土贝母皂甙甲素的制备方法

专利名称：土贝母皂甙甲素的制备方法技术领域：本发明涉及植物药材提取、分离范畴，特别是从中药材土贝母中提取并分离土贝母皂甙甲素的方法。葫芦科植物土贝母(Bolbostemmapaniculatum(Maxim.)Franquet)，性苦，微寒。功能散结，消肿，解毒。中医用于治疗乳痈瘰疠，乳腺炎，颈淋巴结结核，慢性淋巴结炎，肥厚性鼻炎等。从其提取的土贝母总皂甙中分离出多种三萜皂甙和甾体皂甙成分，其中，土贝母皂甙甲素(Tubeimoside Ⅰ)，分子式为C63H98O29，结构式为 已知它具有抗炎、抗癌和抗促癌生理活性作用。现有技术中的土贝母皂甙甲素的提取和分离方法，是将药材粉碎成末，75%乙醇浸取，减压蒸醇，余液氯仿萃取后的水层，用正丁醇提取，正丁醇提取液减压浓缩并放置后析出土贝母总皂甙。然后用硅胶H低压柱层析分离土贝母总皂甙，得到土贝母皂甙甲素。现有技术的不足是需用剧毒的氯仿作萃取溶剂，用液相色谱仪分离，产量小成本极高，工艺条件无法适应工业化生产需要。本发明的目的，就是要研制一种适合国情的大批量工业化方法。本发明的构思是以如下技术方案实施的设计研制一种属于植物药材提取范畴的，包括药材粉碎、溶剂浸提、浓缩、再次溶剂提取、再浓缩、分离等步骤的土贝母皂甙甲素的制备方法，其特征是1.首先提取土贝母总皂甙，其次分离制备土贝母皂甙甲素，2.药材粉碎至5～20目，用60～80%乙醇或甲醇于≤80℃浸提2～4次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用2～4倍量水稀释后，用水饱和的C4～C5脂肪醇萃取2～4次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙，3.土贝母总皂甙甲醇溶解，混合溶剂沉淀，得土贝母皂甙甲素粗品，4.或土贝母总皂甙热水溶解，大孔吸附树脂层析，稀醇洗脱，混合溶剂沉淀，得土贝母皂甙甲素粗品。上述的土贝母皂甙甲素的制备方法，所述的混合溶剂法沉淀，是指向土贝母总皂甙的甲醇溶液中，加入2～6倍量的丙酮、乙醚或丙酮-乙醚混合液。上述的土贝母皂甙甲素的制备方法，所述的大孔吸附树脂层析，是指使用D101、D520、AB-8、NKA-Ⅱ等型号的大孔吸附树脂层析。上述的土贝母皂甙甲素的制备方法，所述的稀醇洗脱是指先用25～35%的乙醇洗去杂质，再用40～70%的乙醇洗脱土贝母皂甙甲素。上述的土贝母皂甙甲素的制备方法，所述的土贝母皂甙甲素粗品经含水甲醇溶解-混合溶剂沉出的方法精制。与现有技术相比，本发明的方法有以下优点1.溶剂价廉、易得，毒性较小;2.工艺简便，设备简单，成本低，适合国情，能投入工业化生产。较好地达到了本发明的预期目的。以下结合实施例对本发明作进一步的详细阐述实施例一土贝母药材5kg，粉碎过5目筛，用总量为20L的60%乙醇于80℃浸提2次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用2倍量水稀释后，用总量为6L的水饱和的正丁醇萃取2次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙0.13kg。上述量土贝母总皂甙，用0.26L甲醇溶解，向土贝母总皂甙的甲醇溶液中，加入2倍量的丙酮沉淀，静置24h，得土贝母皂甙甲素粗品0.046kg，经含水甲醇溶解-丙酮沉出法精制，静置24h，得白色土贝母皂甙甲素成品0.04kg，收率0.8%;高效液相色谱仪测定，含量96.5%，mp251～252℃。实施例二土贝母药材5kg，粉碎至20目，用80%乙醇于60℃浸提4次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用4倍量水稀释后，用20L水饱和的异戊醇萃取4次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙0.125kg。