2-o-烷基抗坏血酸的锂盐的制作方法

专利名称：2-o-烷基抗坏血酸的锂盐的制作方法技术领域：本发明是关于新的抗坏血酸衍生物的锂盐。已经知道，活性氧类或活性有机基类在心脏、脑、肾脏等疾病，例如缺血性心脏病、脑缺血障碍、缺血性肾障碍、缺血性消化器官系溃疡、癌、动脉硬化、糖尿病、白内障等的病变发展(即，细胞机能低下、障碍、破坏、坏死等)中占有重大作用[I.Fridovich，Annual Review of Pharmacology and Toxicology，23，239(1983);J.M.McCord，The New England Journal of Medicine，312，159(1985);K.P.Burton，J.M.McCord和G.Chai，American Journal of Physiology，246，H776(1984);井上正雄等，活性酵素と病态，学会出版センタ-(1992)]。超氧化物阴离子基(O-·2)、氢氧根(·OH)、单氧(JO2)、过氧化基(ROO·)等被认为是生物体中的活性氧类或活性有机基类。已经知道，尤其O-·2在生物体内的形成与在生物体中不断引起的活性氧类的细胞或组织障碍之间的关系具有重大意义，超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)有效地或特异地消除这种O-·2的作用是有效果的[D.N.Granger，G.Rutili，J.M.McCord，Gastroenterology，81，22(1981)]。另外，抗坏血酸、α-生育酚、半胱氨酸、还原型谷胱甘肽等化合物具有消除游离基的作用，这些化合物能够预防在某种疾病状态中预料与游离基有关的组织障碍[I.Fridovich)，Science，201，875(1978)]。作为具有循环系机能障碍预防治疗作用的抗坏血酸衍生物，例如2-O-醚体已记载在特开昭61-263969号公报(EP-A-202589)中。本发明人立足于到目前为止认为在生物体组织障碍中显示极重要作用的活性氧类和有机基的基础研究，进行研究探索比上述游离基消除剂效力更强、以消除活性氧类和有机基为目的、在药理学及制剂学方面均优异的新型药剂。结果发现，在试管内实验和疾病动物实验标本中，以低量使用新的2-O-取代抗坏血酸衍生物的锂盐能抑制脂质过氧化酶活性、缺血性心脏和脑机能障碍等，基于这些认识，进一步研究的结果，完成了本发明。即，本发明提供了2-O-烷基抗坏血酸锂。本发明的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐作为循环系统机能障碍预防和治疗剂或抗癌剂等是有效的。下面说明本发明。本发明的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐是由下述通式[Ⅰ](式中R1表示烷基)表示的化合物的锂盐，可以是一盐、二盐或三盐中的任一种。 锂的结合部位在1位、2位或3位的氧原子之中的任一个都可以，理想的是在其中的3位。在上述通式[Ⅰ]中，作为以R1表示的烷基，例如可举出可以有取代基的直链或支链的烷基。作为在可以有该取代基的直链或支链烷基中的烷基，理想的碳原子数是1-20，更理想的碳原子数是9-20，特别理想的是14-18个碳原子的直链烷基。作为其例子，例如可以举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基、正十一烷基、正十二烷基、正十三烷基、正十四烷基、正十五烷基、正十六烷基、正十七烷基、正十八烷基、正十九烷基和正二十烷基等。在可以有上述取代基是的直链或支链烷基中的亚甲基数理想的是1-19。作为上述烷基的取代基，例如可举出可以有取代基的羟基、可以有取代基的氨基、可以有取代基的羧基、可以有取代基的氨基羰基、可以有取代基的乙烯基、可以有取代基的乙炔基、可以有取代基的环烷基、可以有取代基的芳基、可以有取代基的杂环基，以下式(式中， R2表示甲基、甲氧基或者以2个R2表示形成-CH＝CH-CH＝CH-基的情况、R3表示可以有取代基的苯基、萘基、噻嗯基和吡啶基)表示的醌基或者由下式(式中，各符号与上述含义相同)表示的苯并二氢吡喃-2-基。 