一种多糖复合凝胶及其制备方法和应用与流程

1.本发明涉及注射用凝胶技术领域，具体涉及一种多糖复合凝胶及其制备方法和应用。


背景技术：

2.透明质酸，又叫玻璃酸，玻尿酸，(简称ha)是一种天然的多糖结构，由重复的d-葡萄糖醛酸和n-乙酰基葡萄糖通过β-1，3-糖苷键构成的双糖结构组成，广泛存在于动物体和微生物体中，无种属差异性和免疫原性，具有很高的生物安全性，是备受关注的新型生物医学材料，具有很高的医用价值。其强大的吸水性及特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，另外，透明质酸还可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂，与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。可注射凝胶在体内与修复组织之间嵌合性好，实现原位注射达到微创目的，成为软组织修复、重建、填充的热点。其结构折叠形成三维网络，产生生理效应。包括产生流体阻力，维持体内水平衡和内环境稳定，影响生物大分子的溶解度、空间构型、化学平衡和系统渗透压，阻止病原播放，引导胶原纤维分泌性物质的沉积。其与不能分离的蛋白质连接形成聚合体，维持组织的化学空间结构的形状和体积，保证组织的可逆性抗压缩力。其对巨噬细胞、粘细胞、淋巴细胞、自然杀伤细胞均有一定作用。
3.聚己内酯，即pcl，具有良好的生物降解性、生物相容性和无毒性，而被广泛用作医用生物降解材料及药物控制释放体系，运用于组织工程已经作为药物缓释系统。目前也较多作为医疗美容行业的填充品。pcl是少数被美国 fda批准的一类安全、填充效果极佳的可完全降解的高分子材料降解型人工合成生物材料，其具有良好生物相容性、低毒性、易于改性等优点，同时，pcl可以引起一种异物巨细胞反应，从而导致胶原蛋白逐渐生成。随着时间的增加使真皮层增厚，填充部位完全被新生的自体组织代替，在人体内可以维持2年以上，得到一个“永久性美容”的效果。
4.近年来，在微整形手术中，软组织填充手术越来越受欢迎，主要是填充皱纹、填平凹陷部位、修正面部轮廓。在所用的软组织填充剂中，透明质酸因其安全性高、生物相容性好、术后的不良反应少、术后填充效果立即显现等优势成为国内外最常用的软组织填充剂。但透明质酸类填充剂因其自身限制，在体内的维持时间较短，仅为6-12个月。
5.寡肽，也称作小肽，是多肽的一种，分子量一般在1000道尔顿以下，是小分子活性肽，由2~10个氨基酸彼此缩合形成的化合物。寡肽又可分为：寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5、寡肽-6等，其通过外源性作用于皮肤，与皮肤真皮层细胞结合后，可改变皮肤细胞组织的代谢，改善微循环，能够促进真皮层成纤维细胞增殖分化，有效恢复皮下结缔组织的生长，而使皮肤细腻，富有光泽，增加弹性消除皱纹，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝仪器操作后修复。能刺激并提高细胞合成的能力，修复受损的弹力纤维，让肌肤的每个细胞充满青春活力，明显改善肌肤干枯、松弛、细纹等老化现象，让肌
mmol/l、0.7 mmol/l、0.8 mmol/l、0.9 mmol/l、1 mmol/l。
16.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液为盐酸水溶液、醋酸水溶液和乳酸水溶液的任意一种或多种。
17.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液可以单独选择为盐酸水溶液、醋酸水溶液或乳酸水溶液，也可将其中任意两种或全部三种按照等体积比复配后共同使用，最优选为乳酸水溶液。
18.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述含有交联剂的酸性水溶液中，交联剂为改性聚乙二醇和1，4丁二醇二缩水甘油醚的任意一种或多种。
19.交联剂可单独使用或将多种改性聚乙二醇复配使用。
20.优选为改性聚乙二醇，更优选为聚乙二醇二缩水甘油醚或四臂星形聚乙二醇环氧化物。
21.乙二醇二缩水甘油醚是含乙二醚链的环氧树脂，属低黏度水溶性环氧树脂或脂肪族环氧树脂，本发明中所提供的聚乙二醇二缩水甘油醚分子量为400-5000，可选择为400、1000、2000、3000、4000、5000；聚乙二醇二缩水甘油醚的分子结构式如下式ⅰ所示：式ⅰ。
22.四臂星形聚乙二醇环氧化物（四臂-聚乙二醇-环氧化物）是一种多臂聚乙二醇衍生物，在连接到一个季戊四醇核心的四个臂的每个末端具有环氧或环氧基团，本发明中所提供的四臂星形聚乙二醇环氧化物的分子量为200-40000，可选择为200、400、600、800、1000、2000、3400、5000、10000、20000、30000、40000；四臂星形聚乙二醇环氧化物的分子结构式如下式ⅱ所示：式ⅱ。