土贝母总皂甙热水溶解，使用D101或D520型大孔吸附树脂层析，25%乙醇洗去杂质，40%的乙醇洗脱，回收乙醇，干燥，所得产物用0.1L的甲醇溶解，向其中加入6倍量的乙醚，析出白色沉淀，静置24h，得土贝母皂甙甲素粗品0.039kg，经含水甲醇溶解-丙酮、乙醚混合溶剂沉出法精制，静置24h，得白色土贝母皂甙甲素成品0.031kg，收率0.6%;高效液相色谱仪测定，含量95.5%，mp249～251℃。实施例三土贝母药材5kg，粉碎过10目筛，用总量20L的60%甲醇于80℃浸提2次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用2倍量水稀释后，用5L的水饱和的异丁醇萃取2次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙0.126kg。上述量土贝母总皂甙，用0.26L的甲醇溶解，向土贝母总皂甙的甲醇溶液中，加入2倍量的丙酮沉淀，静置24h，得土贝母皂甙甲素粗品0.047kg，经含水甲醇溶解-丙酮沉出法精制，静置24h，得白色土贝母皂甙甲素成品0.041kg，收率0.8%;高效液相色谱仪测定，含量95.3%，mp249～251℃。实施例四土贝母药材5kg，粉碎至20目，用20L80%甲醇于60℃浸提4次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用4倍量水稀释后用5L水饱和的戊醇萃取4次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙0.131kg。土贝母总皂甙热水溶解，使用NKA-Ⅱ或AB-8型大孔吸附树脂层析，35%乙醇洗去杂质，70%的乙醇洗脱，回收乙醇，干燥，所得产物用0.1L的甲醇溶解，向其中加入6倍量的乙醚，析出白色沉淀，静置24h，得土贝母皂甙甲素粗品0.038kg，经含水甲醇溶解-丙酮、乙醚混合溶剂沉出法精制，静置24h，得白色土贝母皂甙甲素成品0.0295kg，收率0.6%;高效液相色谱仪测定，含量96.4%，mp251～252℃。权利要求1.一种属于植物药材提取范畴的，包括药材粉碎、溶剂浸提、浓缩、再次溶剂提取、再浓缩、分离等步骤的土贝母皂甙甲素的制备方法，其特征是1.1.首先提取土贝母总皂甙，其次分离制备土贝母皂甙甲素，1.2.药材粉碎至5～20目，用60～80%乙醇或甲醇于≤80℃浸提2～4次，蒸去溶剂，余液浓缩至浸膏，用2～4倍量水稀释后，用水饱和的C4～C5脂肪醇萃取2～4次，萃取液减压蒸去有机溶剂，真空干燥得土贝母总皂甙，1.3.土贝母总皂甙甲醇溶解，混合溶剂沉淀，得土贝母皂甙甲素粗品，1.4.或土贝母总皂甙热水溶解，大孔吸附树脂层析，稀醇洗脱，混合溶剂沉淀，得土贝母皂甙甲素粗品。2.按照权利要求1所述的土贝母皂甙甲素的制备方法，其限定部分是所述的混合溶剂法沉淀，是指向土贝母总皂甙的甲醇溶液中，加入2～6倍量的丙酮、乙醚或丙酮-乙醚混合液。3.按照权利要求1所述的土贝母皂甙甲素的制备方法，其限定部分是所述的大孔吸附树脂层析，是指使用D101、D520、AB-8、NKA-Ⅱ等型号的大孔吸附树脂层析。4.按照权利要求1所述的土贝母皂甙甲素的制备方法，其限定部分是所述的稀醇洗脱是指先用25～35%的乙醇洗去杂质，再用40～70%的乙醇洗脱土贝母皂甙甲素。5.按照权利要求1所述的土贝母皂甙甲素的制备方法，其限定部分是所述的土贝母皂甙甲素粗品经含水甲醇溶解-混合溶剂沉出的方法精制。全文摘要中药材土贝母，粉碎、稀醇浸提、浓缩、水稀释，用水饱和的C文档编号C07J63/00GK1093272SQ9311038公开日1994年10月12日 申请日期1993年4月7日 优先权日1993年4月7日发明者姜永涛, 孙太江 申请人:山东新华制药厂