含三唑基的并环类衍生物抑制剂、其制备方法和应用与流程

1.本发明属于药物合成领域，具体涉及一种含三唑基的并环类衍生物抑制剂及其制备方法和应用。


背景技术：

2.神经激肽(neurokinin，nk)包含p物质(substance p，sp)、神经激肽a和神经激肽b，其对应的三类受体分别为神经激肽1受体(nk1r)、神经激肽2受体(nk2r)和神经激肽3受体(nk3r)。这三类受体均为g蛋白偶联受体，其中nk1r分布最为广泛，在中枢和周围神经系统均有分布，nk2r主要分布在周围神经系统，nk3r主要分布在中枢神经系统。目前nk受体抑制剂已被应用于治疗更年期潮热、抑郁症、精神分裂等疾病，特别是nk3r与更年期综合症潮热等症状密切相关，nk3r抑制剂已被证明具有很好的改善更年期潮热的作用。
3.更年期潮热(menopausal hot flashes)是指更年期的人时常出现的潮热、出汗等症状，是更年期综合症的突出表现特征。更年期潮热是由于体内雌激素水平下降引起血管舒缩功能障碍所致。当体内雌激素下降时，会造成大脑误认为是体温过高，因此，大脑会向心脏发出信号要求心脏泵压更多的血液，汗腺释放更多的汗水，同时伴有出汗、心悸、眩晕等。超过四分之三的女性在更年期有潮热现象，80％的患者此症状可持续1年以上，有些还能维持到绝经后5年左右。目前针对更年期潮热的治疗主要是激素替代疗法，但这种疗法容易引起乳腺癌，脑卒中，冠心病，痴呆等疾病，危险系数较大。口服药物，如帕罗西汀(属于ssris类药物，治疗抑郁症)是唯一获批的用于治疗更年期潮热的小分子药物，也同样存在副作用问题，且只在美国获批，因此临床上需要开发更安全有效的更年期综合症治疗药物。
4.国际申请wo2014154895报道了nk受体抑制剂化合物，但其中的化合物在nk1r/nk2r/nk3r的体外结合实验中ki大部分都在20nm以上，在细胞功能实验中，对nk3r抑制作用ic50大部分在30nm以上。cn103906750报道nk1r/nk2r/nk3r的体外结合实验中ki大部分都在20nm以上，在细胞功能实验中，对nk3r抑制作用ic
50
大部分在20nm以上。cn105229008b报道nk3r的体外结合实验中ki大部分都在30nm以上。cn102906093b报道nk1r/nk2r/nk3r的体外结合实验中ki大部分都在500nm以上。
5.因此迫切需要开发具有高活性的nk受体抑制剂，用于改善更年期潮热症状，以满足巨大的市场需求。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于提供一种通式(i)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受盐，其中通式(i)所示的化合物结构如下：
[0007][0008]
其中：
[0009]
环a选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
[0010]
环c选自环烷基、杂环基、芳基或杂芳基；
[0011]
r1选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、
‑
(ch2)
n
‑
、
‑
(ch2)
n
r
aa
、
‑
(ch2)
n
or
aa
、
‑
(ch2)
n
sr
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)r
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
aa
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
aa
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
c(o)nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
c(o)r
bb
或
‑
(ch2)
n
nr
aa
s(o)
m
r
bb
，所述的烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、烯基、炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、
‑
(ch2)
n
‑
、
‑
(ch2)
n
r
cc
、
‑
(ch2)
n
or
cc
、
‑
(ch2)
n
sr
cc
、
‑
(ch2)
n
c(o)r
cc
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
cc
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
cc
、
‑
(ch2)
n
nr
cc
r
dd
、
‑
(ch2)
n
c(o)nr
cc
r
dd
、
‑
(ch2)
n
nr
cc
c(o)r
dd
或
‑
(ch2)
n
nr
cc
s(o)
m
r
dd
中的一个或多个取代基所取代；
[0012]
r2选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、
‑
(ch2)
n
‑
、
‑
(ch2)
n
r
aa
、
‑
(ch2)
n
or
aa
、
‑
(ch2)
n
sr
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)r
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
aa
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
aa
、
‑
(ch2)
n
p(o)r
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
c(o)nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
c(o)r
bb
或
‑
(ch2)
n
nr
aa
s(o)
m
r
bb
；
[0013]
或者，任意两个相邻或不相邻的r2链接形成一个环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、硝基、羟基、氰基、氧代基、烯基、炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0014]
r3选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、氧代基、硝基、羟基、氰基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、
‑
(ch2)
n
‑
、
‑
(ch2)
n
r
aa
、
‑
(ch2)
n
or
aa
、
‑
(ch2)
n
sr
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)r
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
aa
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
aa
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
c(o)nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
c(o)r
bb
或
‑
(ch2)
n
nr
aa
s(o)
m
r
bb
，所述的烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、氧代基、硝基、羟基、氰基、烯基、炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0015]
或者，任意两个相邻或不相邻的r3链接形成一个环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氨基、氧代基、硝基、羟基、氰基、烯基、炔基、取代或未取代的
环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0016]
r
aa
、r
bb
、r
cc
和r
dd
各自独立地选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基或杂芳基，所述的烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，任选进一步被选自氢、氘、烷基、氘代烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、卤素、氰基、硝基、羟基、氨基、烯基、炔基、取代或未取代的环烷基、取代或未取代的杂环基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0017]
x为0、1、2、3、4、5或6；
[0018]
y为0、1、2、3、4、5或6；
[0019]
z为0、1、2、3、4或5；
[0020]
m为0、1或2；且
[0021]
n为0、1或2。
[0022]
在本发明进一步优选的实施方式中，环a选自c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基；优选c6‑
10
芳基；更优选苯基。
[0023]
在本发明进一步优选的实施方式中，环c选自c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基；优选含1
‑
3个选自n、o或s原子的5
‑
6元杂芳基；更优选噻二唑基或吡啶基。
[0024]
在本发明进一步优选的实施方式中，r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0025]
在本发明进一步优选的实施方式中，r1选自c1‑6烷基或c3‑6环烷基。
[0026]
在本发明进一步优选的实施方式中，r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基、5
‑
14元杂芳基、
‑
(ch2)
n
‑
、
‑
(ch2)
n
r
aa
、
‑
(ch2)
n
or
aa
、
‑
(ch2)
n
sr
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)r
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
aa
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
aa
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
c(o)nr
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
c(o)r
bb
或
‑
(ch2)
n
nr
aa
s(o)
m
r
bb
；
[0027]
在本发明进一步优选的实施方式中，r2选自含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基、
‑
(ch2)
n
r
aa
、
‑
(ch2)
n
or
aa
、
‑
(ch2)
n
sr
aa
、
‑
(ch2)
n
c(o)or
aa
、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
r
aa
、
‑
(ch2)
n
p(o)r
aa
r
bb
、
‑
(ch2)
n
nr
aa
r
bb
或
‑
(ch2)
n
c(o)nr
aa
r
bb
。
[0028]
在本发明进一步优选的实施方式中，r2选自
‑
(ch2)
n
ocn、
‑
(ch2)
n
och2f、
‑
(ch2)
n
och3、
‑
(ch2)
n
sch2f、
‑
(ch2)
n
sch3、
‑
(ch2)
n
s(o)
m
ch3、(ch2)
n
nh2、
‑
(ch2)
n
nhch3、
‑
(ch2)
n
n(ch3)2、
‑
(ch2)
n
c(o)nh2、
‑
(ch2)
n
c(o)nhch3、
‑
(ch2)
n
c(o)n(ch3)2、
‑
(ch2)
n
c(o)oet、
‑
(ch2)
n
p
(o)(ch3)2、、任选地进一步被氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基中的一个或多个取代基所取代
[0029]
在本发明进一步优选的实施方式中，r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代。
[0030]
在本发明进一步优选的实施方式中，r3选自c1‑6烷基、卤素、c6‑
