一种利用大肠杆菌制备大豆豆血红蛋白的方法与流程

技术特征：
1.一种制备大豆豆血红蛋白的方法，包括：构建含有用于血红素生物合成途径酶的基因的第一质粒；构建含有用于大豆豆血红蛋白lgb2的基因的第二质粒；构建含有第一质粒和第二质粒的第一大肠杆菌生产宿主；以及通过培养第一大肠杆菌生产宿主生产大豆豆血红蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其中血红素生物合成途径酶是ala合酶、nadp依赖的苹果酸酶、二羧酸转运体和亚铁螯合酶。3.根据权利要求1所述的方法，其中大豆豆血红蛋白由具有如seq id no:1所示氨基酸序列的珠蛋白和具有分子式1的血红素组成，4.根据权利要求1所述的方法，其中，第一质粒具有seq id no：6所示的核苷酸序列。5.根据权利要求1所述的方法，其中，第二质粒具有seq id no：8所示的核苷酸序列。6.根据权利要求2所述的方法，其中，ala合酶是具有seq id no：2所示核苷酸序列的球形红杆菌ala合酶，nadp依赖的苹果酸酶是具有seq id no:3所示核苷酸序列的大肠杆菌nadp依赖的苹果酸酶，二羧酸转运体是具有seq id no:4所示核苷酸序列的大肠杆菌二羧酸转运体，亚铁螯合酶是具有seq id no:5所示核苷酸序列的大肠杆菌亚铁螯合酶。7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：使用琥珀酸将ph调节至7至9，以培养第一大肠杆菌生产宿主。8.一种制备大豆豆血红蛋白的方法，包括：构建含有用于血红素生物合成途径酶的基因的第三质粒；构建含有第三质粒的第二大肠杆菌生产宿主；通过培养第二大肠杆菌生产宿主制备大豆豆血红蛋白。9.根据权利要求8所述的方法，其中血红素生物合成途径酶是ala合酶、nadp依赖的苹果酸酶、二羧酸转运体和亚铁螯合酶。10.根据权利要求8所述的方法，其中，大豆豆血红蛋白由具有seq id no:1所示氨基酸序列的珠蛋白和具有分子式1的血红素组成，
11.根据权利要求8所述的方法，其中，第三质粒具有seq id no：9所示的核苷酸序列。12.根据权利要求8所述的方法，其中，ala合酶是具有seq id no：2所示核苷酸序列的球形红杆菌ala合酶，nadp依赖的苹果酸酶是具有seq id no:3所示核苷酸序列的大肠杆菌nadp依赖的苹果酸酶，二羧酸转运体是具有seq id no:4所示核苷酸序列的大肠杆菌二羧酸转运体，亚铁螯合酶是具有seq id no:5所示核苷酸序列的大肠杆菌亚铁螯合酶。13.根据权利要求8所述的方法，进一步包括：使用琥珀酸将ph调节至7至9，以培养第二大肠杆菌生产宿主。14.一种制备大豆豆血红蛋白的方法，包括：构建含有用于大豆豆血红蛋白lgb2的基因的第二质粒；构建含有第二质粒的第三大肠杆菌生产宿主；通过培养第三大肠杆菌生产宿主生产珠蛋白；通过微生物发酵或化学合成制备血红素；将珠蛋白与血红素结合以得到大豆豆血红蛋白。15.根据权利要求14所述的方法，其中，第二质粒具有seq id no:8所示的核苷酸序列。16.根据权利要求14所述的方法，其中，制备血红素包括：构建含有用于血红素生物合成途径酶的基因的第一质粒；构建含有第一质粒的第四大肠杆菌生产宿主；通过培养第四大肠杆菌生产宿主制备血红素。17.根据权利要求16所述的方法，其中，第一质粒具有seq id no:6所示的核苷酸序列。18.一种可用作肉类调味剂和/或铁补充剂的组合物，包含根据权利要求1-17中任一项制备的大豆豆血红蛋白。

技术总结
一种制备大豆豆血红蛋白的方法，包括：构建含有用于血红素生物合成途径酶的基因的第一质粒；构建含有用于大豆豆血红蛋白LGB2的基因的第二质粒；构建含有第一质粒和第二质粒的第一大肠杆菌生产宿主；以及通过培养第一大肠杆菌生产宿主来生产大豆豆血红蛋白。可用作肉类调味剂和/或铁补充剂的组合物包括按照该方法制备的大豆豆血红蛋白。法制备的大豆豆血红蛋白。法制备的大豆豆血红蛋白。


技术研发人员：尹成俊 姜尚铉 全秀娟 权安成 李恩吉
受保护的技术使用者：尹特荣生物科技株式会社
技术研发日：2021.01.09
技术公布日：2022/8/19