SMS1与鞘磷脂合成通路在作为发热伴血小板减少综合征治疗靶点中的用途

本发明属于生物医药领域，具体涉及sms1与鞘磷脂合成通路在作为发热伴血小板减少综合征治疗靶点中的用途。

背景技术：

1、sms1(鞘磷脂合成酶1，sphingomyelin synthase 1)属于鞘磷脂合成酶家族(smsfa mily)，由sgms1基因编码，sms1也称为sgms1，即磷脂酰胆碱-神经酰胺胆碱磷酸转移酶1(phosphatidylcholine:ceramide cholinephosphotransferase 1)。sms家族有sms1、sms2和smsr三种同工酶，其中sms1主要定位在高尔基体上，通过磷酰胆碱的磷酸基与神经酰胺(ceramide，ce)伯羟基上的羟基形成酯键，催化磷酰胆碱头部基团从磷脂酰胆碱(phosphatidy lcholine，pc)转移到ce上，从而生成鞘磷脂(sphingomyelin，sm)和二酰基甘油(diacyl glycerol，dag)，是鞘磷脂合成过程中的关键酶。sms1发挥主要作用，占细胞内sm合成活性的70％，参与细胞内囊泡转运，胆固醇代谢，细胞增殖，细胞凋亡和其他重要过程。sms 1催化ce和pc产生的sm通过囊泡运输或蛋白质促进运输被转运到质膜上。

2、sftsv(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus)全称发热伴血小板减少综合征病毒，正式名为大别班达病毒(dabie bandavirus，dbv)，属于白纤病毒科(phenuiv iridae)班达病毒属(bandavirus)，但学术界仍广泛的称其为sftsv。sftsv为多股负链rna病毒，基因组按长度分三段(l、m、s)，并包裹有核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein，np)。发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopeniasyndrome，sfts)是由sftsv感染引起的新型蜱媒疾病。sftsv感染引起的主要症状包括发热、肌痛、血小板减少、肝酶升高等，严重的患者会发展为多器官功能衰竭(multiple organdysfunction syndr ome，mods)甚至死亡。蜱虫是其重要的传染媒介，尤其是长角血蜱。sftsv在我国多个省份均有分布，致死率较高。

3、对于病毒性疾病的预防和治疗主要依靠疫苗和药物。当前，sftsv的疫苗研制和药物研发报道较少。目前针对sftsv感染的治疗方法也相当有限，主要治疗手段为对症支持治疗和广谱抗病毒疗法，其疗效有限，个体差异较大。因此，相关抗病毒药物和疫苗的研发将是攻克该病毒的关键着力方向，深入研究和开发新的治疗靶点和治疗药物对sftsv感染的预防和治疗具有重要的临床意义。

技术实现思路

1、本发明的目的之一是提供一种可用于发热伴血小板减少综合征病毒感染治疗的策略，即sms1与鞘磷脂合成通路在作为发热伴血小板减少综合征治疗靶点中的应用。本发明所要解决的技术问题不限于所描述的技术主题，本领域技术人员通过以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技术主题。

2、为实现上述目的，本发明首先提供了抑制鞘磷脂合成的物质在制备具有如下任一种功能的产品中的用途：

3、a1)预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病；

4、a2)抑制sftsv复制、增殖和/或感染；

5、a3)抑制sftsv的活性。

6、上述用途中，所述抑制鞘磷脂合成的物质可为鞘磷脂合成通路抑制剂。

7、上述用途中，所述鞘磷脂合成通路抑制剂可为sms1抑制剂、ctp抑制剂、cert抑制剂、spt抑制剂、chat抑制剂、胆碱激酶抑制剂、1，2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶抑制剂、3-酮基二氢鞘氨醇还原酶抑制剂、神经酰胺合成酶抑制剂或二氢神经酰胺脱氢酶抑制剂。

