NapyradiomycinA4及其在抗猪伪狂犬病病毒中的应用的制作方法

napyradiomycin a4及其在抗猪伪狂犬病病毒中的应用
技术领域
1.本发明属于新化合物及抗病毒领域，具体涉及napyradiomycin a4及其在抗猪伪狂犬病病毒中的应用。


背景技术：

2.伪狂犬病病毒(pseudorabies virus，prv)属于疱疹病毒科中的α疱疹病毒亚科，引起家畜和某些野生动物的传染病，其中对猪的危害最大，每年给世界养猪业造成巨大的经济损失。猪伪狂犬病(pseudorabies，pr)是由猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus，prv)引起不同生长阶段猪发生的一种急性、高度接触性传染病，以神经系统障碍和脏器损伤为主要特征。该病对不同年龄的猪都有危害，成年猪耐过后成为长期的带毒、排毒污染源。世界动物卫生组织(oie)将该病列为b类动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。自2011年以来，伪狂犬病毒变异株的出现导致免疫过的猪再次出现伪狂犬病症状。
3.目前，还没有特效药物可治愈由猪伪狂犬病毒(pseudorabies virus，prv)引起的猪伪狂犬病，多通过接种疫苗辅以对症治疗的方式对病猪进行治疗。因此，研究开发一种针对猪伪狂犬病毒的兽用药物意义重大。
4.napyradiomycin类化合物拥有独特的结构和多样的生物活性，具有重要的生物学意义，但对于抗病毒活性的研究未见报道。申请人在以兽用病毒靶标的天然药物的筛选中，发现了napyradiomycin a4化合物，其对猪伪狂犬病毒具有较强的抑制活性，表现出进一步开发利用的价值。


