β-二酮酸二聚体化合物、制备方法及用途的制作方法

专利名称：β-二酮酸二聚体化合物、制备方法及用途的制作方法技术领域：本发明涉及具有对称结构的β-二酮酸二聚体的合成，更具体地说为含3-芳基-1，3-二酮酸单体的二聚体类化合物作为高效HIV-1整合酶抑制剂的合成及用途。背景技术： HIV-1是导致艾滋病的病毒，它编码三种酶逆转录酶(reversetranscriptase，RT)、蛋白酶(protease，PR)和整合酶(integrase，IN)。这三种酶是HIV复制和感染所必需的基本酶。目前临床上用于治疗艾滋病的药物都是逆转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂，但这两类药均不能根除HIV，并出现了毒性、病人的并发症和多重抗药性等副作用，因此，具有新颖作用机制的整合酶抑制剂有望提高疗效，并能与已有的抗艾滋病药物产生协同作用，组成新的有效的联合疗法。HIV-1整合酶(IN)是病毒复制所必需的三大基本酶之一，逆转录病毒DNA在整合酶的催化下插入宿主染色体内，进而发生HIV的复制和感染；而且HIV-1整合酶以单一的活性部位与病毒和宿主两种不同构象的DNA底物作用，有可能限制HIV对整合酶抑制剂药物产生抗药性；加之整合酶只存在于病毒中，哺乳动物均无此类酶，因此HIV-1整合酶成为大有前景的抗HIV药物设计的新型靶蛋白(Curr.Opin.Drug Discov.Devel.2001，4，402-410)。目前许多合成的化合物具有抑制HIV-1整合酶的效果，但只有β-二酮酸类化合物展示有效的细胞内抗病毒活性(Science 2000，287，646-650)，其生物等排体β-二酮四唑S-1360作为HIV-1整合酶抑制剂已进入临床II期研究。由于HIV-1整合酶表现出以二聚或四聚体形式起催化作用，因此，我们从二酮酸类化合物出发，通过不同长度、取向、形状的连接板块合成出不同结构的β-二酮酸二聚体，进一步提高活性、增加选择性，开发具有抗病毒活性的Me Too药物。发明内容本发明的目的是寻找一类具有抗病毒活性的高效HIV-1整合酶抑制剂的β-二酮酸类二聚体化合物。本发明的另一目的是提供一类β-二酮酸类二聚体化合物的制备方法。本发明的再一目的是提供含3-芳基-1，3-二酮酸的二聚体类化合物在医学上的用途。本发明设计基于HIV-1整合酶与其抑制剂相互作用的晶体结构和构效关系，由于HIV-1整合酶表现出以二聚或四聚体形式起催化作用(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1999，96，13040-13043)，但低聚体的精确性质仍未知，因此，我们从具有抗病毒活性的β-二酮酸类化合物出发，通过不同长度、取向、形状的连接板块合成出β-二酮酸二聚体，以获取高活性的抗病毒剂。本发明是以3-芳基-1，3-二酮酸为单体，通过不同的连接点和连接板块合成出不同结构的β-二酮酸二聚体(化合物通式如1和2所示)，同时在分子水平测定了各个化合物的HIV-1整合酶抑制活性。本发明的一类含3-芳基-1，3-二酮的对称二聚体类化合物，具有如下结构1和2 其中，X为N，O，S等杂原子 R为C2-C6烷基或取代芳环R1为C2-C6烷基或取代芳环该类化合物的结构通式1和2共有的基本骨架为4-芳基-4-氧-2-羟基-2-丁烯酸，它们的合成如下反应式所示 相应的芳基乙酮与草酸二甲酯或草酸叔丁酯甲酯在硷性条件下反应，缩合后，得到的二酮酸甲酯经碱水解得4-芳基-4-氧-2-羟基-2-丁烯酸。通式1的双二酮酸类二聚体是通过下列反应制备的 其中，通式1中的单体5按照文献J.Med.Chem.2000，43(26)，4923的方法合成。即将取代的苯甲醛与3-溴-1-苯基溴化锂反应，得到(3-溴-苯基)-(取代的苯基)-甲醇(化合物3)，经三乙基硅烷还原得到相应的3-苄基苯基溴(化合物4)。该溴化物被锂盐化后与酰化试剂N，N-二甲基乙酰胺作用，得到相应的芳基酮。芳基乙酮按照上面所述的方法草酰化再水解就得到相应的单体4-芳基-4-氧-2-羟基-2-丁烯酸。将上述所得的相应4-芳基-4-氧-2-羟基-2-丁烯酸与不同结构的二胺在偶联试剂1-羟基苯并三唑(HOBT)和1-[3-(二甲基氨)丙基]-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)的活化下偶联成具有对称结构的不同碳链的二酮酸二酰胺。通式2的双二酮酸类二聚体是通过下列反应获取的 首先二甲苯作为起始原料经N-溴代丁二酰亚胺溴化生成二溴甲苯，所得的不同位置取代(邻-，间-或对-)二溴甲苯与3-羟基苯乙酮在碱性条件下反应得苄氧基连接的双苯基乙酮。上述所得的双苯基乙酮经草酰化后，再水解得相应的双芳基二酮酸类二聚体。以苯基取代的甲基作为双(4-芳基-4-氧-2-羟基-2-丁烯酸)的连接板块的二酮酸二聚体是从(3-溴二苯基)-(取代苯基)-甲醇出发，通过下列反应获得的 先由(3-溴-苯基)-(取代苯基)-甲醇经琼斯试剂氧化得相应的酮(化合物11)再与取代的苯基溴化锂反应得三芳基取代的叔醇(化合物12)，上述叔醇经二氯二甲基硅烷还原得相应的二-(3-溴苯基)-芳基甲烷(化合物13)，化合物13经锂盐化后与N-甲氧基-N-甲基乙酰胺反应得相应的二芳基酮-芳基-甲烷(化合物14)。