迷迭香酸二聚体化合物及其分离方法

专利名称：迷迭香酸二聚体化合物及其分离方法技术领域：本发明涉及天然植物的成分分离，属于药品的加工方法。本发明分离出的迷迭香酸二聚体与丹酚酸B共存于丹参中。丹参Salvia miltiorrhiza Bung为唇形科植物之根，中医传统使用的安神止痛，活血化瘀药。70年代以来，由于发现丹参对心绞痛、冠心病等心血管疾病有较好的临床疗效，对其化学成分的研究进行得比较深入，从50年前分离出黄色结晶物算起，至今已有30余种化学成分被分离和完成结构测定。这些成分可分为脂溶性和水溶性两类，水溶性成分大多为酚性醛、酚性酸、二萜酸等。本发明的目的是提供一种新化合物迷迭香酸二聚体化合物，并提供其水溶性分离方法，揭示该化合物还有治疗消化性溃疡的药理作用。迷迭香酸二聚体的结构式 命名(根据有机化学的国际命名法)I.4-Carboxylethenyl-7-hydroxyl-2-(3、4-dihydroxyphenyl)benzofuran-3-carboxylic acid性质为白色无定形化合物，易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。该迷迭香酸二聚体化合物的分离方法是，将粉碎的丹参根茎用95％(v/v)的乙醇在室温下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液经浓缩后溶于水，并用乙酸乙酯萃取，得出酚酸类为主的混合物。其特点是将该混合物用湿硅胶H柱进行粗分离，用氯仿-甲醇-甲酸混合液洗脱，得出含丹酚酸B与迷迭香酸二聚体的混合物。用硅胶H干柱对丹酚酸和迷迭香酸二聚体混合物进行分离，并用氯仿-乙酸乙酯多次洗脱，再用反相HPLC分离，用ODS柱，洗脱液为甲醇∶水＝85∶15(v/v)，流速3ml/min。迷迭香酸二聚体为首次从丹参根茎中分离出来的一种新化合物，经初步试验表明，它和丹酚酸B分别或作为混合物都具有预防和治疗消化性溃疡的药理作用。这为丹参生药和单成分的制备又拓展了一种新用途。在用已知技术萃取得出酚酸类混合物后，又利用本发明的提取方法分离出丹酚酸B与迷迭香酸二聚体的混合物，经检测证明这其中的丹酚酸B与已知该成分完全相同。丹酚酸B，其结构式为 分子式及分子量为C36H30O16718.60命名3-Benzofurancarboxylic acid，4-[3-[1-Garboxy-2-(3.4-dihydroxyphenyl)ethoxy]-3-oxo-l propenyl]-2-(3.4-dihydroxy-phenyl)-2，3-dihydro-7-hydroxy-，3-[1-Carboxy-2-(3.4-dihydroxy-phenyl)ethyl]ester命名依据《植物药有效成分手册》人民卫生出版社1986年3月第一版迷迭香酸二聚体的四谱分析结果如下IRν(δ)KBr(cm-1)3395(-OH，S)，2855～2500(-CH2，-CH，W)，max1793(-COOM，S)，1614(-COOM，-CH＝CH-，M)，1525 -COOM)，1286-1179 ，867，812(苯环上的CH面外摇摆振动)；1H-NMRδ4.43(1H，d，J＝4.2)δ5.85(1H，d，J＝4.2)，δ6.26(1H，d，J＝16.0)，δ6.46(1H，d，J＝8.0)，δ6.68(1H，d，J＝8.0)，δ6.92(1H，d J＝8.4)δ7.22(1H，d，J＝8.4)，δ7.65(1H，d，J＝16.0)13C-NMR[(CD3)2CO]δ56.86(C8′)，87.20(C7′)，113.29(C2′)，115.93(C8)，115.93(C5)116.920c5′)，117.82(C6′)，121.28(C6)，125(C2)，127.60(C1′)，133.12(C1)，142(C7)，144.65(C3′，C4，C4′)，148.24(C3)，168(C9)，170(C9′)质谱EI-MS m/e 迷迭香酸二聚体化合物的分离方法是，包括已知的水溶性提取方法将粉碎的丹参根茎用95％(v/v)的乙醇在室温下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液经浓缩后溶于水，并用乙酸乙萃取，得出酚酸类为主的混合物。