用于通过原位杂交进行核酸的多路复用检测的方法与流程

技术特征：
1.一种检测多种靶核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(e)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；(f)从与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组裂解所述标记；(g)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(h)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；其中检测到多种靶核酸。2.如权利要求1所述的方法，其中所述方法还包括：(i)从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组裂解所述标记；(j)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且
其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及(k)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。3.如权利要求2所述的方法，所述方法包括重复步骤(i)至(k)一次或多次。4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。6.如权利要求5所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna (mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。8.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。9.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。10.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置扩增子杂交；(e)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。11.如权利要求10所述的样品，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记被裂解。12.如权利要求11所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增
子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。13.如权利要求12所述的样品，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。14.如权利要求13所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。15.如权利要求10-14中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。16.如权利要求10-15中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。17.如权利要求16所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。18.如权利要求10-17中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。19.如权利要求10-17中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。20.如权利要求10-17中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。21.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，
其中所述扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置扩增子杂交；(e)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。22.如权利要求21所述的载玻片，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记被裂解。23.如权利要求22所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。24.如权利要求23所述的载玻片，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。25.如权利要求24所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。26.如权利要求21-25中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。27.如权利要求21-26中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。28.如权利要求27所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna (mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。29.如权利要求21-28中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织
样本。30.如权利要求21-28中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。31.如权利要求21-28中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。32.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(b)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(c)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(d)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组。33.如权利要求32所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。34.如权利要求32或33所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。35.如权利要求34所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。36.如权利要求32-35中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含裂解剂以从所述标
记探针裂解所述可裂解的标记。37.如权利要求32-36中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。38.一种检测多种核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置前置扩增子组接触，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点；(c)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(d)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(e)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(f)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；(g)从与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组裂解所述标记；(h)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(i)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；
其中检测到多种靶核酸。39.如权利要求38所述的方法，其中所述方法还包括：(j)从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组裂解所述标记；(k)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及(l)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。40.如权利要求39所述的方法，所述方法包括重复步骤(j)至(l)一次或多次。41.如权利要求38-40中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。42.如权利要求38-41中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。43.如权利要求42所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。44.如权利要求38-43中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。45.如权利要求38-43中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。46.如权利要求38-43中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。47.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的前置前置扩增子对杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增
子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。48.如权利要求47所述的样品，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记被裂解。49.如权利要求48所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；并且其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。50.如权利要求49所述的样品，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。51.如权利要求50所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。52.如权利要求47-51中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。53.如权利要求47-52中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。54.如权利要求53所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。
55.如权利要求47-54中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。56.如权利要求47-54中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。57.如权利要求47-54中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。58.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的前置前置扩增子对杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。59.如权利要求58所述的载玻片，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记被裂解。60.如权利要求59所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之