化合物14经草酸叔丁酯甲酯在甲醇钠存在下进行草酰化反应得化合物15，然后硷水解得以芳基取代的甲烷为连接单元的双芳基二酮酸类二聚体。药理数据显示，这类含3-芳基-1，3-二酮的对称二聚体具有非常高的HIV-1整合酶抑制活性，对于底物的3’端切断和链转移的半抑制浓度IC50均在6.0-0.02μM范围内，其中最好的化合物的抑制活性高于单体化合物。HIV-1整合酶抑制活性HIV-1整合酶的作用机制是两步反应1)3’端加工(3’Processing)整合酶结合前病毒DNA的长末端重复区域(LTR)的特定序列形成稳定的复合物，然后进行核苷3’端的内切核苷酸解加工，特异性地切掉序列...CAGT-3’末端的GT二核苷酸，露出凹进的3’位羟基；2)链转移(Strand Transfer)加工过的DNA/整合酶预整合复合物穿过核膜进入核子中心，与宿主的DNA结合，然后整合酶催化病毒DNA凹进的3’位羟基通过酯交换反应嵌入宿主细胞的染色体内，成为成熟的前病毒。因此，整合酶抑制剂的活性表现在对病毒DNA的3’端切除的抑制或链转移的抑制，以半抑制浓度IC50来表征。体外整合酶测试使用重组蛋白HIV-1整合酶，按照文献描述的方法操作(Methods Enzymol.2001，340，624-633和J.Med.Chem.1997，40，942-951)。整合酶与抑制剂在反应缓冲液中于30℃下预培养30分钟，控制所加入的整合酶的最终浓度为200nM。然后，加入20nM的5’-端32P-标记的线性低聚核苷酸底物，继续培养1小时。反应由加入等体积的变性装载染料所淬灭。一等分样品装载在20％的变性聚丙烯酰胺的凝胶(0.09M Tris-borate，pH8.3，2mM EDTA，20％聚丙烯酰胺，8M尿素)上经电泳分离。凝胶干燥后，置于一分子动态磷显象器的盒子里曝光，然后由分子动态磷显象器进行分析。抑制百分比由下列公式计算％I＝100×[1-(D-C)/(N-C)]式中的C，N和D分别代表不同条件下的21核苷酸底物转化为19核苷酸(3’-端切断产物)或链转移产物的分数。其中C，N和D所在的条件分别为DNA单独存在，DNA加上整合酶，以及DNA加上整合酶加上抑制剂。半抑制浓度IC50由抑制剂浓度对抑制百分比作图而测定产生50％抑制所对应的浓度来确定。反应缓冲液的组成为25mM MOPS，pH7.2，50mM NaCl，1mM HEPES，pH7.5，50μM EDTA，50μM二硫苏糖醇，7.5mM MnCl2，0.1mg/mL牛血清蛋白(BSA)，10.0mM 2-巯基乙醇，10％二甲亚砜。表1.具有对称结构的二聚体β-二酮酰胺类化合物1a-1e对野生形HIV-1整合酶的抑制活性 IC50，μM化合物RR13’-切断链转移21核苷DNA 19核苷DNA在Mn2+离子存在下1a3.0 0.030.81b 10.0 0.04，0.175 3.01c 7.0 0.045，0.37 2.01d 6.5 0.1，1.00.371e 7 -OH(单体)3.0 0.370.8表2.具有对称结构的二聚体β-二酮酰胺类化合物1a-1e对定点变异的HIV-1整合酶的抑制活性 IC50，μM(C-65-S IN) IC50，μM(C-56-S IN)化合物R R13’-切断 链转移 3’-切断链转移在Mn2+离子存在下1a 1.25，3.00.12，0.081.1，2.00.2，0.041b 3.0，4.0 0.45，0.084.5，3.00.25，0.11c 5.0，＞4.0 0.25，0.05＞3.3，4.0 0.85，2.01d 3.0，＞3.3 1.0，1.0 2.5，3.30.3，0.11e 7 -OH(单体) 0.45，＞1.0 0.02，0.082.0，2.00.2，0.04 表3.具有对称结构的β-二酮酸二聚体类化合物2a-2d对野生形和定点变异的HIV-1整合酶的抑制活性 IC50，μM(WT IN) IC50，μM(C-65-S IN)化合物R3’-切断 链转移 3’-切断链转移在Mn2+离子存在下2a 1.11.52.5 0.52b 6.0，6.0 5.510 0.372c 1.33，2.0 2.01.75 1.752d 1.12.52.5 0.37 3.00.80.45，1.00.02，0.08具体实施方式下面结合实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明。实例1 4-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酰哌嗪二胺1a步骤1(3-溴-苯基)-(2-氟-苯基)-甲醇(化合物3) 在氮气保护下，向一干燥反应瓶中加入1.6M的正丁基锂的己烷溶液(6.5mL，10.4mmol)及20mL无水四氢呋喃，冷至-78℃，将1，3-二溴苯(1.2mL，10.0mmol)缓慢滴加至体系中，-78℃～-50℃下搅拌2.5小时，然后将邻氟苯甲醛(1.06mL，10.4mmol)缓慢滴加至体系中，保持体系温度低于-50℃。-78℃～-50℃搅拌0.5小时，自然升温至室温，继续搅拌3小时，体系用饱和NH4Cl溶液淬灭，乙醚萃取，合并有机层，依次用饱和的NaHCO3溶液、饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。