技术实现要素：

5.本发明一个目的在于提供了napyradiomycin类化合物a4，其分子式为c
25h30
cl2o6，分子量496.41，结构式如下：
[0006][0007]
本发明的另一个目的是提供了napyradiomycin a4在制备治疗或预防猪伪狂犬病
病毒(pseudorabies virus)感染的药物中的应用。
[0008]
为了达到以上目的，本发明采用以下技术措施：
[0009]
napyradiomycin a4，其分子式为c
25h30
cl2o6，分子量496.41，结构式如下：
[0010][0011]
napyradiomycin a4在制备治疗或预防猪伪狂犬病毒感染的药物中的应用，包括napyradiomycin a4作为有效成分或是有效成分之一用于制备治疗或预防猪伪狂犬病毒感染的药物；或是napyradiomycin a4作为有效成分或是有效成分之一用于制备猪伪狂犬病毒抑制剂。
[0012]
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
[0013]
1.本发明首次提供了1种napyradiomycin类新化合物napyradiomycin a4，为该类化合物结构及生物活性的多样性提供了新的选择性。
[0014]
2.本发明首次发现napyradiomycin a4对猪伪狂犬病毒抑制活性较强；对猪伪狂犬病毒半数抑制浓度(ic
50
)为0.74μg/ml，其药物的治疗指数(ti)为14.29；显著高于阳性对照利巴韦林的ic
50
(14.16μg/ml)和ti(2.82)。napyradiomycinsa4的药物安全性较高，具有优异的抑制猪伪狂犬病毒的活性，为兽用抗病毒制剂的开发提供了新的选择性。
具体实施方式
[0015]
本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。本发明所述物质，如未特别说明，均来源于商业合成。
[0016]
实施例1：
[0017]
申请人在以兽用病毒靶标的药物的筛选中，发现了napyradiomycin类新化合物napyradiomycin a4，该化合物对猪伪狂犬病毒抑制活性较强，结构式如下：
[0018][0019]
同时申请人还筛选出了另外两种新的napyradiomycin类化合物，分别为：
[0020]
a80915h：
[0021][0022]
a80915i：
[0023][0024]
申请人将现有的napyradiomycin类化合物作为对照组：
[0025]
napyradiomycin a1
[0026][0027]
napyradiomycin b1：
[0028]
naphthomevalin：
[0029][0030]
a80915g：
[0031][0032]
a80915g-8
″‑
acid：
[0033][0034]
实施例2：
[0035]
mtt法测定napyradiomycin类化合物对猪伪狂犬病毒半数抑制浓度
[0036]
1.细胞与病毒
[0037]
非洲绿猴肾细胞(vero)，猪伪狂犬病毒(prv)由华中农业大学谭臣教授提供。
[0038]
2.病毒tcid50测定
[0039]
prv的半数组织培养感染剂量tcid50测定于长满单层细胞的96孔板中进行，病毒液在维持液中作连续的10倍稀释，每个浓度8个重复，每日观察细胞病变(cpe)，记录高于
50％和低于50％病变孔的病毒稀释度，根据reed
–
muench method计算比距，获得tcid50。
[0040]
3.药物的半数中毒浓度(cc
50
)测定
[0041]
96孔板中长满单层的vero细胞，弃掉上清，加入pbs洗1-2次，加入含不同浓度药物的培养基，37℃培养48小时。弃掉上清，加入mtt染色，37℃培养4小时，弃掉上清，加入dmso终止反应，37℃培养10分钟，检测od450nm值。细胞存活率按公式计算，细胞存活率(％)＝(药物组平均od450nm值/细胞对照组平均od450nm值)
×
100％。用spss 16.0分析软件的probit回归法计算药物的半数中毒浓度cc
50
。
[0042]
4.药物的半数抑制浓度(ic
50
)测定
[0043]
96孔板中长满单层的vero细胞，弃掉上清，加入pbs洗1-2次，加入含不同浓度药物的培养基及prv病毒液(100tcid50)，同时设置不加药物的病毒对照孔和细胞对照孔，37℃培养48-72小时。当病毒对照孔出现病变达50％以上时，弃掉上清，加入pbs洗1-2次，加入mtt染色，37℃培养4小时，弃掉上清，加入dmso终止反应，37℃培养10分钟，检测od450nm值。病毒抑制率按公式计算，病毒抑制率(％)＝[(试验组平均od450nm值-病毒对照组平均od450nm值)/(细胞对照组平均od450nm值-病毒对照组平均od450nm值)]
×
100％。用spss 16.0分析软件的probit回归法计算药物的半数抑制浓度ic
50
。
[0044]
5.药物的治疗指数(ti)
[0045]
治疗指数(ti)＝cc
50
/ic
50
，值越大越说明抗病毒潜力越大。其中ti》2为有效低毒，1《ti《2为低效有毒，ti《1无临床使用价值。
[0046]
6.结果：
[0047]
96孔板中长满单层的vero细胞，加入prv病毒液(100tcid50)和不同浓度的药物(40、20、10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125μg/ml)，37℃培养48-72小时，显微镜下观察cpe(细胞病变)，同时与阳性对照利巴韦林和阿昔洛韦做比较，结果见表1。
[0048]
表1 napyradiomycin类化合物对猪伪狂犬病毒的抑制活性
[0049][0050]
“‑”
表示无抑制活性。
[0051]
从表1可以看出，napyradiomycins a1、b1、a80915g、a80915g-8
″‑
acid、
napyradiomycin a4对猪伪狂犬病毒均表现出抑制作用，尤其是napyradiomycins a1、a4对猪伪狂犬病毒的抑制作用极为明显，ic
50
分别为0.63、0.74μg/ml；治疗指数(ti)分别为8.73、14.29，显著高于阳性对照药剂利巴韦林。说明这两个化合物的药物安全性较高，具有优异的抑制猪伪狂犬病毒的活性。此外，napyradiomycin b1、a80915g-8
″‑
acid这两个化合物对猪伪狂犬病毒的ic
50
分别为3.63、9.61μg/ml，其ti》2.0，为有效低毒化合物。a80915g的对猪伪狂犬病毒的ic
50
值为3.39μg/ml，其治疗指数1《ti《2，为低毒有效化合物。同为napyradiomycin类化合物的naphthomevalin、a80915i和a80915h对猪伪狂犬病毒无抑制活性。