23.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述多糖类物质为透明质酸和透明质酸盐中的任意一种或多种。
24.透明质酸是构成人体细胞间质、眼玻璃体、关节滑液等结缔组织的主要成分，在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复的重要生理功能。透明质酸分子中含有大量的羧基和羟基，在水；溶液中形成分子内和分子间的氢键，这使其具有强大的保水作用，可结合自身400倍以上的水；在较高浓度时，由于其分子间作用形成的复杂的三级网状结构，其水溶液又具有显著的粘弹性。透明质酸作为细胞间基质的主要成分，直接参与细胞内外电解质交流的调控，发挥物理和分子信息的过滤器作用。透明质酸具有独特理化性质和生理功能，在医学方面已得到广泛应用。
25.透明质酸可用作眼科人工晶体植入手术的粘弹剂、骨性关节炎和类风湿性关节炎等关节手术的填充剂，作为媒介在滴眼液中广泛应用，还用于预防术后粘连和促进皮肤伤口的愈合。透明质酸与其它药物反应形成的化合物对药物发挥缓释作用，可达到定向和定时释放的目的。
26.透明质酸盐优选为透明质酸钠盐、透明质酸钾盐和/或透明质酸钙盐，既可单独使用，也可以等质量复配使用，单独使用或复配后，分子量为200-3000kda，可选择为200kda、500kda、1000kda、2000kda、3000kda，优选为1000kda。
27.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述生物可降解高分子材料为分子量5-9kda的聚合物，优选为聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乙丙交酯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乙二醇和聚环氧丙烷中的任意一种或多种。
28.生物可降解高分子材料的分子量可选择为5kda、6kda、7kda、8kda、9kda，优选为7kda；分子粒径为5-80μm，可选择为5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm，优选为50μm；具体可以为上述所列物质中的任意一种单独使用或任意多种复配使用，其总分子量达到5-9kda、分子粒径为5-80μm即可，优选为聚己内酯单独使用。
29.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述多肽为2-10个氨基酸缩合得到的、分子量小于1kda的小分子多肽；优选为寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5和寡肽-6中的任意一种或多种。
30.多肽选择为小分子多肽，优选为寡肽，分子量可选择为100da、200da、300da、400da、500da、600da、700da、800da、900da、1000da，寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5和寡肽-6可单独使用或任意多种复配使用，其总分子量小于1000da即可，优选为寡肽1、寡肽3或寡肽5，最优选为寡肽5。
31.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶，所述分散助剂为橙皮素。
32.橙皮素具有增强分散效果的作用，同时还可有效抑制凝胶使用过程中产生的炎症，橙皮素加入后，在分散过程中，能够有效促进多糖类物质和生物可降解高分子材料的分散效果，使二者能够更紧密的复合。
33.本发明的另一个目的是提供了一种多糖复合凝胶的制备方法，所述多糖复合凝胶为上述的多糖复合凝胶，其制备方法为：将多糖类物质与生物可降解高分子材料分散并复合后，加入至含有交联剂的酸性水溶液中，通过至少两次交联后，再加入多肽即可。
34.本发明的重要发明点即在于，不仅采用了分散助剂提高多糖类物质的分散效果，同时还调整了交联的次数以及交联的外部环境，至少两次交联能够有效提高多糖类物质和生物可降解高分子材料的交联程度，同时，交联过程的外部环境采用酸性环境，也有助于进一步提高二者的交联程度，同时，酸性环境的交联产物能够更加有效适应后续的再次交联。