浓缩，柱层析(石油醚/乙醚＝15∶1)纯化，得2.82g黄色油状物3，产率95％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.59(s，1H)；7.39-7.53(m，2H)；7.20-7.27(m，2H)；7.10-7.19(m，2H)；6.95-7.03(m，1H)；6.02(d，1H)；2.83(d，1H). 步骤2(3-溴-苯基)-(2-氟-苯基)-甲烷(化合物4) 在氮气保护下，向一干燥反应瓶中加入化合物3(1.183g，4.21mmol)，三乙基硅烷(0.81mL，5.05mmol)及15mL无水二氯甲烷，冷至0℃，将BF3·Et2O(0.64mL，5.05mmol)缓慢滴加至体系中，自然升温至室温搅拌过夜，体系用饱和的NaHCO3溶液淬灭，乙醚萃取，合并有机相，用饱和的盐水洗，无水Na2SO4干燥。浓缩，柱层析(100％石油醚)纯化，得0.971g黄色油状物4，产率84％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.30-7.35(m，2H)；7.00-7.20(m，6H)；3.95(s，2H). 步骤31-[3-(2-氟-苄基)-苯基]乙酮(化合物5) 将化合物4(0.67g，2.53mmol)溶于10mL无水四氢呋喃，冷至-78℃，在氮气保护下，向体系中缓慢滴加1.6M的正丁基锂己烷溶液(1.9mL，3.0mmol)，-78℃下搅拌2小时，将N，N-二甲基乙酰胺(0.35mL，3.8mmol)缓慢滴加至体系中，反应温度控制在-50℃以下，于-78℃～-50℃下搅拌0.5小时，体系用1N的HCl溶液淬灭，水相用乙醚萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。浓缩，残余物用柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10∶1)纯化，得0.288g黄色油状物5，产率63％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.77-7.83(m，2H)；7.19-7.37(m，2H)；7.15-7.19(m，2H)；7.03-7.14(m，2H)；4.04(s，2H)；2.57(s，3H). EI-MS(M/Z，％)228(M+，39.0)，213(100)，185(10.0)，165(26.0). 步骤44-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2，4-二氧-丁酸甲酯(化合物6) 在氮气保护下，向一干燥反应瓶中加入甲醇钠(2.91g，53.95mmol)及45mL无水甲苯，冷至0℃，将(3.18g，26.97mmol)草酸二甲酯及(2.461g，10.79mmol)化合物5的乙二醇二甲醚溶液45mL缓慢滴加至体系中，0℃搅拌0.5小时，逐渐升温至60℃，搅拌过夜，体系用1N的HCl溶液淬灭，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和的盐水洗，无水Na2SO4干燥。浓缩得黄色油状物6，未经纯化直接进行下一步反应。EI-MS(M/Z，％)314(M+，8.0)，255(100)，213(58.0)，185(10.0)，165(18.0)，109(40.0). 步骤54-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酸(化合物7) 将上一步所得粗品化合物6溶于40mL四氢呋喃/甲醇(1∶1)混合溶剂中，室温条件下，滴加1N的氢氧化钠溶液40mL，室温搅拌1小时，体系用乙醚萃取，水相用2N的HCl溶液调PH值至1～2，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用饱和的NaHCO3溶液洗，饱和的盐水洗，无水Na2SO4干燥。浓缩，残渣用石油醚/二氯甲烷重结晶纯化，得1.179g淡黄色絮状固体化合物7，两步收率53.35％。mp117～118℃。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.88-7.84(m，2H)；7.49-7.42(m，2H)；7.25-7.17(m，2H)；7.15(s，1H)，7.10-7.04(m，2H)；4.08(s，2H). EI-MS(M/Z，％)300(M+，12.5)，255(100)，213(30.0)，183(18.0)，165(26.0)，109(70.0). 步骤64-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酰哌嗪二胺(化合物1a) 单体二酮酸4-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酸，化合物7(0.15g，0.2mmol)和EDCI(0.101g，0.525mmol)，HOBT(0.071g，0.525mmol)溶于1.5mL无水四氢呋喃，0℃搅拌15分钟，向体系中滴加哌嗪(0.02g，0.25mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液1mL，自然升温至室温，搅拌2.5小时后，将反应混合物倒入冰水中，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。