8、上述用途中，所述抑制鞘磷脂合成的物质(或所述鞘磷脂合成通路抑制剂)可包括下述任一种：

9、b1)抑制目标基因的复制、转录、翻译、转录后修饰和/或翻译后修饰的物质；

10、b2)降低目标基因表达的蛋白的含量、活性和/或功能的物质；

11、所述目标基因可包括sgms1基因、ctp基因、cert基因、spt基因、chat基因、胆碱激酶基因、1，2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶基因、3-酮基二氢鞘氨醇还原酶基因、神经酰胺合成酶基因和/或二氢神经酰胺脱氢酶基因。

12、上述用途中，所述抑制鞘磷脂合成的物质(或所述鞘磷脂合成通路抑制剂)可包括通过基因敲减技术、基因编辑技术和/或基因敲除技术使所述目标基因缺失或失活的物质，或靶向结合所述目标基因表达的蛋白使其含量下降或功能失活的物质。

13、进一步地，利用基因敲减技术(包括rna干扰技术、morpholino干扰技术、反义核酸技术和核酶技术等)、基因编辑技术(包括锌指核酶基因敲除技术、talen基因编辑技术和crispr基因编辑技术等)或基因敲除技术(包括完全基因敲除和条件型基因敲除)抑制基因表达、沉默或敲除基因是本领域技术人员熟知的。例如：可以利用靶向目标基因的shrna、sirna或mirna从转录后水平或翻译水平使基因表达失活或基因沉默。也可以利用含有sgrna和cas蛋白的crispr-cas系统对目标基因进行敲除。

14、进一步地，所述物质可包括核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、重组载体(如基因编辑载体)、重组细胞和病毒载体(如慢病毒和腺相关病毒)。

15、进一步地，所述核酸分子可包括(1)rna干扰技术中所使用的双链rna(dsrna)、小干扰rna(sirna)、微小rna(mirna)和短发夹rna(shrna)等；(2)反义核酸技术中所使用的反义rna(asrna)和反义寡核苷酸(aon)等；(3)基因编辑技术中所使用的grna和sgrna等；(4)适体(aptamer)和核酶(ribozyme)等。

16、所述抗体可包括单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、fab抗体、fv抗体、单链抗体(scfv)、单域抗体和最小识别单位(mru)等。

17、上述用途中，所述抑制鞘磷脂合成的物质(或所述鞘磷脂合成通路抑制剂)可包括下述任一种：

18、c1)sms1抑制剂，包括：

19、(1)sirna，所述sirna的正义链的核苷酸序列如seq id no.1所示，所述sirna的反义链的核苷酸序列如seq id no.2所示；

20、(2)编码(1)中所述sirna的dna分子；

21、(3)含有(1)中所述sirna或(2)中所述dna分子的表达盒、重组载体或重组宿主细胞；

22、(4)sgrna，所述sgrna的靶序列如seq id no.5-seq id no.14中至少任一所示；

23、(5)编码(4)中所述sgrna的dna分子；

24、(6)含有(4)中所述sgrna或(5)中所述dna分子的表达盒、重组载体或重组宿主细胞；

25、(7)化合物d609或sms1-in-1；

26、(8)sms1抗体；

27、c2)ctp抑制剂，包括：et-18-och3、ctp抗体和miltefosine；

28、c3)cert抑制剂，包括：hpa-12、cert抗体和torcetrapib；

29、c4)spt抑制剂，包括：myriocin、spt抗体和spt-in-1。

30、本发明还提供了鞘磷脂合成通路中的基因和/或蛋白在制备具有如下任一种功能的产品中的用途：

31、d1)预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病；

32、d2)抑制sftsv复制、增殖和/或感染；

33、d3)抑制sftsv的活性；

34、d4)筛选预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病的药物。

35、所述鞘磷脂合成通路中的基因和/或蛋白可作为靶点用于d1)-d2)中的任一用途。

36、进一步地，d4)中所述筛选的方法可包括：以鞘磷脂合成通路中的基因和/或蛋白作为靶点对待筛药物或试剂进行筛选，以能降低鞘磷脂合成通路中的至少一种基因表达水平和/或降低该基因表达的蛋白含量或活性的药物或试剂作为预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病的候选药物。

