一种新型冠状病毒抗体检测试纸条及其应用的制作方法

1.本发明涉及病毒抗体检测技术领域，特别地，涉及一种新型冠状病毒抗体检测试纸条及其应用。


背景技术：

2.国际病毒分类委员会(international committee on taxonomy of viruses,ictv)于2020年2月11日宣布，新型冠状病毒(2019-ncov)的正式分类名为严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，sars-cov-2)。而世界卫生组织(who)同日宣布，由这一病毒导致的疾病的正式名称为covid-19。冠状病毒是一个大型病毒家族，已知可引起感冒以及中东呼吸综合征(mers)和严重急性呼吸综合征(sars)等较严重疾病。
3.机体首次感染新型病毒后，机体的免疫系统会对病毒进行免疫防御，产生特异性的抗体。一般1-2周出现igm抗体，约4周左右产生igg抗体。猫新冠病毒抗体检测试剂的使用，为临床提供了血清学的证据，可与核酸检测方法联合使用，从而为新冠病毒的诊断提供更全面、准确的信息。
4.抗体测定试纸条还可助力猫新型冠状病毒(sars-cov-2)疫苗的开发，用于检测接种疫苗后猫体内产生抗体的情况及疫苗的效果。


技术实现要素：

5.为了解决现有猫新型冠状病毒抗体检测技术存在的检测步骤繁琐、耗时，需要专业人员进行操作且主要依赖实验室的问题，本发明提供一种新型冠状病毒抗体检测试纸条及应用。本发明采用夹心法，通过包被在硝酸纤维素膜上的新型冠状病毒抗原及包被在金标结合垫上的新型冠状病毒抗原，利用免疫层析的原理检测样品中的新型冠状病毒总抗体，检测方法快速准确。
6.根据本发明的第一方面，提供了一种新型冠状病毒抗体检测试纸条，所述试纸条包括底板、样品垫、金标结合垫、滤血膜、检测线、质控线、硝酸纤维素膜和吸收垫；所述样品垫、金标结合垫、滤血膜、硝酸纤维素膜和吸收垫从左至右依次粘贴在底板上，且样品垫与金标结合垫)连接，金标结合垫与滤血膜连接，滤血膜与硝酸纤维素膜连接，硝酸纤维素膜与吸收垫连接；
7.所述硝酸纤维素膜上从左至右依次分布有检测线和质控线；
8.所述金标结合垫包被有含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联标记物，所述fc标签的氨基酸如seq id no:1所示；
9.所述硝酸纤维素膜上的检测线包被有新型冠状病毒重组抗原；所述硝酸纤维素膜上的质控线包被有抗鼠igg-fc片段抗体二抗，其中fc片段的氨基酸如seq id no:1所示；
10.所述金标结合垫包被的与胶体金偶联的新型冠状病毒重组抗原和检测线包被的新型冠状病毒重组抗原含有相同的抗原决定簇；
11.所述金标结合垫包被的含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联物用于与待测样品中的新型冠状病毒抗体特异性结合，所述检测线包被的新型冠状病毒重组抗原用于与待测样品中的新型冠状病毒抗体特异性结合；
12.所述金标结合垫包被的含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联物用于与质控线包被的抗鼠igg-fc片段抗体二抗特异性结合。
13.优选地，所述抗鼠igg-fc片段抗体二抗为兔抗鼠igg-fc片段抗体二抗。
14.优选地，所述新型冠状病毒重组抗原为新型冠状病毒重组s蛋白。
15.按照本发明的另一方面，提供了任一所述的检测条用于检测新型冠状病毒抗体的应用。
16.优选地，包括以下步骤：
17.s1：将待测样品滴加至样品垫上，5min-15min后，待测样品逐渐层析至金标结合垫、滤血膜、硝酸纤维素膜和吸收垫上，根据显色结果判断待测样品中新型冠状病毒抗体的情况；
18.s2：若检测线和质控线内均出现紫红色条带，则待测样品中新型冠状病毒抗体呈阳性；
19.若仅在质控线内出现紫红色条带，而检测线内无紫红色条带，则待测样品中新型冠状病毒抗体呈阴性；
20.若在检测线内出现紫红色条带，而质控线内无紫红色条带，则所述检测卡无效；若在检测线和质控线内均无紫红色条带，则所述检测卡无效。
21.优选地，所述待测样品用磷酸盐缓冲液稀释后滴至样品垫上。
22.优选地，所述待测样品的ph值为6.5-8.0。
23.总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点：
24.(1)本发明采用夹心法，通过包被在硝酸纤维素膜上的新型冠状病毒抗原及包被在金标结合垫上的新型冠状病毒抗原，利用免疫层析的原理检测猫等动物血液中的新型冠状病毒总抗体，检测方法快速准确。
25.(2)本发明试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，样本中的新冠病毒抗体与所述新型冠状病毒抗原与胶体金的偶联物上的新型冠状病毒抗原特异性结合；检测线上包被新型冠状病毒抗原与所述样本中的的新冠病毒抗体特异性结合；质控线上包被兔抗鼠igg-fc片段抗体与新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联标记物上的新型冠状病毒重组抗原的fc标签特异性结合。
