cDNA、mRNA、蛋白及评价胶质瘤预后性的试剂盒和系统的制作方法

cdna、mrna、蛋白及评价胶质瘤预后性的试剂盒和系统
技术领域
1.本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种与胶质瘤预后性相关的cdna、一种由该cdna转录得到的mrna、一种由该mrna编码得到的蛋白、一种用于评价胶质瘤预后性的试剂盒以及一种用于评价胶质瘤预后性的系统。


背景技术：

2.胶质瘤是源自神经上皮的肿瘤的统称，占颅脑肿瘤的40％-50％，是最常见的原发性颅内肿瘤。胶质瘤难以根治，手术后往往会复发，而且预后性不佳。世界卫生组织分级系统根据胶质瘤的组织学特征将胶质瘤分为
ⅰ-ⅳ
级，不同级别胶质瘤的预后性各不相同。
3.准确评价胶质瘤患者的预后性具有重要的临床、科研及社会价值。在临床工作中，准确的预后性评估可指导医生针对高风险患者制定个性化的检查及治疗方案，帮助医生制定合理的复查及随访计划，进而提高医疗服务的质量。在科研中，准确评估患者预后性的风险层级，可以为研发针对高风险病人的有效治疗方案提供重要依据，并且可以成为检验新型治疗效果的重要参考。从社会角度来说，准确评估患者预后性，可为病患及家属提供科学的生存预期，指引病人依从治疗计划，避免过度医疗，减轻家庭经济压力，有助于改善医患关系。
4.目前，主要依据胶质瘤的病理级别进行胶质瘤的预后性评价，但是同一病理级别的不同胶质瘤患者的预后性也会存在较大差异，仅依据胶质瘤病理级别进行胶质瘤的预后性评价仍然不够准确。


技术实现要素：

5.本公开的目的是提供一种与胶质瘤预后性相关的cdna、一种由该cdna转录得到的mrna、一种由该mrna编码得到的蛋白、一种用于评价胶质瘤预后性的试剂盒以及一种用于评价胶质瘤预后性的系统，能够进一步提高胶质瘤预后性评价的准确性。
6.第一方面，本公开提供一种cdna，该cdna的序列中含有seq id no:1的片段，或者，该cdna的序列中含有seq id no:1的片段的互补片段；其中，所述seq id no:1的片段至少含有seq id no:1的第2635-2652位、第2623-2640位或者第2627-2645位的序列；
7.优选地，所述seq id no:1的片段至少含有seq id no:1的第2588-2687位的序列。
8.可选地，所述cdna与人met基因相对应，且所述cdna的序列中不含有人met基因的19号外显子。
9.可选地，所述cdna为单链dna，且所述cdna的序列为seq id no:1所示的序列，或者所述cdna的序列为seq id no:1所示的序列的互补序列。
10.可选地，所述cdna为双链dna，且所述cdna的其中一条单链的序列为seq id no:1所示的序列，另一条单链的序列为seq id no:1所示的序列的互补序列。
11.第二方面，本公开提供一种mrna，该mrna是第一方面中任意一项所述的cdna的逆转录模板。
12.可选地，所述mrna的序列中含有seq id no:2的片段，所述seq id no:2的片段至少含有seq id no:2的第3820-3837位、第3832-3849位或者第3827-3845位的序列；
13.优选地，所述seq id no:2的片段至少含有seq id no:2的第3785-3884位的序列。
14.可选地，所述mrna的序列为seq id no:2所示的序列。
15.第三方面，本公开提供一种蛋白，该蛋白由第二方面中任意一项所述的mrna编码。
16.可选地，所述蛋白的氨基酸序列中含有seq id no:3的片段，所述seq id no:3的片段至少含有seq id no:3的第1207-1220位的序列；
17.优选地，所述seq id no:3的片段至少含有seq id no:3的第1175-1220位的序列。
18.可选地，所述蛋白的氨基酸序列为seq id no:3所示的序列。
19.第四方面，本公开提供一种评价胶质瘤预后性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第一方面中任意一项所述的cdna的第一引物对，和/或，能够与第一方面中任意一项所述的cdna特异性杂交的第一探针；和/或，
20.该试剂盒包括能够特异性地扩增第二方面中任意一项所述的mrna的第二引物对，和/或，能够与第二方面中任意一项所述的mrna特异性杂交的第二探针；和/或，
21.该试剂盒包括抗第三方面中任意一项所述的蛋白的抗体以及第三方面中任意一项所述的蛋白。
22.可选地，所述第一引物对含有如seq id no:4所示的第一引物和如seq id no:5所示的第二引物，所述第一探针的序列中含有如seq id no:6所示的序列；
23.所述第二引物对含有如seq id no:7所示的第三引物和如seq id no:8所示的第四引物，所述第二探针的序列中含有如seq id no:9所示的序列。
24.第五方面，本公开提供一种分子试剂在制备评价胶质瘤预后性的试剂盒中的用途，所述分子试剂包括如下(1)-(8)中的至少一种：
25.(1)第一方面中任意一项所述的cdna；
26.(2)能够特异性地扩增第一方面中任意一项所述的cdna的第一引物对；
27.(3)能够与第一方面中任意一项所述的cdna特异性杂交的第一探针；
28.(4)第二方面中任意一项所述的mrna；
