离子水性组合物的制作方法

离子水性组合物
1.本技术是申请日为2014年11月28日、优先权日为2013年12月3日、发明名称为“离子水性组合物”的中国专利申请201480065988.8的分案申请。
技术领域
2.本发明涉及用于鼻施用的组合物和治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症的方法。


背景技术：

3.鼻窦疾病影响美国至少15％的人群，具有可预见的患者发病率和财政影响。重要的是，任何可以缓解鼻窦疾病的模式要求认真的关注。在这种背景中所采用的各种治疗中，鼻冲洗被认为是可以与现有处方药如类固醇、抗组胺药、血管收缩剂和其它药物联合应用的或作为帮助缓解鼻窦症状如鼻堵塞、鼻漏等的治疗模式的一部分的简单、便宜和有益的途径。
4.鼻通道的主要功能是调节呼吸空气流、加热和润湿吸入的空气和消除外来元素(灰尘、微生物病菌)。覆盖鼻粘膜的纤毛上皮在防御感染方面发挥重要作用。该上皮的颤动纤毛浸入它们周围的保护性粘液中，它们的目的是通过它们的运动推动该粘液以及任何外来杂质向后、即朝着咽的方向。
5.目前可获得的用于冲洗鼻通道的基于海水的组合物通常被制备成与鼻粘液等渗。这些组合物通常由海水与去离子水的混合物组成，该混合物中的海水的体积分数为约1/3。或者，组合物由增加的海水体积分数组成，产生高渗溶液。这些据信由于与等渗溶液相比产生了允许更有效的粘液除去的渗透梯度而具有较好的冲洗性质。
6.然而，尽管它们广泛用于冲洗和症状性缓解鼻窦病症，但是这些溶液(通常包装成气雾喷雾器的形式)提供了很少的对抗病因的治疗益处或没有对抗病因的治疗益处。而且，在其中给海水组合物补充被认为改善其作用的另外成分如外源性盐、防腐抗细菌剂、氨基酸、精油等物质的情况中，它们由于各种因素遭受到有限的工业实用性。这些包括所添加成分的差的水溶性、标签限制和/或烧灼感(例如在精油的情况中；根据who指南，这些不能用于儿童)、所添加成分与(高渗)溶液中存在的高含盐量的有限的相容性、成本增加或其它限制。
7.为此原因，寻求具有改善的效力和可忽略不计的副作用的较好的海水和/或盐水溶液。


技术实现要素：

8.发明简述
9.如下文所述，本发明表征了用于鼻施用的组合物和治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症的方法。
10.在一个方面，组合物包含离子水性溶液和平均分子量高于4kda且包含l-岩藻糖和
硫酸酯基团的硫酸多糖。在一项实施方案中，组合物被配制成用于鼻施用。
11.在一项实施方案中，硫酸多糖来源于由褐藻分离的提取物。在另一项实施方案中，褐藻是裙带菜(undaria pinnafitida)。在另一项实施方案中，硫酸多糖是岩藻依聚糖。在另一项实施方案中，硫酸多糖为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。
12.在另一项实施方案中，组合物还包含蓝/绿藻提取物，例如由钝顶螺旋藻(spirulina platensis)分离的提取物。在一项实施方案中，蓝/绿藻提取物为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。
13.在另一项实施方案中，组合物还包含平均分子量高于约15kda的硫酸化的基于半乳糖的多糖。在一项实施方案中，基于半乳糖的多糖是角叉菜胶。在另一项实施方案中，角叉菜胶选自ι-角叉菜胶、κ-角叉菜胶和λ-角叉菜胶。在特定实施方案中，角叉菜胶是ι-角叉菜胶。
14.在另一项实施方案中，基于半乳糖的多糖来源于由红藻分离的提取物。在另一项实施方案中，基于半乳糖的多糖是来源于由星芒杉藻(gigartina stellata)或皱波角叉菜(chondrus chrispus)分离的红藻提取物的ι-角叉菜胶。在另一项实施方案中，基于半乳糖的多糖是来源于由耳突卡帕藻(kappaphycus cottonii)分离的红藻提取物的κ-角叉菜胶。在一项实施方案中，红藻选自星芒杉藻、皱波角叉菜、耳突卡帕藻。在另一项实施方案中，基于半乳糖的多糖为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。在另一项实施方案中，组合物包含平均分子量高于约15kda的硫酸化的基于半乳糖的多糖和蓝/绿藻提取物。
15.在另一项实施方案中，离子水性溶液包括海水。在特定实施方案中，海水包括未稀释的海水。在特定实施方案中，海水包括(即用后面的物质稀释)纯化水、蒸馏水、去离子水和过滤水中的至少一种。在另一项实施方案中，离子水性溶液包括盐水。在另一项实施方案中，离子水性溶液包括组合物的约10至约99.9％重量含量。
16.在另一项实施方案中，组合物对于等渗具有约250-350mosm/l的摩尔渗透压浓度值，对于高渗具有高于约350mosm/l的摩尔渗透压浓度值，对于低渗具有低于约250mosm/l的摩尔渗透压浓度值。在另一项实施方案中，组合物还包含外源性盐、抗微生物剂、氨基酸和精油中的至少一种。
17.在另一方面，提供了组合物在制备用于缓解呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症的药剂或产品中的用途。在一项实施方案中，组合物被配制成用于鼻施用。在另一项实施方案中，该用途是用于选自如下的呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症：急性和慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它呼吸道疾病。
