一种用于快速繁殖甘薯试管苗的培养基及其制备方法

本发明涉及快繁，更具体的说是涉及一种用于快速繁殖甘薯试管苗的培养基及其制备方法。

背景技术：

1、甘薯种植历史悠久，随着粮食产量的不断增加，粮食问题逐步得到解决，甘薯的种植面积逐渐减少，已从主要粮食作物转为经济作物种植。

2、甘薯由于在生产、储藏过程中无污染、无公害而又营养丰富，有关专家们评价它是“21世纪最理想的食物”。甘薯具有丰富的人体所需要的营养物质，据《中华医药全典》介绍，甘薯是碱性食品，含有蛋白质、脂肪、糖类、粗纤维、钙、磷、铁、钾、钠、镁、氯、胡萝b素、维生素b1、维生素b2、烟酸和维生素c，还含有番茄碱和苹果酸等。且甘薯具有良好的医疗保健作用，含有人体必需的氨基酸-赖氨酸，能供给人体大量的粘液蛋白，对人体有特殊的保护作用；并能保持心血管管壁的弹性，防止动脉粥样硬化发生，并使皮下脂肪减少，避免出现过度肥胖；还能防止肝脏和肾脏中结缔组织萎缩，预防胶原病的发生；同时，还能保持消化道、呼吸道以及关节腔和浆膜腔的滑润。甘薯含淀粉和纤维素很高，可预防便秘和肠道疾病，有助于防止血液中胆固醇的形成，“具有补中和血、益气生津、宽肠胃、通便秘的功效”。李时珍在《本草纲目》中写道，甘薯“补虚乏、益气力、健脾胃、强肾阴”，久食“使人长寿少病”。

3、近年来，甘薯病毒病严重危害甘薯的生产，是导致甘薯产量、品质降低和种性退化的主要原因之一。甘薯是无性繁殖作物，由于长期的无性繁殖，病毒可通过薯块和秧苗传播，病毒积累也随之增多，造成甘薯产量和种性严重退化。目前，尚无对甘薯病毒有效的化学防治方法。因此，甘薯脱毒苗繁育技术仍是防治甘薯病毒病最有效的措施。

4、传统的甘薯脱毒苗繁育技术存在一定的不足：首先，从脱毒苗到生产种需要3-4年，周期长；其次，在脱毒苗的生长繁育过程中，甘薯容易感染病毒，并随着繁殖代数的增加而逐代加重，种薯质量下降；再次，在繁育过程中需要的人力物力增多，经济成本高等问题。

5、因此，如何缩短甘薯试管苗的生长时间是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于快速繁殖甘薯试管苗的培养基及其制备方法，以解决现有技术中的不足。

2、为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、一种用于快速繁殖甘薯试管苗的培养基，包括以下组分：ms+0.2-0.4mg/l6-ba(6-苄氨基腺嘌呤)+0.05-0.15mg/lnaa(萘乙酸)+0.1-0.3mg/l iaa(吲哚乙酸)+0.02-0.04mg/l pp333(多效唑)+0.7-0.9g/l kno3(硝酸钾)+0.21-0.23g/lmgso4(硫酸镁)+0.43-0.45g/lcacl2(氯化钙)；

4、优选为：ms+0.3mg/l 6-ba+0.1mg/l naa+0.2mg/l iaa+0.03mg/lpp333+0.8g/lkno3+0.22g/lmgso4+0.44g/l cacl2。

5、本发明中：

6、ms培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。ms培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。和其它培养基的基本成分相比，ms培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。

7、6-ba，即6-苄氨基嘌呤，别称有6-苯甲基腺嘌呤等，主要作用是促进芽的形成。

8、naa，即1-萘乙酸，分子式是c12h10o2，具有生长素类活性的植物生长调节剂，由根、茎、叶吸收，主要作用是诱发不定根形成。

9、iaa，即生长素，其化学本质是吲哚乙酸，有调节茎的生长速率、抑制侧芽、促进生根等作用。

10、pp333，即多效唑，三唑类植物生长调节剂，是内源赤霉素合成的抑制剂，具有延缓植物生长，抑制茎杆伸长，缩短节间、促进植物分蘖、促进花芽分化，增加植物抗逆性能，提高产量等效果。

11、kno3，提供氮元素和钾离子。

12、mgso4，提供镁离子。

13、cacl2，提供钙离子。

14、一种用于快速繁殖甘薯试管苗的培养基的制备方法，具体包括以下步骤：

15、(1)植物激素和盐的配制

16、按上述培养基的浓度配制6-ba、naa、iaa、pp333、kno3、mgso4和cacl2；

17、(2)融化琼脂

18、将琼脂置于不锈钢锅内，加入所需配制培养基体积一半的水，加热融化琼脂，得到琼脂液，备用；

19、(3)加母液

20、将配制的6-ba、naa、iaa、pp333、kno3、mgso4和cacl2，ms培养基的各种母液，以及蔗糖加入琼脂液中，继续加热并搅拌，待蔗糖溶解后，加水至所需配制培养基体积，搅拌均匀；

21、(4)调节ph值

22、测量培养基的ph值，并调节培养基的ph值为5.8-6.0；

23、(5)分装

24、将培养基进行分装，并用耐高温高压材料封口；

25、(6)高压灭菌

26、将培养基置于高压灭菌锅中，用饱和蒸汽彻底排出高压灭菌锅内空气后，高压灭菌，待高压灭菌锅气压降至常压后，将培养基移到洁净室，即得。

27、进一步，上述步骤(1)中，6-ba的配制具体为：称取1.0mg/ml的6-ba，先用1mol/l的naoh使之溶解，再用蒸馏水定容至0.2-0.4mg/l，置于4℃冰箱贮藏待用。

28、进一步，上述步骤(1)中，naa的配制具体为：称取0.1mg/ml的naa，先用95％酒精使之溶解，再用蒸馏水定容至0.05-0.15mg/l，置于4℃冰箱贮藏待用。

29、进一步，上述步骤(1)中，iaa的配制具体为：称取0.1mg/ml的iaa，先用95％酒精使之溶解，再用蒸馏水定容至0.1-0.3mg/l，置于4℃冰箱贮藏待用。

30、进一步，上述步骤(1)中，pp333的配制具体为：称取0.1mg/ml的pp333，先用蒸馏水充分溶解，再用蒸馏水定容至0.02-0.04mg/l，置于4℃冰箱贮藏待用。

31、进一步，上述步骤(4)中，测量的工具为酸度计或精密ph试纸；调节ph值的溶液为0.1mol/l的hcl溶液或0.1mol/l的naoh溶液。

32、进一步，上述步骤(5)中，分装的容器为试管、三角瓶或培养瓶(不要将培养基粘附到培养瓶口)。

33、进一步，上述步骤(6)中，高压灭菌的温度为121℃，时间为20-40min(灭菌物体积越大，所需灭菌时间延长)。

34、经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

35、本发明通过优化培养基组分，缩短了甘薯试管苗的生长时间，提高了甘薯试管苗的扩繁系数，降低了组培的生产成本，使甘薯脱毒苗繁育技术体系达到了节本增效的目的。