肺表面活性蛋白的免疫测定方法和免疫测定试剂与流程

背景技术：

1、肺表面活性物质是由肺的ii型肺上皮细胞产生/分泌的液态的物质。肺表面活性物质具有通过减弱肺胞表面的表面张力而使肺胞容易膨胀，帮助呼吸、气体交换的功能。

2、肺表面活性蛋白(下文中，有时简称为sp)是对肺表面活性物质有特异性的载脂蛋白质。作为sp，已知有为亲水性蛋白质，表现生物体防御作用，与特异性的脂质结合的sp-a、sp-d、以及疏水性较强的、与磷脂缔合的sp-b、sp-c。已知其中sp-d对肺有特异性，血清中的sp-d反应肺部疾病的存在。作为通过血清中的sp-d的测定而能够诊断的肺部疾病，可举出例如突发性间质性肺炎、胶原病性间质性肺炎、肺胞蛋白沉积症等(非专利文献1)。

3、现在，作为sp-d的免疫测定试剂，已知有根据酶免疫测定法(elisa法)的sp-d试剂盒“yamasa”eia ii(非专利文献2)、根据化学发光酶免疫测定法(cleia法)的cl sp-d“yamasa”nx(非专利文献3)。然而，根据elisa法的所述测定试剂中，为了使抗体与样品中的sp-d反应而需要4个半小时的时间，不仅如此还需要将抗体和sp-d的免疫复合体与未反应的部分进行分离的b/f分离工序，操作较复杂。此外，在使用非专利文献2的试剂盒的情况下，需要稀释生物体样品后用于测定，操作较复杂。需要说明的是，非专利文献2的试剂盒中能够测定的样本种类仅为血清。

4、非专利文献3的试剂中，作为测定仪器，需要专用的仪器，能够测定的样本种类也仅为血清。

5、现有技术文献

6、非专利文献

7、非专利文献1：临床化学32：216-226，2003

8、非专利文献2：sp-d试剂盒“yamasa”eia ii包装说明书

9、非专利文献3：cl sp-d“yamasa”nx包装说明书

技术实现思路

1、发明所解决的技术问题

2、本发明提供可以对生物体来源样品中的sp-d更简便地、更短时间内进行测定的免疫测定试剂和免疫测定方法。

3、解决问题的技术手段

4、本发明人为了解决所述问题而进行了深入研究，发现了通过包含在液相中，使血清、血浆等生物体来源样品与担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子接触的工序的、免疫测定方法，可以简便且短时间内，对生物体来源样品中的sp-d进行测定。此外，通过对试剂组成进行研究而发现了不论生物体来源样品的种类、保存过程都可以准确地进行测定，从而完成了本发明。

5、即，本发明具有以下的构成。

6、<1>

7、一种生物体来源样品中的肺表面活性蛋白d(sp-d)的免疫测定方法，其包含：

8、在液相中，使所述样品与担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子接触的工序。

9、<2>

10、根据<1>所述的测定方法，其中，

11、生物体来源样品为血清或血浆。

12、<3>

13、根据<1>或<2>所述的测定方法，其中，

14、乳胶粒子为平均粒径90nm～450nm的乳胶粒子。

15、<4>

16、根据<1>～<3>中任一项所述的测定方法，其中，

17、液相中的乳胶粒子的浓度为0.01～0.10％。

18、<5>

19、根据<1>～<4>中任一项所述的测定方法，其中，

20、使所述样品与担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子接触的工序包含以下的工序：

21、(1)在液相中，使所述样品与包含缓冲液的第1试剂接触的工序；

22、(2)在工序(1)之后，将包含担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子的第2试剂添加到液相中的工序。

23、<6>

24、根据<1>～<5>中任一项所述的测定方法，其进一步包含：

25、对样品中的sp-d和担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子的复合体的凝聚程度进行光学性测定的工序。

26、<7>

27、根据<6>所述的测定方法，其中，

28、进行光学性测定的工序是对散射光强度、吸光度或透射光强度通过光学仪器进行测定的工序。

29、<8>

30、根据<1>～<7>中任一项所述的测定方法，其中，

31、液相中的ph为5.0～9.0。

32、<9>

33、根据<1>～<8>中任一项所述的测定方法，其中，

34、在液相中包含二价金属。

35、<10>

36、根据<9>所述的测定方法，其中，

37、二价金属为镁或钙。

38、<11>

39、一种试剂，其用于对生物体来源样品中的sp-d通过免疫测定法进行测定，其中，

40、所述试剂至少包含缓冲液和担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子。

41、<12>

42、根据<11>所述的测定试剂，其中，

43、生物体来源样品为血清或血浆。

44、<13>

45、根据<11>或<12>所述的测定试剂，其中，

46、乳胶粒子为平均粒径90nm～450nm的乳胶粒子。

47、<14>

48、根据<11>～<13>中任一项所述的测定试剂，其中，

49、液相中的乳胶粒子的浓度为0.01～0.10％。

50、<15>

51、根据<11>～<14>中任一项所述的测定试剂，其中，

52、缓冲液的ph为5.0～9.0。

53、<16>

54、根据<11>～<15>中任一项所述的测定试剂，其中，

55、在缓冲液中包含二价金属。

56、<17>

57、根据<16>所述的测定试剂，其中，

58、二价金属为镁或钙。

59、<18>

60、一种生物体来源样品中的sp-d的免疫测定方法中的测定值的变动抑制方法，其包含：

61、在包含二价金属的液相中，使所述样品与担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子接触的工序。

62、<19>

63、根据<18>所述的测定值的变动抑制方法，其中，

64、生物体来源样品为血浆。

65、<20>

66、根据<18>或<19>所述的测定值的变动抑制方法，其中，

67、乳胶粒子为平均粒径90nm～450nm的乳胶粒子。

68、<21>

69、根据<18>～<20>中任一项所述的测定值的变动抑制方法，其中，

70、液相中的乳胶粒子的浓度为0.01～0.10％。

71、<22>

72、根据<18>～<21>中任一项所述的测定值的变动抑制方法，其中，

73、二价金属为镁或钙。

74、<23>

75、一种试剂盒，其用于对生物体来源样品中的sp-d通过免疫测定法进行测定，其中，

76、所述试剂盒包含：

77、(1)第1试剂，其包含缓冲液；

78、(2)第2试剂，其包含担载有抗sp-d单克隆抗体的乳胶粒子。

79、发明的效果

80、根据本发明，能够提供更简便地、更短时间内得到测定结果的生物体来源样品中的sp-d的免疫测定方法和测定试剂。