作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的羟基，可以举出以下式(式中，R4-O-R4表示氢、C1-8烷基或苯基)表示的基，也就是除了未取代的羟基外，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基等C1-3烷氧基和苯氧基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的氨基，可以举出以下式(式中，R5 和R6相同或不同，分别表示氢、C1-3烷基、苯基或对羟基苯基)表示的基，也就是除了未取代的氨基外，例如甲氨基、二甲氨基、乙氨基、丙氨基、异丙氨基等C1-3或者C1-8的烷基取代氨基和苯氨基、对羟基苯氨基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的羧基，可以举出以下式(式中，R7表示氢、C1-8烷基或苯基)表示的基，也就是除了未取代的羧基外，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、苯氧基羰基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的氨基羰基，可以举出以下式(式中，R8表示氢、C1-3烷基、苯基或者对羟基苯基)表示的基，也就是除未取代的氨基羰基外，例如甲氨基羰基、乙氨基羰基、异丙氨基羰基、苯氨基羰基、对羟苯基氨基羰基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的乙烯基，可以举出以下式(式中， R9和R10相同或不同，表示氢、C1-5烷基、苯基、对甲氧基苯基、3-吡啶或者3，4-亚甲二氧基苯基)表示的基，也就是除未取代乙烯基以外，例如丙烯基、丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、1，1-二苯基乙烯基、1-苯基-1-(3-吡啶)乙烯基、1-苯基-1-(2-噻嗯基)乙烯基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的乙炔基，可以举出以下式(式中，R11-C≡C-R11表示氢或者C1-6烷基)表示的基，也就是除未取代的乙炔基以外，例如甲基乙炔基、乙基乙炔基、正戊基乙炔基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的环烷基中的环烷基，理想的是碳原子数为3-6个的环烷基，作为其例子，例如是环丙基、环丁基、环戊基或环己基等。该环烷基可以有1-3个取代基，作为该取代基例如可举出羧基、羟基或者C1-3烷基等。作为有取代基的环烷基例如可举出1-羧基环丙基、2-羧基环丙基、1-羧基环戊基、1-羧基环己基、4-羧基环己基等。作为上述烷基的取代基而例示的可以有取代基的芳基，可以举出以下式(式中，R12 R13和R14相同或不同，表示氢、C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤素、乙氧基羰基乙烯基、苯基、羧基、羧基甲基或者1-羧基乙基)表示的基、或者1-3个的C1-3烷基、C1-3烷氧基、卤素、羧基或者可以被乙酰基取代的萘基。具体地说，例如苯基、1-或2-萘基、2-、3-或4-一甲基苯基、2-、3-或4-一甲氧基苯基、2-、3-或4-一乙氧基苯基、2-、3-、或4-一卤代苯基(卤素原子表示氯、溴和氟的各原子)、2，3-亚甲二氧基苯基、3，4-二甲苯基、3，4-二甲氧基苯基、4-(乙氧基羰基乙烯基)苯基、4-异丙基苯基、4-甲氧基羰基苯基、3，4，5-三甲苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、4-二苯基、4-羧基苯基、4-羧基甲苯基、4-(1-羧乙基)苯基等。