一种土壤为栽培基质的植物无菌培养的方法

本发明涉及栽培中一种土壤为栽培基质的植物无菌培养的方法。

背景技术：

1、植物无菌培养通常采用在固体植物培养基中栽培植物的方法。在固体培养基中，微生物往往只能在固体培养基表面生长，但在植物-微生物互作的相关研究中，需要构建微生物能够直接接触植物根系的无菌实验体系。因此，该领域研究需要一种具有微生物渗透性培养介质的植物无菌培养体系。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题是如何实现以土壤为栽培基质的植物无菌培养。

2、为解决上述问题，本发明提供一种土壤为栽培基质的植物无菌培养的方法，包括如下步骤：

3、将装有土壤的种植容器整体高压蒸汽灭菌，所述种植容器为向上开口的透明瓶，开口处覆以透气封口膜；在无菌条件下将透气封口膜打开，以无菌水进行灌溉充分润湿土壤，将消毒后的植物种子种植到所述土壤中后将透气封口膜盖好；在人工气候培养箱内完成植物培养。

4、上述方法中，所述种植容器，具体可为向上开口的圆柱形玻璃瓶。

5、上述方法中，所述过滤透气封口膜可选为16cm×16cm。

6、上述方法中，所述高压蒸汽灭菌，为在121℃高压蒸汽灭菌60min(含)以上。

7、上述方法中，所述土壤为将花卉营养土与蛭石按体积比为1:3混合得到的混合物。

8、上述方法中，所述土壤的土层高度为5-8cm。

9、上述方法中，所述消毒后的种子，先后以体积百分含量70％的乙醇水溶液、质量百分含量1.5％的次氯酸钠水溶液处理种子后以无菌水清洗后获得。

10、上述方法中，禾本科颖果类植物种子为剥去谷壳后的种子。

11、上述方法中，所述无菌条件可为在生物安全柜中。

12、上述方法中，所述无菌水为无菌ddh2o。

13、上述方法中，所述植物可为单子叶植物或双子叶植物；所述单子叶植物可选为禾本科植物，所述禾本科植物可选为水稻。

14、上述方法中，所述方法还包括将完成植物培养的植物的不同组织进行含菌情况检测的步骤。

15、上述方法中，所述方法中所述含菌情况检测可为以针对细菌保守基因的引物进行pcr检测有无细菌。

16、上述方法中，所述针对细菌保守基因的引物，具体可为针对细菌保守基因16srrna基因的v3v4可变区引物对，由322f-a和796r组成：

17、322f-a：5’-acgghccaractcctacggaa-3’；

18、796r：5’-ctaccmgggtatctaatcckg-3’。

19、本发明提供了一种土壤为栽培基质的植物无菌培养的方法，本发明的方法所培养的水稻，其茎叶和根部经pcr检测均不含菌，说明本发明的无菌土培方法同样实现了水稻的无菌培养，可用于植物-微生物互作的相关研究。

技术特征：

1.一种植物无菌培养的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述种植容器，为向上开口的圆柱形玻璃瓶。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述高压蒸汽灭菌，为在121℃高压蒸汽灭菌60min以上。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述消毒后的植物种子，为先以体积百分含量为70％的乙醇水溶液处理再以质量百分含量为1.5％的次氯酸钠水溶液处理种子后以无菌ddh2o清洗后获得。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述无菌条件由生物安全柜提供。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述无菌水为无菌ddh2o。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述植物为单子叶植物或双子叶植物。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述单子叶植物为禾本科植物。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述禾本科植物为水稻。

10.根据权利要求1-9任一所述的方法，其特征在于：所述方法还包括将完成植物培养的植物的不同组织进行含菌情况检测的步骤。

技术总结本发明涉及栽培技术领域，具体提供了一种土壤为栽培基质的植物无菌培养的方法，包括如下步骤：将装有土壤的种植容器整体高压蒸汽灭菌，所述种植容器为向上开口的透明高瓶，开口处覆以过滤透气封口膜；在无菌条件下将过滤透气封口膜打开，以无菌水灌溉充分润湿土壤，将消毒后的植物种子种植到所述土壤中后将过滤透气封口膜盖好；在人工气候培养箱内完成植物培养。本发明的方法所培养的水稻，其茎叶和根部经PCR检测均不含菌，说明本发明的无菌土培方法同样实现了水稻的无菌培养，可用于植物‑微生物互作的相关研究。技术研发人员：张莉莉,陈丽莹,方荣祥,张杰受保护的技术使用者：中国科学院微生物研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/11