35.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶的制备方法，具体包括以下步骤：s1.多糖类物质的水溶液加入生物可降解高分子材料和分散助剂后，进行超声分散，混合均匀再真空冷冻干燥，得到复合物；s2.将步骤s1得到的复合物加入至含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行至少两次交联，每次交联后改变交联温度再进行下一次交联，得到交联产物；s3.将步骤s2得到的交联产物调节ph至中性，透析，得复合凝胶，再次进行真空冷冻干燥减量，得到减量复合凝胶；
s4.待步骤s3得到的减量复合凝胶减为原来90-99.5%时，滴入等量多肽，混合均匀后即得到多糖复合凝胶。
36.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶的制备方法，所述步骤s1中，超声分散的条件为100-200w，30-40℃，15-35min；真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，干燥时间为24-60h。
37.超声分散可选择为100w、125w、150w、175w、200w，30℃、32℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃，15min、20min、25min、30min、35min；优选为150w，35℃，25min。
38.真空冷冻干燥温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃，优选为-30℃，干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h，优选为40h。
39.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶的制备方法，所述步骤s2中，本次交联的温度大于下一次交联的温度。
40.交联本身即为线型或支型高分子链间以共价键连接成网状或体型高分子的过程，在两次交联时，第一次交联的温度需要大于第二次交联温度，其原因主要在于，第一次交联需要是将多糖类物质和生物可降解高分子材料中的大粒径高分子先进行共价键连接，此时连接的结构大多为网状结构，二次交联需要降低温度，使二者的小粒径高分子再次进行共价键连接，形成更加紧密更加牢固稳定的体型结构，能够有效提高交联度。
41.进一步的，上述的一种多糖复合凝胶的制备方法，交联次数为两次，所述第一次交联的温度为40-60℃，时间为2-10h；第二次交联的温度为20-50℃，时间为2-24h。
42.第一次交联可选择为温度40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，时间2h、4h、6h、8h、10h，优选为50℃，6h；第二次交联可选择为温度20℃、30℃、40℃、50℃，时间2h、5h、10h、15h、20h、24h，优选为30℃，15h；进一步的，上述的一种多糖复合凝胶的制备方法，所述步骤s3中，采用弱碱性溶液调节交联产物的ph值至6.8-7.3，透析方法为用磷酸盐缓冲液透析纯化至渗透压为270-330mmol/l，真空冷冻干燥减量的条件为温度-10℃～-50℃，干燥时间为24-60h，减量至原体积的20-30%；弱碱性溶液优选为碳酸氢钠或碳酸氢二钠。
43.调节后的ph值可选择为6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3；透析至渗透压可选择为270mmol/l、280mmol/l、290mmol/l、300mmol/l、310mmol/l、320mmol/l、330mmol/l；冷冻干燥的温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃；干燥时间可选择为干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h；优选为ph值为7.0，渗透压300mmol/l，冷冻干燥温度-40℃，干燥时间为40h。
44.本发明的第三个目的是提供了一种多糖复合凝胶在制备注射用填充剂中的应用，所述多糖复合凝胶为上述的多糖复合凝胶或上述制备方法制备得到的多糖复合凝胶。
45.与现有技术相对比，本发明所提供的多糖复合凝胶及其制备方法和应用，具有以下优点：1.聚己内酯pcl分散的的更均匀，且牢固的固定在凝胶中；2.交联剂用量少；3.杜绝了堵针，成份分离等情况；
4.减少红肿，硬结等术后不良反应；5.增强了术区组织的细胞质量，并且对术区组织、皮肤有抗衰，年轻化的作用；6.延长了交联透明质酸的吸收代谢时间；7.填充塑形好，不塌陷，不变形；8.有效提升了术后满意度和舒适感。
具体实施方式
46.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述仅仅用以解释本发明，并不用于限制本发明的范围。