29.(5)能够特异性地扩增第二方面中任意一项所述的mrna的第二引物对；
30.(6)能够与第二方面中任意一项所述的mrna特异性杂交的第二探针；
31.(7)第三方面中任意一项所述的蛋白；
32.(8)抗第三方面中任意一项所述的蛋白的抗体。
33.第六方面，本公开提供一种评价胶质瘤预后性的系统，该系统包括扩增装置、测序装置、计算装置和输出装置；
34.所述扩增装置含有采集单元和扩增单元，所述采集单元用于采集模板核酸片段和扩增引物，所述扩增单元用于利用所述扩增引物对所述模板核酸片段进行扩增，得到扩增产物；
35.所述测序装置用于对所述扩增产物进行核酸序列测序，得到扩增产物序列；
36.所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下判别：
37.若所述扩增产物序列中含有如第一方面中任意一项所述的cdna的序列和/或如第
二方面中任意一项所述的mrna的序列，则判定所述模板核酸片段对应的胶质瘤预后性较差；
38.所述输出装置用于输出所述计算装置的判定结果。
39.第七方面，本公开提供一种评价胶质瘤预后性的方法，该方法包括检测待测胶质瘤样本中是否含有如上所述的cdna和/或mrna和/或蛋白的步骤，如果待测胶质瘤样本中含有如上所述的cdna和/或mrna和/或蛋白，则指示该待测胶质瘤样本对应的胶质瘤患者的预后性更差。
40.通过上述技术方案，本公开有效地提高了胶质瘤预后性评价的准确性。
41.本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
42.附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
43.图1是本公开实施例提供的cdna琼脂糖凝胶核酸电泳图；
44.图2是本公开实施例提供的cdnasanger测序结果图；
45.图3是本公开实施例提供的全级别胶质瘤样本患者生存曲线图；
46.图4是本公开实施例提供的idh突变的全级别胶质瘤样本患者生存曲线图；
47.图5是本公开实施例提供的继发胶质母细胞瘤样本患者生存曲线图；
48.图6是本公开实施例提供的idh突变的继发胶质母细胞瘤样本患者生存曲线图。
具体实施方式
49.以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
50.本公开的第一方面提供一种cdna，该cdna的序列中含有seq id no:1的片段，或者，该cdna的序列中含有seq id no:1的片段的互补片段；其中，所述seq id no:1的片段至少含有seq id no:1的第2635-2652位、第2623-2640位或者第2627-2645位的序列；优选地，所述seq id no:1的片段至少含有seq id no:1的第2588-2687位的序列。
51.优选地，所述cdna与人met基因相对应，且所述cdna的序列中不含有人met基因的19号外显子。
52.根据本公开，所述cdna可以为单链dna，且所述cdna的序列可以为seq id no:1所示的序列，或者所述cdna的序列可以为seq id no:1所示的序列的互补序列。
53.根据本公开，所述cdna可以为双链dna，且所述cdna的其中一条单链的序列可以为seq id no:1所示的序列，另一条单链的序列可以为seq id no:1所示的序列的互补序列。
54.上述cdna是19号外显子缺失的人met基因对应的cdna，本公开的发明人发现，当胶质瘤细胞的mrna可逆转录出上述cdna时，胶质瘤的恶性程度更高，抗药性更强，患者的预后性更差。其中，所述seq id no:1的片段中含有上述19号外显子的缺失位点，seq id no:1所示的序列中含有人met基因的除19号外显子外的所有外显子，seq id no:1所示的序列如下所示：
55.tacaagatgttgcatcactttactttaattgcatgatttatcagaacaactattaacatacgaagtac
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56.其中，seq id no:1的第2635-2652位的序列为ccaatacagtttcttgca；seq id no:1的第2623-2640位的序列为cacgccaaaggaccaata；seq id no:1的第2627-2645位的序列为ccaaaggaccaatacagtt。
57.本公开的第二方面提供一种mrna，该mrna是第一方面中任意一项所述的cdna的逆转录模板。
58.优选地，所述mrna的序列中含有seq id no:2的片段，所述seq id no:2的片段至少含有seq id no:2的第3820-3837位、第3832-3849位或者第3827-3845位的序列；优选地，所述seq id no:2的片段至少含有seq id no:2的第3785-3884位的序列。
59.优选地，所述mrna的序列为seq id no:2所示的序列。
60.其中，seq id no:2所示的序列为与seq id no:1所示的序列互补的rna序列，seq id no:2所示的序列如下所示：
