者除外，其直接胆红素》2.5
×
uln)，或肝硬化，或慢性肝病child-pugh b或c类。
[0230]
7.已知的活动性人类免疫缺陷病毒(hiv)、乙型肝炎病毒(hbv)或丙型肝炎病毒(hcv)感染。允许非活动性肝炎携带者状态或正在接受抗病毒治疗的低病毒性肝炎滴度。对于被认为处于病毒暴露风险中的受试者，应使用血清学确定阴性。
[0231]
8.已知的严重精神疾病或其他状况，例如活动性酒精或其他药物滥用或成瘾，研究人员认为使受试者有不依从方案的高风险。
[0232]
9.根据new york heart association(nyha)标准(iii级或iv级分期)，因任何原因(如心肌病、缺血性心脏病、严重瓣膜功能障碍、高血压性心脏病或充血性心力衰竭)导致心力衰竭的心肌损害。
[0233]
10.筛查具有》480毫秒的可测qtc间期的12导联超声心动图(根据fridericia或
bazett校正)。
[0234]
11.活动性的、不受控制的感染。接受治疗(抗生素、抗真菌或抗病毒治疗)的具有感染的参与者必须在入组前≧72小时不发热，且血流动力学稳定。
[0235]
12.需要》2升/分钟(lpm)氧气的非aml相关肺部疾病。
[0236]
13.总白细胞》20,000/μl或blast％》50％(骨髓或外周血中)的高疾病负担的增殖性aml。
[0237]
14.使参与者处于即将死亡的风险中的任何其他状况。
[0238]
15.在第一剂研究治疗的2周内接受过任何研究性治疗。
[0239]
16.无法吞咽口服药物。
[0240]
17.已知对atra、其任何成分或其他维甲酸过敏。
[0241]
18.已知对对羟基苯甲酸酯类(parabens)敏感。