37、进一步地，所述鞘磷脂合成通路中的基因和/或蛋白可包括sgms1基因和/或sms1蛋白、ctp基因和/或ctp蛋白、cert基因和/或cert蛋白、spt基因和/或spt蛋白、chat基因和/或chat蛋白、胆碱激酶基因和/或胆碱激酶蛋白、1，2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶基因和/或1，2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶蛋白、3-酮基二氢鞘氨醇还原酶基因和/或3-酮基二氢鞘氨醇还原酶蛋白、神经酰胺合成酶基因和/或神经酰胺合成酶蛋白以及二氢神经酰胺脱氢酶基因和/或二氢神经酰胺脱氢酶蛋白。

38、上述用途中，所述鞘磷脂合成通路中的基因和/或蛋白可为sgms1基因和/或sms1蛋白、ctp基因和/或ctp蛋白、cert基因和/或cert蛋白，或spt基因和/或spt蛋白。

39、进一步地，本发明还提供了sgms1基因和/或sms1蛋白作为靶点在制备具有如下任一种功能的产品中的用途：

40、(1)预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病；

41、(2)抑制sftsv复制、增殖和/或感染；

42、(3)抑制sftsv的活性；

43、(4)筛选预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病的药物。

44、进一步地，(4)中所述筛选的方法可包括：以sgms1基因和/或sms1蛋白作为靶点对待筛药物或试剂进行筛选，以能降低sgms1基因表达水平和/或降低sms1蛋白含量或活性的药物或试剂作为预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病的候选药物。

45、本发明还提供了生物材料，所述生物材料可为下述任一种：

46、e1)核酸分子，所述核酸分子为本文中所述的sirna或sgrna；

47、e2)编码本文中所述sirna或sgrna的dna分子；

48、e3)含有e1)所述核酸分子或e2)所述dna分子的表达盒；

49、e4)含有e1)所述核酸分子或e2)所述dna分子的重组载体；

50、e5)含有e1)所述核酸分子或e2)所述dna分子的重组宿主细胞。

51、进一步地，所述重组载体包括将编码所述sirna的dna分子与载体在体外连接构建而成的重组体dna分子。重组载体可以任何合适的方式构建，只要构建的重组载体可以携带所述sirna进入受体细胞，并能表达所述sirna，使其执行对靶基因的抑制功能即可。

52、进一步地，所述重组载体还包括表达所述sgrna的基因编辑载体。构建基因编辑载体的方法是本领域技术人员熟知的，可以根据设计的向导rna(如本发明的sgrna)选择与其匹配(或结合)的cas蛋白，只要能够实现实验目的(如基因敲除)即可。例如可以将sgrna与cas蛋白连入同一个载体中并以双启动子启动，也可以将sgrna与cas蛋白分别连在不同的载体上，或者也可以选择已经含有cas蛋白基因的骨架载体(如本发明中使用的px459载体)作为sgrna的表达载体，将编码sgrna的dna分子克隆至该骨架载体中，构建得到基因编辑载体。

53、进一步地，所述cas蛋白可包括cas9、cas12a、cas12b、cas12i3、cas13a、cas13b和cas13c等2类crispr-cas系统。

54、进一步地，所述cas蛋白可为cas9蛋白。所述cas9蛋白不限于特定的某一种蛋白，只要能与sgrna配合使用即可。

55、进一步地，所述cas9蛋白包括化脓链球菌(streptococcus pyogenes)cas9(spcas9，ii-a亚型)、spcas9 hf(高保真)、缺刻酶cas9(ncas9)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)cas9(sacas9，ii-a亚型)、脑膜炎奈瑟氏球菌(neisseriameningitidis)cas9(nmca s9，ii-c亚型)、新凶手弗朗西斯菌(francisella novicida)cas9(fncas9，ii-b亚型)、嗜热链球菌(streptococcus thermophilus)cas9(st1cas9、st3cas9)、空肠弯曲杆菌(campyloba cter jejuni)cas9(cjcas9)和密螺旋体(treponemasp.)cas9，以及其他生物体的cas9直系同源物但不限于此。所述cas9蛋白还可包括高保真cas9突变体(如：spcas9-hf1和esp cas9-1.1)等。

