半乳甘露聚糖抗原的制备方法和半乳甘露聚糖抗原与流程

1.本发明涉及抗原制备技术领域，尤其涉及一种半乳甘露聚糖抗原的制备方法和半乳甘露聚糖抗原。


背景技术：

2.半乳甘露聚糖(galactomannan，gm)广泛存在于曲霉菌属的菌丝及孢子的细胞壁中，在部分植物的细胞壁中也会存在这种成分，比如大豆。gm抗原是一种以甘露聚糖为主链，以呋喃半乳糖为侧链的多糖。当曲霉菌侵及组织器官时，菌丝在组织中不断生长。最早从菌丝顶端释放出来的抗原即为gm，其释放量与菌量呈正相关，可一定程度的反应曲霉菌感染程度，因其不存在于念珠菌及隐球菌胞壁中，因此对于曲霉菌病的诊断具有良好的特异性。
3.近年来，由于广谱抗生素、导管插管、免疫缺陷病如艾滋病、肿瘤化疗、造血干细胞及实体器官移植术后应用免疫抑制剂及糖皮质激素等药物，临床上出现越来越多的免疫力低下的患者，及正常宿主广泛暴露于曲霉菌孢子环境下使得侵袭性曲霉病(invasive aspergillosis，ia)的发病率呈上升趋势，死亡率也一直攀升，临床表现为咳嗽、咳痰、咯血、胸痛和呼吸困难等肺部感染症状(j fort
ú
n,et al.galactomannan in bronchoalveolar lavage fluid for diagnosis of invasive aspergillosis in non-hematological patients.journal of infection,2016:738-744.)。ia在血液病和造血干细胞移植患者中的死亡率高达70～90％，造成高死亡率的主要原因在于不能在病程早期对ia进行检测诊断，以至患者得不到及时有效的治疗。因此，对ia进行早期诊断具有重要的意义。同时gm还可作为监测指标反映药物治疗效果，故gm试验对ia的感染诊断十分重要。
4.目前，半乳甘露聚糖抗原主要从烟曲霉菌的培养液中分离，采用乙醇沉淀的方法对培养液上清液进行沉淀，然后用乙醇洗涤醇沉后的组分，得到抗原粗提物。然而，当半乳甘露聚糖抗原用于制备抗体时，由于粗提物中含有糖胺、蛋白，杂糖等杂质，无法满足抗体制备的要求，现有技术中也有对粗提物进行进一步纯化的研究，例如公开号为cn104945527a的中国发明专利申请公开了将制得的半乳甘露聚糖粗提物依次进行肼解、水解；向水解产物中加入酶进行酶解，并除去酶解产物中的酶及小分子物质；产物经离子交换柱、亲和层析柱及凝胶色谱纯化，得到纯度为93.18％的半乳甘露聚糖抗原，2l烟曲霉培养液最终可得到150mg半乳甘露聚糖抗原纯品，测得半乳甘露聚糖抗原纯化样品核酸及蛋白质含量为6.82％。然而，使用该方法步骤繁琐，操作复杂，而且成本较高，不易于规模化生产。
5.因此，有必要提供一种新型的半乳甘露聚糖抗原的制备方法和半乳甘露聚糖抗原以解决现有技术中存在的上述问题。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种半乳甘露聚糖抗原的制备方法和半乳甘露聚糖抗原，
有效降低纯化制备成本，简化制备步骤，提高制备效率，且制得的半乳甘露聚糖纯度较高。
7.为实现上述目的，本发明的半乳甘露聚糖抗原的制备方法包括以下步骤：
8.s1：对灭菌后的烟曲霉菌的菌液离心后保留第一上清液；
9.s2：在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液，离心弃去上清，得到曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物；
10.s3：除去所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物中的蛋白，得到多糖溶液；
11.s4：对所述多糖溶液依次进行脱色、超滤、层析和浓缩，得到半乳甘露聚糖纯品。
12.本发明的半乳甘露聚糖抗原的制备方法的有益效果在于：本发明的制备方法使用脱色、超滤、层析联用来对曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物进行纯化，能够有效降低纯化制备成本，简化制备步骤，提高制备效率，且制得的半乳甘露聚糖纯度较高，且核酸、蛋白质或其他杂质的含量较低，满足抗体制备的要求。
13.优选的，所述步骤s2中，所述离心弃去上清的步骤执行完毕后，对得到的沉淀用无水乙醇进行洗涤以得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
14.优选的，所述对得到的沉淀用无水乙醇进行洗涤以得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物的步骤包括：
15.s21：向所述沉淀加入去离子水得到第一混合物；
16.s22：在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液，离心弃去上清，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
17.优选的，所述s22步骤中，所述离心弃去上清，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物的步骤包括：所述离心弃去上清的步骤执行完毕后，对得到的沉淀用无水乙醇洗涤2-4次，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
18.优选的，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为3:1-5:1。