47.除非另有定义，本文所使用的所有的技术术语和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同，本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本发明。本文中所使用的试剂和仪器均商购可得，所涉及的表征手段均可参阅现有技术中的相关描述，本文中不再赘述。
48.为了进一步了解本发明，下面结合最佳实施例对本发明作进一步的详细说明。
49.实施例1多糖复合凝胶，是由按照重量份计的以下物质制备得到的：多糖类物质0.5-1.5份，生物可降解高分子材料0.1-10份，含有交联剂的酸性水溶液3-10份，多肽0.2-6份，分散助剂0.5-3份。
50.多糖类物质使用量可选择为0.5份、0.7份、1份、1.2份、1.5份，优选为1份；生物可降解高分子材料的使用量可选择为0.1份、0.5份、1份、3份、5份、7份、9份、10份，优选为5份；含有交联剂的酸性水溶液的使用量可选择为3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份、10份，优选为6份；多肽的使用量可选择为0.2份、0.5份、1份、2份、3份、4份、5份、6份，优选为3份；分散助剂的使用量可选择为0.5份、1份、1.5份、2份、2.5份、3份，优选为1.5份。
51.含有交联剂的酸性水溶液中，酸的浓度为0.1-1mmol/l。
52.含有交联剂的酸性水溶液中，酸的浓度优选为0.5-1mmol/l，最优选浓度为0.8 mmol/l。
53.酸浓度可选为0.1mmol/l、0.2 mmol/l、0.3 mmol/l、0.4 mmol/l、0.5 mmol/l、0.6 mmol/l、0.7 mmol/l、0.8 mmol/l、0.9 mmol/l、1 mmol/l。
54.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液为盐酸水溶液、醋酸水溶液和乳酸水溶液的任意一种或多种。
55.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液可以单独选择为盐酸水溶液、醋酸水溶液或乳酸水溶液，也可将其中任意两种或全部三种按照等体积比复配后共同使用，最优选为乳酸水溶液。
56.含有交联剂的酸性水溶液中，交联剂为改性聚乙二醇和1，4丁二醇二缩水甘油醚的任意一种或多种。
57.交联剂可单独使用或将多种改性聚乙二醇复配使用。
58.优选为改性聚乙二醇，更优选为聚乙二醇二缩水甘油醚或四臂星形聚乙二醇环氧
化物。
59.聚乙二醇二缩水甘油醚分子量为400-5000，可选择为400、1000、2000、3000、4000、5000；四臂星形聚乙二醇环氧化物的分子量为200-40000，可选择为200、400、600、800、1000、2000、3400、5000、10000、20000、30000、40000；多糖类物质为透明质酸和透明质酸盐中的任意一种或多种。
60.透明质酸盐优选为透明质酸钠盐、透明质酸钾盐和/或透明质酸钙盐，既可单独使用，也可以等质量复配使用，单独使用或复配后，分子量为200-3000kda，可选择为200kda、500kda、1000kda、2000kda、3000kda，优选为1000kda。
61.生物可降解高分子材料为分子量5-9kda的聚合物，优选为聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乙丙交酯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乙二醇和聚环氧丙烷中的任意一种或多种。
62.生物可降解高分子材料的分子量可选择为5kda、6kda、7kda、8kda、9kda，优选为7kda；分子粒径为5-80μm，可选择为5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm，优选为50μm；具体可以为上述所列物质中的任意一种单独使用或任意多种复配使用，其总分子量达到5-9kda、分子粒径为5-80μm即可，优选为聚己内酯单独使用。
63.多肽为2-10个氨基酸缩合得到的、分子量小于1kda的小分子多肽；优选为寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5和寡肽-6中的任意一种或多种。
64.多肽选择为小分子多肽，优选为寡肽，分子量可选择为100da、200da、300da、400da、500da、600da、700da、800da、900da、1000da，寡肽-1、寡肽-3、寡肽-5和寡肽-6可单独使用或任意多种复配使用，其总分子量小于1000da即可，优选为寡肽1、寡肽3或寡肽5，最优选为寡肽5。
