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一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒及其应用的制作方法

  • 国知局
  • 2024-07-30 10:42:14

本发明属于生物检测,具体涉及一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒及其应用。

背景技术:

1、布鲁氏菌病(brucellosis)是一种人畜共患病,其又称地中海弛张热、马耳他热或波浪热,是由布鲁氏菌引起的人畜共患性全身传染病,其临床特点为长期发热、多汗、关节痛及肝脾肿大,该病进入慢性期可能引发多器官和系统损害。可能导致流产,不育。本病分布于全世界各地,而且在人、兽之间仍在发生流行,给我国畜牧业和人类健康带来严重危害。布鲁氏菌病的发生、发展和转归比较复杂,其临床表现多种多样,很难以某一种症状来确定诊断。对布鲁氏菌病的诊断,应结合流行病学、临床表现和实验室检查等情况综合判断。因此开展布鲁氏菌病的快速,精准诊断方法的相关研究,对于其综合防控意义重大。

2、现检测布鲁氏菌抗体的技术方法有虎红平板凝集试验(rbt)、胶体金免疫层析试验(gica)、酶联免疫吸附试验(elisa)、补体结合试验(cft)、全乳环状试验(mrt)等,其中虽然免疫层析检测方便,但不能进行定量;而elisa是目前使用最广泛的检测方法,但其缺点在于耗时较长、自动化困难。所以建立一种能准确定量、高敏感性、全自动化、快速检测布鲁氏菌抗体的方法非常必要。

3、化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,clia)技术是将化学发光体系和免疫学方法结合起来的一种诊断技术,通过将免疫信号放大转化为化学发光信号,检测发光强度从而检测相应物质的含量。第一代的clia技术是在发光板上进行反应,除底物变为化学发光体系外,其余步骤和elisa基本相同,故也存在大量检测费时费力、自动化难度高等问题。第二代clia技术使用纳米材料作为固相反应载体,使得抗原抗体反应在反应管中以更接近液相的体系进行,即管式化学发光法,其减少空间位阻的影响,使得抗原抗体反应更为充分,从而实现自动化、高敏感性检测。虽然此方法已经用人医乙肝三项、肿瘤标志物等检测,兽医上也逐渐开始使用此方法用于检测口蹄疫a、o、asia 1型抗体等,但是由于检测对象的不同,使用抗原、抗体等关键原料不同,其检测体系不能通用,检测效果差异很大。

技术实现思路

1、有鉴于此,本发明的目的在于提供一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,不仅能够定量检测患病机体中布鲁氏菌的特异性抗体,而且满足自动化、高敏感性、高重复性检测要求,可实现临床检测中使用方便操作简便的目的。

2、本发明提供了一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,包括偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液和酶标抗体溶液。

3、优选的,所述布鲁氏菌抗原包括布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原。

4、优选的,所述偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液中每毫克磁微粒偶联布鲁氏菌抗原的质量为10~80μg。

5、优选的,所述磁微粒为磁性fe3o4微粒。

6、优选的,所述磁性fe3o4微粒的粒径包括0.1~5μm。

7、优选的,还包括稀释液;所述稀释液为0.1m、ph值为7.0的mops缓冲液;

8、所述mops缓冲液为含质量百分含量0.1%~2%的bsa、体积百分含量0.01%~0.5%的tween-20、体积百分含量0.01%~0.5%的proclin300、0.01~0.5m的mgcl2、0.01~0.5m的nacl、质量百分含量0.05%~3%的水解乳蛋白和质量百分含量0.1~1%的peg的水溶液。

9、优选的,所述酶标抗体溶液中酶包括辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶;

10、所述酶标抗体溶液中抗体为布鲁氏菌单克隆抗体。

11、优选的,还包括产品校准品、质控品、浓缩洗液和发光底物。

12、优选的,所述产品校准品包括布鲁氏菌抗体含量分别为0u、1.5u、6.5u、23.5u、91.5u和290.8u的抗血清;

13、所述校准品稀释液为包含以下成分的pbs缓冲液:质量百分含量0.1%~2%的bsa、质量百分含量0.1%~1%的peg、质量百分含量0.5%~5%的prionex、质量百分含量0.1%~0.5%的明胶和体积百分含量0.01%~0.5%的proclin300;