浓缩，残渣经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝60∶1)纯化，得棕色粘稠化合物1a 56mg，产率40％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.79-7.76(m，4H)；7.44-7.38(m，4H)；7.25-7.19(m，2H)；7.17-7.13(m，2H)，7.09-7.03(m，4H)；4.05(s，4H)，3.73-3.78(m，8H). ESI-MS651.1(M+H+，100)，674.2(M+Na+，12.0). 目标化合物1b-1e用类似方法制得实施例24-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羧基-4-氧-丁-2-烯酰乙二胺1b 淡黄色粉末，收率65％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87-7.83(m，6H)；7.75-7.42(m，4H)；7.19(s，2H)；7.26-7.02(m，6H)，4.05(s，4H)；3.64(m，4H). EI-MS(M/Z，％)323(100)，254(38.0)，213(70.0)，165(26.0)，109(14.0). 实施例34-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酰丙二胺1c 淡黄色粉末，收率68％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.88-7.84(m，6H)；7.44-7.38(m，4H)；7.21(s，1H)；7.24-7.13(m，3H)，7.09-7.02(m，3H)；4.06(s，4H)；3.47(q，4H，J＝6.42Hz)；1.8(m，2H).ESI-MS661.4(M+Na+，100). 实施例44-[3-(2-氟-苄基)-苯基]-2-羟基-4-氧-丁-2-烯酰戊二胺1d 淡黄色粉末，收率70％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87-7.82(m，4H)；7.44-7.38(m，4H)；7.28-7.25(m，4H)；7.19(s，1H)；7.24-7.13(m，3H)，7.09-7.02(m，3H)；4.06(s，4H)；3.41(q，4H，J＝6.86Hz)；1.69-1.62(m，4H)；1.48-1.40(m，2H). ESI-MS(M/Z，％)667.2(M+H+，96.5)，689.3(M+Na+，100). 实施例54-[3-(2-氟-苄基)-苯基]2-羟基-4-氧-丁-2-烯酰己二胺1e 淡黄色粉末，收率70％。mp134～135℃.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.87-7.82(m，4H)；7.44-7.38(m，4H)；7.19(s，2H)；7.27-7.13(m，5H)，7.09-7.02(m，3H)，4.06(s，4H)；3.39(q，4H，J＝6.73)，1.63-1.60(m，4H)，1.43-1.40(m，4H).ESI-MS(M/Z，％)681.3(M+H+，9.0)，703.4(M+Na+，100). 实施例61，2-双-[3-(1，3-二氧3-羧基)-苯氧甲基]-苯2a步骤11，2-双-溴甲基-苯(化合物8a) 向一干燥的单颈瓶中加入NBS(6.6g，37.5mmol)、邻二甲苯(1.85mL，15.0mmol)及100mL四氯化碳，搅拌条件下加入过氧化苯甲酰(18mg)。体系在剧烈搅拌条件下回流36小时，室温时将反应过程中生成的沉淀过滤掉，滤液浓缩后柱层析，100％的石油醚做洗脱剂，得到1.5g白色固体化合物8a，产率33.5％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ4.67(s，4H)，7.30-7.33(m，2H)，7.36-7.39(m，2H)步骤21，2-双-(3-乙酰苯氧甲基)-苯(化合物9a) 在氮气保护下，将3-羟基苯乙酮(0.34g，2.5mmol)溶于4mL无水N，N-二甲基甲酰胺，将K2CO3(0.71g，5.14mmol)及化合物8a(0.26g，1.0mmol)加至体系中，体系在60℃反应4小时，体系用水稀释后，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用2N的NaOH溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后，残余物柱层析(PE∶EtOAc＝3∶1)纯化，得到0.34g白色固体9a，产率90.9％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.56-7.53(m，6H)，7.42-7.34(m，4H)，7.17-7.15(m，2H)，5.23(s，4H)，2.56(s，6H). 