间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；并且其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。61.如权利要求60所述的载玻片，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。62.如权利要求61所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。63.如权利要求58-62中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。64.如权利要求58-63中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。65.如权利要求64所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。66.如权利要求58-65中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。67.如权利要求58-65中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。68.如权利要求58-65中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。69.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点；(b)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增
子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(e)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组；并且。70.如权利要求69所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。71.如权利要求69或70所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。72.如权利要求71所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。73.如权利要求69-72中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含裂解剂以从所述标记探针裂解所述可裂解的标记。74.如权利要求69-73中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。75.一种检测多种靶核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置前置扩增子组接触，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点；
(c)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(d)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(e)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(f)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；(g)从与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组裂解所述标记；(h)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(i)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；其中检测到多种靶核酸。76.如权利要求75所述的方法，其中所述方法还包括：(j)从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组裂解所述标记；(k)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及
(l)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。77.如权利要求76所述的方法，所述方法包括重复步骤(j)至(l)一次或多次。78.如权利要求75-77中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。79.如权利要求75-78中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。80.如权利要求79所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。81.如权利要求75-80中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。82.如权利要求75-80中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。83.如权利要求75-80中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。84.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置前置扩增子杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。85.如权利要求84所述的样品，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针
组的所述标记被裂解。86.如权利要求85所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。87.如权利要求86所述的样品，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。88.如权利要求87所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。89.如权利要求84-88中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。90.如权利要求84-89中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。91.如权利要求90所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。92.如权利要求84-91中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。93.如权利要求84-91中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。94.如权利要求84-91中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。95.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所
述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置前置扩增子杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。96.如权利要求95所述的载玻片，其中与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记被裂解。97.如权利要求96所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。98.如权利要求97所述的载玻片，其中来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记被裂解。99.如权利要求98所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个
的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。100.如权利要求95-99中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。101.如权利要求95-100中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。102.如权利要求101所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。103.如权利要求95-102中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。104.如权利要求95-102中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。105.如权利要求95-102中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。106.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点；(b)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(e)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标
记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组。107.如权利要求106所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。108.如权利要求106或107所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。109.如权利要求108所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。110.如权利要求106-109中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含裂解剂以从所述标记探针裂解所述可裂解的标记。111.如权利要求106-110中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。112.一种检测多种靶核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(e)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；
(f)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组中除去所述标记；(g)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(h)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；其中检测到多种靶核酸。113.如权利要求112所述的方法，其中所述方法还包括：(i)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组中除去所述标记；(j)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及(k)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。114.如权利要求113所述的方法，所述方法包括重复步骤(i)至(k)一次或多次。115.如权利要求112-114中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。116.如权利要求112-115中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。117.如权利要求116所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。118.如权利要求112-117中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。119.如权利要求112-117中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血
液样品。120.如权利要求112-117中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。121.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置扩增子杂交；(e)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。122.如权利要求121所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记。123.如权利要求122所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。124.如权利要求123所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除