作为上述烷基的取代基例示的可以有取代基的杂环基中的杂环基，可以举出例如含有1个硫原子、氮原子或者氧原子的5-7节杂环基，含有2-4个氮原子的5-6节杂环基，含有1-2个氮原子和1个硫原子或者氧原子的5-6节杂环基。这些杂环基可以有1-3个取代基，作为这种取代基，例如可举出可以被苯基取代的C1-3烷基，羧基，羟基，C1-3烷氧基，可以被卤素取代的苯基，卤素，羧甲基，苯甲酰基等。作为可以有这种取代基的杂环的具体例子可举出2-、3-或4-吡啶基、2-或3-噻嗯基、吗啉代基、吡咯烷基、1-哌啶基、哌啶基、哌嗪基、4-苯基哌嗪基、4-(对氟苯基)哌嗪基、4-二苯甲基哌嗪基、4-(对甲氧基苯基)哌嗪基等。在本说明书中所述的C1-6烷基，例如可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、正戊基、正己基等。本说明书中所述的C1-3烷基，例如可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基等。本说明书中所述的C1-3烷氧基，例如可举出甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基等。本说明书中所述的卤素可举出氯、溴、氟和碘。本发明的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐可通过对上述通式[Ⅰ]所示的化合物(以下简称化合物[Ⅰ])进行锂化反应而获得。使用一般公知的方法，例如使碳酸锂等锂化合物进行反应来实现上述反应。在不阻碍反应的溶剂中进行该反应。溶剂可以使用水、醇类(例如，甲醇、乙醇等)。碳酸锂等锂化合物的用量相对于原料化合物[Ⅰ]来说是约0.5-10倍摩尔。反应温度约10-80℃。反应时间约10分钟至6小时左右。这样制成的2-O-烷基抗坏血酸锂可以通过公知的分离·提纯方法(例如，使用硅胶、聚苯乙烯系树脂、活性炭、反相系等的柱色谱法，再结晶等)离析提取。在本发明方法中作为原料使用的化合物[Ⅰ]例如可以由下述的反应过程来制备[特开昭61-26396号公报(EP-A-202589)、特开昭60-130582号公报(US4780549)等]。 在上述方法中，化合物[Ⅰ]是这样制备的，使抗坏血酸或异抗坏血酸按照公知的方法与例如甲氧基甲基氯化物、乙氧基甲基氯化物、苄基溴化物、三甲基甲硅烷基氯化物、二甲基叔丁基甲硅烷基氯化物等的保护基反应，生成3-O-醚体，接着使所得到的醚体与以式R1-Z[式中，R1具有与上述相同的含义，Z表示卤素(例如，氯、溴)]表示的化合物进行反应。该反应在无机碱存在下进行。作为无机碱，例如使用氢氧化钠、氢氧化钾等碱金属氢氧化物，碳酸钠、碳酸钾等碱金属盐。该反应在不阻碍反应的溶剂中进行。作为溶剂使用二甲基甲酰胺、六甲基磷酰胺等酰胺类，二甲基亚砜等亚砜类，四氢呋喃等环状醚类等的一种或者它们中的二种以上。反应时间约1-18小时。反应温度约10-60℃。本发明的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐，在使用脂质过氧化酶、磷脂水解酶A2、GST-cdc25Hu2(蛋白质脱磷氧化酶)的试管内的实验中显示消除游离基和抗癌作用。并且在大鼠心脏的贫血-再灌流模型等中显示预防和改善心机能障碍作用，而且毒性、副作用极低。本发明化合物对哺乳动物(例如，小鼠、大鼠、兔、狗、猴、人等)的缺血性心脏障碍(心律不齐、冠状动脉痉挛、心脏组织坏死、心肌梗塞等)、蛛网膜下出血障碍、缺血性脑组织障碍(例如，脑梗塞、痴呆、老年性痴呆症等)、缺血性肾障碍、缺血性消化器官障碍(例如，消化道溃疡等)、癌、动脉硬化症、糖尿病、白内障等诸障碍具有治疗和预防改善效果，可以用作循环系统机能障碍预防·治疗剂或者抗癌剂。