18.在另一方面，提供了包含离子水性溶液和褐藻提取物的用于鼻施用的组合物。在一项实施方案中，褐藻提取物为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。在另一项实施方案中，组合物还包含蓝/绿藻提取物。在特定实施方案中，蓝/绿藻提取物为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。在另一项实施方案中，组合物还包含红藻提取物。在一项特定的实施方案中，红藻提取物为组合物的约0.1至约10％重量含量的范围。在另一项实施方案中，离子水性溶液包含海水或盐水溶液中的至少一种。在另一项实施方案中，组合物还包含外源性盐、抗微生物剂、氨基酸和精油中的至少一种。在另一项实施方案中，组合物还包含皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂
和抗生素中的至少一种。在另一项实施方案中，组合物还包含至少一种植物提取物。在另一项实施方案中，组合物还包含至少一种水合剂。
19.在另一方面，提供了本文所述组合物的药物组合物。
20.在另一方面，用于治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症的药物组合物包含离子水性溶液、褐藻提取物和可药用载体或佐剂。在一项实施方案中，离子水性溶液包含海水或盐水溶液中的至少一种。在另一项实施方案中，呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症选自急性和慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它呼吸道疾病。在另一项实施方案中，药物组合物还包含蓝/绿藻提取物。在另一项实施方案中，药物组合物还包含外源性盐、抗微生物剂、氨基酸和精油中的至少一种。在另一项实施方案中，组合物还包含皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂和抗生素中的至少一种。
21.在另一方面，提供了用于在需要其的个体中治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症的方法，该方法通过将本文所述的药物组合物喷雾到个体的鼻通道来进行。在一项实施方案中，个体是人个体。在另一项实施方案中，呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症选自急性和慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它呼吸道疾病。在特定实施方案中，呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症是鼻窦炎。
22.在另一方面，提供了包含任选与使用说明书一起的本文所述的药物组合物的包装装置。在一项实施方案中，装置选自气雾剂分配器、气动加压装置、多剂量计量喷雾泵、吸入器、泵式喷雾器和喷洒器。
23.定义
24.除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语具有本发明所实施的领域的技术人员通常所理解的含义。如本文所用的下述术语具有下文所述的含义，另有指示除外。
[0025]“藻提取物”指来自藻细胞的任意级分或者分离或纯化分子。该提取物可包括蛋白质或糖蛋白或核酸。藻提取物的实例包括褐藻提取物(例如裙带菜)、蓝绿藻提取物(例如钝顶螺旋藻)和红藻提取物(例如星芒杉藻、皱波角叉菜和耳突卡帕藻)。
[0026]
"基于岩藻糖的多糖"包括岩藻聚糖硫酸酯、富含岩藻糖的硫酸多糖、含鼠李糖的硫酸多糖、半乳岩藻聚糖(galactofucan)等。术语"岩藻依聚糖"也可以用于描述来自褐色海草的基于岩藻糖的多糖以及其物理上、化学上和/或酶促衍生的形式。
[0027]
术语"基于半乳糖的多糖"包括通过α(1-3)和β(1-4)价键键合的d-半乳糖、角叉菜胶(ι-、κ-和λ-角叉菜胶，它们的结构和硫酸化度略有不同)、直链或支链的硫酸化的基于半乳糖的多糖等。术语"角叉菜胶"也可用于描述由红色可食用海草提取的基于半乳糖的多糖以及其物理上、化学上和/或酶促衍生的形式。
[0028]“呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症”指具有异常的鼻、支气管和肺粘膜粘液产生、分泌或清除或炎症(细菌性、病毒性、过敏性或自身免疫性)的任意病症或障碍。所述疾病的实例包括急性鼻窦炎、复发性急性鼻窦炎、亚急性鼻窦炎、慢性鼻窦炎、慢性鼻窦炎急性加重、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它上呼吸道和下呼吸道疾病。
[0029]
"物质"或"剂"指任意的化学合成或来源于天然来源(例如植物提取物)的小分子化合物或其混合、抗体、核酸分子或多肽或其片段。
[0030]“缓解”指减轻、抑制、减弱、消退、阻止或稳定疾病的发展或进程。
[0031]
在本公文本文中，"包含"、"含有"、"含"和"具有"等具有美国专利法中对它们所述的含义，并且可以指"包括"等；"基本由
……
组成"同样具有美国专利法中对它们所述的含义，该术语是开放式的，允许存在不止是述及的那些，只要述及的物质的基本特征或新特征不被不止是述及那些的存在所改变，但是排除现有技术的实施方案。
[0032]
"有效量"指缓解未经治疗患者的鼻窦炎的症状所要求的本发明的组合物的量。用于实施本发明来治疗性处置鼻窦炎的活性化合物的有效量根据施用方式、对象的年龄、体重和一般健康而异。最后，参与医师或兽医将决定适当的量和剂量方案。这类量称为"有效"量。
[0033]
生物体如藻种属的“级分”是任意分离或纯化的分子或分子复合物。级分可以通过本领域已知的任意方法获得，通过所述任意方法从细胞分离或纯化分子，例如通过提取或超速离心。在特定实例中，藻级分是通过提取藻细胞、然后进一步分离具有特定分子量范围或尺寸的分子而获得的。在特定实例中，级分是液体形式。在其它实例中，级分是固体形式，例如干燥形式。在另一个实例中，级分可以被配制成喷雾化颗粒。