步骤31，2-双-[3-(1，3-二氧-4-丁酸甲酯)-苯氧甲基]-苯(化合物10a) 向干燥的25mL单颈瓶中加入CH3ONa(167mg，7.59mmol)及1.5mL无水甲苯，冰盐浴冷却，缓慢滴加9a(116mg，0.31mmol)及MeOOCCOOtBu(198mg，1.24mmol)溶于THF/DME(3.0mL/3.0mL)的溶液，0℃下搅拌0.5小时后，剧烈搅拌条件下，将反应混合物倒入HCl溶液(1N)的冰水中，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用1N的HCl溶液，盐水洗，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后残余物柱层析(CHCl3/CH3OH＝10∶1)纯化，得到0.158g油状化合物10a，产率93.5％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.58-7.52(m，6H)，7.44-7.37(m，4H)，7.21-7.18(m，2H)，7.03(s，2H)，5.26(s，4H)，3.94(s，6H). 步骤41，2-双-[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯氧甲基]-苯(化合物2a) 将化合物1，2-双-[3-(1，3-二氧-3-羧酸甲酯)-苯氧甲基]-苯10a(0.164g，0.30mmol)溶于四氢呋喃和甲醇的混合溶剂(2.0mL∶2.0mL)，室温下将3.2mL 1N的NaOH溶液缓慢滴加至体系中，搅拌1小时后，反应体系用乙醚萃取，水相用2N的HCl调pH值至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，盐水洗，无水Na2SO4干躁。有机相浓缩后，残余物用石油醚/二氯甲烷重结晶，得到0.109g黄色固体2a，产率70.0％. 1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.64-7.61(m，3H)；7.59-7.55(m，3H)；7.49-7.45(m，2H)；7.41-7.39(q，2H，J＝13.40)；7.06(s，2H)，5.36(s，4H). ESI-MS517.1(M-H+，38.0)；445.1(100)实施例71，3-双-[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯氧甲基]-苯2b 步骤11，3-双-溴甲基-苯(化合物8b) 向一干燥的单颈瓶中加入NBS(6.68g，37.5mmol)、间二甲苯(1.85mL，15.0mmol)及30mL四氯化碳，搅拌条件下加入过氧化苯甲酰(23mg)。体系在剧烈搅拌条件下回流36小时，室温时将反应过程中生成的沉淀过滤掉，滤液浓缩后柱层析，100％的石油醚做洗脱剂，得到1.88g白色固体化合物8b，产率47.4％。1HNMR(600MHz，CDCl3)δ4.46(s，4H)，7.40(s，1H)，7.31(m，3H)步骤21，3-双-(3-乙酰苯氧甲基)-苯(化合物9b) 在氮气保护下，将3-羟基苯乙酮(0.5g，3.7mmol)溶于8mL无水N，N-二甲基甲酰胺，将K2CO3(1.1g，7.6mmol)及化合物8b(0.40g，1.5mmol)加至体系中，体系在60℃反应4小时，体系用水稀释后，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用2N的NaOH溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后，残余物柱层析(PE∶EtOAc＝4∶1)纯化，得到0.41g白色固体9b，产率74.0％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ2.595(s，6H)，5.14(s，4H)，7.17-7.20(m，2H)，7.36-7.43(m，5H)，7.54-7.58(m，5H). 步骤31，3-双-[3-(1，3-二氧-4-丁酸甲酯)-苯氧甲基]-苯(化合物10b) 向干燥的25mL单颈瓶中加入CH3ONa(343mg，6.36mmol)及2mL无水甲苯，冰盐浴冷却，缓慢滴加9b(238mg，0.636mmol)及MeOOCCOOtBu(407mg，2.54mmol)溶于THF/DME(2.0mL/2.0mL)的溶液，0℃下搅拌0.5小时后，剧烈搅拌条件下，将反应混合物倒入HCl溶液(1N)的冰水中，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用1N的HCl溶液，盐水洗，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后残余物柱层析(CHCl3/CH3OH＝10∶1)纯化，得到0.343g油状化合物10b，产率98.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.61-7.58(m，4H)，7.56(s，1H)，7.45-7.39(m，5H)，7.24-7.21(m，2H)，7.06(s，2H)，5.16(s，4H)，3.95(s，6H). 