56、在本发明的一个或多个实施方案中，所述sgrna适用于crispr/cas9基因编辑系统，即所述sgrna可与cas9蛋白结合，并指导cas9蛋白对靶位点进行切割。

57、进一步地，所述载体可为质粒或病毒。

58、进一步地，所述病毒可包括杆状病毒、逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、痘病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)和疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)但不限于此。所述病毒优选逆转录病毒或腺病毒。

59、本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包括本文中任一所述的抑制鞘磷脂合成的物质或本文中任一所述的鞘磷脂合成通路抑制剂，以及一种或多种药学上可接受的载体，所述药物组合物具有如下至少任一种用途：

60、f1)预防或治疗sftsv感染或sftsv感染引起的疾病；

61、f2)抑制sftsv复制、增殖和/或感染；

62、f3)抑制sftsv的活性。

63、所述药学上可接受的载体选自稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、防腐剂、稳定剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂、润滑剂、烟雾化剂、悬浮剂、增塑剂和分散剂。

64、为了将所述药物组合物制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂(载体)，例如，水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油等载体，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、ph调节剂等载体。

65、本发明还提供了抑制sftsv复制的方法，所述方法可包括使sftsv与本文中任一所述的抑制鞘磷脂合成的物质、本文中任一所述的鞘磷脂合成通路抑制剂，或所述药物组合物接触。

66、本文所述sftsv感染引起的疾病可包括发热伴血小板减少综合征(severe feverwith thrombocytopenia syndrome，sfts)。

67、本文所述产品可包括试剂、制剂、药物、药物组合物、治疗试剂盒等。

68、本文所述物质可包括核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、重组载体(如基因编辑载体)、重组细胞和病毒载体(如慢病毒和腺相关病毒)但不限于此。

69、本发明通过对sftsv的宿主因子sms1进行研究，首次发现sms1是一个可以用于防治sftsv感染的靶点。在huh7细胞中利用sirna敲低内源sms1表达会抑制sftsv感染，利用crispr/cas9技术构建多株sgms1敲除细胞系，并在sgms1-ko细胞系中发现sftsv的感染受到显著地抑制。在动物实验中，sgms1-ko小鼠的sftsv感染同样受到显著地抑制。以上结果揭示了sgms1在sftsv感染过程中发挥着重要的作用，抑制sms1蛋白的表达或活性能有效抑制sftsv的感染。

70、实验证明，四种sm合成通路相关的小分子化合物均能抑制sftsv。其中d609能够显著降低sftsv感染小鼠的死亡率，在细胞和动物水平均表现出较强的抗病毒效果，具有明显的技术效果。本发明发现四种鞘磷脂合成通路相关的小分子化合物都能够抑制sftsv的复制，有效治疗sftsv感染，因此可以用于制备sftsv抑制剂。

71、本领域尚未设想到将sms1蛋白和鞘磷脂合成通路作为靶点用来预防或治疗发热伴血小板减少综合征(sfts)或sftsv感染。出乎意料地，本技术的发明人通过包括体内和体外的不同手段证明了sgms1抑制剂、ctp抑制剂、cert抑制剂和spt抑制剂能够显著抑制sftsv的复制和感染。本发明设计开发了不同的sgms1抑制剂(如本发明的sirna、sgrna和grna)，还找出了鞘磷脂生物合成途径中的四种小分子抑制剂，并且将它们用于抑制sftsv感染，均取得了良好的抗病毒效果。本发明探索了sms1和鞘磷脂合成通路作为靶点在sftsv感染治疗中的潜力，为其在临床上用于防治sftsv感染提供了新的依据，在发热伴血小板减少综合征的治疗领域将有广阔的应用前景。

