一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法

本发明属于生物医学，提供了一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法。

背景技术：

1、在地球的丰富生态系统中，野生动物与自然环境关系紧密，它们之间的相互作用不仅塑造了生物的进化历程，更维护了地球生物多样性的繁荣。考拉作为澳大利亚特有的珍稀物种，其生存状况直接影响着当地生态系统的稳定性与完整性。然而，近年来，由于人类活动的干扰，考拉的生存环境面临着严峻的挑战。森林砍伐、城市扩张和气候变化等因素导致考拉的栖息地日益减少，食物来源受限，种群数量锐减。在此背景下，传统的保护措施虽然取得了一定成效，但仍难以应对日益严峻的生存威胁。因此，发明针对该物种的保育专利，具有深远的示范意义。它向世界传递了一个明确的信号：人类有能力和责任通过科技创新来保护野生动物和自然环境。这将激发更多人的环保意识和创新行动，推动全球生物多样性保护事业的发展。

2、考拉生活习性和身体结构特殊，许多药物对它们来说可能是不安全的。因此，我们需要对考拉的药物使用进行深入研究，以确保它们得到适当的治疗并最小化潜在的副作用。通过对考拉药物使用的深入研究，我们可以更好地提升用药的安全性。这不仅有助于确保考拉得到及时有效的治疗，同时还避免了药物对它们的健康产生负面影响。此外，这项研究还将有助于提高人们对珍稀物种用药风险的认识，促进对野生动物的保护和管理。

3、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法，对考拉的药物使用进行体外深入研究，确保考拉得到适当的治疗并将潜在的副作用最小化，更好地提升用药的安全性。

2、本发明首次通过移植混悬液的方式将健康老年考拉肠道菌群移植至小鼠体内，旨在扩大可监测范围，更深入、全面地探讨成年及衰老圈养考拉肠道微生物所引起的小鼠机体各器官的功能变化，为后续给药提供更精确的监测方式。

3、本发明的目的通过下述技术方案实现：

4、一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法，包括如下步骤：

5、(1)制备粪菌混悬液：将来源于老年考拉的粪便制成粪菌混悬液；

6、(2)小鼠灌服和/或饮水方式服用抗生素混合液，所述的抗生素包括万古霉素、氨苄西林、新霉素和甲硝唑；

7、(3)模型建立：将步骤(2)中的小鼠移植步骤(1)制备的粪菌悬浮液，得到考拉源老年小鼠模型。

8、进一步的，步骤(1)具体包括如下步骤：将老年考拉的新鲜粪便溶于无菌生理盐水中，制成混悬液，通过过滤、离心去上清液，获得的沉淀物质即为菌液，溶解菌液得到粪菌混悬液。

9、优选的，所述老年考拉是指8岁以上的考拉；

10、优选的，所述混悬液的浓度为0.15～0.25g/ml；进一步优选为0.2g/ml。

11、优选的，所述过滤是通过两次过滤，具体是先用2层无菌纱布过滤，除去大颗粒物质，再用4层无菌纱布二次过滤；

12、优选的，所述离心的条件为2～8℃，5000～8000r/min，离心10～20min；进一步优选为4℃，6000r/min，离心15min。

13、优选的，将菌液用生理盐水重悬后，再加入无菌甘油，使得菌液：生理盐水：无菌甘油＝7～9：7～9：2～6；进一步优选为9：9：2。

14、进一步的，步骤(2)中，

15、所述小鼠为8周龄c57bl/6n小鼠；优选为8周龄c57bl/6n雄性小鼠。c57bl/6j小鼠为烟酰胺核苷酸转氢酶突变体，会表现出氧化还原相关失衡等改变，故选用c57bl/6n小鼠进行老龄化研究；

16、抗生素给药量为万古霉素0.1～0.15mg/只、氨苄西林0.2～0.3mg/只、新霉素0.2～0.3mg/只、甲硝唑0.2～0.3mg/只；持续2周。

17、进一步优选的，抗生素给药量为万古霉素0.1mg/只、氨苄西林0.2mg/只、新霉素0.2mg/只、甲硝唑0.2mg/只；持续2周。

18、所述抗生素混合液为0.5mg/ml万古霉素、1mg/ml氨苄西林、1mg/ml新霉素、1mg/ml甲硝唑。

19、进一步的，步骤(3)中，

20、移植采用的方式是灌服；

21、移植粪菌混悬液量为200～300μl/只/次，1周3次，持续4～6周(优选6周)；进一步优选的，移植粪菌混悬液量为200μl/只/次，1周3次，持续4～6周(优选6周)；

22、评价考拉源老年小鼠相关表型，所述方法包括：通过大脑皮层、空肠组织衰老因子表达水平进行评价。

23、优选的，所述衰老因子包括tnf-α、il-6、clec4e等；

24、本发明选用小鼠作为试验动物，以灌服生理盐水作为空白对照组，以灌服考拉粪菌混悬液作为模型组，探究移植老年考拉粪菌对小鼠机体的影响。

25、本发明移植小鼠时，对模型成功建立的检测主要体现在以下方面：

26、(1)模型小鼠衰老相关分泌表型因子表达量明显增加；

27、(2)模型小鼠表现出明显的考拉型免疫衰老。衰老与炎症和免疫稳态的改变有关，免疫细胞的衰老与细胞因子水平的体内平衡变化以及代谢途径的改变有关。而细胞因子是由先天免疫系统和适应性免疫系统的细胞产生的免疫调节因子。

28、通过上述方法构建的考拉源老年小鼠模型包括用于阐明考拉机体衰老发病机制和/或研发考拉抗衰老药物。

29、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

30、本发明选用c57bl/6n小鼠并分组正常喂养；所述小鼠日均饮水量为4～7ml/d，根据饮水量给予小鼠自由饮用抗生素构建无菌环境，再利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型；试验期间观察小鼠饮食、活动、精神状态、排便等表观状态，待试验结束，通过real-time quantitative pcr(qpcr)方法检测小鼠各组织衰老因子的表达量。试验结果表明，灌胃6周老年考拉粪菌混悬液能够成功引起小鼠衰老因子的表达量增加，证明小鼠出现衰老表征。该模型在阐明机体衰老发病机制及药物研发方面具有明显的优势和广泛的应用前景，能够对考拉的药物使用进行深入研究，确保考拉得到适当的治疗并将潜在的副作用最小化，更好地提升用药的安全性。

技术特征：

1.一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于：

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：

10.权利要求1～9任一项所述方法构建的考拉源老年小鼠模型在用于阐明考拉机体衰老发病机制和/或研发考拉抗衰老药物中的应用。

技术总结本发明公开一种利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型的方法，属于生物医学技术领域。本发明选用C57BL/6N小鼠并分组正常喂养；自由饮用抗生素构建无菌环境，再利用粪菌移植技术构建考拉源老年小鼠模型；试验期间观察小鼠饮食、活动、精神状态、排便等表观状态，待试验结束，通过qPCR方法检测小鼠各组织衰老因子的表达量。试验结果表明，灌胃6周老年考拉粪菌混悬液能够成功引起小鼠衰老因子的表达量增加，证明小鼠出现衰老表征。该模型在阐明机体衰老发病机制及药物研发方面具有明显的优势和广泛的应用前景，能够对考拉的药物使用进行深入研究，确保考拉得到适当的治疗并将潜在的副作用最小化，更好地提升用药的安全性。技术研发人员：郭世宁,朱咏琪,吕伟杰受保护的技术使用者：华南农业大学技术研发日：技术公布日：2024/6/11