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核糖核酸(rna)的提取方法

  • 国知局
  • 2024-06-20 12:13:45

专利名称:核糖核酸(rna)的提取方法技术领域:本发明涉及一种RNA(核糖核酸)样品的制备方法,适用于生物样品,特别是从海产品中提取RNA的方法。现有的从海产品中提取RNA(核糖核酸)样品的方法有美国德州baylormedicalcallge的分子病毒学研究中心的Robertl,Atmar等人在“Appliedenvironmentalmicrobilogy”vol59,NO.21993。发表的用PCR检测贝类病毒方法,这种方法采用有机絮凝作用和聚乙二醇沉淀法提取RNA样品,其方法较复杂且耗资大。本发明旨在提出一种快速、简便的提取海产品,特别是贝类产品中的RNA的方法。本发明提出的提取RNA的方法包括1、从新鲜海产品、如贝类、虾类中摘取内脏,低温保存,(可选择4℃至-70℃)。2、取上述低温保存的样品若干,置入碱性缓冲液中匀浆、摇匀、离心使颗粒物沉淀,3、往上清中加入6-12%聚乙二醇,混匀,在0℃-6℃中放置2小时以上,4、分离去上清,将沉淀物溶于碱性缓冲液中,混匀,去不溶物。5、往上清中加入有机酸(可选用5-10%的三氯乙酸或三氟乙酸或0.5-1%磺基水杨酸),使蛋白质变性,然后析出变性蛋白,高速离心,使不溶物沉于管底。6、按常规方法沉淀、洗涤、干燥溶液中的RNA样品。上述碱性缓冲液可优先选用Tris或甘氨酸或磷酸盐等,PH值7.5-11,浓度0.05M-0.5M。本发明公开的提取RNA的方法快速、简便、仅需8-10小时即可完成。特别是能从大样中提取微量的RNA。用本法提取海产品中的RNA不含有破坏RNA和抑制逆转录及PCR反应的因子,为使用RT-PCR检测法提供理想、合格的RNA样品。以下结合实施例对本发明作进一步描述。本实施例是从新鲜贝类或虾中提取甲肝病毒的RNA或肠道病毒的RNA。具体步骤如下1、从新鲜贝类或虾样品中摘取内脏,置-20℃保存。2、称取样品10克,置入100ml0.05M甘氨酸,0.15MNaClpH9.5中匀浆,振摇10分钟,12000rpm离心20分钟。3、往上清中加入8克聚乙二醇,混匀。4℃放置2小时以上。4、12000rpm离心10分钟。去上清,沉淀溶于10ml0.1MNaCl·0.05MTris-HClpH9.5中,混匀。20000rpm离心20分钟。5、向上清中加入1ml50%三氯乙酸,煮沸10分钟,冰浴10分钟。20000rpm离心10分钟。上清移入另管中。6、加1ml3M乙酸钠pH5.0,再加入2.5倍的乙醇。离心后,沉淀用70%乙醇洗涤,干燥,即得RNA样品。7、将RNA样品溶于10-20微升水中,-70℃保存即可。权利要求1.一种RNA的提取方法,适用于生物样品,特别是从海产品中提取RNA的方法,包括以下步骤1)取新鲜海产品的内脏,低温保存,然后,2)置入碱性缓冲液匀浆,摇匀,离心使颗料物沉淀,然后,3)往上清中加入聚乙二醇,混匀,在0℃-6℃中放置2小时以上,然后,4)分离去上清,将沉淀物溶于碱性缓冲液中,去不溶物,然后,5)往上清中加入有机酸,去不溶物,然后,6)上清中的RNA按常规方法沉淀,洗涤、干燥。2.根据权利要求1所述的方法,其特征是采用的有机酸可以是5-10%的三氯乙酸或5-10%的三氟乙酸或0.5-1%磺基水杨酸。全文摘要本发明公开了一种提取RNA的方法,它是从新鲜海产品中摘取内脏,低温保存后置入碱性缓冲液中,再向上清中加入聚乙二醇沉淀、溶解后加入有机酸,析出变性蛋白,上清再沉淀、洗涤、干燥,即可得到RNA。本发明公开的提取RNA的方法具有快速、简易。RNA样品中不含有破坏RNA和抑制逆转录和PCR反应的因子。文档编号C07H21/02GK1113916SQ9410609公开日1995年12月27日 申请日期1994年5月26日 优先权日1994年5月26日发明者杨丰, 徐洵 申请人:国家海洋局第三海洋研究所

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