10
芳基、含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂芳基或
‑
(ch2)
n
sr
aa
；所述的c1‑6烷基和c6‑
10
芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代。
[0031]
在本发明进一步优选的实施方式中，r
aa
、r
bb
、r
cc
和r
dd
各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代。
[0032]
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物结构如式(ii)所示：
[0033][0034]
其中：
[0035]
r1选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、
c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0036]
优选c1‑6烷基或c3‑6环烷基；
[0037]
r2选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基、5
‑
14元杂芳基、
‑
(ch2)
n1
r
a1
、
‑
(ch2)
n1
or
a1
、
‑
(ch2)
n1
c(o)r
a1
、
‑
(ch2)
n1
c(o)or
a1
、
‑
(ch2)
n1
oc(o)r
a1
、
‑
(ch2)
n1
s(o)
m1
r
a1
、
‑
(ch2)
n1
p(o)r
a1
r
a2
、
‑
(ch2)
n1
nr
a1
r
a2
、
‑
(ch2)
n1
nr
a1
c(o)r
a2
、
‑
(ch2)
n1
nr
a1
c(o)or
a2
、
‑
(ch2)
n1
c(o)nr
a1
r
a2
或
‑
(ch2)
n1
nr
a1
s(o)
m1
r
a2
；
[0038]
优选含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基、
‑
(ch2)
n1
r
a1
、
‑
(ch2)
n1
or
a1
、
‑
(ch2)
n1
sr
a1
、
‑
(ch2)
n1
c(o)or
a1
、
‑
(ch2)
n1
s(o)
m1
r
a1
、
‑
(ch2)
n1
p(o)r
a1
r
a2
、
‑
(ch2)
n1
nr
a1
r
a2
或
‑
(ch2)
n1
c(o)nr
a1
r
a2
；
[0039]
r
a1
和r
a2
各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0040]
m1为0、1或2；且
[0041]
n1为0、1、2、3或4。
[0042]
在本发明进一步优选的实施方式中，所述化合物结构如式(iii)所示：
[0043][0044]
其中：
[0045]
r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基、5
‑
14元杂芳基、
‑
(ch2)
n2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
or
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)r
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)or
a3
、
‑
(ch2)
n2
oc(o)r
a3
、
‑
(ch2)
n2
s(o)
m2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
p(o)r
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
c(o)r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
c(o)or
a4
、
‑
(ch2)
n2
c(o)nr
a3
r
a4
或
‑
(ch2)
n2
nr
a3
s(o)
m2
r
a4
；
[0046]
优选含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基、
‑
(ch2)
n2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
or
a3
、
‑
(ch2)
n2
sr
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)or
a3
、
‑
(ch2)
n2
s(o)
m2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
p(o)r
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
r
a4
或
‑
(ch2)
n2
c(o)nr
a3
r
a4
；所述含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0047]
r
a3
和r
a4
各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0048]
t为0、1或2；
[0049]
m2为0、1或2；且
[0050]
n2为0、1、2、3或4。
[0051]
本发明进一步包含一种制备所述的各通式化合物、及其立体异构体或其药学上可接受的盐的中间体，如下通式(iv)所示：
[0052][0053]
其中：
[0054]
r1选自c1‑6烷基或c3‑6环烷基；优选环烷基；
[0055]
r3选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基、5
‑
14元杂芳基、
‑
(ch2)
n2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
or
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)r
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)or
a3
、
‑
(ch2)
n2
oc(o)r
a3
、
‑
(ch2)
n2
s(o)
m2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
p(o)r
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
c(o)r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
c(o)or
a4
、
‑
(ch2)
n2
c(o)nr
a3
r
a4
或
‑
(ch2)
n2
nr
a3
s(o)
m2
r
a4
；
[0056]
优选含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基、
‑
(ch2)
n2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
or
a3
、
‑
(ch2)
n2
sr
a3
、
‑
(ch2)
n2
c(o)or
a3
、
‑
(ch2)
n2
s(o)
m2
r
a3
、
‑
(ch2)
n2
p(o)r
a3
r
a4
、
‑
(ch2)
n2
nr
a3
r
a4
或
‑
(ch2)
n2
c(o)nr
a3
r
a4
；所述含1
‑
3个选自n、o或s原子的3
‑
8元杂环基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；
[0057]
r
a3
和r
a4
各自独立地选自氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基或5
‑
14元杂芳基，所述的c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基，任选的，进一步被氢、氘、卤素、氨基、羟基、氰基、c1‑6烷基、c2‑6烯基、c2‑6炔基、c1‑6氘代烷基、c1‑6卤代烷基、c1‑6烷氧基、c1‑6卤代烷氧基、c3‑8环烷基、3
‑
12元杂环基、c6‑
14
芳基和5
‑
14元杂芳基中的一个或多个取代基所取代；且
[0058]
t为0、1或2。
[0059]
本发明进一步包含一种制备通式(iii)化合物、及其立体异构体或其药学上可接受的盐的方法，该方法包含如下步骤：
[0060][0061]
通式(iv)化合物和通式(v)化合物通过缩合或偶联反应，得到通式(iii)化合物，
[0062]
其中：
[0063]
r4为羟基或者卤素；优选卤素；
[0064]
本发明还提供了一种药用组合物，其包括治疗有效剂量的所示的各通式化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
[0065]
本发明还提供了一种优选方案，还涉及所述的各通式化合物、及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物在制备nk抑制剂相关药物中的应用，尤其在制备nk3抑制剂相关药物中的应用。
[0066]
本发明还提供了一种优选方案，还涉及所述的通式(i)化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防精神病性障碍、认知障碍、帕金森病、疼痛、惊厥、肥胖症、炎性疾病、呕吐、先兆子痫、气道相关疾病、生殖障碍、性激素依赖性疾病或妇科疾病相关疾病的药物中的应用。
[0067]
本发明还提供了一种优选方案，还涉及所述的通式(i)化合物及其立体异构体或其药学上可接受的盐，或所述的药物组合物在制备用于治疗和/或预防更年期综合征相关疾病中的应用，所述的更年期综合征包含潮热、出汗、心悸、眩晕及肥胖等症状。
[0068]
本发明进一步涉及通式(i)所示的化合物、其立体异构体或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备用于治疗和/或预防精神病性障碍、认知障碍、帕金森病、疼痛、惊厥、肥胖症、炎性疾病、呕吐、先兆子痫、气道相关疾病、生殖障碍、性激素依赖性疾病或妇科疾病相关疾病的药物的方法。
[0069]
本发明还涉及治疗和/或预防精神病性障碍、认知障碍、帕金森病、疼痛、惊厥、肥胖症、炎性疾病、呕吐、先兆子痫、气道相关疾病、生殖障碍、性激素依赖性疾病或妇科疾病相关疾病的方法，其包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物或其药学上可接受的盐、酯、前药、溶剂化物、水合物或衍生物。
[0070]
在一些实施方案中，本方法涉及诸如治疗和/或预防精神病性障碍、认知障碍、帕金森病、疼痛、惊厥、肥胖症、炎性疾病、呕吐、先兆子痫、气道相关疾病、生殖障碍、性激素依赖性疾病或妇科疾病相关病症的治疗。
[0071]
本文提供的治疗方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的化合物。在一个实施方案中，本发明提供了治疗哺乳动物中包括更年期潮热相关疾病症的方法。该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物，或其药学上可接受的盐、酯、前药、溶剂化物、水合物或衍生物。
[0072]
发明的详细说明
[0073]
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
[0074]
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至8个碳原子的烷基，更优选1至6个碳原子的烷基，最更优选1至3个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1
‑
二甲基丙基、1,2
‑
二甲基丙基、2,2
‑
二甲基丙基、1
‑
乙基丙基、2
‑
甲基丁基、3
‑
甲基丁基、正己基、1
‑
乙基
‑2‑
甲基丙基、1,1,2
‑
三甲基丙基、1,1
‑
二甲基丁基、1,2
‑
二甲基丁基、2,2
‑
二甲基丁基、1,3
‑
二甲基丁基、2
‑
乙基丁基、2
‑
甲基戊基、3
‑
甲基戊基、4
‑
甲基戊基、2,3
‑
二甲基丁基、正庚基、2
‑
甲基己基、3
‑
甲基己基、4
‑
甲基己基、5
‑
甲基己基、2,3
‑
二甲基戊基、2,4
‑
二甲基戊基、2,2
‑
二甲基戊基、3,3
‑
二甲基戊基、2
‑
乙基戊基、3
‑
乙基戊基、正辛基、2,3
‑
二甲基己基、2,4
‑
二甲基己基、2,5
‑
二甲基己基、2,2
‑
二甲基己基、3,3
‑
二甲基己基、4,4
‑
二甲基己基、2
‑