步骤41，2-双-[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯氧甲基]-苯(化合物2b) 将化合物1，2-双-[3-(1，3-二氧-3-羧酸甲酯)-苯氧甲基]-苯10b(0.174g，0.32mmol)溶于四氢呋喃和甲醇的混合溶剂(2.0mL∶2.0mL)，室温下将3.2mL1N的NaOH溶液缓慢滴加至体系中，搅拌1小时后，反应体系用乙醚萃取，水相用2N的HCl调pH值至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，盐水洗，无水Na2SO4干躁。有机相浓缩后，残余物用石油醚/二氯甲烷重结晶，得到0.122g黄色固体2b，产率73.5％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.68-7.63(m，4H)，7.51-7.48(m，6H)，7.36-7.33(dd，2H)，7.09(S，2H)，5.23(s，4H).ESI-MS517.1(M-H+，100)实施例81，4-双-[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯氧甲基]-苯2c步骤11，4-双-溴甲基-苯(化合物8c) 向一干燥的单颈瓶中加入NBS(20.1g，112.36mmol)、对二甲苯(5.56mL，45.0mmol)及100mL四氯化碳，搅拌条件下加入过氧化苯甲酰(18mg)。体系在剧烈搅拌下回流36小时，室温时将反应过程中生成的沉淀过滤掉，滤液浓缩后柱层析，100％的石油醚做洗脱剂，得到6.12g白色固体化合物8c，产率51.0％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.37(m，4H)；4.48(s，4H). 步骤21，4-双-(3-乙酰苯氧甲基)-苯(化合物9c) 在氮气保护下，将3-羟基苯乙酮(1.36g，10.0mmol)溶于15mL无水N，N-二甲基甲酰胺，将K2CO3(2.76g，20.0mmol)及化合物8c(1.056g，4.0mmol)加至体系中，体系在60℃反应4小时，体系用水稀释后，水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用2N的NaOH溶液和饱和食盐水洗涤，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后，残余物柱层析(PE∶EtOAc＝3∶1)纯化，得到0.54g白色固体9c，产率36.1％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.57-7.54(m，4H)；7.47(s，4H)；7.39-7.35(t，2H)，7.19-7.16(m，2H)；5.12(s，4H)，2.58(s，6H).EI-MS(M/Z，％)239(100)，197(18.0)，104(58.0). 步骤31，4-双-[3-(1，3-二氧-4-丁酸甲酯)-苯氧甲基]-苯(化合物10c) 向干燥的25mL单颈瓶中加入CH3ONa(410mg，7.59mmol)及4mL无水甲苯，冰盐浴冷却，缓慢滴加9c(284mg，0.76mmol)及MeOOCCOOtBu(486mg，3.03mmol)溶于THF/DME(3.0mL/3.0mLL)的溶液，0℃下搅拌0.5小时后，剧烈搅拌条件下，将反应混合物倒入HCl溶液(1N)的冰水中，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用1N的HCl溶液，盐水洗，无水Na2SO4干燥。有机相浓缩后残余物柱层析(CHCl3/CH3OH＝10∶1)纯化，得到0.414g油状化合物10c，产率100％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.67-7.62(m，4H)；7.51-7.47(m，6H)；7.36-7.34(m，2H)；7.08(s，2H)；5.23(s，4H)，3.85(s，6H). 步骤41，4-双-[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯氧甲基]-苯(化合物2c) 将化合物1，4-双-[3-(1，3-二氧-3-羧酸甲酯)-苯氧甲基]-苯10c(0.163g，0.298mmol)溶于四氢呋喃和甲醇的混合溶剂(1.0mL∶1.0mL)，室温下将3.0mL 1N的NaOH溶液缓慢滴加至体系中，搅拌1小时后，反应体系用乙醚萃取，水相用2N的HCl调pH值至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，盐水洗，无水Na2SO4干躁。有机相浓缩后，残余物用石油醚/二氯甲烷重结晶，得到0.107g黄色固体2c，产率69.2％. 