61.gcaggugacccggaggcccucgccgcccgcggcgccccgagcgcuuugugagcagaugcggagccgaguggagggcgcgagccagaugcggggcgacagcugacuugcugagaggaggcggggaggcgcggagcgcgcgugugguccuugcgccgcugacuucuccacugguuccugggcaccgaaagauaaaccucucauaaugaaggcccccgcugugcuugcaccuggcauccucgugcuccuguuuaccuuggugcagaggagcaauggggaguguaaagaggcacuagcaaaguccgagaugaaugugaauaugaaguaucagcuucccaacuucaccgcggaaacacccauccagaaugucauucuacaugagcaucacauuuuccuuggugccacuaacuacauuuauguuuuaaaugaggaagaccuucagaagguugcugaguacaagacugggccugugcuggaacacccagauuguuucccaugucaggacugcagcagcaaagccaauuuaucaggagguguuuggaaagauaacaucaacauggcucuaguugucgacaccuacuaugaugaucaacucauuagcuguggcagcgucaacagagggaccugccagcgacaugucuuuccccacaaucauacugcugacauacagucggagguucacugcauauucuccccacagauagaagagcccagccaguguccugacuguguggugagcgcccugggagccaaaguccuuucaucuguaaaggaccgguucaucaacuucuuuguaggcaauaccauaaauucuucuuauuucccagaucauccauugcauucgauaucagugagaaggcuaaaggaaacgaaagaugguuuuauguuuuugacggaccaguccuacauugauguuuuaccugaguucagagauucuuaccccauuaaguauguccaugccuuugaaagcaacaauuuuauuuacuucuugacgguccaaagggaaacucuagaugcucagacuuuucacacaagaauaaucagguucuguuccauaaacucuggauugcauuccuacauggaaaugccucuggaguguauucucacagaaaagagaaaaaagagauccacaaagaaggaaguguuuaauauacuucaggcugcguaugucagcaagccuggggcccagcuugcuagacaaauaggagccagccugaaugaugacauucuuuucgggguguucgcacaaagcaagccagauucugccgaaccaauggaucgaucugccaugugugcauucccuaucaaauaugucaacgacuucuucaacaagaucgucaacaaaaacaaugugagaugucuccagcauuuuuacggacccaaucaugagcacugcuuuaauaggacacuucugagaaauucaucaggcugugaagcgcgccgugaugaauaucgaacagaguuuaccacagcuuugcagcgcguugacuuauucaugggucaauucagcgaaguccucuuaacaucuauauccaccuucauuaaaggagaccucaccauagcuaaucuugggacaucagagggucgcuuc
augcagguugugguuucucgaucaggaccaucaaccccucaugugaauuuucuccuggacucccauccagugucuccagaagugauuguggagcauacauuaaaccaaaauggcuacacacugguuaucacugggaagaagaucacgaagaucccauugaauggcuugggcugcagacauuuccaguccugcagucaaugccucucugccccacccuuuguucaguguggcuggugccacgacaaaugugugcgaucggaggaaugccugagcgggacauggacucaacagaucugucugccugcaaucuacaagguuuucccaaauagugcaccccuugaaggagggacaaggcugaccauauguggcugggacuuuggauuucggaggaauaauaaauuugauuuaaagaaaacuagaguucuccuuggaaaugagagcugcaccuugacuuuaagugagagcacgaugaauacauugaaaugcacaguugguccugccaugaauaagcauuucaauauguccauaauuauuucaaauggccacgggacaacacaauacaguacauucuccuauguggauccuguaauaacaaguauuucgccgaaauacgguccuauggcugguggcacuuuacuuacuuuaacuggaaauuaccuaaacagugggaauucuagacacauuucaauugguggaaaaacauguacuuuaaaaagugugucaaacaguauucuugaauguuauaccccagcccaaaccauuucaacugaguuugcuguuaaauugaaaauugacuuagccaaccgagagacaagcaucuucaguuaccgugaagaucccauugucuaugaaauucauccaaccaaaucuuuuauuaguggugggagcacaauaacagguguugggaaaaaccugaauucaguuagugucccgagaauggucauaaaugugcaugaagcaggaaggaacuuuacaguggcaugucaacaucgcucuaauucagagauaaucuguuguaccacuccuucccugcaacagcugaaucugcaacucccccugaaaaccaaagccuuuuucauguuagaugggauccuuuccaaauacuuugaucucauuuauguacauaauccuguguuuaagccuuuugaaaagccagugaugaucucaaugggcaaugaaaauguacuggaaauuaagggaaaugauauugacccugaagcaguuaaaggugaaguguuaaaaguuggaaauaagagcugugagaauauacacuuacauucugaagccguuuuaugcacgguccccaaugaccugcugaaauugaacagcgagcuaaauauagaguggaagcaagcaauuucuucaaccguccuuggaaaaguaauaguucaaccagaucagaauuucacaggauugauugcugguguugucucaauaucaacagcacuguuauuacuacuuggguuuuuccuguggcugaaaaagagaaagcaaauuaaagaucugggcagugaauuaguucgcuacgaugcaagaguacacacuccucauuuggauaggcuuguaagugcccgaaguguaagcccaacuacagaaaugguuucaaaugaaucuguagacuaccgagcuacuuuuccagaagaucaguuuccuaauucaucucagaacgguucaugccgacaagugcaguauccucugacagacaugucccccauccuaacuaguggggacucugauauauccaguccauuacugcaaaauacuguccacauugaccucagugcucuaaauccagagcugguccaggcagugcagcauguagugauugggcccaguagccugauugugcauuucaaugaagucauaggaagagggcauuuugguuguguauaucaugggacuuuguuggacaaugauggcaagaaaauucacugugcugugaaauccuugaacagaaucacugacauaggagaaguuucccaauuucugaccgagggaaucaucaugaaagauuuuagucaucccaauguccucucgcuccugggaaucugccugcgaagugaagggucuccgcuggugguccuaccauacaugaaacauggagaucuucgaaauuucauucgaaaugagacucauaauccaacuguaaaagaucuuauuggcuuuggucuucaaguagccaaaggcaugaaauaucuugcaagcaaaaaguuuguccacagagacuuggcugcaagaaacuguauugguccuuuggcgugcuccucugggagcugaugacaagaggagccccaccuuauccugacguaaacaccuuugauauaacuguuuacuuguugcaagggagaagacuccuacaacccgaauacugcccagaccccuuauaugaaguaaugcuaaaaugcuggcacccuaaagccgaaaugcgcccauccuuuucugaacuggugucccggauaucagcgaucuucucuacuuucauuggggagcacuauguccaugugaacgcuacuuaugugaacguaaaaugugucgcuccguauccuucucuguugucaucagaagauaacgcugaugaugagguggacacacgaccagccuccuucugggagacaucauagugcuaguacuaugucaaagcaacaguccacacuuuguccaaugguuuuuucacugccugaccuuuaaaaggccaucgauauucuuugcucuugccaaaauugcacuauuauaggacuuguauuguuauuuaaauuacuggauucuaaggaauuucuuaucugacagagcaucagaaccagaggcuuggucccacaggccacggaccaauggccugcagccgugacaacacuccugucauauuggaguccaaaacuugaauucuggguugaauuuuuuaaaaaucagguaccacuugauuucauaugggaaauugaagcaggaaauauugagggcuucuugauc