乙基己基、3
‑
乙基己基、4
‑
乙基己基、2
‑
甲基
‑2‑
乙基戊基、2
‑
甲基
‑3‑
乙基戊基、正壬基、2
‑
甲基
‑2‑
乙基己基、2
‑
甲基
‑3‑
乙基己基、2,2
‑
二乙基戊基、正癸基、3,3
‑
二乙基己基、2,2
‑
二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1
‑
二甲基丙基、1,2
‑
二甲基丙基、2,2
‑
二甲基丙基、1
‑
乙基丙基、2
‑
甲基丁基、3
‑
甲基丁基、正己基、1
‑
乙基
‑2‑
甲基丙基、1,1,2
‑
三甲基丙基、1,1
‑
二甲基丁基、1,2
‑
二甲基丁基、2,2
‑
二甲基丁基、1,3
‑
二甲基丁基、2
‑
乙基丁基、2
‑
甲基戊基、3
‑
甲基戊基、4
‑
甲基戊基、2,3
‑
二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基，本发明优选甲基、乙基、异丙基、叔丁基、卤代烷基、氘代烷基、烷氧基取代的烷基和羟基取代的烷基。
[0075]
术语“亚烷基”是指烷基的一个氢进一步被取代，例如：“亚甲基”指
‑
ch2‑
、“亚乙基”指
‑
(ch2)2‑
、“亚丙基”指
‑
(ch2)3‑
、“亚丁基”指
‑
(ch2)4‑
等。术语“烯基”指由至少由两个碳原子和至少一个碳
‑
碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1
‑
丙烯基、2
‑
丙烯基、1
‑
、2
‑
或3
‑
丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
[0076]
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基，优选环丙基、环丁基、环己基、环戊基和环庚基。
[0077]
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5
元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
[0078][0079]
也包含单螺环烷基与杂环烷基共用螺原子的螺环烷基，非限制性实例包括：
[0080][0081]
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
[0082][0083]
术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：
[0084][0085]
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
[0086]
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)
m
(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括
‑
o
‑
o
‑
、
‑
o
‑
s
‑
或
‑
s
‑
s
‑
的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；更优选包含3至8个环原子；最优选包含3至8个环原子。单环杂环基的非限制性实例包括氧杂环丁烷、四氢吡喃基、氮杂环庚烷基、吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻
吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选氧杂环丁烷、四氢呋喃基、四氢吡喃基、氮杂环庚烷基、哌啶基和哌嗪基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基；其中涉及到的螺环、稠环和桥环的杂环基任选与其他基团通过单键相连接，或者通过环上的任意两个或者两个以上的原子与其他环烷基、杂环基、芳基和杂芳基进一步并环连接。
[0087]
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)
m
(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
[0088][0089]
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)
m
(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
[0090][0091]
术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或s(o)
m
(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：
[0092][0093][0094]
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
[0095][0096]
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
[0097]
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
[0098][0099]
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0100]
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选
自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，更优选为5元或6元，例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基、噁二唑等，优选为三唑基、噻吩基、咪唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更优选三唑基、吡咯基、噻吩基、噻唑基、嘧啶基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噻二唑基和噁二唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
[0101][0102]
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0103]
术语“烷氧基”指
‑
o
‑
(烷基)和
‑
o
‑
(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0104]“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0105]“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
[0106]“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。
[0107]“烯基”指链烯基，又称烯烃基，其中所述的烯基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0108]“炔基”指(ch≡c
‑
)，其中所述的炔基可以进一步被其他相关基团取代，例如：烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
[0109]“羟基”指
‑
oh基团。
[0110]“卤素”指氟、氯、溴或碘。
[0111]“氨基”指
‑
nh2。
[0112]“氰基”指
‑
cn。
[0113]“硝基”指
‑
no2。
[0114]“羧基”指
‑
c(o)oh。
[0115]“thf”指四氢呋喃。
[0116]“etoac”指乙酸乙酯。
[0117]“meoh”指甲醇。
[0118]“dmf”指n、n
‑
二甲基甲酰胺。
[0119]“dipea”指二异丙基乙胺。
[0120]“tfa”指三氟乙酸。
[0121]“mecn”指乙晴。
[0122]“dma”指n,n
‑
二甲基乙酰胺。
[0123]“et2o”指乙醚。
[0124]“dce”指1,2二氯乙烷。
[0125]“dipea”指n，n
‑
二异丙基乙胺。
[0126]“nbs”指n
‑
溴代琥珀酰亚胺。
[0127]“nis”指n
‑
碘代丁二酰亚胺。
[0128]“cbz
‑
cl”指氯甲酸苄酯。
[0129]“pd2(dba)
3”指三(二亚苄基丙酮)二钯。
[0130]“dppf”指1,1
’‑
双二苯基膦二茂铁。
[0131]“hatu”指2
‑
(7
‑
氧化苯并三氮唑)
‑
n,n,n’,n
’‑
四甲基脲六氟磷酸酯。
[0132]“khmds”指六甲基二硅基胺基钾。
[0133]“lihmds”指双三甲基硅基胺基锂。
[0134]“meli”指甲基锂。
[0135]“n
‑
buli”指正丁基锂。
[0136]“nabh(oac)
3”指三乙酰氧基硼氢化钠。
[0137]“x选自a、b、或c”、“x选自a、b和c”、“x为a、b或c”、“x为a、b和c”等不同用语均表达了相同的意义，即表示x可以是a、b、c中的任意一种或几种。
[0138]
本发明所述的氢均可被其同位素氘所取代，本发明涉及的实施例化合物中的任一氢也均可被氘取代。
[0139]“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
[0140]“取代的”指基团中的一个或多个氢，优选为最多5个，更优选为1～3个氢彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
[0141]“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
[0142]“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
具体实施方式
[0143]
以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。
[0144]
实施例
[0145]
本发明的化合物结构是通过核磁共振(nmr)或/和液质联用色谱(lc
‑
ms)来确定的。nmr化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。nmr的测定是用bruker avance
‑
400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(dmso
‑
d6)，氘代甲醇(cd3od)和氘代氯仿(cdcl3)，内标为四甲基硅烷(tms)。
[0146]
液质联用色谱lc
‑
ms的测定用agilent 1200infinity series质谱仪。hplc的测定使用安捷伦1200dad高压液相色谱仪(sunfire c18 150
×
4.6mm色谱柱)和waters 2695
‑
2996高压液相色谱仪(gimini c18 150
×
4.6mm色谱柱)。
[0147]
薄层层析硅胶板使用烟台黄海hsgf254或青岛gf254硅胶板，tlc采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
[0148]
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
[0149]
在无特殊说明的情况下，本发明的所有反应均在连续的磁力搅拌下，在干燥氮气或氩气氛下进行，溶剂为干燥溶剂，反应温度单位为摄氏度。
[0150]
实施例1
[0151]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0152][0153]
第一步：乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
羰基哌嗪
‑2‑
基)乙酸酯的制备
[0154][0155]
冰水浴冷却下，将醋酸硼氢化钠(16g，75.8mmol)加入到2,4
‑
二甲氧基苯甲醛(9g，54.2mmol)和乙基2
‑
(3
‑
羰基哌嗪
‑2‑
基)乙酸酯(10g，54.2mmol)的乙腈(150ml)溶液中，再加入醋酸(4.9g，81.2mmol)，反应液室温搅拌过夜。减压除去大部分溶剂，残余物用乙酸乙酯(200ml)溶解，饱和碳酸氢钠水溶液调节ph到7，分液，水相用乙酸乙酯(50ml*2)萃取，有机相合并，干燥，浓缩。残余物经硅胶柱分离(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得产物乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
羰基哌嗪
‑2‑
基)乙酸酯(13g，产率：72％)。
[0156]
ms m/z(esi):337.1[m h]