[0034]
术语"分离"、"纯化"或"生物学纯"指在不同程度上不含如同在其天然状态中所发现的那样通常伴随它的组分。"分离"指从原始来源或周围分离的程度。"纯度"指高于分离的分开程度。"纯化"或"生物纯"多糖足够地不含其它物质，以便任意杂质不实质上影响多糖的生物学作用或引起其它不利后果。换言之，如果当本发明的多糖被分离或化学合成时基本上不含细胞或其它物质的话，则它是纯化的。纯度和均匀度通常采用分析化学技术进行测定，例如电泳和薄层色谱法。术语"纯化"可以指通过除去蛋白质和/或dna而在多糖中富含的物质。
[0035]
如本文所用的在“获得物质”中的“获得”包括合成、购买或以其它方式取得物质。
[0036]
如本文所用的术语“预防”、“阻止”、“预防性处置”等指在没有发生呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症、例如鼻窦炎或炎性病症、但是处于发生该病症的风险中或易患该病症的个体中降低发生该病症的可能性。
[0037]“降低”指负性改变至少10％、25％、50％、75％或100％。
[0038]
"个体"指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，例如牛族动物、马科动物、犬科动物、羊(ovine)或猫科动物。
[0039]
本文提供的范围理解为该范围内所有数值的缩写。例如，1-50的范围被理解为包括来自由1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50组成的组的任意数字、数字组合或亚组。
[0040]
如本文所用的术语“治疗”等指减少或缓解障碍和/或相关症状。可以理解，虽然未排除，但是治疗障碍或病症不要求该障碍、病症或相关症状被完全消除。
[0041]
除非具体说明或从本文清楚看出，否则如本文所用的术语"或"被理解为是包含性的。除非具体说明或从本文清楚看出，否则如本文所用的术语"一个"、"一种"和"该"等被理解为单数或复数。
[0042]
除非具体说明或从本文清楚看出，否则如本文所用的术语“约”被理解为在本领域的正常容许范围内，例如在平均值的2个标准偏差内。约可以理解为在所述值的10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.1％、0.05％或0.01％。除非在其它方面从本文清楚，否则本文提供的所有数值被术语约所修饰。
[0043]
如本文所用的“％重量含量”指％w/w。本文提及的所有百分比数值是％w/w，另有指示除外。
[0044]
如本文所用的与参比制剂相关的“基本上类似的组合物”指具有与参比相同浓度的相同组分的制剂或者其中任意组分的浓度与参比以非实质的方式不同的制剂。
[0045]
本文的变量的任意定义中的化学基团名单包括作为任意单个基团或所列基团的组合而变的定义。对本文的变量或方面所述的实施方案包括任意单个实施方案或其与任意其它实施方案或其部分组合的实施方案。
[0046]
本文提供的任意组合物或方法可以与一个或多个本文提供的任意其它组合物或方法组合。
附图说明
[0047]
图1给出了在采用由正常人供体分离的细胞的三维重建人气道上皮模型中对il-8分泌测试制剂1-4和各种对照后获得的数据(参见实施例1)。
[0048]
图2给出了在采用由人过敏性供体分离的细胞的三维重建人气道上皮模型中对粘膜纤毛清除(a板)、il-8分泌(b板)和纤毛摆动频率(c板)测试制剂1和各种对照后获得的数据(参见实施例2)。
具体实施方式
[0049]
发明详述
[0050]
本发明提供了基于海水的组合物。具有非常丰富的、容易通过天然生长的生物体分离的、本质上与海水和/或所有类型的摩尔渗透压浓度的盐水溶液相容的和被公认为安全的成分的组合物被特别请求用于开发具有改善的效力和可忽略不计的副作用的新溶液。本文所述的组合物被认为满足了所有这些条件。
[0051]
组合物可以用作鼻通道冲洗液以帮助鼻粘膜水肿的吸收和/或用于治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症如慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性鼻炎、鼻息肉和其它鼻病症和/或鼻、支气管和呼吸系统粘膜的炎性病症。组合物包括离子水性溶液和衍生自藻的组分、例如平均分子量高于4kda且包含l-岩藻糖和硫酸酯基团的硫酸多糖。硫酸多糖可以是直链或支链的。
[0052]
组合物可以以鼻喷雾的形式(或者以用于吸入的气雾/喷洒形式)应用于患有由各种物质(例如细菌来源的物质、病毒、细菌、刺激物、变应原等)引起的影响鼻、支气管和肺粘膜的各种炎性和其它病症的患者。炎性病症的一些非限制性实例包括：急性和慢性鼻窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)、其它呼吸道疾病等。
[0053]
组合物
[0054]
本文描述了意欲施用于呼吸道和通过呼吸道、例如经鼻施用的组合物、例如基于海水的组合物。该组合物可包括之前过滤的、纯化的和灭菌的海水与基于藻的组分的混合
物。在一个方面，本发明提供了含有离子水性溶液和藻如褐藻提取物的组合物。下文进一步描述了海水、包括离子水性溶液如盐水或海水溶液和来源于藻的组分的组合物。
[0055]
离子水性溶液
[0056]
本发明的组合物可以包括过滤和/或灭菌的离子水性溶液。离子水性溶液可以被分为两个不同的类别：盐水溶液和海水溶液。
[0057]
以前已经记载了海水灭菌。ep 0909184还描述了在康卡勒海港(cancale bay)收集的海水中存在的镁、钙、钾、锌和铜的相对百分比。在相同区域的另外位置(saint malo)也可以用作海水来源，参见fr2915389。所收集的海水可以用纯化/过滤/去离子水稀释至不同的程度或者用于选择性电透析以改变不同的离子浓度，还参见wo/2012/110665。