去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记。125.如权利要求124所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。126.如权利要求121-125中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。127.如权利要求121-126中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。128.如权利要求127所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。129.如权利要求121-128中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。130.如权利要求121-128中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。131.如权利要求121-128中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。132.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置扩增子杂交；(e)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述
标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。133.如权利要求132所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记，从而除去所述标记。134.如权利要求133所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。135.如权利要求134所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记，从而除去。136.如权利要求135所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。137.如权利要求132-136中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。138.如权利要求132-137中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。139.如权利要求138所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。140.如权利要求132-139中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于
组织样本。141.如权利要求132-139中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。142.如权利要求132-139中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。143.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(b)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(c)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(d)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组。144.如权利要求143所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。145.如权利要求143或144所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。146.如权利要求145所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同
靶核酸特异性地杂交的靶探针。147.如权利要求143-146中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。148.一种检测多种核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置前置扩增子组接触，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点；(c)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(d)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(e)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(f)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；(g)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组中除去所述标记；(h)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子
与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(i)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；其中检测到多种靶核酸。149.如权利要求148所述的方法，其中所述方法还包括：(j)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组中除去所述标记；(k)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及(l)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。150.如权利要求149所述的方法，所述方法包括重复步骤(j)至(l)一次或多次。151.如权利要求148-150中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。152.如权利要求148-151中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。153.如权利要求152所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。154.如权利要求148-153中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。155.如权利要求148-153中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。156.如权利要求148-153中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。157.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针
对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的前置前置扩增子对杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。158.如权利要求157所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记。159.如权利要求158所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；并且其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。160.如权利要求159所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记。161.如权利要求160所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组
对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。162.如权利要求157-161中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。163.如权利要求157-162中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。164.如权利要求163所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna (mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。165.如权利要求157-164中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。166.如权利要求157-164中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。167.如权利要求157-164中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。168.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与相应的前置前置扩增子对杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于
所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。169.如权利要求168所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记。170.如权利要求169所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；并且其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。171.如权利要求170所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记。172.如权利要求171所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。173.如权利要求168-172中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。174.如权利要求168-173中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。175.如权利要求174所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的
组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。176.如权利要求168-175中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。177.如权利要求168-175中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。178.如权利要求168-175中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。179.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子组包含对所述靶探针组的靶探针对中的每个具有特异性的一对前置前置扩增子，其中所述前置前置扩增子对的每个前置前置扩增子包含用于靶探针组的靶探针对的靶探针中的一个的结合位点，并且其中所述前置前置扩增子包含用于前置扩增子的多个结合位点；(b)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含多个前置扩增子，其中所述多个前置扩增子包含对每对前置前置扩增子具有特异性的前置扩增子，其中每个前置扩增子包含用于所述前置前置扩增子组的前置前置扩增子对中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子具有特异性的多个扩增子亚组，所述每个前置扩增子对每对前置前置扩增子具有特异性，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于对一对前置前置扩增子具有特异性的所述前置扩增子中的一个的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(e)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的并且其中所述标记是可裂解的，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组；并且。180.如权利要求179所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探