.
[0157]
第二步：乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
乙氧基
‑
1,2,5,6
‑
四氢吡嗪
‑2‑
基)乙酸酯的制备
[0158][0159]
在0℃，氮气保护下，将三乙氧基四氟硼酸盐(2.8g，14.8mmol，分5批，每15分钟一批)加入到乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
羰基哌嗪
‑2‑
基)乙酸酯(2g，6.0mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，反应液室温搅拌5小时后，反应液滴加到0℃的氢氧化钠水溶液(10ml，3m)中，分液，水相用二氯甲烷(50ml*2)萃取，有机相合并，用水(50ml*2)洗涤，干燥，浓缩得乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
乙氧基
‑
1,2,5,6
‑
四氢吡嗪
‑2‑
基)乙酸酯(2.18g)粗品，直接用于下一步。
[0160]
ms m/z(esi):365.2[m h]

.
[0161]
第三步：乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯的制备
[0162][0163]
将3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
甲酰肼(0.83g，4.5mmol)加入到乙基2
‑
(1
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
乙氧基
‑
1,2,5,6
‑
四氢吡嗪
‑2‑
基)乙酸酯(2.18g，6.0mmol)的无水甲醇(20ml)溶液中，反应液在75℃下，搅拌过夜。反应液浓缩，残余物经硅胶柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得到产物乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯(1.65g，产率：57％)
[0164]
ms m/z(esi):485.2[m h]

.
[0165]
第四步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙烷
‑1‑
醇的制备
[0166][0167]
在0℃，氮气保护下，将四氢铝锂(305mg，8.0mmol)分批加入到乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯(1.3g，2.7mmol)的四氢呋喃(30ml)溶液中，反应液在0℃下搅拌20分钟。将水(280mg，16mmol)缓慢加入到反应液中，继续搅拌5分钟，加入无水硫酸钠，过滤。有机相蒸干，得2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙烷
‑1‑
醇(650mg，产率：55％)粗品，直接用于下一步。
[0168]
ms m/z(esi):443.2[m h]

.
[0169]
第五步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙基甲磺酸酯的制备
[0170][0171]
在0℃，氮气保护下，将甲基磺酰氯(252mg，2.2mmol)滴加到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙烷
‑1‑
醇(650mg，1.5mmol)和三乙胺(445mg，4.4mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液中。反应液在0℃搅拌30分钟后，加入饱和食盐水淬灭，二氯甲烷(25ml*2)萃取，有机相合并，用水(50ml*2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙基甲磺酸酯(650mg)粗品，直接用于下一步。
[0172]
ms m/z(esi):521.2[m h]

.
[0173]
第六步：3
‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0174][0175]
室温氮气保护下，将甲烷亚磺酸钠(1.27g，12.5mmol)和碘化钾(2.0g，12.5mmol)加入到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙基甲磺酸酯(650mg，1.25mmol)的n,n
‑
二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。微波110℃反应1小时。反应液冷却，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml)萃取，有机相饱和食盐水(30ml*6)洗涤，有机相干燥，浓缩，残余物经硅胶柱分离(二氯甲烷:甲醇＝100：3)得到产物3
‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(400mg，产率：63％)
[0176]
ms m/z(esi):505.2[m h]

.
[0177]
第七步：3
‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0178][0179]
在室温下，将三氟乙酸(2ml)滴加到3
‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(400mg，0.8mmol)的二氯甲烷(2ml)溶液中，反应液室温搅拌1小时。水(25ml)加入到反应液中，反应液继续搅拌15分钟，然后过滤，滤液用二氯甲烷(30ml*2)萃取，有机相干燥，浓缩，得产物3
‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(150mg，产率：53％)。
[0180]
ms m/z(esi):355.1[m h]

.
[0181]
第八步：(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮的制备
[0182][0183]
在0℃，氮气保护下，将对氟苯甲酰氯(54mg，0.34mmol)滴加到3
‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(80mg，0.22mmol)和三乙胺(68mg，0.68mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液中，反应液室温搅拌30分钟，然后饱和食盐水淬灭，二氯甲烷(30ml*2)萃取，有机相干燥，浓缩，残余物经硅胶柱分离(石油醚:乙酸乙酯＝100：0到石油醚：乙酸乙酯＝0：100)得产物(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮(68mg，产率：63％)。
[0184]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.57
–
7.44(m,2h),7.24
–
7.14(m,2h),6.40
–
5.63(m,1h),4.97
–
4.72(m,1h),4.61
–
3.96(m,2h),3.84
–
3.50(m,2h),3.47
–
3.35(m,1h),3.16(s,1h),3.07
–
2.73(m,2h),2.71
–
2.48(m,2h),2.50
–
2.29(m,1h),1.28
–
0.94(m,4h).
[0185]
ms m/z(esi):477.1[m h]

.
[0186]
实施例2
[0187]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(3,4
‑
二氯苯基)甲酮
[0188][0189]
实施例2的制备方法参照实施例1第八步。
[0190]
1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.66
–
7.54(m,2h),7.38
–
7.30(m,1h),6.30
–
5.99(m,1h),4.95
–
4.76(m,1h),4.36
–
3.99(m,2h),3.86
–
3.51(m,2h),3.51
–
3.27(m,1h),2.99(s,3h),2.71
–
2.51(m,2h),2.49
–
2.32(m,1h),1.22
–
0.98(m,4h).
[0191]
ms m/z(esi):527.0[m h]

.
[0192]
实施例3
[0193]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
(噻吩
‑2‑
基)苯基)甲酮
[0194][0195]
实施例3的制备方法参照实施例1第八步。
[0196]
ms m/z(esi):540.9[m h]

.
[0197]
实施例4
[0198]
(s)
‑
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0199][0200]
第一步：甲基o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯盐酸盐的制备
[0201][0202]
将o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸(5.0g，42mmol)溶于甲醇(50ml)，冷却至0℃，滴加氯化亚砜(15g，0.13mol)，反应在室温下搅拌过夜。溶剂旋干，得到甲基o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯盐酸盐(5.6g，产率：100％)，白色固体。
[0203]
第二步：苯甲基(2
‑
羰基乙基)氨基甲酸酯的制备
[0204][0205]
将苯甲基(2
‑
羟基乙基)氨基甲酸酯(3.0g，15mmol)溶于乙酸乙酯(50ml)，加入15％溴化钠溶液(5ml，7.7mmol)，2,2,6,6
‑
四甲基哌啶氮氧化物(47mg，0.3mmol)，冷却至0℃，滴加预先用碳酸氢钠调节ph～8的次氯酸钠溶液(24g，16mmol)，反应在0℃下搅拌4小时。加入水(100ml)，用乙酸乙酯(100ml x2)萃取，有机相用饱和硫代硫酸钠(100ml)洗，饱和食盐水(100ml)洗，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到苯甲基(2
‑
羰基乙基)氨基甲酸酯(3.0g，产率：100％)，浅黄色液体。
[0206]
第三步：甲基n
‑
(2
‑
(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)
‑
o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯的制备
[0207][0208]
将甲基o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯盐酸盐(1.7g,10.1mmol)溶于二氯甲烷(100ml)，加入三乙胺(12.5g，0.12mol)，再加入苯甲基(2
‑
羰基乙基)氨基甲酸酯(3g，15.5mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液，搅拌半小时，冷却至0℃，加入三乙酰氧基硼氢化钠(6.6g，31mmol)，反应在室温下搅拌过夜。冷却至0℃，用饱和碳酸氢钠调ph～8，水相用二氯甲烷(100ml)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到甲基n
‑
(2
‑
(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)
‑
o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯(1.5g，产率：31％)，浅黄色液体。
[0209]
ms m/z(esi):311.1[m h]

.
[0210]
第四步：(r)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮的制备
[0211][0212]
将甲基n
‑
(2
‑
(((苄氧基)羰基)氨基)乙基)
‑
o
‑
甲基
‑
d
‑
丝氨酸酸酯(1.5g，4.8mmol)溶于甲醇(30ml)，加入钯碳(500mg)，置换氢气三次，反应在氢气(15psi)下室温搅拌过夜。反应液过滤，滤液浓缩，得到(r)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮(0.6g，产率：87％)，无色胶状物。
[0213]
第五步：(r)
‑4‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮的制备
[0214][0215]
将(r)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮(0.6g，4.2mmol)溶于乙腈(20ml)，加入2,4
‑
二甲氧基苯甲醛(0.76g，4.6mmol)和乙酸(0.38g，6.3mmol)，冷却至0℃，搅拌半小时。加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.3g，6.3mmol)，反应在室温下搅拌过夜。冷却至0℃，用饱和碳酸氢钠调ph～8，水相用二氯甲烷(30ml x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用prep
‑
tlc分离，得到(r)
‑4‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮(0.4g，产率：33％)，无色胶状物。
[0216]
ms m/z(esi):295.2[m h]