[0058]
盐水溶液可以指包含各种浓度的氯化钠(nacl)的水性溶液，包括：(1)标准或等渗盐水溶液：含有约0.9％w/v nacl和摩尔渗透压浓度为约300mosm/l的溶液；(2)低渗盐水溶液，含有低于约0.9％nacl和低于约300mosm/l的nacl，参见例如us 8,337,906；和(3)高渗盐水溶液，含有高于约0.9％nacl和高于约300mosm/l的nacl。例如，3％和5％nacl的溶液将分别具有约1000mosm/l和约1700mosm/l的摩尔渗透压浓度。
[0059]
盐水溶液可以包括另外的盐，例如其非限制性的实例有死海(dead sea)盐和抗氧化剂，如us 7,541,052所示例，还参见us 6,528,081。任选的另外成分可以包括如us 5,622,724中所示例的锌、铜、锰、镁和其它金属离子、抗微生物剂、精油等，还参见wo/2003/015746和wo/2012/110665。这些溶液可以采用各种缓冲剂调节ph，即，调节至生理水平(ph 7-8)。盐水溶液还可以包括高渗(us7,541,052)或低渗盐水溶液。
[0060]
海水溶液可以指三种溶液类型：(1)未稀释的海水；(2)稀释的海水；和(3)离子含量/摩尔渗透压浓度改变的海水。
[0061]
未稀释的海水含有多种成分，参见下表1；这些包括各种盐、矿物质和痕量元素。应当注意，海水的离子含量/强度以两种方式测定：作为氯化钠当量或经由直接测定摩尔渗透压浓度(例如约1000mosm/l)。
[0062]
在前者中，nacl当量采用诸如volhard法进行计算。在这种情况中，该方法沉淀出海水中的所有氯(“卤化物”如cl的na、k、ca、mg盐)和将它们转化为nacl的百分比。因此，未稀释的海水具有约3.1-3.8％w/v nacl(取决于海水的来源)。
[0063]
关于纯海水的摩尔渗透压浓度测定，应当注意，约1000mosm/l值的不同离子的贡献(mosm)为：na:459、k:10、ca:10、mg:53、cl:538。在这种情况中所用的海水通常在使用前过滤或灭菌以除去/消除微生物。
[0064]
海水可以用纯化/蒸馏/去离子/过滤水稀释至不同的程度。根据稀释因子，溶液可以被制成是低渗的、等渗的或与未稀释的海水相比是逐渐较不高渗的。例如，ep 0908184中描述了7:3稀释，该文献整体引入本文作为参考。这导致了包含约2.3-2.5％nacl(当量)的高渗溶液。还可以进行另外的稀释以得到含有约0.9、2、2.6或3％nacl的溶液，参见例如us 4,581,226(还参见表1和3)。清楚的是，海水的摩尔渗透压浓度根据稀释而异。
[0065]
海水的离子浓度/摩尔渗透压浓度还可以通过化学手段被人工改变，例如进行电透析以特定地降低离子含量至预期的程度(例如至约0.9％nacl，使得溶液等渗)或至约2.2％(高渗)。ep 1091747或us2010/0151044(等渗)或wo/2008/037938和wo/2012/110665(高渗)中记载了该类别的典型溶液。
[0066]
稀释海水溶液和电透析海水溶液之间的区别是：除了具有不同的nacl百分比，在前者中海水成分被稀释，而在后者中它们保持与纯海水中相同。下文解释了该信息的关联性，还参见下表2和3，它们直接表了两种方法中的离子含量。应当指出，因为纯海水开始具有不同％的不同成分，所以在每种情况中溶液制备存在一些不同。
[0067]
表1:来自“handbook of chemistry and physics”,第63版,1982-1983,crc press的海水组成，还参见us2010/0151044的表a。
[0068]
[0069][0070]
表2:通过将海水稀释以特定地减少离子含量至预期程度而改变的离子含量/摩尔渗透压浓度
[0071][0072]
*纯海水的值取自langmuir(1997):aqueous environmental geochemistry:upper saddle river,prentice hall,inc.,600p
[0073]
**所描绘的值将根据海水来源改变5-10％
[0074]
***计算为nacl当量(volhard法)
[0075]
表3:通过电透析以特定地降低离子含量至预期程度而改变的离子含量/摩尔渗透压浓度
[0076][0077]
藻提取物
[0078]
本发明的组合物还可以包含藻提取物、例如由藻提取物获得的硫酸多糖。藻提取物可以由三种不同的藻获得：(1)褐藻；(2)蓝绿藻；(3)和红藻。
[0079]
褐藻提取物
[0080]
还提供了包括来自褐藻的提取物的组合物。褐藻提取物和一些海洋无脊椎动物(例如海胆和海参)富含硫酸多糖。由褐藻提取物获得的硫酸多糖可以具有高于约4kda的平均分子量。硫酸多糖可以是直链或支链的。硫酸多糖包括具有l-岩藻糖和硫酸酯基团的基于岩藻糖的多糖，例如岩藻依聚糖。岩藻依聚糖包括衍生自褐藻如裙带菜的那些或合成的岩藻依聚糖多糖如平均分子量为约1至2mda的高分子量岩藻依聚糖(hmwf)级分(例如kraeber，德国)和平均分子量为约8.2kda的低分子量岩藻依聚糖(lmwf)级分是有用的。
[0081]