acagaaaacucagaagagauaguaaugcucaggacaggagcggcagccccagaacaggccacucauuuagaauucuaguguuucaaaacacuuuuguguguuguauggucaauaacauuuuucauuacugauggugucauucacccauuagguaaacauucccuuuuaaauguuuguuuguuuuuugagacaggaucucacucuguugccagggcuguagugcaguggugugaucauagcucacugcaaccuccaccucccaggcucaagccucccgaauagcugggacuacaggcgcacaccaccauccccggcuaauuuuuguauuuuuuguagagacgggguuuugccauguugccaaggcugguuucaaacuccuggacucaagaaauccacccaccucagccucccaaagugcuaggauuacaggcaugagccacugcgcccagcccuuauaaauuuuuguauagacauuccuuugguuggaagaauauuuauaggcaauacagucaaaguuucaaaauagcaucacacaaaacauguuuauaaaugaacaggauguaauguacauagaugacauuaagaaaauuuguaugaaauaauuuagucaucaugaaauauuuaguugucauauaaaaacccacuguuugagaaugaugcuacucugaucuaaugaaugugaacauguagauguuuuguguguauuuuuuuaaaugaaaacucaaaauaagacaaguaauuuguugauaaauauuuuuaaagauaacucagcauguuuguaaagcaggauacauuuuacuaaaagguucauugguuccaaucacagcucauagguagagcaaagaaaggguggauggauugaaaagauuagccucugucucgguggcagguucccaccucgcaagcaauuggaaacaaaacuuuuggggaguuuuauuuugcauuaggguguguuuuauguuaagcaaaacauacuuuagaaacaaaugaaaaaggcaauugaaaaucccagcuauuucaccuagauggaauagccacccugagcagaacuuugugaugcuucauucuguggaauuuugugcuugcuacuguauagugcaugugguguagguuacucuaacugguuuugucgacguaaacauuuaaaguguuauauuuuuuauaaaaauguuuauuuuuaaugauaugagaaaaauuuuguuaggccacaaaaacacugcacugugaacauuuuagaaaagguaugucagacugggauuaaugacagcaugauuuucaaugacuguaaauugcgauaaggaaauguacugauugccaauacaccccacccucauuacaucaucaggacuugaagccaaggguuaacccagcaagcuacaaagagggugugucacacugaaacucaauaguugaguuuggcuguuguugcaggaaaaugauuauaacuaaaagcucucugauagugcagagacuuaccagaagacacaaggaauuguacugaagagcuauuacaauccaaauauugccguuucauaaauguaauaaguaauacuaauucacagaguauuguaaaugguggaugacaaaagaaaaucugcucuguggaaagaaagaacugucucuaccagggucaagagcaugaacgcaucaauagaaagaacucggggaaacaucccaucaacaggacuacacacuuguauauacauucuugagaacacugcaaugugaaaaucacguuugcuauuuauaaacuuguccuuagauuaaugugucuggacagauugugggaguaagugauucuucuaagaauuagauacuugucacugccuauaccugcagcugaacugaaugguacuucguauguuaauaguuguucugauaaaucaugcaauuaaaguaaagugaugcaacaucuugua。
62.其中，seq id no:2的第3820-3837位的序列为ugcaagaaacuguauugg；seq id no:2的第3832-3849位的序列为uauugguccuuuggcgug；seq id no:2的第3827-3845位的序列为aacuguauugguccuuugg。
63.本公开的第三方面提供一种蛋白，该蛋白由第二方面中任意一项所述的mrna编码。
64.优选地，所述蛋白的氨基酸序列中含有seq id no:3的片段，所述seq id no:3的片段至少含有seq id no:3的第1207-1220位的序列；
65.优选地，所述seq id no:3的片段至少含有seq id no:3的第1175-1220位的序列。
66.优选地，所述蛋白的氨基酸序列为seq id no:3所示的序列。
67.其中，seq id no:3所示的序列为由seq id no:2所示的rna序列编码的氨基酸序列，seq id no:3所示的氨基酸序列如下所示：
68.mkapavlapgilvllftlvqrsngeckealaksemnvnmkyqlpnftaetpiqnvilhehhiflgatnyiyvlneedlqkvaeyktgpvlehpdcfpcqdcsskanlsggvwkdninmalvvdtyyddqliscgsvnrgtcqrh