作为上述疾病预防·改善剂使用的具体例子，可举出例如抗心律不齐剂、抗心肌梗塞剂、抗脑梗塞剂、老年痴呆和老年性痴呆症预防剂、蛛网膜下出血后的治疗改善等循环器官系统改善剂、肾机能改善剂、紧张性消化器官溃疡治疗剂、抗癌剂等。本发明化合物毒性低，可以与已知的药理上允许的载体、赋形剂、稀释剂等混合，按照公知的方法，制成药物组合物[例如，片剂、胶囊(包括软胶囊、微胶囊)、液剂、栓剂、注射剂、经鼻剂、经皮剂、点眼剂等]，采用口服或者非口服安全地给药。给药量随用药对象、用药路线、症状等而异，向上述哺乳动物口服给药时，本发明的化合物通常作为一次量约0.1mg/Kg-500mg/Kg体重，最好是约0.5mg/Kg-200mg/Kg体重，每日1-3次给药。另外，在非口服给药时，例如作为栓剂的本发明化合物可以约5mg-100mg/Kg体重，每日1-2次给药。作为注射剂的本发明化合物希望以约0.1mg/Kg-5mg/Kg体重，每日1-2次进行注射。在制造上述口服制剂例如片剂时，可以适当配合粘合剂(如羟丙基纤维素、羟甲基丙基甲基纤维素、聚乙二醇等)、崩解剂(例如淀粉、羧甲基纤维素钙等)、赋形剂(例如乳糖、淀粉等)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石等)等。另外，制造非口服剂例如注射剂时，可以适当配合等渗剂(例如，葡萄糖、D-山梨糖醇、D-甘露糖醇、氯化钠等)、防腐剂(例如，苄醇、氯代丁醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、缓冲剂(例如，磷酸缓冲液、乙酸钠缓冲液等)等。实施例下面举出实验例和实施例，更具体地说明本发明，但本发明不限于所举出的实验例和实施例。实验例12-O-十八烷基抗坏血酸锂的溶血性和溶解度将含有下述实施例1中得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂的生理食盐溶液加热到37℃，然后收集在施皮茨滚筒中，加入0.1ml预先加热到37℃的兔脱纤维血(注)，轻轻地振动混合后，在37℃加热1小时。此后，将该液体进行离心分离，对上清液用肉眼观察有无溶血。结果，2-O-十八烷基抗坏血酸锂在1μg/ml以下，没有看到溶血。(注)兔脱纤维血从兔身上采集约20ml血液，集中到装有约20个直径8mm的玻璃球的烧瓶中，缓慢地振动混合约5分钟后，用网过滤。用时进行调制。对水的溶解度在28℃时是1g/83ml(水)。实验例22-O-十八烷基抗坏血酸锂的毒性[方法]向JclICR小鼠和JclWistar大鼠各1组雌雄2只，口服和静脉内投给被检验体。另外，作为被检验体，将实施例1所得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂以口服投药时悬浮在0.5%甲基纤维素中，以静脉内投药时溶解在生理食盐水中。小鼠、大鼠共同LD50以口服时是2000mg/Kg以上，以静脉内时是25-50mg/Kg的范围。没有看到性别的差异，生存例的解剖检查观察也未看到异常现象。另外，静脉内投药死亡例的解剖检查看到肺部充血。实验例32-O-十八烷基抗坏血酸锂的脂质过氧化酶活性阻止作用[方法]使2mg NADPH生成系的大鼠肝微粒体、300μM被检验体(实施例1所得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂)和20mM四氯化碳在37℃反应12分钟，向该溶液中加入硫代巴比土酸和三氯乙酸的混合液，在535nm测定吸光度。酶活性阻止率是75%，看到被检验体有消除游离基作用。实验例42-O-十八烷基抗坏血酸锂的磷脂质水解酶A2活性阻止作用[方法]使来自在猪胰腺的磷脂质水解酶A2、300μM被检验体(实施例1所得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂)和0.1M含标记的磷酸胆碱(pH 9)在氨基乙酸-NaOH缓冲液中反应10分钟，然后加入2.5M Ca++再反应5分钟。