特定的褐藻包括以下种属：胞链藻属(ascoseira)、马鞭藻属(cutleria)、microzonia、zanardinia、节枝藻属(arthrocladia)、酸藻属(desmarestia)、himantothallus、phaeurusm、网翼藻属(dictyopteris)、网地藻属(dictyota)、厚缘藻属(dilophus)、distromium、glossophora、homoeostrichus、匍扇藻属(lobophora)、lobospira、newhousia、厚网藻属(pachydictyon)、团扇藻属(padina)、褐舌藻属(spatoglossum)、棕叶藻属(stypopodium)、雀尾藻属(taonia)、圈扇藻属(zonaria)、scoresbyella、离果藻属(choristocarpus)、discosporangium、定孢藻属(acinetospora)、费氏藻属(feldmannia、geminocarpus、褐茸藻属(hincksia)、髭毛藻属(pogotrichum)、间囊藻属(pylaiella)、adenocystis、caepidium、utriculidium、顶毛藻属(acrothrix)、ascoseirophila、粗粒藻属(asperococcus)、austrofilum、索藻属(chordaria)、枝管藻(cladosiphon)、corycus、戴氏藻属(delamarea)、网管藻属(dictyosiphon)、短毛藻属(elachista)、真丝藻属(eudesme)、giraudia、gononema、褐毛藻属(halothrix)、haplogia、百丝藻属(hecatonema)、异形褐条藻属(heterosaundersella)、hummia、isthmoplea、带绒藻属(laminariocolax)、丝带藻属(laminarionema)、粘膜藻属(leathesia)、leptonematella、海管藻属(litosiphon)、小孢藻属(microspongium)、mikrosyphar、myelophycus、多条藻属(myriogloea)、多丝藻属(myrionema)、毛丝藻属(myriotrichia)、异丝藻属(papenfussiella)、海绵藻属(petrospongium)、pleurocladia、polytretus、proselachista、原水云属(protectocarpus)、点叶藻属(punctaria)、湿粘藻属
(sauvageaugloia)、soranthera、聚果藻属(sorocarpus)、spermatochnus、球毛藻属(sphaerotrichia)、stictyosiphon、扭线藻属(streblonema)、环囊藻属(striaria)、斯氏藻属(stschapovia)、面条藻属(tinocladia)、chordariopsis、asterocladon、水云属(ectocarpus)、库氏藻属(kuckuckia)、中孢藻属(mesospora)、asterotrichia、巴克藻属(bachelotia)、bifurcariopsis、durvillaea、囊叶藻属(ascophyllum)、墨角藻属(fucus)、西叶藻属(hesperophycus)、鹿角菜属(pelvetia)、拟鹿角菜属(pelvetiopsis)、silvetia、xiphosphora、himanthalia、hormosira、notheia、anthophycus、axillariella、双叉藻属(bifurcaria)、bifurcariopsis、carpoglossum、caulocystis、带球藻属(coccophora)、cystophora、囊链藻属(cystoseira)、长角藻属(halidrys)、hizikia、叶囊藻属(hormophysa)、囊链藻属(myagropsis)、myogropsis、myriodesma、马尾藻属(sargassum)、喇叭藻属(turbinaria)、cystophaera、marginariella、phyllospora、seirococcus、铁钉菜属(ishige)、厚岸藻属(akkesiphycus)、翅藻属(alaria)、aureophycus、druehlia、eualaria、hirome、拟巨藻属(lessoniopsis)、中肋藻属(pleurophycus)、带翅藻属(pterygophora)、裙带菜属(undaria)、undariella、undariopsis、绳藻属(chorda)、孔叶藻属(agarum)、多肋藻属(costaria)、网肋藻属(dictyoneurum)、thalassiophyllum、节枝藻属(arthrothamnus)、costularia、cymathere、feditia、gigantea、海带属(laminaria)、巨藻属(macrocystis)、腔囊藻属(nereocystis)、浮叶藻属(pelagophycus)、浮叶藻属(pelagophycus)、巨藻属(macrocystis)、phycocastanum、phyllariella、polyschidea、postelsia、pseudolessonia、saccharina、拟扭叶藻属(streptophyllopsis)、昆布属(ecklonia)、拟昆布属(eckloniopsis)、优秀藻属(egregia)、爱氏藻属(eisenia)、巨藻属(lessonia)、拟绳藻属(pseudochorda)、nemoderma、onslowia、verosphacella、neoralfsia、basispora、软胞藻属(hapalospongidion)、jonssonia、石皮藻属(lithoderma)、myrionemopsis、石皮藻属(petroderma)、porterinema、拟石皮藻属(pseudolithoderma)、褐壳藻属(ralfsia)、毛孢藻属(chnoospora)、囊藻属(colpomenia)、网胰藻属(hydroclathrus)、幅叶藻属(petalonia)、罗氏藻属(rosenvingea)、萱藻属(scytosiphon)、bodanella、空枝藻属(coelocladia)、heribaudiella、褐层藻属(phaeostroma)、asteronema、scytothamnus