vfphnhtadiqsevhcifspqieepsqcpdcvvsalgakvlssvkdrfinffvgntinssyfpdhplhsisvrrlketkdgfmfltdqsyidvlpefrdsypikyvhafesnnfiyfltvqretldaqtfhtriirfcsinsglhsymempleciltekrkkrstkkevfnilqaayvskpgaqlarqigaslnddilfgvfaqskpdsaepmdrsamcafpikyvndffnkivnknnvrclqhfygpnhehcfnrtllrnssgcearrdeyrtefttalqrvdlfmgqfsevlltsistfikgdltianlgtsegrfmqvvvsrsgpstphvnflldshpvspevivehtlnqngytlvitgkkitkiplnglgcrhfqscsqclsappfvqcgwchdkcvrseeclsgtwtqqiclpaiykvfpnsapleggtrlticgwdfgfrrnnkfdlkktrvllgnesctltlsestmntlkctvgpamnkhfnmsiiisnghgttqystfsyvdpvitsispkygpmaggtlltltgnylnsgnsrhisiggktctlksvsnsilecytpaqtistefavklkidlanretsifsyredpivyeihptksfisggstitgvgknlnsvsvprmvinvheagrnftvacqhrsnseiiccttpslqqlnlqlplktkaffmldgilskyfdliyvhnpvfkpfekpvmismgnenvleikgndidpeavkgevlkvgnkscenihlhseavlctvpndllklnselniewkqaisstvlgkvivqpdqnftgliagvvsistalllllgfflwlkkrkqikdlgselvrydarvhtphldrlvsarsvspttemvsnesvdyratfpedqfpnssqngscrqvqypltdmspiltsgdsdisspllqntvhidlsalnpelvqavqhvvigpsslivhfnevigrghfgcvyhgtlldndgkkihcavkslnritdigevsqfltegiimkdfshpnvlsllgiclrsegsplvvlpymkhgdlrnfirnethnptvkdligfglqvakgmkylaskkfvhrdlaarncigplacssgs。
69.其中，seq id no:3的第1207-1220位的序列为arncigplacssgs。
70.seq id no:3的第1175-1220位的序列为nptvkdligfglqvakgmkylaskkfvhrdlaarncigplacssgs。
71.本公开的第四方面提供一种评价胶质瘤预后性的试剂盒，该试剂盒包括能够特异性地扩增第一方面中任意一项所述的cdna的第一引物对，和/或，能够与第一方面中任意一项所述的cdna特异性杂交的第一探针；和/或，该试剂盒包括能够特异性地扩增第二方面中任意一项所述的mrna的第二引物对，和/或，能够与第二方面中任意一项所述的mrna特异性杂交的第二探针；和/或，该试剂盒包括抗第三方面中任意一项所述的蛋白的抗体以及第三方面中任意一项所述的蛋白。
72.其中，所述第一引物对只要能特异性地扩增如第一方面任意一项所述的cdna即可，优选地，所述第一引物对含有如seq id no:4所示的第一引物和seq id no:5所示的第二引物。第一探针只要能与如第一方面任意一项所述的cdna特异性杂交即可，优选地，所述第一探针的序列中含有如seq id no:6所示的序列。所述第二引物对只要能特异性地扩增如第二方面中任意一项所述的mrna即可，优选地，所述第二引物对含有seq id no:7所示的第三引物和如seq id no:8所示的第四引物。第二探针只要能与如第二方面中任意一项所述的mrna特异性杂交即可，优选地，所述第二探针的序列中含有如seq id no:9所示的序列。
73.其中，seq id no:4所示的序列为：aatttctgaccgagggaatcat；seq id no:5所示的序列为：acgccaaaggaccaatacagtttc；seq id no:6所示的序列为：gccaaaggaccaatacagtttctt；seq id no:7所示的序列为：taatacgactcactataggggagcacgccaaaggaccaataca；seq id no:8所示的序列为：tgaaatatcttgcaagcaaaaagtt；seq id no:9所示的序列为：agcacgccaaaggaccaatacagt。
74.其中，抗第三方面任意一项所述的蛋白的抗体可以为单克隆抗体和/或多克隆抗体。
75.本公开的第五方面提供一种分子试剂在制备评价胶质瘤预后性的试剂盒中的用途，所述分子试剂包括如下(1)-(8)中的至少一种：
76.(1)第一方面中任意一项所述的cdna；(2)能够特异性地扩增第一方面中任意一项所述的cdna的第一引物对；(3)能够与第一方面中任意一项所述的cdna特异性杂交的第一探针；(4)第二方面中任意一项所述的mrna；(5)能够特异性地扩增第二方面中任意一项所述的mrna的第二引物对；(6)能够与第二方面中任意一项所述的mrna特异性杂交的第二探针；(7)第三方面中任意一项所述的蛋白；(8)抗第三方面中任意一项所述的蛋白的抗体。