19.优选的，所述在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物在2-8℃下静置过夜。
20.优选的，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为3:1-5:1。
21.优选的，所述在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物静置0.5-1.5小时。
22.优选的，所述步骤s3包括：
23.s31：在所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物中加入去离子水，得到第二混合物；
24.s32：在所述第二混合物中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，得到所述多糖溶液。
25.优选的，所述步骤s32包括：在所述第二混合物中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，得到所述多糖溶液。其有益效果在于：可除去水层和溶剂层的变性蛋白质。
26.优选的，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤执行完毕后，重复2-4次所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤，得到所述多糖溶液。其有益效果在于：可除去水层和溶剂层的变性蛋白质。
27.优选的，所述第二混合物与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1-5:1。
28.优选的，其特征在于，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤中，所述得到的上清液体与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1-5:1。
29.优选的，所述步骤s4包括：
30.s41：向所述多糖溶液中加入活性炭粉末；
31.s42：对经所述步骤s41后所得的混合物进行超滤、层析和浓缩，得到半乳甘露聚糖纯品。
32.优选的，所述步骤s41包括：向每100ml所述多糖溶液中加入1-2g活性炭粉末后室温搅拌1-3小时。其有益效果在于：可在不吸附多糖的情况下有效对溶液进行脱色。
33.优选的，所述步骤s42包括：
34.s421：对所述步骤s41所得混合物进行超滤、离心；
35.s422：对所述步骤s421所得混合物使用葡聚糖凝胶层析柱进行层析，收集所得洗脱液并浓缩，得到所述半乳甘露聚糖纯品。
36.其有益效果在于：采用葡聚糖凝胶g-100层析柱对多糖溶液进行纯化可获得更高纯度的半乳甘露聚糖。
37.优选的，所述步骤s422包括：将所述步骤s421所得混合物从所述葡聚糖凝胶层析柱顶端注入，再分别用去离子水以及浓度为0.05-0.15mol/l的氯化钠溶液洗脱并收集预定洗脱峰处的洗脱液，对所述洗脱液进行浓缩得到所述半乳甘露聚糖纯品。
38.本发明还提供一种半乳甘露聚糖抗原，通过所述半乳甘露聚糖抗原的制备方法制成。本发明的半乳甘露聚糖纯度较高，且核酸、蛋白质或其他杂质的含量较低，满足抗体制备的要求。
附图说明
39.图1为本发明半乳甘露聚糖抗原的制备方法的流程图；
40.图2为半乳甘露聚糖纯品多糖含量测定标准曲线。
具体实施方式
41.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。除非另外定义，此处使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域内具有一般技能的人士所理解的通常意义。本文中使用的“包括”等类似的词语意指出现该词前面的元件或者物件涵盖出现在该词后面列举的元件或者物件及其等同，而不排除其他元件或者物件。
42.图1为本发明半乳甘露聚糖抗原的制备方法的流程图。参照图1，本发明提供了一种半乳甘露聚糖抗原的制备方法，包括以下步骤：
43.s1：对灭菌后的烟曲霉菌的菌液离心后保留第一上清液；
44.s2：在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液，离心弃去上清，得到曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物；
45.s3：除去所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物中的蛋白，得到多糖溶液；
46.s4：对所述多糖溶液依次进行脱色、超滤、层析和浓缩，得到半乳甘露聚糖纯品。
47.本发明的制备方法使用脱色、超滤、层析联用来对曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物进行纯化，能够有效降低纯化制备成本，简化制备步骤，提高制备效率，且制得的半乳甘露聚糖纯度较高，且核酸、蛋白质或其他杂质的含量较低，满足抗体制备的要求。
48.一些实施例中，所述步骤s2中，所述离心弃去上清的步骤执行完毕后，对得到的沉淀用无水乙醇进行洗涤以得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
49.一些实施例中，所述对得到的沉淀用无水乙醇进行洗涤以得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物的步骤包括：