65.分散助剂为橙皮素。
66.多糖复合凝胶的制备方法，是将多糖类物质与生物可降解高分子材料分散并复合后，加入至含有交联剂的酸性水溶液中，通过至少两次交联后，再加入多肽即可。
67.具体包括以下步骤：s1.多糖类物质的水溶液加入生物可降解高分子材料和分散助剂后，进行超声分散，混合均匀再真空冷冻干燥，得到海绵状复合物；s2.将步骤s1得到的海绵状复合物加入至含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行至少两次交联，每次交联后改变交联温度再进行下一次交联，得到交联产物；s3.将步骤s2得到的交联产物调节ph至中性，透析，得复合凝胶，再次进行真空冷冻干燥减量，得到减量复合凝胶；s4.待步骤s3得到的减量复合凝胶减为原来90-99.5%时，滴入等量多肽（小分子多肽，即寡肽1、寡肽3、寡肽4、寡肽5、寡肽6），混合均匀后即得到多糖复合凝胶。
68.步骤s1中，超声分散的条件为超声分散的条件为100-200w，30-40℃，15-35min；真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，干燥时间为24-60h。
69.超声分散可选择为100w、125w、150w、175w、200w，30℃、32℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃，15min、20min、25min、30min、35min；优选为150w，35℃，25min。
70.真空冷冻干燥温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃，优选为-30℃，干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h，优选为40h。
71.步骤s2中，本次交联的温度大于下一次交联的温度。
72.交联次数为两次，第一次交联的温度为40-60℃，时间为2-10h；第二次交联的温度为20-50℃，时间为2-24h。
73.第一次交联可选择为温度40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，时间2h、4h、6h、8h、10h，优选为50℃，6h；第二次交联可选择为温度20℃、30℃、40℃、50℃，时间2h、5h、10h、15h、20h、24h，优选为30℃，15h；步骤s3中，采用弱碱性溶液调节交联产物的ph值至6.8-7.3，透析方法为用磷酸盐缓冲液透析纯化至渗透压为270-330mmol/l，真空冷冻干燥减量的条件为温度-10℃～-50℃，干燥时间为24-60h，减量至原体积的20-30%；弱碱性溶液优选为碳酸氢钠或碳酸氢二钠。
74.调节后的ph值可选择为6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3；透析至渗透压可选择为270mmol/l、280mmol/l、290mmol/l、300mmol/l、310mmol/l、320mmol/l、330mmol/l；冷冻干燥的温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃；干燥时间可选择为干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h；优选为ph值为7.0，渗透压300mmol/l，冷冻干燥温度-40℃，干燥时间为40h。
75.多糖复合凝胶的用途主要是为了制备注射用填充剂。
76.实施例2多糖复合凝胶的制备，包括以下步骤：s1.多糖类物质的水溶液加入生物可降解高分子材料和分散助剂后，进行超声分散，混合均匀再真空冷冻干燥，得到海绵状复合物；s2.将步骤s1得到的海绵状复合物加入至含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行至少两次交联，每次交联后改变交联温度再进行下一次交联，得到交联产物；s3.将步骤s2得到的交联产物调节ph至中性，透析，得复合凝胶，再次进行真空冷冻干燥减量，得到减量复合凝胶；s4.待步骤s3得到的减量复合凝胶减为原来90-99.5%时，滴入等量多肽（小分子多肽，即寡肽1、寡肽3、寡肽4、寡肽5、寡肽6），混合均匀后即得到多糖复合凝胶。
77.步骤s1中，多糖类物质0.5-1.5g，生物可降解高分子材料0.1-10g，分散助剂0.5-3g，超声分散的条件为100-200w，30-40℃，15-35min；真空冷冻干燥的温度为-10℃～-50℃，干燥时间为24-60h；超声分散可选择为100w、125w、150w、175w、200w，30℃、32℃、34℃、35℃、36℃、38℃、40℃，15min、20min、25min、30min、35min；优选为150w，35℃，25min。