、stereocladon、splachnidium、边枝藻属(cladostephus)、黑顶藻属(sphacelaria)、sphacella、alethocladus、海翼藻属(halopteris)、硬茎藻属(stypocaulon)、austronereia、bellotia、果冠藻属(carpomitra)、encyothalia、海神藻属(nereia)、perisporochnus、perithalia、sporochnema、毛头藻属(sporochnus)、tomaculopsis、管皮藻属(syringoderma)、halosiphon、masonophycus、phyllariopsis、囊根藻属(saccorhiza)、斯氏藻属(stschapovia)、单孢藻属(haplospora)、phaeosiphoniella、线翼藻属(tilopteris)、neolepioneuma、analipus和褐枝藻属(phaeostrophion)。
[0082]
其它来源包括一些绿色海草和棘皮动物如海胆和海参。绿色海草的实例包括石莼属(ulva sp)、浒苔属(enteromorpha sp)、codium sp、蕨藻属(caulerpa sp)和halimala sp。
[0083]
包括基于岩藻糖的多糖的硫酸多糖可以包括来源于墨角藻(fucus vesiculosus)的提取物，主要含有岩藻糖、硫酸盐、灰分和痕量氨基葡萄糖。来自褐藻枯墨角藻
(f.evanescens c.ag)、f.distichus和齿缘墨角藻(f.serratus l.)的硫酸多糖主要包括岩藻糖、硫酸盐和乙酸盐。岩藻依聚糖包括f-岩藻依聚糖，其主要由岩藻糖的硫酸酯和u-岩藻依聚糖(由约20％葡糖醛酸组成)组成。一些硫酸多糖包括可替换的3-和4-连接的α-l-呋喃并吡喃糖2-硫酸酯残基等可以包括二糖重复单元。除了直链多糖外，高支化结构也被包括在衍生自昆布(e.kurome)或绳藻(chorda filum)的提取物中。
[0084]
用于本文所述的方法和组合物的硫酸多糖可以包括来自全植物或植物任意部分如叶、茎、芽孢或其组合的提取物。起始物质可以是新鲜的、冷冻的或干燥的物质。在过滤或透析后，提取物可以作为液体或干燥状态使用。通常，这类提取物包括至少约1％w/v至约100％w/v的基于岩藻糖的多糖。
[0085]
硫酸多糖通常具有约4kda至约5mda的平均分子量，包括约5、10、15、20、30、50、70、90、100、300、500、700、900、1000、2000、3000、4000和5000kda或在这些特定尺寸之间的平均分子量。
[0086]
硫酸多糖还包括专利申请wo/2011/100805中所述的岩藻依聚糖，参见例如可以用于mw(高于约4kda、包含各种岩藻依聚糖含量如约10-95％或更高的制备物)、可用于分离的种属、所用岩藻依聚糖的说明等相关信息。注意，实施例中所用的岩藻依聚糖衍生自裙带菜(水性)提取物，其包含高于约85％的岩藻依聚糖。
[0087]
在一项实施方案中，组合物包含约0.1％至约10％组合物重量含量的硫酸多糖或岩藻依聚糖。硫酸多糖或岩藻依聚糖在组合物中的范围可以是约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％和约0.1％至约1％组合物重量含量。在其它实施方案中，组合物包括至少约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更高％重量含量的硫酸多糖或岩藻依聚糖。
[0088]
蓝绿藻提取物
[0089]
本发明的组合物还可以包括来自蓝绿藻的提取物。蓝绿藻提取物富含蛋白质、维生素、矿物质和类胡萝卜素(可以帮助保护细胞免于损害的抗氧化剂)。提取物含有营养素、包括复合维生素b、β胡萝卜素、维生素e、锰、锌、铜、铁、硒和γ亚麻酸(一种必需脂肪酸)。蓝绿藻如aphanizomenon flos aquae(afa)或spirulina(arthrospira)在它们的提取物中具有高达约62％氨基酸。因为提取物富含蛋白质和其它营养素来源，所以它们已经被用于营养补充剂中。
[0090]
蓝绿藻如afa或spirulina(arthrospira)可以由任意来源分离。该来源可以是富含蓝绿藻的天然存在的来源。该来源还可以是人工制成的来源，例如人工湖或水源。该来源还可以是生物反应器或发酵器。该来源可以是为了在商业上生长和收获蓝绿藻而产生的环境。
[0091]
蓝绿藻提取物可以包括来自全藻或藻的任意部分的提取物。该提取物可以是被分级的。蓝绿藻提取物可以包括来自蓝绿藻细胞的任意级分或者分离或纯化的分子。将蓝绿藻断裂，加入无机或有机溶剂，收集提取物(或分子)。提取物的具体的非限制性实例是采用高效液相色谱法、薄层色谱法、亲和柱、磁珠或蒸馏而分离的。在一项实施方案中，基于蓝绿藻的分子量或分子疏水性采用分级分离来分离提取物。例如，提取物可以包括低于约50kda且不是50kda或更高的那些分子；低于约10kda且不是10kda或更高的那些分子；或低于约
5kda且不是5kda或更高的那些分子。
[0092]
蓝绿藻提取物、例如干燥形式的蓝绿藻提取物包含约0.5％至约5％组合物重量含量的蓝绿藻提取物。蓝绿藻提取物在组合物中的范围可以是约0.1％至约20％、约0.5％至约20％、约0.5％至约10％、约0.5％至约5％和约0.5％至约1％组合物重量含量。在一项实施方案中，组合物包括至少约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％或更多的蓝绿藻提取物重量含量。在示例性的实施方案中，蓝绿藻提取物为约0.1％至约10％的组合物的范围。
[0093]
红藻提取物
[0094]