本方法的特点是用湿硅胶H柱对此酚酸类混合物进行粗分离用氯仿-甲醇-甲酸混合液洗脱，得出含丹酚酸B与迷迭香酸二聚体混合物及其它酸类化合物。进一步分离；用硅胶H干柱进行，先用约20mg丹酚酸B与迷迭香酸二聚体混合物拌少量硅胶H，自然干燥后倒入硅胶干柱中(硅胶干柱高度为11cm)，放入样品层高度＜1cm；然后用氯仿液约60ml洗脱，接着用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1(v/v)，30ml洗脱之后用氯仿∶乙酸乙酯＝1∶1(v/v)30ml洗脱，再用氯仿∶乙酸乙酯＝2∶3(v/v)50ml洗脱，得丹酚酸B；继续用氯仿∶乙酸乙酯＝2∶3(v/v)50ml洗脱出迷迭香酸二聚体，再用反相HPLC分离，用ODS柱，洗脱液为甲醇∶水＝85∶15(v/v)，流速为3ml/min。迷迭香酸二聚体和丹酚酸B这两种单成分物质，除具有丹参已知的安神止痛、活血化瘀、治疗心血管疾病的药效外，还分别或作为混合物对消化性溃疡有显著的抑制、愈合作用，这为丹参全成分及单成分的利用开拓了一种新用途。用大鼠乙醇性胃溃疡为模型试验每100g体重腹腔注射2mg丹酚酸B，对溃疡发生面有明显的抑制和愈合作用。对迷迭香酸二聚体药用剂量的动物试验正在进行中，但其混合物的药效已观察到有明显效果。权利要求性质为白色无定形化合物，易溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中。2.一种迷迭香酸二聚体化合物的分离方法是，包括将粉碎的丹参用95％(v/v)的乙醇在室温下冷浸，然后用60～70％(v/v)乙醇水溶液多次提取，乙醇提取液经浓缩后溶于水，并用乙酸乙酯萃取，得出酚酸类为主的混合物；其特征是将此酚酸类混合物用湿硅胶H柱进行粗分离，用氯仿一甲醇一甲酸混合液洗脱，得出含丹酚酸B与迷迭香酸二聚体混合物，用硅胶H干柱进行分离，用氯仿一乙酸乙酯多次洗脱，再用反相HPLC分离，用ODS柱，洗脱液为甲醇∶水＝85∶10(v/v)，流速3ml/min。3.根据权利要求2所述的迷迭香酸二聚体化合物的提取方法，其特征是所述的多次洗脱及各次所用洗脱剂配比和用量都不相等；粗分离后得到的分离物先用氯仿液，用量100份，洗脱后，接着用氯仿∶乙酸乙酯＝4∶1(v/v)，用量50份洗脱，再用该洗脱剂1∶1(v/v)，用量50，然后用该剂2∶3，用量80洗脱，得丹酚酸B后用该剂2∶3，用量80。4.一种迷迭香酸二聚体化合物的用途，包括存在于已知丹参生药整体中的用途为活血化瘀、治疗心血管疾病，其特点在于还是治疗消化性溃疡的药物。5.一种丹酚酸B的用途，包括存在于已知丹参生药整体中的用途为活血化瘀、治疗心血管疾病，其特点在于还是治疗消化性溃疡的药物。6.一种迷迭香酸二聚体与丹酚酸B混合物的用途，包括存在于已知丹参生药整体中的用途为活血化瘀、治疗心血管疾病，其特点在于还是治疗消化性溃疡的药物。全文摘要迷迭香酸二聚体化合物及其分离方法，用水溶性提取方法从丹参根茎中提出酚酸类混合物，其特征是将含丹酚酸B与迷迭香酸二聚体混合物用湿硅胶H干柱进行粗分离，用氯仿-乙酸乙酯多次洗脱，再用反相HPLC，用ODS柱，分别提取出上述两种物质。特点是除已知丹参生药中的用途为活血化瘀、治疗心血管疾病外，这两种物质分别或作为混合物都是治疗消化性溃疡的药物。文档编号C07D307/00GK1153778SQ9511397公开日1997年7月9日 申请日期1995年12月8日 优先权日1995年12月8日发明者李和泉, 王玉林, 路生满, 高明奇, 刘守兰 申请人:中国医科大学