72、术语定义

73、在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

74、术语“抑制鞘磷脂合成的物质”通常是指能够抑制细胞内鞘磷脂积累的任何分子或化合物，例如抑制鞘磷脂合成或代谢的任何分子或化合物。

75、术语“鞘磷脂合成通路(也称为鞘磷脂生物合成途径)”在本文中可指包括一系列酶促反应的神经酰胺、磷脂酰胆碱和鞘磷脂生物合成代谢通路，该通路中的催化酶包括：胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase，chat)、胆碱激酶(choline kinase)、磷酸胆碱胞苷转移酶(phosphocholine cytidylyltransferase，ctp)、1,2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶(1,2-diacylglycerol cholinephosphotransferase)、丝氨酸棕榈酰转移酶(serinepalmitoyl transferase，spt)、3-酮基二氢鞘氨醇还原酶(3-ketosphinganinereductase)、神经酰胺合成酶、二氢神经酰胺脱氢酶(dihydroceramide desaturase)和鞘磷脂合成酶(sphingomyelin synthase，sms)。其中鞘磷脂合成酶(sms)是鞘磷脂生物合成通路中的最后一个酶，其包括sms1、sms2和smsr三种同工酶。该通路还包括转运蛋白，如神经酰胺转运蛋白(ceramide transport protein，cert)。鞘磷脂生物合成途径如图1所示。

76、术语“鞘磷脂合成通路抑制剂”可指靶向或结合鞘磷脂合成通路中的分子从而阻断该通路的任何物质。例如：sgms1抑制剂、ctp抑制剂、cert抑制剂、spt抑制剂、chat抑制剂、胆碱激酶抑制剂、1，2-二酰甘油胆碱磷酸转移酶抑制剂、3-酮基二氢鞘氨醇还原酶抑制剂、神经酰胺合成酶抑制剂和二氢神经酰胺脱氢酶抑制剂等。在本发明的一个或多个实施方案中，所述鞘磷脂合成通路抑制剂包括sgms1抑制剂、ctp抑制剂、cert抑制剂和spt抑制剂。

77、术语“抑制剂(也称拮抗剂)”具有本领域公知的含义，可指降低(下调)目标蛋白或基因的水平和/或活性的任何物质。所述抑制剂也可定义为抑制细胞因子、受体、信号通路等的任何物质。

78、术语“sgms1抑制剂(也称为sms1抑制剂)”在本技术中可为抑制sgms1基因的复制、转录、翻译、转录后修饰和/或翻译后修饰的物质，也可为抑制或降低sms1蛋白的含量、活性和/或功能的物质。所述sms1抑制剂包括通过基因敲减(gene knock-down)、基因编辑(geneediting)、基因敲除(gene knock-out)等技术使sgms1基因缺失或失活的物质。所述sms1抑制剂还包括能靶向结合sms1蛋白、抑制sms1蛋白活性或阻止sms1蛋白执行其功能的物质。所述物质可包括核酸分子、碳水化合物、脂、小分子化合物、抗体、多肽、蛋白、重组载体(如基因编辑载体)、重组细胞和病毒载体(如慢病毒和腺相关病毒)但不限于此。所述核酸分子可以是rna干扰技术中所使用的特异性靶向sgms1的核酸分子，如：双链rna(dsrna)、小干扰rna(sirna)、微小rna(mirna)和短发夹rna(shrna)等。所述核酸分子也可以是反义核酸技术中所使用的反义rna(asrna)和反义寡核苷酸(aon)。所述核酸分子还包括适体(aptamer)和核酶(ribozyme)等。所述抗体可包括单克隆抗体、多克隆抗体、双特异性抗体、fab抗体、fv抗体、单链抗体(scfv)、单域抗体和最小识别单位(mru)等。本文中鞘磷脂合成通路中的其他抑制剂(如ctp、cert和spt抑制剂等)具有与sgms1抑制剂类似的含义。

79、术语“基因敲减(gene knock-down)”也称基因敲低，通常是指从转录后水平或翻译水平使基因表达失活或基因沉默，而基因的dna序列没有发生改变的技术。基因敲减包括rna干扰技术、morpholino干扰技术、反义核酸技术和核酶技术等。