所提供的组合物可以包含来自红藻的提取物。红藻含有具有通过α(1-3)和β(1-4)价键交替键合的d-半乳糖的硫酸多糖。这些基于半乳糖的多糖通过在α键合的(1-3)半乳糖残基上存在或不存在3,6-脱水桥和通过它们的硫酸化水平来加以区分。角叉菜胶是由红藻(红藻纲(rhodophyceae)或红色海草)中提取的直链或支链的硫酸化的基于半乳糖的多糖的通用术语。wo/2009/027057记载了这种情况中的实例。
[0095]
基于半乳糖的多糖或角叉菜胶的提取和生产方法可以衍生自野生红藻如含角叉菜胶的植物、例如gigartina radula、gigartina skottsbergii、gigartina chamissoi、星芒杉藻(gigartina stellata)、心形银杏藻(iridaea cordata)、皱波角叉菜(chondrus chrispus)和sarcothalia crispate，它们沿着尼龙绳播种和在大型水产农业操作中收获或由合成角叉菜胶生产中获得。从红藻中分离基于半乳糖的多糖是按照标准技术如stanley等人的美国专利3,094,517中所述进行的。角叉菜胶从干净的藻中提取，同时还通过将藻放入通过添加低浓度碱盐而制成略微碱性的溶液(例如，溶液的ph被升至例如9-10的范围)中和然后将该溶液加热至约80℃的温度达约20分钟至长达2小时的时间进行碱修饰。
[0096]
存在10种以上结构不同的角叉菜胶，它们的性质取决于提取它们的藻的种属。三种主要类型是ι-、κ-和λ-角叉菜胶，它们的性质和硫酸化度略微不同。ι-角叉菜胶是形成软性凝胶的硫酸化的基于半乳糖的多糖，其主要由红色海草星芒杉藻(gigartina stellata)和皱波角叉菜(chondrus crispus)提取。κ-角叉菜胶产生强刚性凝胶，主要由耳突卡帕藻(kappaphycus cottonii)产生。λ-角叉菜胶是最常见的形式，经常用于乳产品的增稠。
[0097]
基于半乳糖的多糖可以具有约15kda至5mda的分子量和平均分子量为高于50kda的级分、尤其是平均分子量为50kda至3mda的级分。基于半乳糖的多糖还包括专利申请wo/2009/027057中记载的角叉菜胶，例如参见相关信息。
[0098]
在一项实施方案中，组合物包含约0.1％至约10％组合物重量含量的基于半乳糖的多糖或角叉菜胶。基于半乳糖的多糖或角叉菜胶在组合物中的范围可以是约0.1％至约20％、约0.1％至约10％、约0.1％至约5％和约0.1％至约1％组合物重量含量。在其它实施方案中，组合物包括至少约0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％重量含量或更多的基于半乳糖的多糖或角叉菜胶。
[0099]
藻提取
[0100]
如本文提供的藻提取物可以由新鲜的、脱水的或可保存(preserved)的藻或海产细胞提取。藻可以在任意水性溶液中、例如用水或适宜的缓冲盐水溶液或其它溶剂如乙醇
和甲醇和dmso提取。提取物还可以通过任意其它适宜的方法来产生。提取后，将提取物干燥，如上文所述的那样。藻提取物可以直接进行使用，或者可以作为液体、冷冻液体、脱水的、冻干的、真空干燥的、滚筒干燥的细胞或喷雾干燥的细胞储存。
[0101]
在一项实施方案中，提取物进行过滤以分离出不同尺寸的级分。过滤可以采用具有不同分子量截留的超滤过滤器进行，例如允许收集低于约10mda的分子和排除约10mda或更高的分子的具有10mda截留的过滤器。在本文中，"约"指5kda的差异。在其它实例中，分子量截留过滤器允许收集低于5mda的分子和排除5mda或更高的分子；低于1mda的分子和排除1mda或更高的分子；低于500kda的分子和排除500kda或更高的分子；低于300kda的分子和排除300kda或更高的分子；低于100kda的分子和排除100kda或更高的分子；低于50kda的分子和排除50kda或更高的分子.
[0102]
其它组分
[0103]
本文提供的组合物可以包含一种或多种另外的组分。任选地包含在组合物中的另外组分/物质的非限制性实例包括清凉剂如薄荷脑、加温剂、调味剂、唾液分泌剂、茶提取物、外源性盐(例如死海盐)、抗腐败和抗细菌剂、氨基酸、精油、维生素(例如维生素a、维生素c、维生素b和/或维生素d)、类胡萝卜素、迷迭香、迷迭香提取物、咖啡酸、咖啡提取物、姜黄提取物、姜黄素、蓝莓提取物、葡萄籽提取物、迷迭香酸、抗氧化剂、酶、益生元、益生菌、穿心莲(andrographis)提取物、1-色氨酸、大蒜(allium sativum)、草药治疗剂、增补剂、天然成分、矿物质、提高能量的物质、睡眠辅助剂、增强免疫系统的物质、着色剂、防腐剂、香料、果实提取物、其它物质及其组合。另外可能的额外组分包括水合剂。
[0104]
可以加入精油以代表特征性香味的必需草本活性剂，其可以净化或赋予抗微生物活性。可以使用柠檬油、桉树油、滇荆芥油(balm oil)、薄荷油、樟脑、茴香油、迷迭香油、留兰香油、欧薄荷油、百里香油(thymus oil)和鼠尾草油作为精油。精油的浓度可以为大约0.01mg至50mg、特别是0.05mg至15mg/10ml，其中0.01mg至10mg、特别是0.01mg至5mg是柠檬油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至5mg是桉树油；0.01mg至5mg、特别是0.01mg至0.3mg是滇荆芥油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至3mg是薄荷油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至3mg是樟脑；0.001mg至5mg、特别是0.001mg至0.5mg是茴香油；0.001mg至5mg、特别是0.001mg至0.05mg是迷迭香油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至5mg是留兰香油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至5mg是欧薄荷油；0.01mg至10mg、特别是0.01mg至5mg是百里香油；和0.001mg至5mg、特别是0.001mg至0.5mg是鼠尾草油/10ml组合物。