50.s21：向所述沉淀加入去离子水得到第一混合物；
51.s22：在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液，离心弃去上清，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
52.一些实施例中，所述步骤s1包括：将培养后的所述烟曲霉的菌液在121℃下湿热灭菌35-45分钟，将灭菌后得到的菌液在室温下经定性滤纸过滤，然后使用0.22微米滤膜过滤去除所述烟曲霉的菌液中的菌体，保留第一上清液。所述烟曲霉的菌液在121℃下湿热灭菌35-45分钟可杀死芽孢。
53.一些实施例中，所述s22步骤中，所述离心弃去上清，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物的步骤包括：所述离心弃去上清的步骤执行完毕后，对得到的沉淀用无水乙醇洗涤2-4次，得到所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物。
54.一些实施例中，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为3:1-5:1。
55.一些具体的实施例中，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为3:1。
56.一些具体的实施例中，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为5:1。
57.一些具体的实施例中，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为4:1。所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为4:1可沉淀出最大量的多糖。
58.一些实施例中，所述在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物在2-8℃下静置过夜。
59.一些具体的实施例中，所述在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物在2℃下静置过夜。
60.一些具体的实施例中，所述在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物在4℃下静置过夜。
61.一些具体的实施例中，所述在所述第一上清液中加入第一无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物在8℃下静置过夜。
62.一些实施例中，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为3:1-5:1。
63.一些具体的实施例中，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为3:1。
64.一些具体的实施例中，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为5:1。
65.一些具体的实施例中，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为4:1。所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为4:1可沉淀出最大量的多糖。
66.一些实施例中，所述在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物静置0.5-1.5小时。
67.一些具体的实施例中，所述在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物静置0.5小时。
68.一些具体的实施例中，所述在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物静置1.5小时。
69.一些具体的实施例中，所述在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液的步骤执行完毕后，将得到的混合物静置1小时。
70.一些实施例中，所述步骤s3包括：
71.s31：在所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物中加入去离子水，得到第二混合物；
72.s32：在所述第二混合物中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，得到所述多糖溶液。
73.一些实施例中，所述步骤s32包括：在所述第二混合物中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心，得到所述多糖溶液。此步骤可除去水层和溶剂层的变性蛋白质。
74.一些实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤执行完毕后，重复2-4次所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤，得到所述多糖溶液。此步骤可除去水层和溶剂层的变性蛋白质。
75.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤执行完毕后，重复2次所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤，得到所述多糖溶液。
