荧光定量方法检测人母乳内10属细菌的试剂盒及其应用与流程

技术特征：
1.鉴定或辅助鉴定母乳中细菌的多重pcr引物探针组合物，其特征在于：所述细菌为双歧杆菌属、不动杆菌属、棒状杆菌属、链球菌属、葡萄球菌属、摩根氏菌属、普罗维登斯菌属、芽孢杆菌属、寡养单胞菌属和水栖菌属这10属细菌中的10属以下的细菌，所述多重pcr引物探针组合物包括1
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frp、2
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frp、3
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frp、5
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frp、6
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frp、7
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frp、8
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frp、9
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frp、10
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frp和11
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frp；所述1
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frp为不动杆菌属的特异引物和探针，由引物1
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fp、引物1
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rp和探针1
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probe组成，引物1
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fp是seq id no.2所示的单链dna，引物1
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rp是seq id no.3所示的单链dna，探针1
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probe是seq id no.4所示的单链dna；所述2
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frp为双歧杆菌属的特异引物和探针，由引物2
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fp、引物2
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rp和探针2
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probe组成，引物2
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fp是seq id no.5所示的单链dna，引物2
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rp是seq id no.6所示的单链dna，探针2
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probe是seq id no.7所示的单链dna；所述3
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frp为棒状杆菌属的特异引物和探针，由引物3
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fp、引物3
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rp和探针3
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probe组成，引物3
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fp是seq id no.8所示的单链dna，引物3
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rp是seq id no.9所示的单链dna，探针3
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probe是seq id no.10所示的单链dna；所述5
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frp为寡养单胞菌属的特异引物和探针，由引物5
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fp、引物5
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rp组和探针5
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probe组成，引物5
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fp是seq id no.11所示的单链dna，引物5
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rp是seq id no.12所示的单链dna，探针5
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probe是seq id no.13所示的单链dna；所述6
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frp为链球菌属的特异引物和探针，由引物6
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fp、引物6
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rp和探针6
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probe组成，引物6
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fp是seq id no.14所示的单链dna，引物6
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rp是seq id no.15所示的单链dna，探针6
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probe是seq id no.16所示的单链dna；所述7
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frp为芽孢杆菌属的特异引物和探针，由引物7
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fp、引物7
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rp和探针7
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probe组成，引物7
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fp是seq id no.17所示的单链dna，引物7
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rp是seq id no.18所示的单链dna，7
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probe是seq id no.19所示的单链dna；所述8
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frp为水栖菌属的特异引物和探针，由引物8
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fp、引物8
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rp和探针8
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probe组成，引物8
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fp是seq id no.20所示的单链dna，引物8
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rp是seq id no.21所示的单链dna，探针8
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probe是seq id no.22所示的单链dna；所述9
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frp为摩根氏菌属的特异引物和探针，由引物9
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fp、引物9
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rp和探针9
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probe组成，引物9
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fp是seq id no.23所示的单链dna，引物9
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rp是seq id no.24所示的单链dna，探针9
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probe是seq id no.25所示的单链dna；所述10
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frp为普罗维登斯菌属的特异引物和探针，由引物10
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fp、引物10
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rp和探针10
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probe组成，引物10
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fp是seq id no.26所示的单链dna，引物10
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rp是seq id no.27所示的单链dna，探针10
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probe是seq id no.28所示的单链dna；所述11
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frp为葡萄球菌属的特异引物和探针，由引物11
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fp、引物11
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rp和探针11
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probe组成，引物11
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fp是seq id no.29所示的单链dna，引物11
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rp是seq id no.30所示的单链dna，探针11
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probe是seq id no.31所示的单链dna。2.如权利要求1所述的多重pcr引物探针组合物，其特征在于：所述引物1
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fp、所述引物1
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rp、所述探针1
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probe、所述引物2
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fp、所述引物2
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rp、所述探针2
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probe、所述引物3
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fp、所述引物3
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rp、所述探针3
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probe、所述引物5
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fp、所述引物5
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rp、所述探针5
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probe、所述引物6
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fp、所述引物6
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rp、所述探针6
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probe、所述引物7
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fp、所述引物7
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rp、所述探针7
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probe、所述引物8
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fp、所述引物8
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rp、所述探针8
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probe、所述引物9
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fp、所述引物9
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rp、所述探针9
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probe、所述引物10
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fp、所述引物10
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rp、所述探针10
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probe、所述引物11
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fp、所述引物11
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rp和所述探针11
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probe的物质的量相同。3.如权利要求1或2所述的多重pcr引物探针组合物，其特征在于：所述多重pcr引物探针组合物还包括内参
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frp，所述内参
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frp为内源性内参的特异引物和探针，由引物内参
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fp、引物内参
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rp和探针内参
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probe组成，引物内参
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fp是seq id no.32所示的单链dna，引
物内参
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rp是seq id no.33所示的单链dna，探针内参
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probe是seq id no.34所示的单链dna。4.如权利要求3所述的多重pcr引物探针组合物，其特征在于：所述引物内参
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fp、所述引物内参
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rp和所述探针内参
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probe的物质的量与所述引物1
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fp的物质的量相同。5.鉴定或辅助鉴定母乳中细菌的试剂或试剂盒，其特征在于：所述试剂或试剂盒含有权利要求1至4中任一项所述的多重pcr引物探针组合物。6.如权利要求5所述的试剂或试剂盒，其特征在于：所述试剂或试剂盒还包括阳性标准品，所述阳性标准品为含有核苷酸序列如seq id no.1第4287
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5862位所示的dna片段的载体。7.权利要求1至4中任一项所述的多重pcr引物探针组合物在制备鉴定或辅助鉴定母乳中细菌产品中的应用。8.权利要求1至4中任一项所述的多重pcr引物探针组合物在鉴定或辅助鉴定母乳中细菌中的应用。9.权利要求5或6所述的鉴定或辅助鉴定母乳中细菌的试剂或试剂盒在鉴定或辅助鉴定母乳中细菌中的应用。10.鉴定母乳中细菌的方法，其特征在于：所述方法包括以待测母乳基因组dna为模板，用权利要求1
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4中任一项所述的多重pcr引物探针组合物或权利要求5或6所述的试剂或试剂盒进行实时荧光定量pcr检测，确定所述待测母乳含有权利要求1中所述10属细菌中的哪个或哪些属的细菌。

技术总结
本发明公开了荧光定量方法检测人体母乳内10属细菌的试剂盒及其应用。该试剂盒包括鉴定或辅助鉴定母乳中细菌的多重PCR引物探针组合物，所述细菌为双歧杆菌属、不动杆菌属、棒状杆菌属、链球菌属、葡萄球菌属、摩根氏菌属、普罗维登斯菌属、芽孢杆菌属、寡养单胞菌属和水栖菌属这10属细菌中的10属以下的细菌，所述多重PCR引物探针组合物包括核苷酸序列是序列表中序列2至序列31的单链DNA。本发明能实时监测检测过程，可以还原样本原始菌群状态，检测方法准确、快速，可同时对人母乳内10个种属进行定性检测和定量检测，也可单种属检测或多种属属联合检测，还可以根据荧光标记任意组合几个种属的联合检测。种属的联合检测。种属的联合检测。


技术研发人员：郑明权 李巧玲
受保护的技术使用者：艾德范思（北京）医学检验实验室有限公司
技术研发日：2021.11.04
技术公布日：2021/11/30