.
[0217]
第六步：(r)
‑1‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑5‑
乙氧基
‑6‑
(甲氧基甲基)
‑
1,2,3,6
‑
四氢吡嗪的制备
[0218][0219]
将(r)
‑4‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑3‑
(甲氧基甲基)哌嗪
‑2‑
酮(50mg，0.17mmol)溶于二氯乙烷(1ml)，加入碳酸钠(54mg，0.51mmol)，冷却至0℃，滴加三乙基氧鎓四氟硼酸盐(0.68ml，0.68mmol)，反应在室温下搅拌2小时。加入食盐水(20ml)，水相用二氯甲烷(20ml x 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得(r)
‑1‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑5‑
乙氧基
‑6‑
(甲氧基甲基)
‑
1,2,3,6
‑
四氢吡嗪(50mg，100％crude)，直接用于下一步。
[0220]
第七步：(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0221][0222]
将(r)
‑1‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑5‑
乙氧基
‑6‑
(甲氧基甲基)
‑
1,2,3,6
‑
四氢吡嗪(50mg，0.14mmol)溶于甲醇(10ml)，加入3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
甲酰肼(17mg，0.11mmol)，反应在65℃下搅拌过夜。反应液旋干，粗品用prep
‑
tlc分离，得到(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(30mg，产率：49％)，无色胶状物。
[0223]
ms m/z(esi):443.2[m h]

.
[0224]
第八步：(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0225][0226]
将(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(30mg，0.07mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入三氟乙酸(1.5ml)，反应在室温搅拌1小时。加入水(5ml)搅拌半小时，有固体析出，过滤，滤液用4m的氢氧化钠溶液调ph>14，用二氯甲烷(10mlx 3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(20mg，产率：100％)。
[0227]
ms m/z(esi):293.2[m h]

.
[0228]
第九步：(s)
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮的制备
[0229][0230]
将(s)
‑3‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(20mg，0.068mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入饱和碳酸氢钠水溶液(2ml)，再加入4
‑
氟苯甲酰氯(13mg，0.08mmol)，反应在室温下搅拌半小时。加入水(10ml)，用二氯甲烷(10ml x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用高效液相色谱纯化得到(s)
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(甲氧基甲基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮(7.1mg，产率：25％)，白色固体。
[0231]
ms m/z(esi):415.0[m h]

.
[0232]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.50(m,2h),7.19
–
7.15(m,2h),6.03
–
5.95(m,1h),4.87
–
4.84(m,1h),4.20
–
3.95(m,5h),3.33(s,3h),2.43
–
2.39(m,1h),1.14
–
1.12(m,4h).
[0233]
实施例5
[0234]2‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺
[0235][0236]
第一步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸的制备
[0237][0238]
将乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯(50mg，0.1mmol)溶于乙醇(5ml)，加入水(0.5ml)，加入氢氧化钠(21mg，0.5mmol)，反应在室温下搅拌过夜。反应液旋干，得到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸的钠盐(50mg，产率：100％crude)，黄色固体。
[0239]
ms m/z(esi):457.1[m h]

.
[0240]
第二步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺的制备
[0241][0242]
将2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸的钠盐(50mg，0.1mmol)溶于n,n
‑
二甲基甲酰胺(5ml)，加入2m二甲胺/四氢呋喃溶液(0.11ml,0.22mmol)，2
‑
(7
‑
氮杂苯并三氮唑)
‑
n,n,n',n'
‑
四甲基脲六氟磷酸酯(51mg，0.13mmol)和n,n
‑
二异丙基乙胺(71mg，0.55mmol)，反应在室温下搅拌2小时。加入水(20ml)，水相用二氯甲烷(20ml x 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用prep
‑
tlc纯化得到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺(40mg，产率：75％)，黄色固体。
[0243]
ms m/z(esi):484.1[m h]

.
[0244]
第三步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺的制备
[0245][0246]
将2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺(40mg,0.08mmol)溶于二氯甲烷(8ml)，加入三氟乙酸(2ml)，反应在室温搅拌1小时。加入水(10ml)搅拌半小时，有固体析出，过滤，滤液用4m的氢氧化钠溶液调ph>14，用二氯甲烷(20ml x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺(20mg，产率：72％)。
[0247]
ms m/z(esi):334.2[m h]

.
[0248]
第四步：2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺的制备
[0249][0250]
将2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺(20mg，0.06mmol)溶于二氯甲烷(8ml)，加入饱和碳酸氢钠水溶液(4ml)，再加入4
‑
氟苯甲酰氯(14mg，0.09mmol)，反应在室温下搅拌半小时。加入水(20ml)，用二氯甲烷(20ml x 2)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，粗品用高效液相色谱纯化得到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n,n
‑
二甲基乙酰胺(16mg，产率：59％)，白色固体。
[0251]
ms m/z(esi):456.2[m h]

.
[0252]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.52
–
7.48(m,2h),7.19
–
7.15(m,2h),6.20
–
6.16(m,1h),5.00
–
4.96(m,1h),4.43
–
4.39(m,1h),4.15
–
4.10(m,2h),3.59
–
3.50(m,2h),3.12(s,3h),2.87(s,3h),2.41
–
2.37(m,1h),1.12
–
1.11(m,4h).
[0253]
实施例6
[0254]2‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)
‑
n
‑
甲基乙酰胺
[0255][0256]
实施例6的制备方法参照实施例5第二到四步。
[0257]
ms m/z(esi):442.2[m h]

.
[0258]
实施例7
[0259]
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0260][0261]
实施例7的制备方法参照实施例1第三到八步。
[0262]
ms m/z(esi):467.4[m h]

.
[0263]
实施例8
[0264]
(s)
‑
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
((甲磺酰)甲基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0265][0266]
实施例8的制备方法参考实施例4。
[0267]
ms m/z(esi):453.1[m h]

.
[0268]
实施例9
[0269]
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(氧杂环丁
‑3‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0270][0271]
实施例9的制备方法参照实施例4。
[0272]
ms m/z(esi):443.0[m h]

.
[0273]
实施例10
[0274]
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0275][0276]
实施例10的制备方法参照实施例1第八步。
[0277]
ms m/z(esi):493.1[m h]

.
[0278]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.52
–
7.47(m,2h),7.47
–
7.38(m,2h),6.45
–
5.77(m,1h),4.96
–
4.74(m,1h),4.42
–
3.96(m,2h),3.87
–
3.52(m,2h),3.52
–
3.25(m,1h),2.99(s,3h),2.72
–
2.50(m,2h),2.48
–
2.27(m,1h),1.20
–
0.98(m,4h)。
[0279]
实施例11
[0280]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0281][0282]
第一步：3
‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0283][0284]
在0℃氮气保护下，将钠氢(22mg，0.54mmol，60％w/w)加入到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙烷
‑1‑
醇(160mg，0.36mmol)的四氢呋喃(10ml)溶液中，反应液在0℃氮气保护下搅拌10分钟，后加入碘甲烷(103mg，0.72mmol)，反应液室温搅拌过夜。饱和食盐水淬灭。乙酸乙酯(25ml*2)萃取，水洗，有机相干燥蒸干得粗品，粗品柱分离(石油醚：乙酸乙酯＝1：9)得到产物3
‑
环丙基
‑5‑
(7
‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(90mg，产率：54％)
[0285]
ms m/z(esi):457.2[m h]

.
[0286]
第二步：3
‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0287][0288]
同实施例1第七步。
[0289]
ms m/z(esi):307.1[m h]

.
[0290]
第三步：(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮的制备
[0291][0292]
同实施例1第八步。
[0293]
1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.57
–
7.43(m,2h),7.23
–
7.07(m,2h),6.59
–
6.08(m,1h),4.94
–
4.74(m,1h),4.37
–
4.10(m,2h),3.81
–
3.46(m,3h),3.28(s,3h),2.51
–
2.26(m,3h),1.20
–
1.00(m,4h).
[0294]
ms m/z(esi):429.1[m h]