76.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤执行完毕后，重复4次所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤，得到所述多糖溶液。
77.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤执行完毕后，重复3次所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤，得到所述多糖溶液。
78.一些实施例中，所述第二混合物与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1-5:1。
79.一些具体的实施例中，所述第二混合物与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1。
80.一些具体的实施例中，所述第二混合物与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为5:1。
81.一些具体的实施例中，所述第二混合物与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为4:1。
82.一些实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤中，所述得到的上清液体与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1-5:1。
83.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤中，所述得到的上清液体与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为3:1。
84.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤中，所述得到的上清液体与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为5:1。
85.一些具体的实施例中，所述在得到的上清液体中加入由氯仿和醇组成的有机混合液后离心的步骤中，所述得到的上清液体与所述由氯仿和醇组成的有机混合液的体积比为4:1。
86.一些实施例中，所述步骤s4包括：
87.s41：向所述多糖溶液中加入活性炭粉末；
88.s42：对经所述步骤s41后所得的混合物进行超滤、层析和浓缩，得到半乳甘露聚糖纯品。
89.一些实施例中，所述步骤s41包括：向每100ml所述多糖溶液中加入1-2g活性炭粉末后室温搅拌1-3小时。此步骤可在不吸附多糖的情况下有效对溶液进行脱色。
90.一些实施例中，所述步骤s42包括：
91.s421：对所述步骤s41所得混合物进行超滤、离心；
92.s422：对所述步骤s421所得混合物使用葡聚糖凝胶层析柱进行层析，收集所得洗脱液并浓缩，得到所述半乳甘露聚糖纯品。
93.采用葡聚糖凝胶g-100层析柱对多糖溶液进行纯化可获得更高纯度的半乳甘露聚糖。
94.一些实施例中，所述步骤s422包括：将所述步骤s421所得混合物从所述葡聚糖凝胶层析柱顶端注入，再分别用去离子水以及浓度为0.05-0.15mol/l的氯化钠溶液洗脱并收集预定洗脱峰处的洗脱液，对所述洗脱液进行浓缩得到所述半乳甘露聚糖纯品。
95.一些具体的实施例中，所述步骤s422包括：将所述步骤s421所得混合物从所述葡聚糖凝胶层析柱顶端注入，再分别用去离子水以及浓度为0.05mol/l的氯化钠溶液洗脱并收集预定洗脱峰处的洗脱液，对所述洗脱液进行浓缩得到所述半乳甘露聚糖纯品。
96.一些具体的实施例中，所述步骤s422包括：将所述步骤s421所得混合物从所述葡聚糖凝胶层析柱顶端注入，再分别用去离子水以及浓度为0.15mol/l的氯化钠溶液洗脱并收集预定洗脱峰处的洗脱液，对所述洗脱液进行浓缩得到所述半乳甘露聚糖纯品。
97.一些具体的实施例中，所述步骤s422包括：将所述步骤s421所得混合物从所述葡聚糖凝胶层析柱顶端注入，再分别用去离子水以及浓度为0.1mol/l的氯化钠溶液洗脱并收集预定洗脱峰处的洗脱液，对所述洗脱液进行浓缩得到所述半乳甘露聚糖纯品。
98.本发明还提供一种半乳甘露聚糖抗原，通过所述半乳甘露聚糖抗原的制备方法制成。本发明的半乳甘露聚糖纯度较高，且核酸、蛋白质或其他杂质的含量较低，满足抗体制备的要求。
99.以下通过实施例1-4对本发明的技术方案进行详细阐述。
100.实施例1
101.本发明实施例1提供了半乳甘露聚糖抗原的具体制备方法。所述半乳甘露聚糖抗原的具体制备方法为：
102.将烟曲霉接种于沙氏液体培养基中，每升所述沙氏液体培养基含10g蛋白胨与40g葡萄糖，将所述沙氏液体培养基在温度为30℃、摇床转速为200转/分的条件下培养46小时；
103.取200ml培养后的所述烟曲霉的菌液在121℃下湿热灭菌40分钟，将灭菌后得到的菌液在室温下经定性滤纸过滤，然后使用0.22微米滤膜过滤去除所述烟曲霉的菌液中的菌体，保留第一上清液；
104.将所述第一上清液转移至离心管中，加入第一无水乙醇溶液，将得到的混合物在4℃下静置过夜，所述第一无水乙醇溶液与所述第一上清液的体积比为4:1，得到的混合物在4℃下静置过夜后在4℃、16000g的条件下离心15分钟，弃去上清液，在得到的沉淀中加入去离子水，得到第一混合物；