1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.66-7.61(m，3H)；7.50-7.46(m，5H)；7.34-7.31(m，3H)；7.08(s，2H)，5.21(s，4H).ESI-MS517.1(M-H+，100)实施例91-(1，1-双[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯基])甲基-2-氟-苯2d步骤1(3-溴-苯基)-(2-氟-苯基)-甲酮(化合物11) 将(3-溴-苯基)-(2-氟-苯基)-甲醇(化合物3)(3.84g，13.6mmol)溶于40mL丙酮，0℃搅拌条件下，将10.21mL琼斯氧化剂缓慢滴加至体系中，0℃下反应25分钟，将10mL异丙醇缓慢滴加至体系中，撤掉冰浴，室温条件下搅拌10分钟，垫硅藻土过滤，浓缩后柱层析(石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1)，得到3.757g白色固体11，产率98.6％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.96-7.98(m，1H)；7.71-7.76(m，2H)；7.53-7.59(m，2H)；7.29-7.38(m，2H)；7.15-7.21(m，1H).EI-MS(M/Z，％)281(M++3，8.0)；280(M++2，48.0)；279(M++1，8.0)；278(M+，48.0)；183(28.0)；185(23.0)；123(100).IR(film)1658，1608，1563，1480，1453，1297，734cm-1. 步骤2双-(3-溴-苯基)-(2-氟-苯基)-甲醇(化合物12) 在氮气保护下，向一干燥反应瓶中加入1.6M的正丁基锂己烷溶液(6.5mL，10.4mmol)及35mL无水四氢呋喃，冷至-78℃，将1，3-二溴苯(2.28mL，18.85mmol)缓慢滴加至体系中，-78℃～-50℃搅拌3.5小时后，将溶于5mL无水四氢呋喃的化合物11(3.757g，13.46mmol)缓慢滴加至体系中，使体系温度低于-50℃。-78℃～-50℃搅拌0.5小时，自然升温至室温继续反应3小时后，体系用饱和NH4Cl溶液淬灭，水相用乙醚萃取，合并有机层，依次用饱和的NaHCO3溶液洗，饱和的盐水洗，无水Na2SO4干燥。浓缩后，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝40∶1)纯化，得5.58g白色固体12，产率95％。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.50-7.67(m，4H)；7.25-7.34(m，4H)；6.96-7.08(m，3H)；6.67-6.68(m，1H).EI-MS(M/Z，％)436(M+，8.43)；281(39.40)；279(40.35)；185(17.84)；183(22.30)；123(100)；95(21.70)；57(15.23).IR(film)υmax3481，3419，1610，1580，1564，1550，1485，1452，1420，1227，760cm-1. 步骤31-[1，1-双(3-溴-苯基)]-甲基-2-氟-苯(化合物13) 将化合物12(5.58g，12.79mmol)及碘化钠(7.67g，51.16mmol)溶于35mL乙腈中，搅拌溶解后，向体系中缓慢滴加二甲基氯硅烷(3.08mL，25.59mmol)，室温搅拌2小时，体系用乙酸乙酯稀释后，依次用水洗，饱和的NaHCO3溶液，10％的Na2S2O3溶液及盐水洗，无水Na2SO4干躁。浓缩后，柱层析(100％石油醚)，得5.37g白色固体13，产率100％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.39-7.36(m，2H)；7.35-7.13(m，5H)；7.12-7.01(m，4H)；6.91-6.86(m，1H)；5.74(s，1H)；EI-MS(M/Z，％)418(M+，30.0)；420(M++2，55.7)；422(M++4，29.8)；341(76.0)；339(72.4)；183(100)；165(55.0). 步骤41-[1，1-双(3-乙酰苯基)]-甲基-2-氟-苯(化合物14) 将化合物13(1.049g，2.497mmol)溶于10mL无水四氢呋喃，冷至-78℃，将1.6M的正丁基锂己烷溶液(3.9mL，6.244mmol)缓慢滴加至体系中，-78℃搅拌45分钟，将N-甲基-N-甲氧基乙酰胺(0.7mL，6.244mmol)缓慢滴加至体系中，使体系温度低于-50℃。-78℃～-50℃搅拌0.5小时，自然升温至室温继续反应2小时后，反应用饱和NH4Cl溶液淬灭，乙醚萃取，合并有机层，依次用饱和的NaHCO3溶液洗，饱和的盐水洗，无水Na2SO4干躁。浓缩后，柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10∶1)，得0.522g白色固体14，产率40.2％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.86-7.83(dt，2H)；7.74-7.73(m，2H)；7.43-7.40(t，2H)；7.30-7.24(m，3H)；7.10-7.04(m，2H)；6.91-6.87(td，1H)；5.94(s，1H)；2.55(s，6H). 