一种用于猪δ冠状病毒的mRNA疫苗及其构建方法和应用

本发明涉及生物医药，特别是涉及一种用于猪δ冠状病毒的mrna疫苗及其构建方法和应用。

背景技术：

1、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus，pdcov)是一种新型的猪肠致病性冠状病毒，属于新发现的冠状病毒科δ冠状病毒属，引起猪腹泻、呕吐、脱水甚至死亡。pdcov全长基因组约25.4kb，编码15个成熟非结构蛋白(nsp2-16)，4个结构蛋白(s、e、m、n)和3个辅助蛋白(ns6、ns7、ns7a)。其中，s蛋白已被确定为pdcov最具免疫原性的抗原，在诱导中和抗体和抗病毒t细胞应答中起重要作用。

2、pdcov可引起5-15日龄哺乳仔猪腹泻和呕吐，pdcov感染后的剖检变化与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus，pedv)和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus，tgev)的相似。疫苗接种仍然是预防和控制传染病最有效的方法。目前，还没有针对pdcov的商业疫苗，需要进一步研发安全有效控制pdcov的疫苗，对于pdcov的防控具有重要意义，若pdcov基因组持续突变，混合感染其他病毒，需要在很短的开发周期内开发出有效的疫苗。而mrna疫苗是将含有编码抗原蛋白的mrna导入人体，直接进行翻译，形成相应的抗原蛋白，从而诱导机体产生特异性免疫应答，达到预防免疫的作用。mrna疫苗利用的是病毒的基因序列而不是病毒本身，因此，mrna疫苗具有不带有病毒成分，没有感染风险的特点。同时，mrna疫苗研发周期短，能够快速开发新型候选疫苗应对病毒变异。因此，mrna疫苗有助于在短的时间内研制出针对新出现的感染性疾病大流行的疫苗。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种用于猪δ冠状病毒的mrna疫苗及其构建方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，该mrna疫苗的研发时间短、安全性高，可以对目前pdcov的防控产生免疫保护，可为pdcov防控提供技术支撑。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

3、本发明提供一种用于猪δ冠状病毒的mrna疫苗，所述mrna疫苗包括如seq id no：1-2所述序列中至少一种。

4、本发明还提供所述的mrna疫苗的制备方法，包括以下步骤：

5、合成mrna疫苗的dna序列；

6、将所述dna序列构建到载体上，之后经过酶切、转录和纯化，得到所述的mrna疫苗。

7、本发明还提供一种用于猪δ冠状病毒的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗，所述脂质纳米颗粒包裹mrna疫苗包括权利要求1所述的mrna疫苗，以及用于包裹所述mrna疫苗的脂质，所述脂质是采用可电离化脂质体、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、胆固醇和peg-脂质体混合而成。

8、优选的是，所述可电离化脂质体、所述二硬脂酰基磷脂酰胆碱、所述胆固醇和所述peg-脂质体的摩尔比为55∶(5-15)∶(30-40)∶(1-2)。

9、本发明还提供一种所述的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗的制备方法，包括以下步骤：

10、将可电离化脂质体、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、胆固醇和peg-脂质体溶解于乙醇中，制得脂质乙醇溶液；

11、用柠檬酸盐缓冲液稀释mrna疫苗，制备mrna水溶液；

12、将所述脂质乙醇溶液与所述mrna水溶液混合，制得脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗。

13、优选的是，所述脂质乙醇溶液与所述mrna水溶液的体积比为1∶(2-5)。

14、本发明还提供所述的mrna疫苗或所述的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗在制备防控猪δ冠状病毒感染疾病的疫苗中的应用。

15、本发明公开了以下技术效果：

16、通过基因合成、体外转录、脂质纳米颗粒包裹得到rna疫苗，能够快速应对当前流行的pdcov，减少了新疫苗开发的研发及生产周期。本发明制备的rna疫苗生产效率高，体内可产生较高水平的pdcov的中和抗体和结合抗体，可有效降低仔猪腹泻、脱水及呕吐的发生，对于猪腹泻的防控具有重大的推广价值，对于pdcov的防控提供重要手段。

技术特征：

1.一种用于猪δ冠状病毒的mrna疫苗，其特征在于，所述mrna疫苗包括如seq id no：1-2所述序列中至少一种。

2.如权利要求1所述的mrna疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.一种用于猪δ冠状病毒的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗，其特征在于，所述脂质纳米颗粒包裹mrna疫苗包括权利要求1所述的mrna疫苗，以及用于包裹所述mrna疫苗的脂质，所述脂质是采用可电离化脂质体、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、胆固醇和peg-脂质体混合而成。

4.如权利要求3所述的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗，其特征在于，所述可电离化脂质体、所述二硬脂酰基磷脂酰胆碱、所述胆固醇和所述peg-脂质体的摩尔比为55∶(5-15)∶(30-40)∶(1-2)。

5.一种如权利要求3或4所述的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述脂质乙醇溶液与所述mrna水溶液的体积比为1∶(2-5)。

7.如权利要求1所述的mrna疫苗或权利要求3所述的脂质纳米颗粒包裹的mrna疫苗在制备防控猪δ冠状病毒感染疾病的疫苗中的应用。

技术总结本发明公开了一种用于猪δ冠状病毒的mRNA疫苗及其构建方法和应用，属于生物医药技术领域。所述mRNA疫苗包括如SEQ ID NO：1‑2所述序列中至少一种。还公开了脂质纳米颗粒包裹的mRNA疫苗，其包括所述的mRNA疫苗，以及用于包裹所述mRNA疫苗的脂质，所述脂质是采用可电离化脂质体、二硬脂酰基磷脂酰胆碱、胆固醇和PEG‑脂质体混合而成。本发明制备的mRNA疫苗，能够快速应对当前流行的猪δ冠状病毒，减少了新疫苗开发的研发生产周期。本发明制备的mRNA疫苗生产效率高，体内可产生较高水平的猪δ冠状病毒的中和抗体和结合抗体，可有效降低仔猪腹泻、脱水及呕吐的发生，对于猪δ冠状病毒防控提供重要手段。技术研发人员：李彬,李基棕,汪伟,蒋剑豪,范宝超,郭容利,肖丽,赵李祥,钟天翼受保护的技术使用者：江苏省农业科学院技术研发日：技术公布日：2024/6/11