一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法

本发明涉及植物组织培养，具体涉及一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法。

背景技术：

1、菊花(chrysanthemum morifolium)传统品种繁多，达七千多个；开花观赏期长，自每年6月至次年1月连续不断；花型花色丰富多彩。近年来，切花菊已发展成为国际商品花卉中总产值最高的花种，具有花形多样、色彩丰富、用途广泛、耐运耐贮、瓶插寿命长、繁殖栽培容易、能周年供应、成本低、高产出等优点(陈亚娇,2019)。

2、切花菊品种分为小花多头型和大花单头型两种类型品种。然而，单头大花型标准切花菊极易着生侧芽，侧芽生长消耗营养、影响成花品质。为了保持切花菊的商品性，大花型品种生产过程需要将所有侧芽人工抹除，但抹芽操作费时费力。在目前标准切花菊生产中，平均每公顷要花费约2500个小时的单位劳动时间用于抹除侧芽侧蕾，其人工费用约占生产成本的1/3，导致企业人工成本过高,效益和效率下降,影响规模化生产(温超等,2017)。

3、日、韩在无/少侧芽大花型单头菊育种上已取得了一定的突破，尤其以日本开始较早、进展较快，如精兴园有限会社(seikoen-kiku)近年来通过杂交育种选育了‘精の一世’、‘精の光彩’、‘精州’、‘精菱’等无/少侧芽品种，逐渐成为主流商业品种。然而，目前‘精の一世’等无/少侧芽品种多采用传统的扦插繁育，尚未建立高效的组织培养快速繁殖技术，导致产量较难满足日益增长的市场需求。

技术实现思路

1、发明目的：本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，通过对外植体消毒、初代培养、继代培养和生根培养的参数优化，提高无/少侧枝切花菊品种的诱导率、增殖系数和生根率，提高无/少侧枝切花菊繁殖效率。

2、技术方案：本发明所述一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，包括如下步骤：

3、步骤1、无菌外植体获得：选取切花菊当年生、无病虫害幼嫩茎段，去掉叶片，留少许叶柄，通过消毒、清洗得到外植体；

4、步骤2、初代培养：将步骤1得到的待接种外植体去除伤口表面变色部分，将外植体剪成1.5cm左右小段，每段带有1-2个腋芽，接种到初代培养基中培养，诱导芽；

5、步骤3、继代增殖培养：待步骤2得到的无菌外植体生长到具有1.5cm的芽时，将带有芽的外植体接种到继代增殖培养基中，得到增殖试管苗；

6、步骤4、生根培养；将步骤3得到的健壮无根小苗接种于生根培养基中进行光照培养，培养条件为温度25±2℃，光强度1500～2500lx，光照时间为6h·d-1，湿度60％～70％，培养4周后，得到生根试管苗；

7、进一步地，步骤1具体为：

8、步骤1.1、选取‘精の一世’当年生幼嫩茎段，去掉叶片，留少许叶柄，得到外植体；

9、步骤1.2、将外植体加少许洗洁精，置于流水下冲洗2h，用1g/l的头孢水浸泡30min，随后滤纸将外植体表面水分吸干，放于超净工作台上；

10、步骤1.3、对水分吸干的外植体进行消毒。

11、进一步地，步骤1.3中的消毒方式为：75％的酒精消毒20s，无菌水冲洗1次，0.5％的苯扎溴铵浸泡消毒15min，无菌水冲洗3次，每次5min。

12、进一步地，初代培养基组成为：ms+6-ba 1mg/l+naa 0.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

13、进一步地，继代培养基组成为：ms+6-ba 0.5mg/l+naa 0.2mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

14、进一步地，生根培养基组成为：1/2ms+iba 0.1mg/l+naa 0.1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

15、进一步地，步骤2中的初代培养基中添加的激素为6-ba 1mg/l和naa 0.5mg/l。

16、进一步地，步骤3中的继代增殖培养基中添加的激素为6-ba 0.5mg/l+naa0.2mg/l。

17、进一步地，步骤4中的生根培养基中添加的激素为iba0.1mg/l+naa0.1mg/l。

18、有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：

19、(1)本发明中提供的无/少侧枝切花菊外植体消毒方法，消毒效果较好，存活率高达96％，褐化率仅为0.5％；

20、(2)本发明中提供的无/少侧枝切花菊初代培养基配方，无/少侧枝切花菊芽诱导率超过75％，培养一周后有嫩芽长出，培养15d，嫩芽长高，叶片舒展；

21、(3)本发明中提供的无/少侧枝切花菊增殖培养基配方，增殖系数最高为4.88，且组培苗玻璃化程度低；

22、(4)本发明中提供的无/少侧枝切花菊生根培养基配方，生根率为100％，平均根长超过12cm，根系数量超过27个；

23、(5)本发明的方法简便，所用试剂常规易于获得，可实现无/少侧枝切花菊的高效繁殖。

技术特征：

1.一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：步骤1具体为：

3.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤1.3中的消毒方式为：75％的酒精消毒20s，无菌水冲洗1次，0.5％的苯扎溴铵浸泡消毒15min，无菌水冲洗3次，每次5min。

4.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的初代培养基组成为：ms+6-ba 1mg/l+naa 0.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

5.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的继代培养基组成为：ms+6-ba 0.5mg/l+naa 0.2mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

6.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述的生根培养基组成为：1/2ms+iba 0.1mg/l+naa0.1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l。

7.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤2的初代培养基中添加的激素为6-ba 1mg/l和naa0.5mg/l。

8.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤3的继代增殖培养基中添加的激素为6-ba 0.5mg/l+naa 0.2mg/l。

9.根据权利要求1所述的一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，其特征在于：所述步骤4的生根培养基中添加的激素为iba 0.1mg/l+naa 0.1mg/l。

技术总结本发明提供一种无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法，属于植物组织培养技术领域；本发明无/少侧枝切花菊组织培养快速繁殖方法包括外植体消毒、初代培养、继代培养和生根培养；本发明中提供的无/少侧枝切花菊外植体消毒方法，消毒效果较好，存活率高达96％，褐化率仅为0.5％；本发明中提供的无/少侧枝切花菊初代培养基配方，无/少侧枝切花菊芽诱导率超过75％，培养一周后有嫩芽长出，培养15d，嫩芽长高，叶片舒展；本发明中提供的无/少侧枝切花菊增殖培养基配方，增殖系数最高为4.88，且组培苗玻璃化程度低；本发明中提供的无/少侧枝切花菊生根培养基配方，生根率为100％，平均根长超过12cm，根系数量超过27个。技术研发人员：周琳,杨贞,杨柳燕,张永春,蔡友铭受保护的技术使用者：上海市农业科学院技术研发日：技术公布日：2024/6/13