105.在所述第一混合物中加入第二无水乙醇溶液，将得到的混合物静置1小时，离心弃去上清，到的沉淀用无水乙醇洗涤3次后在4℃、16000g的条件下离心15分钟，然后弃去上清，得到曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物，所述第二无水乙醇溶液与所述第一混合物的体积比为4:1；
106.在所述曲霉菌半乳甘露聚糖粗提物中加入去离子水，得到第二混合物；
107.在所述第二混合物中加入体积为所述第二混合物的1/4的sevage试剂后25℃下磁力搅拌30分钟，然后离心，得到的上清为第二上清液，所述sevage试剂为氯仿和正丁醇体积比为4:1的混合液；
108.在所述第二上清液中加入体积为所述第二上清液的1/4的sevage试剂后25℃下磁力搅拌30分钟，然后离心，得到的上清为第三上清液；
109.在所述第三上清液中加入体积为所述第三上清液的1/4的sevage试剂后25℃下磁力搅拌30分钟，然后离心，得到的上清为第四上清液；
110.在所述第四上清液中加入体积为所述第四上清液的1/4的sevage试剂后25℃下磁力搅拌30分钟，然后离心，得到的上清为第五上清液；
111.在所述第五上清液中加入体积为所述第五上清液的1/4的sevage试剂后25℃下磁力搅拌30分钟，然后离心，得到的上清为多糖溶液；
112.在每100ml所述多糖溶液中加入1.5g活性炭粉末后室温搅拌2小时，对搅拌后的混合物采用0.22微米的滤膜过滤，将得到的上清液转移至10kd离心超滤管，然后在7500g条件下离心15分钟并弃去沉淀，得到5ml浓缩后的多糖溶液；
113.对所述浓缩后的多糖溶液经葡聚糖凝胶g-100层析柱进行纯化，具体步骤为：取所述浓缩后的多糖溶液从所述葡聚糖凝胶g-100层析柱顶端缓缓注入，分别用去离子水、0.1mol/l的nacl溶液梯度洗脱，洗脱液釆用手动收集，每管收集2ml，各洗脱液收集50管，每隔一管釆用苯酚-硫酸法检测收集同一洗脱峰处的多糖并浓缩，浓缩后即得到所述样液中的半乳甘露聚糖纯品。
114.实施例2
115.本发明实施例2使用苯酚-硫酸法对本发明实施例1制备的半乳甘露聚糖纯品进行多糖含量检测。图2为半乳甘露聚糖纯品多糖含量测定标准曲线，表1是标准品、稀释10倍的半乳甘露聚糖纯品的含糖量浓度与od490
nm
值的对应关系表。参照图2和表1，将半乳甘露聚糖纯品稀释10倍，测量其od490
nm
值为1.076，根据半乳甘露聚糖纯品多糖含量测定标准曲线可得知稀释10倍的半乳甘露聚糖纯品含糖量浓度为0.3935mg/ml。
116.表1
[0117][0118]
测得全部半乳甘露聚糖纯品的体积为5ml。表2是半乳甘露聚糖纯品的体积和含糖量对应关系表。参照表2，稀释10倍的半乳甘露聚糖纯品含糖量浓度为0.3935mg/ml，可得0.2ml稀释10倍的半乳甘露聚糖纯品、0.2ml原倍浓度的半乳甘露聚糖纯品和5ml半乳甘露聚糖纯品中的含糖量分别为0.079mg、0.787mg和19.675mg。通过本发明的制备方法从200ml烟曲霉培养液中最终可得到19.675mg的半乳甘露聚糖纯品。可知，通过本发明的制备方法从2l烟曲霉培养液中最终可得到196.75mg的半乳甘露聚糖纯品，高于公开号为cn104945527a的中国发明专利申请中2l烟曲霉培养液最终可得到的150mg半乳甘露聚糖抗原纯品的含糖量，因此本发明制备的半乳甘露聚糖纯品含糖量较高。
[0119]
表2
[0120]
样品名称体积(ml)糖含量(mg)半乳甘露聚糖纯品(稀释10倍)0.20.079半乳甘露聚糖纯品(原倍)0.20.787全部半乳甘露聚糖纯品519.675
[0121]
实施例3
[0122]
本发明实施例3对实施例1制备的半乳甘露聚糖纯品进行紫外吸收检测，分别在uv260nm、uv280nm、uv320nm波长下检测半乳甘露聚糖纯品样本，可得知核酸及蛋白质的总含量。表3是半乳甘露聚糖纯品进行紫外吸收检测测得的核酸及蛋白质含量表。参照表3，本发明制备的半乳甘露聚糖纯品中核酸和蛋白质的总含量不超过样本总质量的5％，多糖含量达到95.78％。而公开号为cn104945527a的中国发明专利申请技术方案中所制备的半乳甘露聚糖抗原含糖量为93.18％的，半乳甘露聚糖抗原纯化样品核酸及蛋白质含量为6.82％，因此本发明制备的半乳甘露聚糖纯品的含糖量更高，核酸和蛋白质含量更低。
[0123]
表3
[0124]
检测内容浓度(μg/ml)含量(％)dna9.9510.24％蛋白质163.413.98％多糖393595.78％
[0125]
实施例4
[0126]
本发明实施例4对本发明的方法制备的半乳甘露聚糖纯品进行检测，表4是采用丹娜生物的曲霉半乳甘露聚糖检测试剂盒进行gm抗原鉴定检测结果。参照表4，检测结果呈阳性，且半乳甘露聚糖纯品的od450
nm
值大于阳性质控值，说明本发明的制备方法获得烟曲霉的半乳甘露聚糖纯品具有免疫学活性，满足抗体制备的要求。
[0127]
表4
[0128]
样品名称od450
nm
空白对照0.088阴性质控品0.241阳性质控品2.981cut-off质控品12.23cut-off质控品21.089本发明半乳甘露聚糖纯品3.479
[0129]
虽然在上文中详细说明了本发明的实施方式，但是对于本领域的技术人员来说显而易见的是，能够对这些实施方式进行各种修改和变化。但是，应理解，这种修改和变化都属于权利要求书中所述的本发明的范围和精神之内。而且，在此说明的本发明可有其它的实施方式，并且可通过多种方式实施或实现。