80、术语“基因编辑(gene editing)”通常是指可以在包括体细胞在内的任何细胞内完成特定基因序列的改变，且可造成基因的碱基缺失、重复、插入、移码突变和目标基因的替换及敲除，实现基因组序列的替换、缺失、剪切和单碱基改变等，即随意“编辑”基因组或某个特定基因的序列的技术。基因编辑包括锌指核酶基因敲除技术、talen基因编辑技术和crispr基因编辑技术。

81、术语“基因敲除(gene knock-out)”通常是指利用外源的已突变的基因通过同源重组的方法替换掉内源的正常同源基因，从而使内源基因失活的技术，包括完全基因敲除(例如基于置换型打靶载体或插入型打靶载体对靶基因进行完全突变)和条件型基因敲除(例如基于cre-loxp重组酶系统或flp-frt重组酶系统的组织特异性敲除)。

82、术语“内源”通常是指来自生物、细胞、组织或系统或在其内部产生的任何物质。

83、术语“外源”通常是指从生物、细胞、组织或系统外部引入或在其外部产生的任何物质。

84、术语“rna干扰(rnainterference，rnai)”通常是指利用双链rna(double-stranded rna，dsrna)诱导与之同源互补的靶基因的mrna降解，使基因的表达沉寂关闭，从而引发转录后基因沉默(post-transcription gene silencing，ptgs)，达到阻止基因表达的目的的技术。双链rna(dsrna)是rnai的触发物，引发与之互补的单链rna(ssrna)的降解。长链dsrna可在细胞内被dicer酶切割为小片段的dsrna，即小干扰rna(small interferingrna，sirna)，并由sirna来介导mrna切割，因此通过引入靶基因对应的sirna也可实现rnai。此外，还可以引入一种编码具有反向重复序列可形成发夹的rna(即短发夹rna，shorthairpin rna，shrna)的基因，该基因以发夹结构的形式持续提供dsrna，使rnai持续进行。广义的rna干扰还包括在基因调控区引发的转录水平的基因沉默(转录前基因沉默)，这种沉默过程涉及dna的甲基化而不是对mrna的降解，用于沉默基因的sirna直接作用于基因的调控区，而非编码区。广义的rna干扰还可包括翻译水平的基因沉默(翻译沉默)，例如微小rna(microrna，mirna，一种单链rna分子)主要通过阻止mrna的翻译，干扰目标mrna蛋白质产物的积累来沉默基因的表达。

85、术语“morpholino干扰技术”通常是指用吗啉(morpholino)取代传统核苷酸上的五碳糖环，原有的磷酸基团也发生改变，使得分子整体不带有任何电荷，不能被rnase和dnase识别和降解，稳定性极强。其原理与反义核酸技术相同，通过与靶基因mrna的同源序列互补而结合在mrna分子上，从而阻碍其他分子和蛋白质与特定mrna核酸序列的结合，最终使靶基因mrna不能翻译成蛋白质。

86、术语“反义核酸技术”通常是指利用反义rna能与特异的有同源序列的mrna分子互补结合，从而抑制该mrna的加工和翻译的原理，通过人工合成反义rna或其基因导入细胞内，抑制特定基因表达的技术。反义核酸技术主要包括反义rna(antisense rna，asrna)和反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide，aon)。

87、术语“核酶技术”通常是指利用核酶(ribozyme)切割和降解靶rna分子的技术。核酶是一类具有生物催化活性的rna分子，能特异地结合并切割靶rna分子，可以实现对特定rna分子的降解，从而抑制目标基因的表达。核酶包括锤头状核酶、发夹状核酶、丁型肝炎病毒核酶、vs(varkud satellite)核酶和i类内含子核酶等。

88、术语“sirna(小干扰rna，small interfering rna)”通常是指一类双链rna分子，其可以介导与其互补的靶rna(例如mrna，trna和病毒rna等)的切割、降解或沉默。sirna通常是双链的，包括与靶rna互补的反义链，和与该反义链互补的正义链。sirna的制备方法是本领域技术人员熟知的，例如化学合成法、体外转录法、长片段dsrnas经rnaseiii(或dicer)降解体外制备法，以及通过sirna表达载体转染宿主细胞表达制备的方法等。