78.真空冷冻干燥温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃，优选为-30℃，干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h，优选为40h。
79.多糖类物质为透明质酸和透明质酸盐中的任意一种或多种。
80.透明质酸盐优选为透明质酸钠盐、透明质酸钾盐和/或透明质酸钙盐，既可单独使用，也可以等质量复配使用，单独使用或复配后，分子量为200-3000kda，可选择为200kda、500 kda、1000 kda、2000 kda、3000 kda，优选为1000 kda。
81.生物可降解高分子材料为分子量5-9kda的聚合物，优选为聚乳酸、聚羟基乙酸、聚乙丙交酯、聚己内酯、聚氨基酸、聚乙二醇和聚环氧丙烷中的任意一种或多种。
82.生物可降解高分子材料的分子量可选择为5 kda、6 kda、7 kda、8 kda、9kda，优选为7 kda；分子粒径为5-80μm，可选择为5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm，优选为50μm；具体可以为上述所列物质中的任意一种单独使用或任意多种复配使用，其总分子量达到5-9 kda、分子粒径为5-80μm即可，优选为聚己内酯单独使用。
83.分散助剂为橙皮素。
84.步骤s2中，含有交联剂的酸性水溶液3-10g，含有交联剂的酸性水溶液中，酸的浓度为0.1-1mmol/l。
85.含有交联剂的酸性水溶液中，酸的浓度优选为0.5-1mmol/l，最优选浓度为0.8 mmol/l。
86.酸浓度可选为0.1mmol/l、0.2 mmol/l、0.3 mmol/l、0.4 mmol/l、0.5 mmol/l、0.6 mmol/l、0.7 mmol/l、0.8 mmol/l、0.9 mmol/l、1 mmol/l。
87.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液为盐酸水溶液、醋酸水溶液和乳酸水溶液的任意一种或多种。
88.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液可以单独选择为盐酸水溶液、醋酸水溶液或乳酸水溶液，也可将其中任意两种或全部三种按照等体积比复配后共同使用，最优选为乳酸水溶液。
89.含有交联剂的酸性水溶液中，交联剂为改性聚乙二醇和1，4丁二醇二缩水甘油醚的任意一种或多种。
90.交联剂可单独使用或将多种改性聚乙二醇复配使用。
91.优选为改性聚乙二醇，更优选为聚乙二醇二缩水甘油醚或四臂星形聚乙二醇环氧化物。
92.聚乙二醇二缩水甘油醚分子量为400-5000，可选择为400、1000、2000、3000、4000、5000；四臂星形聚乙二醇环氧化物的分子量为200-40000，可选择为200、400、600、800、1000、2000、3400、5000、10000、20000、30000、40000；交联次数为两次，第一次交联的温度为40-60℃，时间为2-10h；第二次交联的温度为20-50℃，时间为2-24h。
93.第一次交联可选择为温度40℃、45℃、50℃、55℃、60℃，时间2h、4 h、6 h、8 h、10 h，优选为50℃，6h；第二次交联可选择为温度20℃、30℃、40℃、50℃，时间2h、5 h、10 h、15 h、20 h、24 h，优选为30℃，15h；步骤s3中，采用弱碱性溶液调节交联产物的ph值至6.8-7.3，透析方法为用磷酸盐缓冲液透析纯化至渗透压为270-330mmol/l，真空冷冻干燥减量的条件为温度-10℃～-50
℃，干燥时间为24-60h，减量至原体积的20-30%；弱碱性溶液优选为碳酸氢钠或碳酸氢二钠。
94.调节后的ph值可选择为6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3；透析至渗透压可选择为270mmol/l、280mmol/l、290mmol/l、300mmol/l、310mmol/l、320mmol/l、330mmol/l；冷冻干燥的温度可选择为-10℃、-20℃、-30℃、-40℃、-50℃；干燥时间可选择为干燥时间为24h、30h、40h、50h、60h；优选为ph值为7.0，渗透压300mmol/l，冷冻干燥温度-40℃，干燥时间为40h。