针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。181.如权利要求179或180所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。182.如权利要求181所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。183.如权利要求179-182中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。184.一种检测多种靶核酸的方法，所述方法包括：(a)使包含含有多种核酸的细胞的样品与多个靶探针组接触，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(b)使所述样品与前置前置扩增子组接触，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点；(c)使所述样品与前置扩增子组接触，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(d)使所述样品与扩增子组接触，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(e)使所述样品与第一标记探针组接触，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；(f)检测与所述靶核酸结合的所述第一标记探针组的标记探针，从而检测所述第一靶核酸亚组；(g)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第一靶核
酸亚组结合的所述第一标记探针组中除去所述标记；(h)使所述样品与第二标记探针组接触，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组；以及(i)检测与所述靶核酸结合的所述第二标记探针组的标记探针，从而检测所述第二靶核酸亚组；其中检测到多种靶核酸。185.如权利要求184所述的方法，其中所述方法还包括：(j)在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品，从而从与所述第二靶核酸组结合的所述第二标记探针组中除去所述标记；(k)使所述样品与第三标记探针组接触，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组；以及(l)检测与所述靶核酸结合的所述第三标记探针组的标记探针，从而检测所述第三靶核酸亚组。186.如权利要求185所述的方法，所述方法包括重复步骤(j)至(l)一次或多次。187.如权利要求184-186中任一项所述的方法，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。188.如权利要求184-187中任一项所述的方法，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。189.如权利要求188所述的方法，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。190.如权利要求184-189中任一项所述的方法，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。191.如权利要求184-189中任一项所述的方法，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。
192.如权利要求184-189中任一项所述的方法，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。193.一种固定和/或透化细胞的样品，所述样品包含：(a)至少一个含有多种靶核酸的固定和/或透化细胞；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与对所述靶探针组具有特异性的相应前置前置扩增子杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。194.如权利要求193所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记。195.如权利要求194所述的样品，所述样品包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚
组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。196.如权利要求195所述的样品，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记。197.如权利要求196所述的样品，所述样品包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。198.如权利要求193-197中任一项所述的样品，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。199.如权利要求193-198中任一项所述的样品，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。200.如权利要求199所述的样品，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。201.如权利要求193-200中任一项所述的样品，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。202.如权利要求193-200中任一项所述的样品，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。203.如权利要求193-200中任一项所述的样品，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。204.一种载玻片，所述载玻片包含：(a)其上固定有包含至少一个含有靶核酸的固定和/或透化细胞的多个固定和/或透化细胞的载玻片；(b)多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针；(c)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点，其中所述前置前置扩增子与相应的特异性靶探针对杂交；(d)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点，其中所述前置扩增子与对所述靶探针组具有特异
性的相应前置前置扩增子杂交；(e)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点，其中所述扩增子与相应的前置扩增子杂交；(f)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第一靶核酸亚组；其中所述杂交在所述第一靶核酸亚组上提供可检测的标记。205.如权利要求204所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去与所述第一靶核酸亚组结合的所述第一标记探针组的所述标记。206.如权利要求205所述的载玻片，所述载玻片包含第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第二靶核酸亚组，所述第二靶核酸亚组不同于所述第一靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第二靶核酸亚组上提供可检测的标记。207.如权利要求206所述的载玻片，其中通过在高于所述标记探针与扩增子之间的解链温度且低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度的温度下孵育所述样品来除去来自与所述第二靶核酸亚组结合的所述第二标记探针组的所述标记。208.如权利要求207所述的载玻片，所述载玻片包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探
针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组与相应的扩增子杂交并特异性地标记与所述多个靶探针组杂交的第三靶核酸亚组，所述第三靶核酸亚组不同于所述第一和第二靶核酸亚组，其中所述杂交在所述第三靶核酸亚组上提供可检测的标记。209.如权利要求204-208中任一项所述的载玻片，其中每个靶探针组包含两对或更多对与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。210.如权利要求204-209中任一项所述的载玻片，其中所述靶核酸独立地是dna或rna。211.如权利要求210所述的载玻片，其中为rna的所述靶核酸独立地选自由以下组成的组：信使rna(mrna)、微小rna(mirna)、核糖体rna(rrna)、线粒体rna和非编码rna。212.如权利要求209-211中任一项所述的载玻片，其中所述样品是组织样本或来源于组织样本。213.如权利要求209-211中任一项所述的载玻片，其中所述样品是血液样品或来源于血液样品。214.如权利要求209-211中任一项所述的载玻片，其中所述样品是细胞样品或来源于细胞样品。215.一种用于靶核酸的原位检测的试剂盒，所述试剂盒包含：(a)前置前置扩增子组，其中所述前置前置扩增子组包含多个前置前置扩增子，其中所述多个前置前置扩增子包含对每个靶探针组具有特异性的前置前置扩增子，其中每个前置前置扩增子包含用于所述靶探针组中的一个的靶探针对的结合位点和用于前置扩增子的多个结合位点；(b)前置扩增子组，其中所述前置扩增子组包含对每个前置前置扩增子具有特异性的多个前置扩增子亚组，其中每个前置扩增子亚组包含多个前置扩增子，其中前置扩增子亚组的所述前置扩增子包含用于对靶探针组具有特异性的所述前置前置扩增子中的一个的结合位点和用于扩增子的多个结合位点；(c)扩增子组，其中所述扩增子组包含对每个前置扩增子亚组具有特异性的多个扩增子亚组，其中每个扩增子亚组包含多个扩增子，其中扩增子亚组的所述扩增子包含用于所述前置扩增子亚组中的一个的所述前置扩增子的结合位点和用于标记探针的多个结合位点；(d)第一标记探针组，其中所述第一标记探针组包含多个第一标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个中的所述标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第一标记探针亚组中的所述标记在所述第一标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第一标记探针组能够特异性地标记第一靶核酸亚组；(e)第二标记探针组，其中所述第二标记探针组包含多个第二标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一标记探针亚组相比，所述第二标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的所述标记探针包含标
记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第二标记探针亚组中的所述标记在所述第二标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第二标记探针组能够特异性地标记与所述第一靶核酸亚组不同的第二靶核酸亚组。216.如权利要求215所述的试剂盒，所述试剂盒还包含第三标记探针组，其中所述第三标记探针组包含多个第三标记探针亚组，其中每个标记探针亚组对所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子具有特异性，其中与所述第一和第二标记探针亚组相比，所述第三标记探针亚组对不同扩增子亚组的扩增子具有特异性，其中每个标记探针亚组包含多个标记探针，其中所述标记探针亚组中的每个的标记探针包含标记和用于所述扩增子亚组中的一个的所述扩增子的结合位点，其中每个第三标记探针亚组中的所述标记在所述第三标记探针亚组之间是可区分的，并且其中所述标记探针与所述扩增子之间的解链温度低于所述靶探针、前置前置扩增子、前置扩增子与扩增子之间的解链温度，并且其中所述第三标记探针组能够特异性地标记与所述第一和第二靶核酸亚组不同的第三靶核酸亚组。217.如权利要求215或216所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含一个或多个靶探针组，其中每个靶探针组包含一对与靶核酸特异性地杂交的靶探针。218.如权利要求217所述的试剂盒，其中每个靶探针组包含两对或更多对能够与相同靶核酸特异性地杂交的靶探针。219.如权利要求215-218中任一项所述的试剂盒，其中所述试剂盒包含用于透化细胞的至少一种试剂。

技术总结
本发明涉及通过使包含细胞的样品同与靶核酸特异性地杂交的靶探针组、与对每个靶探针组具有特异性的前置扩增子或前置前置扩增子、与对所述前置扩增子具有特异性的扩增子以及与对所述扩增子具有特异性的标记探针接触从而产生多种靶核酸的特异性标记来进行多种靶核酸的多路复用检测的方法。本发明还涉及与多种靶核酸的检测有关的样品、载玻片和试剂盒。载玻片和试剂盒。载玻片和试剂盒。


技术研发人员：X-J.马 B.张 L-c.王 H.卢 L.王 H.宗
受保护的技术使用者：领先细胞医疗诊断有限公司
技术研发日：2020.02.14
技术公布日：2022/5/31