.
[0295]
实施例12
[0296]
(4
‑
氯
‑3‑
氟苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0297][0298]
实施例12的制备方法参照实施例11第三步。
[0299]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.61
–
7.43(m,1h),7.36
–
7.28(m,1h),7.24
–
7.10(m,1h),6.59
–
6.08(m,1h),4.93
–
4.71(m,1h),4.51
–
3.90(m,2h),3.88
–
3.36(m,3h),3.30(s,3h),2.64
–
1.94(m,3h),1.22
–
0.79(m,4h).
[0300]
ms m/z(esi):463.1[m h]

.
[0301]
实施例13
[0302]2‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸乙酯
[0303]
[0304]
第一步：乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯的制备
[0305][0306]
同实施例1第七步。
[0307]
ms m/z(esi):335.1[m h]

.
[0308]
第二步：乙基2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酸酯的制备
[0309][0310]
同实施例1第八步。
[0311]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.53
–
7.42(m,2h),7.22
–
7.11(m,2h),6.30
–
6.09(m,1h),5.00
–
4.81(m,1h),4.46
–
4.21(m,1h),4.21
–
4.00(m,2h),4.04
–
3.83(m,1h),3.81
–
3.62(m,2h),3.41
–
3.15(m,1h),2.55
–
2.27(m,1h),1.25(t,j＝7.1hz,3h),1.19
–
0.94(m,4h).
[0312]
ms m/z(esi):457.1[m h]

.
[0313]
实施例14
[0314]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲硫基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
(甲硫基)苯基)甲酮
[0315][0316]
实施例14的制备方法参照实施例1第六到八步。
[0317]
ms m/z(esi):473.2[m h]

.
[0318]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.43
–
7.35(m,2h),7.35
–
7.29(m,2h),6.21
–
5.88(m,1h),4.93
–
4.72(m,1h),4.32
–
4.04(m,1h),3.80
–
3.44(m,2h),2.89
–
2.67(m,2h),2.53(s,3h),2.50
–
2.34(m,2h),2.13(s,3h),2.07
–
1.96(m,1h),1.20
–
0.98(m,4h).
[0319]
实施例15
[0320]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)丙腈
[0321][0322]
第一步：3
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)丙腈的制备
[0323][0324]
将氰化钠(21mg，0.43mmol)加入到2
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙基甲磺酸酯(75mg，0.14mmol)的n,n
‑
二甲基甲酰胺(1ml)溶液中。在95℃氮气保护下，加热反应2小时。反应液冷却，加入水(50ml)，二氯甲烷(10ml)萃取，有机相饱和食盐水(30ml*6)洗涤，有机相干燥蒸干，粗品3
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)丙腈(65mg)，直接用于下一步。
[0325]
ms m/z(esi):452.2[m h]

.
[0326]
第二步：3
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)丙腈的制备
[0327][0328]
同实施例1第七步。
[0329]
ms m/z(esi):302.1[m h]

.
[0330]
第三步：3
‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)丙腈的制备
[0331][0332]
同实施例1第八步。
[0333]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ8.29
–
8.16(m,2h),7.17
–
7.04(m,2h),5.23
–
5.06(m,2h),5.06
–
4.92(m,1h),4.47
–
4.27(m,1h),3.61
–
3.46(m,1h),3.46
–
3.32(m,1h),3.32
–
3.15(m,1h),3.05
–
2.88(m,1h),2.53
–
2.24(m,2h),1.24
–
1.00(m,4h).
[0334]
ms m/z(esi):424.1[m h]

.
[0335]
实施例16
[0336]
(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0337][0338]
第一步：5
‑
(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑7‑
(2,4
‑
二甲氧苄基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑3‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0339][0340]
同实施例15第一步。
[0341]
ms m/z(esi):506.2[m h]

.
[0342]
第二步：5
‑
(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑3‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑的制备
[0343][0344]
同实施例1第七步。
[0345]
ms m/z(esi):356.1[m h]

.
[0346]
第三步：(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮的制备
[0347][0348]
同实施例1第八步。
[0349]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.67
–
7.49(m,2h),7.41
–
7.28(m,1h),6.39
–
5.99(m,1h),4.99
–
4.79(m,1h),4.47
–
3.96(m,2h),3.95
–
3.45(m,1h),3.30
–
2.76(m,4h),2.73(s,3h),2.52
–
2.02(m,4h),1.90
–
1.43(m,2h).
[0350]
ms m/z(esi):528.1[m h]

.
[0351]
实施例17
[0352]2‑
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑7‑
(4
‑
氟苯甲酰基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑8‑
基)乙酰胺
[0353][0354]
实施例17的制备方法参照实施例5。
[0355]
ms m/z(esi):428.0[m h]

.
[0356]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.50(m,2h),7.17
–
7.13(m,2h),6.48
–
6.27(m,2h),5.68
–
5.64(m,1h),4.93
–
4.89(m,1h),4.18
–
4.10(m,3h),3.35
–
3.30(m,2h),2.41
–
2.37(m,1h),1.14
–
1.10(m,4h).
[0357]
实施例18
[0358]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(3,4
‑
二氯苯基)甲酮
[0359][0360]
实施例18的制备方法参照实施例11第三步。
[0361]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.69
–
7.48(m,2h),7.35
–
7.28(m,1h),6.58
–
6.07(m,1h),5.22
–
4.64(m,1h),4.50
–
3.92(m,2h),3.91
–
3.39(m,3h),3.31(s,3h),2.57
–
2.00(m,3h),1.22
–
0.89(m,4h).
[0362]
ms m/z(esi):479.1[m h]

.
[0363]
实施例19
[0364]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
甲氧基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
(噻吩
‑2‑
基)苯基)甲酮
[0365][0366]
实施例19的制备方法参照实施例11第三步。
[0367]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.76
–
7.64(m,2h),7.54
–
7.44(m,2h),7.42
–
7.32(m,2h),7.17
–
7.07(m,1h),6.55
–
6.01(m,1h),4.90
–
4.70(m,1h),4.49
–
3.90(m,2h),3.90
–
3.43(m,3h),3.31(s,3h),2.55
–
2.01(m,3h),1.21
–
0.92(m,4h).
[0368]
ms m/z(esi):493.1[m h]

.
[0369]
实施例20
[0370]
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0371][0372]
实施例20的制备方法参照实施例1第八步。
[0373]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ8.12
–
7.29(m,9h),6.33
–
6.08(m,1h),4.97
–
4.73(m,1h),4.59
–
3.98(m,2h),3.92
–
3.50(m,2h),3.54
–
3.22(m,1h),2.99(s,3h),2.75
–
2.50(m,2h),2.50
–
2.29(m,1h),1.27
–
0.93(m,4h).
[0374]
ms m/z(esi):535.1[m h]

.
[0375]
实施例21
[0376]
(3,4
‑
二氯苯基)(3
‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0377]
[0378]
实施例21的制备方法参照实施例7。
[0379]
ms m/z(esi):501.0[m h]

.
[0380]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.60
–
7.58(m,2h),7.34
–
7.33(m,1h),6.17
–
6.23(m,1h),4.95
–
4.91(m,1h),4.22
–
4.18(m,2h),3.73
–
3.63(m,2h),3.47
–
3.43(m,1h),3.00(s,3h),2.73(s,3h),2.62
–
2.60(m,2h).
[0381]
实施例22
[0382]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
’‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)甲酮
[0383][0384]
第一步：(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)甲酮的制备
[0385][0386]
将2
‑
(7
‑
氧化苯并三氮唑)
‑
n,n,n',n'
‑
四甲基脲六氟磷酸盐(24.5mg，65umol)加入到3
‑
环丙基
‑5‑
(8
‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6,7,8
‑
四氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑3‑
基)
‑
1,2,4
‑
噻二唑(15mg，43umol)，4
‑
(4
‑
氟苯基)苯甲酸(11mg，51umol)和n，n
‑
二异丙基乙胺(16mg，126umol)的n,n
‑
二甲基甲酰胺(1.5ml)溶液中，反应液室温搅拌16小时。粗产物直接prep
‑
hplc分离得到产物(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲磺酰)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4'
‑
氟
‑
[1,1'
‑
联苯]
‑4‑
基)甲酮(8mg，产率：34％)。
[0387]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.74
–
7.63(m,2h),7.63
–
7.47(m,4h),7.22
–
7.08(m,2h),6.32
–
6.06(m,1h),4.95
–
4.75(m,1h),4.56
–
4.02(m,2h),3.88
–
3.52(m,2h),3.52
–
3.28(m,1h),2.99(s,3h),2.72
–
2.51(m,2h),2.48
–
2.32(m,1h),1.24
–
0.93(m,4h).
[0388]
ms m/z(esi):553.1[m h]