步骤51-(1，1-双[3-(1，3-二氧-3-羧基)-苯基])甲基-2-氟-苯2d 在干燥的25mL单颈瓶中加入CH3ONa(146mg，2.7mmol)及2mL无水甲苯，0℃时将溶于2.0mL/2.0mL(THF/DME)的化合物14(94mg，0.27mmol)及MeOOCCOOtBu(173mg，1.08mmol)缓慢滴加至体系中，0℃搅拌0.5小时后，剧烈搅拌条件下，将反应混合物倒入冷的HCl(1N)溶液中，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用1N的HCl溶液、盐水洗，无水Na2SO4干躁。有机相浓缩后得到油状化合物15，未经提纯，继续下一步反应。将化合物15溶于2.0mL/2.0mL(THF/CH3OH)，室温时将1N的NaOH溶液(5.0mL，5.0mmol)缓慢滴加至体系中，室温搅拌1小时后，体系用乙醚萃取，水相用2N的HCl溶液调pH值至1-2，然后用乙酸乙酯萃取，合并有机相，盐水洗，无水Na2SO4干躁。有机相浓缩后，残余物用石油醚/二氯甲烷重结晶，得到黄色化合物2d(86mg，两步收率65％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.92-7.80(m，4H)；7.49-7.45(m，3H)；7.35-7.35(m，5H)；7.12-6091(m，3H)；7.00(s，1H)；6.09(s，1H). ESI-MS489.1(M-H+，100).权利要求1.具有如下结构的β-二酮酸二聚体化合物 其中，X为N，O，S杂原子；R为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；R1为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；2.根据权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物，其特征在于当结构如(1)式的β-二酮酸二聚体化合物时，其中X为N，O，S杂原子；R为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；R1为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；3.根据权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物，其特征在于当结构如(2)式的β-二酮酸二聚体化合物时，其中X为N，O，S杂原子；R为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；R1为C2-C6烷基，C2-C6取代芳基；4.根据权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物制备方法，其特征在于(1)式由a、相应的芳基乙酮与草酸二甲酯或草酸叔丁酯甲酯在硷性条件下反应，缩合物再硷水解得4-芳基-4氧-2-羟基-2丁烯酸；b、将上述所得的丁烯酸与不同结构的二胺在偶联试剂存在下，偶联成具有对称结构的不同碳链长度或不同形状的二酮酸二酰胺。5.根据权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物制备方法，其特征在于(2)式由a、二甲苯为起始原料经N-溴代丁二酰亚胺溴化生成二溴甲苯，二溴甲苯与3-羟基苯乙酮在碱性条件下，反应得苄氧基连接的双苯基乙酮；b、将上述所得的双苯基乙酮经草酰化后，再水解得相应的双芳基二酮酸类二聚体。6.根据权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物制备方法，其特征在于(2)式由a、(3-溴-苯基)-(取代苯基)-甲醇经琼斯试剂氧化成相应的酮；b、相应的酮与取代苯基溴化锂反应得三芳基取代的叔丁醇；c、上述和叔丁醇经二氯二甲基硅烷还原得相应的二-(3-溴苯基)-芳基甲烷；d、相应的二芳基酮-芳基-甲烷进行草酰化反应得的反应物用硷水解得以芳基取代的甲烷为连接单元的双芳基二酮类二聚体。7.根据权利要求4所述的β-二酮酸二聚体化合物制备方法，其特征在于偶联试剂为1-羟基苯并三唑(HOBT)、1-[3-(二甲基氨)丙基]-3-乙基碳化二亚胺(EDCI)。8.如权利要求1所述的β-二酮酸二聚体化合物的用途，其特征在于它在防、治艾滋病药物中应用。全文摘要本发明公开了一类具有对称结构的β－二酮酸二聚体化合物、制备方法和它们的用途。该类化合物通过基本骨架4－芳基－4－氧－2－羟基－2－丁烯酸与不同结构的二胺在偶联试剂的活化下，偶联成具有对称结构的不同碳链的二酮酸二酰胺或采用二溴甲苯与3－羟基苯乙酮在碱性条件下，反应得苄氧基连接的双苯基乙酮，再经草酰化后，水解得相应的双芳基二酮酸类二聚体，药理试验证明它具有非常高的HIV－1整合酶抑制活性。文档编号C07C69/738GK1548413SQ03116758公开日2004年11月24日 申请日期2003年5月6日 优先权日2003年5月6日发明者龙亚秋, 姜晓华, 宋来东, 诺锐·尼亚玛塔, 尼亚玛塔 申请人:中国科学院上海药物研究所