一种水产品待测样品前处理方法、水产品中残留地西泮的检测方法

本发明属于化学检测，具体涉及一种水产品待测样品前处理方法、水产品中残留地西泮的检测方法。

背景技术：

1、地西泮又名安定，化学式为c16h13cln2o，是一种苯二氮卓类药物，对治疗患有焦虑、失眠、惊厥和癫痫的人群和动物有一定的功效。依据《兽药管理条例》有关规定水产养殖过程中使用该药物属于违规用药。根据第235号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》和《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》(gb 31650―2019)中的规定，地西泮不得在动物性食品中检出。然而近年来，水产品中地西泮的检出时有发生，为了提高水产品的存活率和防止水产品身体损伤，一些不法商家在运输过程中非法使用地西泮，降低水产品的新陈代谢应对运输过程中密度高、氧气少的情况，从而导致地西泮在水产品体内残留。地西泮有蓄积毒性，对人体肝脏、脑及运动神经等器官具毒副作用，人长期食用含有地西泮残留的鱼肉不亚于口服地西泮。

2、目前通常是按照gb 29697-2013《食品安全国家标准动物性食品中地西泮和安眠酮多残留的测定气相色谱-质谱法》对水产品汇总地西泮的残留进行检测，这种方法存在前处理复杂，气相色谱-质谱法针对地西泮的检测不够灵敏，回收率低的问题。为保证食品质量安全，需要更快速、灵敏的对水产品中地西泮的残留进行检测。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了一种水产品待测样品前处理方法、水产品中残留地西泮的检测方法，本发明提供的前处理方法简单且能够高效地将水产品中残留的地西泮提取出来，利于提高定量检测的准确性。

2、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种水产品待测样品前处理方法，包括以下步骤：

3、将待测样品分散于碱性的乙酸乙酯中进行萃取，将萃取后体系依次进行第一涡旋、第一超声和第一固液分离，得到第一液相；

4、利用quechers净化管对所述液相进行提纯后一次进行第二涡旋、第二超声和第二固液分离，得到第二液相；所述quechers净化管中的填料为十八烷基键合硅胶吸附剂、n-丙基乙二胺和mgso4的混合物；

5、将所述第二液相干燥后，得到待测物。

6、优选的，所述碱性的乙酸乙酯为氢氧化钠溶液和乙酸乙酯的混合液，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.8～1.2mol/l；

7、所述混合液中氢氧化钠溶液和乙酸乙酯的体积比为0.18～0.22:10。

8、优选的，所述第一涡旋的转速为2300～2700r/min，所述第一涡旋的时间为4～6min。

9、优选的，所述第一超声用超声波的功率为23～27khz，所述第一超声的时间为10～22min。

10、优选的，所述第一固液分离为离心，所述离心的转速为9000～11000r/min，时间为4～6min。

11、优选的，所述第二涡旋的转速为2300～2700r/min，所述第一涡旋的时间为1～3min；

12、所述第二超声用超声波的功率为23～27khz khz，所述第二超声的时间为10～22min；

13、所述第二固液分离为离心，所述离心的转速为7000～9000r/min，时间为4～6min。

14、优选的，所述干燥为氮气吹干，所述氮气的温度为30～40℃。

15、本发明还提供了一种水产品中残留地西泮的检测方法，包括以下步骤：

16、将待测样品和内标物混合后按照上述技术方案所述的前处理方法进行前处理，得到待测物；

17、将所述待测物溶解于溶剂后进行液相色谱-串联质谱检测，得到待测样品中残留地西泮的含量。

18、优选的，所述溶剂为乙腈水溶液；

19、所述乙腈水溶液的体积浓度为8～12％，所述待测物的质量和乙腈水溶液的体积比为0.1～0.3g：1ml。

20、优选的，所述溶解后还包括：将溶解后溶液离心，将离心得到的上清液进行过滤，得到待测液；

21、所述过滤用滤膜为孔径为0.2～0.24μm的ptfe有机相滤膜。

22、本发明提供了一种水产品待测样品前处理方法，包括以下步骤：将待测样品分散于碱性的乙酸乙酯中进行萃取，将萃取后体系依次进行第一涡旋、第一超声和第一固液分离，得到第一液相；利用quechers净化管对所述液相进行提纯后一次进行第二涡旋、第二超声和第二固液分离，得到第二液相；所述quechers净化管中的填料为十八烷基键合硅胶吸附剂、n-丙基乙二胺和mgso4的混合物；将所述第二液相干燥后，得到待测物。本发明在碱性环境中以乙酸乙酯为萃取剂进行萃取能够提高地西泮的提取效率，在涡旋和超声的共同作用下进一步提高地西泮的提取效率。本发明使用quechers净化管进行提纯能够有效降低成本且净化效果较好，其中硫酸镁既可以除去基质中的水分，又有盐析作用可以除去部分蛋白质，也不会因为大量放热导致目标物损失；十八烷基键合硅胶吸附剂(c18)能够吸附脂肪等非极性干扰物；n-丙基乙二胺(psa)能够通过氢键与化合物发生作用，有效去除糖类、色素、脂肪酸和有机酸等杂质。本发明提供的前处理方法步骤简单易操作，经过本发明提供的前处理方法进行处理能够高效的将水产品中残留的地西泮提取出来并进行纯化利于提高后续定量检测的准确性和灵敏度。

技术特征：

1.一种水产品待测样品前处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述碱性的乙酸乙酯为氢氧化钠溶液和乙酸乙酯的混合液，所述氢氧化钠溶液的摩尔浓度为0.8～1.2mol/l；

3.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述第一涡旋的转速为2300～2700r/min，所述第一涡旋的时间为4～6min。

4.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述第一超声用超声波的功率为23～27khz，所述第一超声的时间为10～22min。

5.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述第一固液分离为离心，所述离心的转速为9000～11000r/min，时间为4～6min。

6.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述第二涡旋的转速为2300～2700r/min，所述第一涡旋的时间为1～3min；

7.根据权利要求1所述水产品待测样品前处理方法，其特征在于，所述干燥为氮气吹干，所述氮气的温度为30～40℃。

8.一种水产品中残留地西泮的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

9.根据权利要求8所述检测方法，其特征在于，所述溶剂为乙腈水溶液；

10.根据权利要求8或9所述检测方法，其特征在于，所述溶解后还包括：将溶解后溶液离心，将离心得到的上清液进行过滤，得到待测液；

技术总结本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种水产品待测样品前处理方法、水产品中残留地西泮的检测方法。本发明将待测样品经氢氧化钠碱化的乙酸乙酯萃取，经过涡旋、超声、离心、用QuEChERS净化管净化，经UPLC‑MS/MS测定，采用内标法定量。本发明提供的前处理方法使地西泮的净化效果更好，回收率高，由于消减基质效应能够做到更低的检测限更好的稳定性，地西泮的检测限可达0.05μg/kg，且使用QuEChERS净化管可有效降低成本，可快速有效的检测出鱼肉中地西泮的含量，对水生生物的污染情况进行准确判断，便于提前建立风险预警。技术研发人员：李东生,徐磊,郝贵杰,沈亚芳,周冬仁,张海琪,赵美蓉受保护的技术使用者：浙江工业大学技术研发日：技术公布日：2024/7/25