.
[0389]
实施例23
[0390]
(4
‑
氟苯基)(3
‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二
氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0391][0392]
实施例23的制备方法参照实施例7。
[0393]
ms m/z(esi):451.4[m h]

.
[0394]
实施例24
[0395]
(s)
‑
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0396][0397]
实施例24的由实施例10经过手性拆分制备。
[0398]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.46(m,2h),7.46
–
7.37(m,2h),6.41
–
5.78(m,1h),4.94
–
4.69(m,1h),4.45
–
3.97(m,2h),3.86
–
3.51(m,2h),3.51
–
3.27(m,1h),2.98(s,3h),2.68
–
2.46(m,2h),2.46
–
2.28(m,1h),1.20
–
0.97(m,4h).
[0399]
ms m/z(esi):493.1[m h]

.
[0400]
实施例25
[0401]
(r)
‑
(4
‑
氯苯基)(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(甲基磺酰基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0402][0403]
实施例25的由实施例10经过手性拆分制备。
[0404]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.46(m,2h),7.46
–
7.37(m,2h),6.41
–
5.78(m,1h),4.94
–
4.69(m,1h),4.45
–
3.97(m,2h),3.86
–
3.51(m,2h),3.51
–
3.27(m,1h),2.98(s,3h),2.68
–
2.46(m,2h),2.46
–
2.28(m,1h),1.20
–
0.97(m,4h).
[0405]
ms m/z(esi):493.1[m h]

.
[0406]
实施例26
[0407]
(3
‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
(二甲基氨基)乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0408][0409]
实施例26的制备方法参照实施例16。
[0410]
ms m/z(esi):442.1[m h]

.
[0411]
实施例27
[0412]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(氟甲氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0413][0414]
实施例27的制备方法参照实施例11。
[0415]
ms m/z(esi):437.1[m h]

.
[0416]
实施例28
[0417]
(8
‑
(2
‑
(氟甲氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0418][0419]
实施例28的制备方法参照实施例11。
[0420]
ms m/z(esi):421.2[m h]

.
[0421]
实施例29
[0422]
(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(氟甲氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0423][0424]
实施例29的制备方法参照实施例11。
[0425]
ms m/z(esi):471.1[m h]

.
[0426]
实施例30
[0427]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(3
‑
氟甲氮杂环丁烷
‑
1基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0428][0429]
实施例30的制备方法参照实施例16。
[0430]
ms m/z(esi):462.1[m h]

.
[0431]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.52
–
7.37(m,4h),6.27
–
6.03(m,1h),5.34
–
4.98(m,2h),4.93
–
4.84(m,1h),4.27
–
3.95(m,3h),3.78
–
3.43(m,3h),3.23
–
2.97(m,2h),2.72(s,3h),2.34
–
2.15(m,2h).实施例31
[0432]
(3,4
‑
二氯苯基)(3
‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑8‑
(2
‑
吗啉基乙基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0433][0434]
实施例31的制备方法参照实施例16。
[0435]
ms m/z(esi):508.1[m h]

.
[0436]
实施例32
[0437]
(8
‑
(2
‑
(2
‑
氧杂
‑6‑
氮杂螺[3.3]庚烷
‑6‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(3,4
‑
二氯苯基)甲酮
[0438][0439]
实施例32的制备方法参照实施例16。
[0440]
ms m/z(esi):520.0[m h]

.
[0441]
实施例33
[0442]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(2
‑
氟乙氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0443][0444]
实施例33的制备方法参照实施例11。
[0445]
ms m/z(esi):451.0[m h]

.
[0446]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.48
–
7.42(m,4h),6.35
–
6.30(m,1h),4.93
–
4.89(m,1h),4.50
–
4.23(m,4h),3.83
–
3.61(m,5h),2.73(s,3h),2.46
–
2.42(m,2h).
[0447]
实施例34
[0448]
(8
‑
(2
‑
(2
‑
氟乙氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0449][0450]
实施例34的制备方法参照实施例11。
[0451]
ms m/z(esi):435.1[m h]

.
[0452]
实施例35
[0453]
(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(2
‑
氟乙氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
环丙基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0454][0455]
实施例35的制备方法参照实施例11。
[0456]
ms m/z(esi):485.1[m h]

.
[0457]
实施例36
[0458]
(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(二甲基膦酰基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0459][0460]
实施例36的制备方法参照实施例1第六到八步。
[0461]
ms m/z(esi):499.0[m h]

.
[0462]
实施例37
[0463]
(3,4
‑
二氯苯基)(8
‑
(2
‑
(二甲基膦酰基)乙基)
‑3‑
(6
‑
甲基吡啶
‑2‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0464][0465]
实施例37的制备方法参照实施例1第三到八步。
[0466]
ms m/z(esi):492.2[m h]

.
[0467]
实施例38
[0468]
(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0469][0470]
实施例38的制备方法参照实施例16。
[0471]
ms m/z(esi):478.1[m h]

.
[0472]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.58
–
7.39(m,2h),7.22
–
7.11(m,2h),6.30
–
5.90(m,1h),5.07
–
4.76(m,1h),4.50
–
4.01(m,2h),3.91
–
3.41(m,1h),3.26
–
2.77(m,6h),2.73(s,3h),2.46
–
2.06(m,4h).
[0473]
实施例39
[0474]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0475][0476]
实施例39的制备方法参照实施例16。
[0477]
ms m/z(esi):494.1[m h]

.
[0478]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.53
–
7.43(m,2h),7.43
–
7.37(m,2h),6.40
–
6.03(m,1h),5.03
–
4.74(m,1h),4.42
–
3.94(m,2h),3.85
–
3.41(m,1h),3.15
–
2.50(m,9h),2.46
–
2.01(m,4h).
[0479]
实施例40
[0480]
(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟氮杂环丁烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0481][0482]
实施例40的制备方法参照实施例16。
[0483]
ms m/z(esi):464.1[m h]

.
[0484]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.44(m,2h),7.23
–
7.13(m,2h),6.33
–
5.97(m,1h),4.97
–
4.77(m,1h),4.41
–
3.98(m,2h),3.97
–
3.24(m,5h),3.23
–
2.79(m,2h),2.72(s,3h),2.39
–
2.09(m,2h).
[0485]
实施例41
[0486]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(3,3
‑
二氟氮杂环丁烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0487][0488]
实施例41的制备方法参照实施例16。
[0489]
ms m/z(esi):480.1[m h]

.
[0490]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.51
–
7.45(m,2h),7.45
–
7.37(m,2h),6.33
–
5.97(m,1h),4.97
–
4.77(m,1h),4.41
–
3.98(m,2h),3.97
–
3.24(m,5h),3.23
–
2.79(m,2h),2.72(s,3h),2.39
–
2.09(m,2h).
[0491]
实施例42
[0492]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
(2,2
‑
二氟乙氧基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0493][0494]
实施例42的制备方法参照实施例11。
[0495]
ms m/z(esi):469.2[m h]

.
[0496]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.49
–
7.42(m,4h),6.38
–
6.32(m,1h),5.92
‑
5.65(m,1h),4.94
–
4.90(m,1h),4.26
–
4.22(m,2h),3.95
–
3.65(m,5h),2.73(s,3h),2.43
–
2.39(m,2h).
[0497]
实施例43
[0498]
(4
‑
氟苯基)(8
‑
(2
‑
(3
‑
氟氮杂环丁烷1
‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0499][0500]
实施例43的制备方法参照实施例16。
[0501]
ms m/z(esi):446.2[m h]

.
[0502]1h nmr(400 mhz,chloroform
‑
d)δ7.54
–
7.45(m,2h),7.22
–
7.14(m,2h),6.22
–
5.97(m,1h),5.31
–
4.99(m,2h),4.93
–
4.86(m,1h),4.27
–
4.15(m,1h),3.94
–
3.62(m,3h),3.47
–
3.27(m,2h),3.09
–
2.88(m,2h),2.72(s,3h),2.31
–
2.15(m,2h).
[0503]
实施例44
[0504]
(4
‑
氟苯基)(8
‑
(2
‑
((r)
‑3‑
氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0505][0506]
实施例44的制备方法参照实施例16。
[0507]
ms m/z(esi):460.2[m h]