14、所述质控品包括质控品1和质控品2;所述质控品1为0.5~6.5u的第一抗血清,质控品2为65.5~105.5u的第二抗血清;

15、所述浓缩洗液为含有以下成分的浓度0.01m、ph值7.0的pbs缓冲液或者0.05m、ph值8.0的tris缓冲液:体积百分含量0.1%~0.5%的tween-20。

16、本发明提供了所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒在非疾病诊断目的的检测布鲁氏菌抗体中的应用。

17、本发明提供了一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,包括偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液和酶标抗体溶液。本发明利用磁微粒偶联布鲁氏菌抗原,构建了一种管式化学发光免疫分析检测试剂盒,使得布鲁氏菌抗体和磁微粒偶联的布鲁氏菌抗原发生特异性反应,利用配套自动化化学发光免疫分析仪和绘制的校准曲线,可实现高敏感性、高特异性的精准定量、全自动化检测。在本发明实施例中,采用所述试剂盒通过全自动化学发光免疫分析仪定量检测布鲁氏菌特异性抗体含量,检测田间样本646份,阳性符合率为96.04%,样本总符合率为97.83%;所述试剂盒检测背景清楚的阳性样本20份,阴性样本10份,符合率均为100%;使用所述试剂盒进行检测6种相关病原抗体阳性样本,检测抗体含量很低,均为阴性,本试剂盒特异性高。本试剂盒与目前使用的检测方法、试剂盒相比,能实现自动化、高敏感性、高重复性检测,检测步骤减少、使用方便、操作简单,可用于临床检测布鲁氏菌抗体。

18、本发明进一步限定了布鲁氏菌抗原的种类包括布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原。本发明分别以商品化的布鲁氏菌bp26蛋白(2mg/ml)和布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原(16mg/ml)为布鲁氏菌抗原进行筛选,结果表明,浓度16mg/ml的布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原比2mg/ml布鲁氏菌bp26蛋白在检测阳性血清发光值/阴性血清发光值(p/n值)方面具有明显优势,因此,确定采用布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原为最佳偶联抗原。

19、进一步的,所述试剂盒还包括产品校准品、质控品、浓缩洗液和发光底物。本发明通过配制校准品稀释液等,使得试剂盒在试用期内各个组分保持稳定,加之应用自动化仪器检测,检测结果重复性好。

技术特征:

1.一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,包括偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液和酶标抗体溶液。

2.根据权利要求1所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述布鲁氏菌抗原包括布鲁氏菌疫苗株s2灭活的lps抗原。

3.根据权利要求2所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液中每毫克磁微粒偶联布鲁氏菌抗原的质量为10~80μg。

4.根据权利要求3所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述磁微粒为磁性fe3o4微粒。

5.根据权利要求4所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述磁性fe3o4微粒的粒径包括0.1~5μm。

6.根据权利要求1所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,还包括稀释液;

7.根据权利要求1所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,所述酶标抗体溶液中酶包括辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶;

8.根据权利要求1~7中任意一项所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒,其特征在于,还包括产品校准品、质控品、浓缩洗液和发光底物。

9.根据权利要求8所述试剂盒,其特征在于,所述产品校准品包括布鲁氏菌抗体含量分别为0u、1.5u、6.5u、23.5u、91.5u和290.8u的抗血清;

10.权利要求1~9中任意一项所述布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒在非疾病诊断目的的检测布鲁氏菌抗体中的应用。

技术总结本发明提供了一种布鲁氏菌抗体管式化学发光检测试剂盒及其应用,本发明属于生物检测技术领域。本发明所述试剂盒包括偶联有布鲁氏菌抗原的磁微粒混悬液、酶标抗体溶液、产品校准品、质控品、浓缩洗液和发光底物。本发明提供的所述试剂盒不仅能准确定量检测牛羊血清中布鲁氏菌的特异性抗体,并且具有自动化、高敏感性、高重复性检测特点,具有较高的市场竞争力。技术研发人员:林密,包艳芳,李涛善,蒋韬,许福玲,潘晓乐,左宜理,许辉,李昕,杨光受保护的技术使用者:兰州兽研生物科技有限公司技术研发日:技术公布日:2024/7/23

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