77.本公开的第六方面提供一种评价胶质瘤预后性的系统，该系统包括扩增装置、测序装置、计算装置和输出装置；所述扩增装置含有采集单元和扩增单元，所述采集单元用于采集模板核酸片段和扩增引物，所述扩增单元用于利用所述扩增引物对所述模板核酸片段进行扩增，得到扩增产物；所述测序装置用于对所述扩增产物进行核酸序列测序，得到扩增产物序列；所述计算装置包括存储器和处理器，所述存储器中存储有计算机程序，所述处理器被配置为执行所述存储器中存储的计算机程序，以实现如下判别：若所述扩增产物序列中含有如第一方面中任意一项所述的cdna的序列和/或如第二方面中任意一项所述的mrna的序列，则判定所述模板核酸片段对应的胶质瘤预后性较差；所述输出装置用于输出所述计算装置的判定结果。
78.本公开的第七方面提供一种评价胶质瘤预后性的方法，该方法包括检测待测胶质瘤样本中是否含有如上所述的cdna和/或mrna和/或蛋白的步骤，如果待测胶质瘤样本中含有如上所述的cdna和/或mrna和/或蛋白，则指示该待测胶质瘤样本对应的胶质瘤患者的预后性更差。其中，可以通过pcr、nasba、tma、rt-rpa、核酸杂交或者高通量测序的方法检测上述cdna和/或mrna，可以通过免疫杂交检测上述蛋白。
79.以下通过实施例进一步详细说明本公开。
80.制备实施例
81.本制备实施例用于获取胶质瘤样本，并获取其中的总rna和总cdna。
82.使用符合医学伦理委员会标准的操作，收集胶质瘤的样本1211例，并判断每一例胶质瘤样本的病理学特征。其中，收集样本的每一位病人都在收集样本之前得到本人及其治疗专家的同意，并具有书面的证明材料。其中，利用病理学诊断方法诊断胶质瘤，并根据胶质瘤样本对应患者的总生存期来评估胶质瘤样本的预后性，患者总生存期越长，则胶质瘤的预后性越好。胶质瘤样本对应患者的性别、年龄、病理学分级、肿瘤类别、以及总生存期等特征见表1。
83.表1
[0084][0085]
使用dna提取试剂盒(购自qiagen)，按照其使用说明书提取上述胶质瘤样本的总rna。该总rna经完整性分析仪检测，确认其rna完整性指数(rna integrity number,rin)大于7.0。使用反转录试剂盒(购自invitrogen)按照其使用说明书以该总rna为模板合成双链cdna。
[0086]
实施例1
[0087]
本实施例对制备实施例合成得到的胶质瘤样本的cdna进行pcr验证。
[0088]
pcr验证所用的引物为如seq id no:4所示的第一引物和如seq id no:5所示的第二引物。pcr的操作按照合成引物和pcr试剂盒的说明书进行。pcr的产物经过琼脂糖凝胶核酸电泳展示扩增条带的有无，如图1所示，所出现的扩增条带使用dna凝胶回收试剂盒(qiaquick pcr purification kit，购自qiagen)进行回收，然后进行sanger测序，测序结果见图2。
[0089]
由图1和图2可知，胶质瘤样品中存在19号外显子缺失的met基因。
[0090]
实施例2
[0091]
本实施例对制备实施例收集得到的胶质瘤样本的rna进行测序。
[0092]
将各个样本的rna使用rna文库构建试剂盒(购自illumina)构建rna文库，然后使
用测序平台(illuminahiseq 2000)对rna文库进行rna测序，并筛选出rna测序结果中含有如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本，结果见表2。
[0093]
表2
[0094][0095]
由表2可以看出，检测到含有如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本有12例，其中位生存期为284天，未检测到如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本有1199例，其中位生存期为866天，说明含有本公开的seq id no:2所示的mrna的胶质瘤预后较差，由此可以用于评价胶质瘤的预后性。
[0096]
此外，分别在全级别胶质瘤、idh突变的全级别胶质瘤、继发胶质母细胞瘤和idh突变的胶质母细胞瘤中，通过生存曲线(kaplan
–
meiercurve)对含有如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本和不含有如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本的整体生存情况进行了比较，结果均显示含有如seq id no:2所示的mrna的胶质瘤样本整体生存较差，见图3-6。
[0097]
以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简
单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。
[0098]
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。
[0099]
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。