睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用

本发明属于微生物工程，特别是涉及到一种能够在红霉素胁迫下对蒽降解的生物技术。

背景技术：

1、蒽是典型的含有三个以角状、线状或簇状机制连接的苯环，其分子量小、毒性小、结构简单，慢性暴露的蒽会对人类健康的造成严重的风险，如癌症和突变问题。由于其疏水特性和可能的生物积累，蒽被用作识别生态系统中多环芳烃的生物有效性和降解速度的标准。鉴于蒽在环境中的这些有害影响以及人类对整个生态系统造成的巨大风险，及时采取合理、高效的处理技术对其进行处理十分重要和迫切，因此选择蒽为目标污染物。

2、目前，抗生素被广泛应用于医疗、畜牧业及水产养殖业，以治疗疾病和提高动物的生长速度。其中，红霉素是发现最早并被广泛应用于临床的大环内酯类抗生素，其抑菌性强，抗菌效果显著，能够通过抑制细菌蛋白质的延伸，从而达到抑菌的目的，从而备受使用者的喜赖。据调查，在海产养殖水中可检测出红霉素浓度为180 ng/l，养殖场周围和污水处理池中，红霉素残留的质量浓度可高达6 mg/l。此外，红霉素更是作为广谱抑菌剂，其检出浓度可作为环境风险评价中具有代表性的一个指标。

3、睾丸酮丛毛单胞菌 ( comamonas testosteroni atcc11996) ct1，产自西班牙巴塞罗那，擅长水解芳香烃类化合物，且该菌株对环境无害。对微生物降解污染物过程的研究，且有红霉素的胁迫影响下，将有助于进一步推动生物降解技术的发展。

技术实现思路

1、本发明提供一种睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，以解决目前处理多环芳烃存在的安全性低、成本高的问题。

2、本发明采取的技术方案是：睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用。

3、睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下对蒽降解的微生物方法，包括下列步骤：

4、（1）、将睾丸酮丛毛单胞菌 ( comamonas testosteroni atcc11996) ct1活化菌株用lb液体培养基继代培养，调整菌体od600nm＝1.0；

5、（2）、取菌株培养液，按照体积比1：1的接种量接入终浓度为0.1 mm的蒽标准样品中；

6、（3）、分别加入不同量的红霉素母液，使培养基中的红霉素浓度依次为：1/4mic、1/2mic、mic、4mic，红霉素的最低抑菌浓度mic为32μg·ml-1，即8μg·ml-1、16μg·ml-1、32μg·ml-1、128μg·ml-1，将上述试样放置于摇床中，恒温27℃，160~200rpm培养24~48h。

7、本发明所述步骤（1）中，lb液体培养基的制备是：酵母粉10g，蛋白胨5g，氯化钠10g，ph 7.0，水定容至1 l，115 ℃灭菌30 min，冷却。

8、本发明所述步骤（2）中，菌株培养液的制备是：将ct1菌种接种于lb液体培养基中，置于27 ℃，160~200rpm恒温摇床下培养。

9、本发明所述步骤（2）中，摇床培养的ph 7.0。

10、本发明所述步骤（3）中，红霉素的最低抑菌浓度mic是用mh肉汤稀释法，按照抗生素敏感试验的操作规范，对该菌进行mic检测，将试管放在摇床中培养，摇床转速为180rpm，在27 ℃下恒温培养24 h，然后取出样品，利用紫外可见光光度计测定菌液od600nm的吸收峰。

11、本发明所述步骤（3）中，当红霉素为1/4 mic时，置于27 ℃，180 rpm恒温摇床，培养至36 h，ct1对0.1 mm蒽的降解效率为57.3 %。

12、本发明所述步骤（3）中，摇床培养的ph 7.0。

13、本发明的有益效果是：通过模拟含有蒽的环境，筛选一株具有在红霉素胁迫下对蒽降解的天然菌株，睾丸酮丛毛单胞菌ct1，能有效降解多环芳烃类中的蒽；在该模拟环境中，红霉素浓度范围为0 - 128 μg·ml-1，通过菌种在其红霉素浓度范围下进行胁迫，进一步了解菌株降解蒽的情况，有效降低蒽对环境造成的污染和对人体健康带来的风险，具有成本低、操作简单、有效降解多环芳烃等优点，可减少使用化学试剂、成本低廉、且无二次污染，具有良好的生态效率和应用前景，有助于进一步推动生物降解技术的发展。

14、本发明将所述菌株应用于在红霉素胁迫下降解蒽的微生物处理，可解决已有技术中缺乏降解蒽的生物技术、在红霉素存在的环境中降解能力差等特点，能有效避免蒽导致的环境污染，且无二次污染，有助于进一步推动生物降解技术的发展，具有良好的生态效率和应用前景。

技术特征：

1.睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用。

2.根据权利要求1所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于，睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下对蒽降解的微生物方法，包括下列步骤：

3.根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于：所述步骤（1）中，lb液体培养基的制备是：酵母粉10g，蛋白胨5g，氯化钠10g，ph 7.0，水定容至1 l，115 ℃灭菌30 min，冷却。

4. 根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于：所述步骤（2）中，菌株培养液的制备是：将ct1菌种接种于lb液体培养基中，置于27 ℃，160~200rpm恒温摇床下培养。

5. 根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于：所述步骤（2）中，摇床培养的ph 7.0。

6. 根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于：所述步骤（3）中，红霉素的最低抑菌浓度mic是用mh肉汤稀释法，按照抗生素敏感试验的操作规范，对该菌进行mic检测，将试管放在摇床中培养，摇床转速为180 rpm，在27 ℃下恒温培养24 h，然后取出样品，利用紫外可见光光度计测定菌液od600nm的吸收峰。

7. 根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，，其特征在于：所述步骤（3）中，当红霉素为1/4 mic时，置于27 ℃，180 rpm恒温摇床，培养至36 h，ct1对0.1 mm蒽的降解效率为57.3 %。

8. 根据权利要求2所述的睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，其特征在于：所述步骤（3）中，摇床培养的ph 7.0。

技术总结本发明涉及一种睾丸酮丛毛单胞菌在红霉素胁迫下降解蒽的应用，属于微生物工程技术领域。将睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni ATCC11996)CT1活化菌株用LB液体培养基继代培养，调整菌体OD<subgt;600nm</subgt;＝1.0；取菌株培养液，按照体积比1：1的接种量接入终浓度为0.1 mM的蒽标准样品中，分别加入不同量的红霉素母液培养。本发明有益效果是：通过模拟含有蒽的环境，筛选一株具有在红霉素胁迫下对蒽降解的天然菌株，睾丸酮丛毛单胞菌CT1，在红霉素胁迫下菌株CT1仍然能够较为高效降解蒽，有效降低蒽对环境造成的污染和对人体健康带来的风险，且无二次污染，具有良好的生态效率和应用前景，有助于进一步推动生物降解技术的发展。技术研发人员：徐淼,李蕙,张津源,马传福,郭立泉受保护的技术使用者：吉林农业大学技术研发日：技术公布日：2024/5/8