向该反应液中加入0.2M EDTA溶液而中止反应，用酸性己烷萃取，测定己烷层部分的闪烁。磷脂水解酶活性59%被阻止。实验例52-O-十八烷基抗坏血酸锂的GST-cdc25Hu2(蛋白质脱磷氧化酶)阻止作用将80μM被检验体(实施例1所得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂)加入含GST-cdc25Hu2融合蛋白质60μg/ml、10mM对硝基苯基磷酸盐(和光纯药社(制))、牛血清蛋白(Sigma公司，美国)、10mM DDT(ジチォスレィト-ル)(和光纯药社(制))、25mM HEPES(2-羟乙基哌嗪-N′-2-乙烷硫酸(pH8.0)的反应液中，在37℃反应60分钟，然后测定在405nm的吸光度，根据吸光度减少判断阻碍活性。cdc25活性有93.6%被阻止。即在被检验体中发现抗癌作用。实验例62-O-十八烷基抗坏血酸的大鼠心肌梗塞巢发展抑制作用[方法]使用雄性Wistar鼠(11-12周龄)，用戊巴比妥钠麻醉，在人工呼吸下在正中部开胸。切开心包膜后，使心脏露出。用带线的缝合针(日本レダリ-出售，7-0丝)将线在左冠状动脉的基始部连带心肌穿过左冠状动脉，将线穿入聚乙烯管，利用拉紧线进行冠状动脉闭塞。1小时后松开线，再开始血流动。再灌流30-60分钟后闭胸，保持清醒状态。24小时后再麻醉，迅速地摘出心脏浸入冰冷的生理食盐水中。为了求出危险区域再次闭塞冠状动脉，通过逆向插入到主动脉中的聚乙烯管将伊凡斯蓝(1%)灌流，使正常区域和危险区域分离。此后，将左心室沿平行垂直轴分割成6个部分，用1%氯化三苯基四唑(TTC)在37℃将坏死细胞以外染色10分钟，称量梗塞巢。将被检验体药物(实施例1所得到的2-O-十八烷基抗坏血酸锂)溶解在生理食盐水中，在冠状动脉闭塞30分钟后静脉内给药。在生理食盐水(1ml/Kg)静脉内给药组(N＝12)中，危险区域的梗塞巢(IS/AR)是60.2±1.8%。与此相反，在被检验体1mg/Kg的静脉内给药组(N＝7)中，显示40.5±4.6%(IS/AR)，与对比组相比，看到32.7%的有效的抑制(P＜0.001)。相应左心室的危险区域(AR/LV)在两组之间没有显著的差别以上结果表明，被检验体以1mg/Kg自变量用量能有效地抑制大鼠冠状动脉闭塞-再灌流后的心肌梗塞巢发展。实施例1将4.28g(10mM)2-O-十八烷基抗坏血酸悬浮在150ml水中，边搅拌边每次少量地加入0.37g(5mM)碳酸锂。接着加入50ml乙醇，形成透明的均匀溶液，然后自然过滤。减压馏去乙醇，将水溶液冻结干燥得到粉末。将该粉末用丙酮洗净后，在干燥器中减压干燥，得到4.0g2-O-十八烷基抗坏血酸锂(熔点163-165℃)。实施例2用已知的方法制成含有3mg 2-O-十八烷基抗坏血酸锂和具有下述组成的片剂。2-O-十八烷基抗坏血酸锂 3mg乳糖 65mg玉米淀粉 40mg羟基丙基纤维素 2mg硬脂酸镁 0.2mg110.2mg(每片)实施例3用已知的方法制成含有500mg 2-O-十八烷基抗坏血酸锂和具有下述组成的片剂。2-O-十八烷基抗坏血酸锂 500mgα化淀粉 15mg玉米淀粉 22mg硬脂酸镁 3mg540mg(每片)权利要求1.2-O-烷基抗坏血酸的锂盐。2.权利要求1所述的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐，其中烷基的碳原子数是14-18。3.含有2-O-烷基抗坏血酸的锂盐的循环系统机能障碍预防和治疗剂。全文摘要提供了可用来作为循环系统机能障碍预防和治疗剂等的2-O-烷基抗坏血酸的锂盐。文档编号C07D307/62GK1093360SQ9311416公开日1994年10月12日 申请日期1993年9月30日 优先权日1992年10月2日发明者清水忠一, 金和龙彦 申请人:武田药品工业株式会社