89、术语“sgrna(单向导rna，single-guide rna)”通常是指人为地对具有双rna结构的crrna/tracrrna复合物(grna)进行改造，将crrna和tracrrna直接(或通过接头)连接而成的单个rna的结构。sgrna是crispr-cas系统的组成部分，负责引导cas蛋白识别并切割目标核酸分子。在实际基因编辑应用中，sgrna可以直接合成，也可以通过质粒表达或体外转录获得。

90、术语“crispr-cas系统”通常是指包含cas蛋白和向导rna的复合物。crispr-cas系统分为两类(1类和2类)，包括六个型(i-vi)和19个亚型。在1类系统中，需要几种具有不同功能的蛋白质，而在2类系统中，只需要一种蛋白质。1类包括i、iii、iv型，2类包括ii、v、vi型。crispr-cas系统通常可包括crispr rna(crrna)、反式激活crrna(tracrrna)和cas蛋白。tracrrna参与前crispr rna(pre-crrna)的成熟，使pre-crrna转变为成熟的crrna。crrna负责识别目标核酸分子中与之互补的序列区域。cas蛋白负责切割目标核酸分子。

91、术语“cas蛋白(也称cas核酸内切酶)”通常是指一系列具有多种活性的核酸内切酶，能在向导rna(guide rna，grna)的引导下对靶位点进行切割。

92、术语“cas9蛋白”通常是指与crrna和tracrrna或与引导rna形成复合物的ii型crispr系统的cas内切核酸酶，用于特异性识别和切割全部或部分的dna靶序列。cas9蛋白具有两个不同的结构域：hnh结构域和ruvc结构域。hnh结构域负责切割与crrna(或grna)互补配对的dna链(靶链)，而ruvc结构域负责切割非互补链(非靶链)。所述cas9蛋白不限于特定的某一种蛋白，只要能与sgrna(grna)配合使用即可。所述cas9蛋白质可源自于细菌种类。

93、术语“载体(vector)”通常是指能够把外源dna或目的基因运载进入宿主细胞进行扩增和/或表达的载体。本领域技术人员可以根据基因工程的目的和受体细胞的性质选择合适的载体。所述载体包括但不限于：质粒(plasmid)、噬菌体(phage，如λ噬菌体或m13噬菌体)、黏粒(cosmid，即柯斯质粒)、噬菌粒(phagemid)、穿梭载体(shuttle vector，如酵母表达载体)、ti质粒、人工染色体(如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)、p1人工染色体(pac)或ti质粒人工染色体(tac))、病毒载体(如杆状病毒载体、逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、痘病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒))。

94、术语“宿主细胞(也称为受体细胞)”通常是指可用于导入载体的任何类型的细胞。宿主细胞可以是真核细胞(例如植物细胞、动物细胞、真菌、或藻类)，或者可以是原核细胞(例如细菌或原生动物)。所述宿主细胞可理解为不仅是指特定的受体细胞，而且也指这种细胞的后代，且由于天然的、偶然的或有意的突变和/或改变，该子代可以不必与原始的亲代细胞完全一致，但仍包括在宿主细胞的范围中。

95、术语“感染复数(multiplicity of infection，moi)”通常是指感染时病毒和细胞数量的比值，即感染每个细胞的病毒颗粒数量。

96、术语“治疗”通常是指治疗性处理，其中治疗对象将减慢(减轻)非期望的生理改变或疾病，或者在治疗期间提供有益或期望的临床结果。有益或期望的临床结果包括症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病的稳定(即未恶化)状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及/或者缓解(不论是部分缓解还是完全缓解)，不论是可检测的还是不可检测的。“治疗”也可意指与受试者未接受治疗时的预期生存期相比延长生存期。需要治疗的那些受试者包括已经患有非期望的生理改变或疾病的那些受试者、以及倾向于患有生理改变或疾病的那些受试者。

