一种刺梨无刺1号无刺品系的特异分子标记及其应用

技术特征：
1.一种分子标记，其特征在于，由分子标记153.61和分子标记341.112组成；所述分子标记153.61的上游引物序列如seq id no.1所示，下游引物序列如seq id no.2所示；所述分子标记341.112的上游引物序列如seq id no.3所示，下游引物序列如seq id no.4所示。2.一种特异性引物组合，其特征在于，含有核苷酸序列如seq id no.1～seq id no.4所示的引物。3.一种含有如权利要求2所述的引物组合的试剂盒。4.权利要求1所述的分子标记或权利要求2所述的引物组合或权利要求3所述的试剂盒在无刺刺梨育种中的应用。5.一种分子标记的方法，其特征在于，将分子标记153.61和分子标记341.112的引物混合后扩增刺梨育种材料，如果能够同时扩增出500bp和100bp的扩增片段，则标志着所标记的育种材料为刺梨无刺1号无刺品系；所述分子标记153.61的上游引物序列如seq id no.1所示，下游引物序列如seq id no.2所示；所述分子标记341.112的上游引物序列如seq id no.3所示，下游引物序列如seq id no.4所示。6.一种检测刺梨无刺1号无刺品系的方法，其特征在于，用具体序列如seq id no.1～seq id no.4所示的引物对提取的刺梨基因组dna进行pcr扩增；然后观察扩增结果，得出结论。7.如权利要求6所述方法，其特征在于，所述扩增为双重pcr扩增，所述扩增反应的总体积为17.5～22.5μl，其中包括0.9～1.1μl dna、153.61标记上下游引物各0.4～0.6μl、341.112标记上下游引物各0.4～0.6μl、6～8μl ddh2o、9～11μltaq dna聚合酶。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述扩增反应的过程为：93～95℃预变性3～5min，93～95℃变性25～35s，45～55℃退火25～35s，70～74℃延伸35～45s，25～35个循环，最后总延伸5～8min，3～5℃保温。9.如权利要求6所述方法，其特征在于，所述得出结论的方法为：如果能够同时扩增出特异的2条不同大小的500bp和100bp扩增片段，则标志着所检测的育种材料为刺梨无刺1号无刺品系。

技术总结
本发明提供了一种刺梨无刺1号无刺品系的特异分子标记及其应用，属于农作物分子育种技术领域。本发明通过一次双重PCR同时检测双标记位点，利用2个InDe1标记即可简单、快速地鉴定出刺梨材料中的无刺1号无刺品系，而且双标记位点同时检测，相互印证，相互检验，也能确保检测结果的准确性、有效性及可靠性，因此在刺梨品种的区分和种间杂交种的鉴定等方面具有重大应用价值，也能为创新大果无刺鲜食刺梨品种提供技术支撑。此外，利用本发明在育种材料的幼苗期提取其叶片基因组DNA进行双重PCR扩增，通过观察电泳条带即可鉴定其是否为无刺1号无刺品系，因而也可缩短无刺刺梨的育种周期，加快育种进程。加快育种进程。加快育种进程。


技术研发人员：鲁敏 饶添枝 安华明 蒋兰兰 南红 郑珊瑚 马文涛 覃家雪
受保护的技术使用者：贵州大学
技术研发日：2022.03.02
技术公布日：2022/4/12