26.(3)本发明中胶体金的偶联标记物上的新型冠状病毒重组抗原的fc标签仅与质控线上包被兔抗鼠igg-fc片段抗体结合，不会与检测线上的新型冠状病毒抗原相结合，具有较高的特异性。
27.(4)本发明中的试纸条可实现猫等动物的新型冠状病毒抗体的现场快速检测，不再局限于人，具有较高的实用价值和推广价值。
28.(5)本发明优选地，抗鼠igg-fc片段抗体二抗为兔抗鼠igg-fc片段，生产工艺简单，易获得。
29.(6)本发明优选地，新型冠状病毒重组抗原为新型冠状病毒重组s蛋白，特异性好，
无生物活性，安全。
附图说明
30.图1为新型冠状病毒抗体检测试纸条的结构示意图，其中1-底板、2-样品垫、3-金标结合垫、4-滤血膜、5-检测线、6-质控线、7-硝酸纤维素膜、8-吸收垫。
具体实施方式
31.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
32.本发明一种新型冠状病毒抗体检测试纸条，所述试纸条包括底板1、样品垫2、金标结合垫3、滤血膜4、检测线5、质控线6、硝酸纤维素膜7和吸收垫8；所述样品垫2、金标结合垫3、滤血膜4、硝酸纤维素膜7和吸收垫8从左至右依次粘贴在底板1上，且样品垫2与金标结合垫3连接，金标结合垫3与滤血膜4连接，滤血膜4与硝酸纤维素膜7连接，硝酸纤维素膜7与吸收垫8连接；
33.所述硝酸纤维素膜7上从左至右依次分布有检测线5和质控线6；
34.所述金标结合垫3包被有含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联标记物，所述fc标签的氨基酸如seq id no:1所示；
35.所述硝酸纤维素膜7上的检测线5包被有新型冠状病毒重组抗原；所述硝酸纤维素膜7上的质控线6包被有抗鼠igg-fc片段抗体二抗，其中fc片段的氨基酸如seq id no:1所示；
36.所述金标结合垫3包被的与胶体金偶联的新型冠状病毒重组抗原和检测线5包被的新型冠状病毒重组抗原含有相同的抗原决定簇；
37.所述金标结合垫3包被的含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联物用于与待测样品中的新型冠状病毒抗体特异性结合，所述检测线5包被的新型冠状病毒重组抗原用于与待测样品中的新型冠状病毒抗体特异性结合；
38.所述金标结合垫3包被的含有fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金的偶联物用于与质控线6包被的抗鼠igg-fc片段抗体二抗特异性结合。
39.在一些实施例中，所述抗鼠igg-fc片段抗体二抗为兔抗鼠igg-fc片段抗体二抗。
40.在一些实施例中，所述新型冠状病毒重组抗原为新型冠状病毒重组s蛋白。
41.实施例1：试纸条组分的制备
42.1、标记物质的制备
43.1.1胶体金标记物的制备
44.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液，用0.2mol/l的碳酸钾溶液调节胶体金溶液的ph值为9.5，将纯化的含fc标签的新型冠状病毒重组抗原与胶体金溶液混匀，再加入10％的氯化钠溶液混匀，室温静置2小时，即获得新型冠状病毒抗原与胶体金的偶联标记物，4℃保存备用。
45.2、试纸条的组装
46.(1)准备洁净托盘放入样品垫，倒入样品垫处理液，浸泡10min后放入烘箱，设置37℃干燥24h
±
4h，铝箔袋密封，获得样品垫2，室温保存备用。
47.(2)采用喷金仪将新型冠状病毒抗原与胶体金的偶联标记物喷在结合垫上，37℃烘箱干燥2h，铝箔袋密封，获得金标结合垫3，室温保存备用。
48.(3)采用划膜仪将兔抗鼠igg-fc片段抗体-6#、新型冠状病毒抗原-5#分别划膜于硝酸纤维素膜7上的质控线(即c线)6和检测线(即t线)5上，37℃烘箱干燥24h
±
4h，铝箔袋密封，获得带有检测线5(包被有新型冠状病毒抗原-5#)和质控线6(包被有兔抗鼠igg-fc片段抗体-6#)的硝酸纤维素膜7，室温保存备用。fc片段的氨基酸如seq id no:1所示。
49.(4)将上述处理好的样品垫2、金标结合垫3、滤血膜4、带有检测线5和质控线6的硝酸纤维素膜7、吸收垫8等材料依次粘贴在底板1上，底板1优选为pvc底板，切条、组装、密封，获得本发明的猫新型冠状病毒抗体检测试纸条，室温保存备用。组装后的试纸条如图1所示。
50.实施例2：新型冠状病毒抗体检测试纸条使用方法
51.(1)从塑封包装中取出试纸条，置于干燥的桌面上，试纸条上显示有质控区(c)和测试区(t)；
52.(2)将取好的血样加在加样孔内；
53.(3)将稀释液瓶盖拧开，往滴入血样的加样孔内滴入稀释液2滴；在15min内读取结果，请勿于20min之后读取结果。
54.(4)结果判读：
55.阳性：位于测试区(t)内出现一条紫红色条带，位于质控区(c)出现一条紫红色条带
56.阴性：仅在质控区(c)出现一条紫红色条带，在测试区(t)内无条带出现；
57.无效结果：仅在测试区(t)出现一条紫红色条带，在质控区(c)无紫红色条带出现；测试区(t)和质控区(c)均无紫红色条带出现。
58.本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。