.
[0508]1h nmr(400 mhz,chloroform
‑
d)δ7.51
–
7.49(m,2h),7.19
–
7.15(m,2h),6.23
–
6.18(m,1h),5.22
–
5.09(m,1h),4.90
–
4.87(m,1h),4.23
–
4.18(m,1h),3.80
–
3.76(m,1h),2.96
–
2.70(m,8h),2.38
–
2.34(m,2h),2.22
–
1.85(m,4h).
[0509]
实施例45
[0510]
(4
‑
氯苯基)(8
‑
(2
‑
((r)
‑3‑
氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0511][0512]
实施例45的制备方法参照实施例16。
[0513]
ms m/z(esi):476.2[m h]

.
[0514]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.48
–
7.43(m,4h),7.26
–
7.22(m,1h),5.23
–
5.08(m,1h),4.90
–
4.87(m,1h),4.18
–
4.15(m,1h),3.80
–
3.75(m,1h),2.95
–
2.70(m,7h),2.43
–
2.02(m,5h),1.90
–
1.72(m,2h).
[0515]
实施例46
[0516]
(4
‑
氟苯基)(8
‑
(2
‑
((s)
‑3‑
氟吡咯烷
‑1‑
基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)甲酮
[0517][0518]
实施例46的制备方法参照实施例16。
[0519]
ms m/z(esi):460.2[m h]

.
[0520]
实施例47
[0521]
(8
‑
(2
‑
((2,2
‑
二氟乙基)(甲基)氨基)乙基)
‑3‑
(3
‑
甲基
‑
1,2,4
‑
噻二唑
‑5‑
基)
‑
5,6
‑
二氢
‑
[1,2,4]三唑并[4,3
‑
a]吡嗪
‑
7(8h)
‑
基)(4
‑
氟苯基)甲酮
[0522][0523]
实施例47的制备方法参照实施例16。
[0524]
ms m/z(esi):466.0[m h]

.
[0525]1h nmr(400mhz,chloroform
‑
d)δ7.53
–
7.44(m,2h),7.22
–
7.13(m,2h),6.12
–
5.71(m,2h),4.94
–
4.84(m,1h),4.45
–
4.10(m,2h),3.75
–
3.55(m,1h),3.02
–
2.77(m,4h),2.72(s,3h),2.51
–
2.20(m,5h).
[0526]
生物学测试评价
[0527]
以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。
[0528]
一、细胞功能实验
[0529]
测试例1、本发明化合物在稳定表达nk3受体细胞中对钙离子流动能力影响的测定实验目的：该测试例的目的是测量化合物对nk3受体的抑制作用。
[0530]
实验仪器：
[0531]
384孔
‑
试验板(corning；3712)
[0532]
移液管(axygen)
[0533]
flipr(molecular devices)
[0534]
实验试剂：
[0535]
dmem(invitrogen；11965)
[0536]
胎牛血清(biowest；s1810
‑
500)
[0537]
透析血清(s
‑
fbs
‑
au
‑
065；serana)
[0538]
青霉素及链霉素(biowest；l0022
‑
100)
[0539]
潮霉素b(cabiochem，400052)
[0540]
matrigel(bd；354230)
[0541]
dmso(sigma；d2650)
[0542]
hbss(invitrogen；14065)
[0543]
hepes(invitrogen；15630080)
[0544]
probenecid(sigma；p8761)
[0545]
bsa(renview；fa016)
[0546]
胰蛋白酶(hdb；0458)
[0547]
实验方法：
[0548]
1.缓冲液制备：1x hbss，20mm hepes，2.5mm probenecid(probenecid为400mm stock in 1m naoh)，0.1％bsa；实验当天新鲜加入probenecid和bsa；实验缓冲液包括染料缓冲液和化合物稀释缓冲液等。
[0549]
2.细胞用胰蛋白酶消化后，以1
×
104个细胞/well的密度播种到384孔
‑
试验板孵育16
‑
24小时(至少过夜)。
[0550]
3.丢弃培养液，并加入20μl染料；37℃避光孵育60min，读取钙信号。
[0551]
4.实验前制备拮抗剂；将5ul/well浓度5x拮抗剂化合物加入384孔
‑
试验板中，室温下避光孵育15min；将试验板转移至flipr，加入5ul/well 6x浓度的激动剂化合物；使用flipr读取数值并保存数据；总化验体积为30ul，包括20ul/well染料缓冲液、5ul/well 5x浓度的实验化合物和5ul/well 6x浓度的激动剂化合物。
[0552]
实验数据处理方法：
[0553]
通过flipr读取钙信号值，实验中每个采样时间点的计算后的输出结果是340/510nm与380/510nm波长信号的比值，最大值减去最小值的计算来源自比值信号曲线；使用graphpad prism拟合百分比抑制率和十点浓度数据至参数非线性逻辑公式计算出化合物的ic
50
值。
[0554]
实验结果：
[0555]
表1：化合物在稳定表达nk3受体细胞对钙离子流动能力的ic
50
值
[0556][0557]
实验结论：
[0558]
从表中数据可以看出，本发明实施例化合物在稳定表达nk3细胞功能钙流实验中显示出良好的抑制活性。
[0559]
测试例2、本发明化合物在稳定表达nk1/nk2受体细胞中对钙离子流动能力影响的
测定实验目的：该测试例的目的是测量化合物对nk1/nk2受体的抑制作用。
[0560]
实验仪器：
[0561]
384孔
‑
试验板(corning；3712)
[0562]
移液管(axygen)
[0563]
flipr(molecular devices)
[0564]
实验试剂：
[0565]
dmem(invitrogen；11965)
[0566]
胎牛血清(biowest；s1810
‑
500)
[0567]
透析血清(s
‑
fbs
‑
au
‑
065；serana)
[0568]
青霉素及链霉素(biowest；l0022
‑
100)
[0569]
潮霉素b(cabiochem，400052)
[0570]
matrigel(bd；354230)
[0571]
dmso(sigma；d2650)
[0572]
hbss(invitrogen；14065)
[0573]
hepes(invitrogen；15630080)
[0574]
probenecid(sigma；p8761)
[0575]
bsa(renview；fa016)
[0576]
胰蛋白酶(hdb；0458)
[0577]
实验方法：
[0578]
1.缓冲液制备：1x hbss，20mm hepes，2.5mm probenecid(probenecid为400mm stock in 1m naoh)，0.1％bsa。实验当天新鲜加入probenecid和bsa。实验缓冲液包括染料缓冲液和化合物稀释缓冲液等。
[0579]
2.细胞用胰蛋白酶消化后，以1
×
104个细胞/well的密度播种到384孔
‑
试验板孵育16
‑
24小时(至少过夜)。
[0580]
3.丢弃培养液，并加入20μl染料。37℃避光孵育60min，读取钙信号。
[0581]
4.实验前制备拮抗剂。拮抗剂模式：将5ul/well浓度5x拮抗剂化合物加入384孔
‑
试验板中，室温下避光孵育15min。将试验板转移至flipr，加入5ul/well 6x浓度的激动剂化合物。使用flipr读取数值并保存数据。总化验体积为30ul，包括20ul/well染料缓冲液、5ul/well 5x浓度的试验化合物和5ul/well6x浓度的激动剂化合物。
[0582]
实验数据处理方法：
[0583]
通过flipr读取钙信号值。实验中每个采样时间点的计算后的输出结果是340/510nm与380/510nm波长信号的比值。最大值减去最小值的计算来源自比值信号曲线。使用graphpad prism拟合百分比抑制率和十点浓度数据至参数非线性逻辑公式计算出化合物的ic
50
值。
[0584]
实验结论：
[0585]
通过以上方案得出本发明所示的化合物在细胞功能钙流试验中显示出约0.1nm至10μm(ic
50
)的生物活性。
[0586]
在一些实施方案中，本发明的化合物对于nk1受体抑制活性的ic
50
小于约10μm、优选化合物小于约1μm、进一步优选小于约100nm、更优选小于约10nm、本发明所列示的化合物
中最优选小于1nm或甚至小于约0.1nm。