95.实施例3多糖复合凝胶的制备，包括以下步骤：s1.多糖类物质的水溶液加入生物可降解高分子材料和分散助剂后，进行超声分散，混合均匀再真空冷冻干燥，得到海绵状复合物；s2.将步骤s1得到的海绵状复合物加入至含有交联剂的酸性水溶液中，混合均匀，调整温度进行至少两次交联，每次交联后改变交联温度再进行下一次交联，得到交联产物；s3.将步骤s2得到的交联产物调节ph至中性，透析，得复合凝胶，再次进行真空冷冻干燥减量，得到减量复合凝胶；s4.待步骤s3得到的减量复合凝胶减为原来95%时，滴入等量多肽（小分子多肽，即寡肽1、寡肽3、寡肽4、寡肽5、寡肽6），混合均匀后即得到多糖复合凝胶。
96.步骤s1中，多糖类物质1g，生物可降解高分子材料5g，分散助剂2g，超声分散的条件为150w，35℃，25min；真空冷冻干燥的温度为-30℃，干燥时间为40h；多糖类物质为透明质酸钠盐单独使用，分子量为1000kda。
97.生物可降解高分子材料为聚己内酯单独使用。
98.生物可降解高分子材料的分子量为7kda；分子粒径为50μm；分散助剂为橙皮素。
99.步骤s2中，含有交联剂的酸性水溶液6.5g，含有交联剂的酸性水溶液中，酸的浓度为0.8mmol/l。
100.含有交联剂的酸性水溶液中，酸性水溶液为乳酸水溶液。
101.含有交联剂的酸性水溶液中，交联剂为四臂星形聚乙二醇环氧化物。
102.四臂星形聚乙二醇环氧化物的分子量为20000；交联次数为两次，第一次交联的温度为50℃，时间为6h；第二次交联的温度为30℃，时间为15h。
103.步骤s3中，采用弱碱性溶液调节交联产物的ph值至7.0，透析方法为用磷酸盐缓冲液透析纯化至渗透压为300mmol/l，真空冷冻干燥减量的条件为温度-40℃，干燥时间为40h，减量至原体积的25%；弱碱性溶液优选为碳酸氢钠或碳酸氢二钠。
104.实施例效果验证：1、为了验证本发明技术方案的效果，发明人对本技术中的关键技术点单独进行了实验，按照关键技术点的多种选择，实验具体分组如下：1）多糖类物质分别选择为：透明质酸钠盐单独使用（实施例3）、透明质酸钾盐单独
使用（实施例4）、透明质酸钙盐单独使用（实施例5）、透明质酸钠盐 透明质酸钾盐（实施例6）、透明质酸钠盐 透明质酸钙盐（实施例7）、透明质酸钾盐 透明质酸钙盐（实施例8）、透明质酸钠盐 透明质酸钾盐 透明质酸钙盐（实施例9）；2）生物可降解高分子材料分别选择为：聚羟基乙酸单独使用（实施例10）、聚己内酯单独使用（实施例11）、聚乙丙交酯单独使用（实施例12）、聚环氧丙烷单独使用（实施例13）、聚己内酯 聚羟基乙酸（实施例14）、聚己内酯 聚乙丙交酯（实施例15）、聚己内酯 聚环氧丙烷（实施例16）；3）分散助剂选择为：橙皮素（实施例17）、无分散助剂（实施例18）；4）含交联剂的酸性水溶液选择为：盐酸水溶液（实施例19）、乳酸水溶液（实施例20）、醋酸 乳酸水溶液（实施例21）、聚乙二醇二缩水甘油醚（实施例22）、四臂星形聚乙二醇环氧化物（实施例23）、聚乙二醇二缩水甘油醚 四臂星形聚乙二醇环氧化物（实施例24）；5）多肽选择为：寡肽1（实施例25）、寡肽3（实施例26）、寡肽5（实施例27）、寡肽6（实施例28）；6）交联过程具体条件：第一次40℃/10h，第二次20℃/24h（实施例29）、第一次60℃/2h，第二次50℃/2h（实施例30）、第一次50℃/6h，第二次30℃/15h（实施例31）。
105.2、效果数据从以下几个方面来体现：1）动力粘度测试：采用旋转粘度计，按照《中华人民共和国药典》记载的vig第二法测定，在剪切速率不小于0.25hz，25℃条件下进行测试；2）渗透压测试；3）交联剂用量：主要与背景技术中所给出的三篇现有技术文献进行比较，现有技术文献分别为公开号为cn 104258470 a、公开号为cn 105879124 a和公开号为cn 102911380 a的专利文献；4）抑制炎症效果评价；等级分为a-炎症痊愈、b-炎症部分痊愈、c-炎症无变化；5）以小鼠实验，验证多糖复合凝胶的吸收代谢时间；6）以小鼠实验，确定不良反应。
106.上述5）、6）的小鼠实验，具体操作为：局部注射反应评价：选择spf级wistar大鼠进行试验，雌雄各半，重量约为180-230g。取45只大鼠，平均分为9组，每组5只，每组分别注射实施例3-实施例31以及对比例1-对比例3（即背景技术中所给出的公开号为cn 104258470 a、公开号为cn 105879124 a和公开号为cn 102911380 a的专利文献）所给出的凝胶或填充剂。注射方法如下：取0.5ml凝胶或填充剂，分别以注射方式植入大鼠背部皮下，感受注射过程中注射器推挤的难易程度，一周后观察是否有红肿、皮下结节等不良反应出现。
107.3、效果验证及效果数据统计如下表1所示。
108.从表1中可以看出，对比例1-3的动力粘度明显高于实施例3-31，交联剂用量也明显大于实施例3-31，同时炎症抑制效果较差、不良反应严重。
109.以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。