97、缩写“sms1”是指鞘磷脂合成酶1(鞘磷脂合酶1)，在本文中与“sgms1”具有相同含义，可互换使用。sgms1属于鞘磷脂合成酶家族，是鞘磷脂合成过程中的关键酶，sms1发挥主要作用，占细胞内鞘磷脂(sm)合成活性的70％。

98、缩写“ctp”是指磷酸胆碱胞苷转移酶(phosphocholine cytidylyltransferase)，该酶是磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，pc)合成过程中的关键限速酶。

99、缩写“cert”是指神经酰胺转运蛋白(ceramide transport protein)，介导神经酰胺从内质网运输到高尔基体参与鞘磷脂的合成。

100、缩写“spt”是指丝氨酸棕榈酰转移酶(serine palmitoyl transferase)，催化鞘脂从头合成。该酶是控制鞘脂生成的关键酶，通过限制鞘脂的生成率从而确保适量的鞘脂生成。

101、术语“三环癸烷-9-基-黄原酸酯(d609)”的英文名为：(o-(octahydro-4,7-methano-1h-in den-5-yl)carbonopotassium dithioate)，d609是指化学文摘社(cas)登录号为83373-60-8，分子式为c11h15os2k，结构式如下的化合物：

102、

103、d609是一种特异性竞争性的磷脂酰胆碱特异性磷脂酶c(phosphatidylcholine(pc)-specific phospholipase c，pc-plc)抑制剂，也是鞘磷脂合酶(sphingomyelinsynthase，sms)抑制剂(即sgms1抑制剂)，其在sftsv感染中的作用及机制目前尚未报道。

104、术语“1-o-十八烷基-2-o-甲基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(et-18-och3)”的英文名为：1-o-octadecyl-2-o-methyl-sn-glycero-3-phosphocholine，et-18-och3是指cas登录号为70641-51-9，分子式为c27h58no6p，结构式如下的化合物：

105、

106、et-18-och3是不可代谢的溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine，lpc)类似物，主要通过抑制磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，pc)合成过程中的关键限速酶-磷酸胆碱胞苷转移酶(phosphocholine cytidylyltransferase，ctp)的活性来降低细胞内磷脂的合成，属于ctp抑制剂。已有研究证明该化合物具有抗肿瘤特性，但其在sftsv感染中的作用及机制目前尚未报道。

107、术语“n-[(1r,3s)-3-羟基-1-(羟甲基)-3-苯基丙基]十二酰胺(hpa-12)”的英文名为：n-[(1r,3s)-3-hydroxy-1-(hydroxymethyl)-3-phenylpropyl]dodecanamide，hpa-12是指cas登录号为383418-30-2，分子式为c22h37no3，结构式如下的化合物：

108、

109、hpa-12是神经酰胺转运蛋白(ceramide transport protein，cert)的抑制剂，能够减少神经酰胺从内质网运输到高尔基体参与sm的合成，且不改变其他相关代谢物质的含量。目前未有研究报道其在sftsv感染中的作用及机制。

110、术语“多球壳菌素(myriocin)”的英文名为(e,2s,3r,4r)-2-amino-3,4-dihydroxy-2-(hydrox ymethyl)-14-oxoicos-6-enoic acid，myriocin是指cas登录号为35891-70-4，分子式为c21h39no6，结构式如下的化合物：

111、

112、myriocin是一种有效的免疫抑制剂，也是一种特异性的丝氨酸棕榈酰转移酶(serine palmitoyl transferase，spt)抑制剂，丝氨酸棕榈酰转移酶催化鞘脂从头合成。目前未有研究报道其在sftsv感染中的作用及机制。

113、术语“miltefosine(米替福新，hexadecyl phosphocholine，hepc)”是一种ctp抑制剂，cas号为58066-85-6，分子式为c21h46no4p。

114、术语“sms1-in-1”是一种sgms1抑制剂，cas号为1807943-38-9，分子式为c23h23brn2o4s。

115、术语“torcetrapib”是一种cert抑制剂，cas号为262352-17-0，分子式为c26h25f9n2o4。

116、术语“spt-in-1”是一种spt抑制剂，cas号为1933533-18-6，分子式为c22h24n2o3。