[0105]
组合物可以包含可药用载体、例如一种或多种溶剂、分散介质、包衣料、抗微生物剂、等渗和吸收延迟剂等，它们与施用于哺乳动物如人是相容的。与赋形剂和治疗剂相容的任意载体是适用的。在组合物中也可以掺入补充性活性化合物。
[0106]
在组合物中可以使用本领域已知的任意抗微生物剂，其浓度为对于该抗微生物剂通常使用的浓度。抗微生物剂包括抗细菌剂、抗真菌剂和抗病毒剂。示例性的抗生素(即抗细菌剂)包括青霉素(例如青霉素g、氨苄西林、甲氧西林、苯唑西林和阿莫西林)、头孢菌素(例如头孢羟氨苄、头孢雷特、头孢噻肟和头孢曲松)、四环素(例如多西环素、米诺环素和四环素)、氨基糖苷(例如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、链霉素和妥布霉素)、大环内酯(例如阿奇霉素、克拉霉素和红霉素)、氟喹诺酮(例如环丙沙星、洛美沙星、左氧氟沙星和诺氟沙星)和其它抗生素、包括氯霉素、克林霉素、环丝霉素、异烟肼、利福平、磺胺甲噁唑联
合甲氧苄啶、甲氧苄啶、头孢泊肟和万古霉素。抗病毒剂是能够抑制病毒复制的物质。抗病毒剂的实例包括1,-d-呋喃核糖基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺、9-2-羟基-乙氧基甲基鸟嘌呤、金刚烷胺、5-碘-2'-呋喃核糖基、三氟胸苷、干扰素、腺嘌呤阿拉伯糖苷、蛋白酶抑制剂、胸苷激酶抑制剂、糖或糖蛋白合成抑制剂、结构蛋白合成抑制剂、吸附和吸收抑制剂和核苷类似物如阿昔洛韦、腺嘌呤阿拉伯糖苷、伐昔洛韦和更昔洛韦。抗真菌剂包括杀真菌剂和抑真菌剂，例如苯甲酸、十一烯酸链烷醇酰胺、环吡酮胺、聚烯、咪唑类、烯丙胺、thicarbamates、两性霉素b、尼泊金丁酯、克林霉素、益康唑(econaxole)、氟康唑、氟胞嘧啶、灰黄霉素、制霉菌素和酮康唑。
[0107]
组合物还可以与其它通常用于缓解窦炎、枯草热、鼻充血、过敏性鼻炎和/或非过敏性(常年性)鼻炎的症状的药物组合进行配制。其它药物的实例可以包括但不限于皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂和抗微生物剂。在一项实施方案中，组合物还包含皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂和抗微生物剂中的至少一种。
[0108]
皮质类固醇和其它甾体化合物可以与所述组合物一起使用来减轻鼻通道中的炎症和组胺产生，由此缓解鼻充血、流鼻涕、喷嚏、窦痛、头痛等。皮质类固醇和其它甾体化合物的实例可以包括alcometasone、倍氯米松、倍他米松、布地奈德、环索奈德、氯倍他索、地夫可特、二氟可龙、去羟米松、地塞米松、氟氢可的松、氟尼缩松、氟轻松、fluometholone、氟替卡松、氢化可的松、糠酸莫米松、癸酸诺龙、利美索龙、甲泼尼龙、泼尼松龙和曲安奈德。皮质类固醇和其它甾体化合物的示例性实施例可以包括莫米松、布地奈德、氟替卡松、氟尼缩松、倍氯米松、曲安西龙和环索奈德。
[0109]
抗组胺药是用于治疗过敏性鼻炎的主要药物之一。抗组胺药可帮助控制喷嚏、瘙痒和鼻漏以及相关的眼症状，但是对于缓解鼻堵塞是无效的。抗组胺药与组胺竞争结合至h1受体，由此阻止组胺的作用，包括支气管痉挛、水肿、粘液分泌增加和瘙痒。如今使用的抗组胺药可以口服或局部(鼻内)给予。可以与所述组合物一起使用的有用的抗组胺药的实例可以包括阿伐斯汀、阿扎他定、氮斯汀、阿司咪唑、溴苯那敏、卡比沙明、西替利嗪、氯非尼拉敏(chloropheniramine)、氯马斯汀、赛庚啶、右氯非尼拉敏(dexchloropheniramine)、苯海拉明、多西拉敏、依巴斯汀、羟嗪、酮替芬、左卡巴斯汀、洛度沙胺、氯雷他定、美克洛嗪、美喹他嗪、甲地嗪、奥沙米特、苯茚胺、异丙嗪、美吡拉敏、司他斯汀、罗卡斯汀、他齐茶碱、替美斯汀、特非那定、阿利马嗪、曲吡那敏和曲普利啶。抗组胺药的示例性实例可以包括阿司咪唑、阿扎他定、氮斯汀、西替利嗪、依巴斯汀、酮替芬、左卡巴斯汀、氯雷他定、洛度沙胺、左卡巴斯汀、美喹他嗪、奥沙米特、司他斯汀、他齐茶碱、替美斯汀和特非那定。
[0110]
鼻减充血剂包括通过使血管收窄(收缩)和减少血流、肿胀和粘液形成来缓解鼻充血的化合物。非常多的减充血剂经由通过刺激α-肾上腺素能受体而增加去甲肾上腺素和肾上腺素活性来发挥作用。减充血剂可以是口服的(例如片剂)在鼻喷雾或滴剂中。减充血剂的实例可以包括麻黄碱、左去氧麻黄碱、萘甲唑啉、羟甲唑啉、去氧肾上腺素、苯丙胺醇、丙己君、伪麻黄碱、昔奈福林(synephrin)、四氢唑啉、曲马唑啉和赛洛唑啉。
[0111]
支气管扩张药是扩张支气管和细支气管、由此减少呼吸系统气道中的阻力和增加进入肺中的气流的物质。它们在阻塞性肺病中是最有用的，哮喘和慢性阻塞性肺疾病是阻
塞性肺病最常见的病症。该类化合物中的类别包括β2-肾上腺素能激动剂和抗胆碱药。β2-肾上腺素能激动剂，也称为β2-肾上腺素能受体激动剂，是作用于β2-肾上腺素能受体、由此引起平滑肌松弛、导致支气管通道扩张的药物。长效β2-激动剂(labas)的实例包括福莫特罗、沙美特罗及其盐，例如富马酸福莫特罗和沙美特罗昔萘酸酯。长效β2-激动剂的实例包括沙丁胺醇、特布他林及其盐，例如硫酸沙丁胺醇。抗胆碱药的实例包括copd和/或哮喘中所用的药物，例如噻托铵和异丙托溴铵。
[0112]
可用于组合物的植物提取物非限制性地包括通过各种方法(例如用水性或有机溶剂提取)由不同植物部分(例如根、果实、叶子等)分离的提取物，例如迷迭香提取物、咖啡提取物、姜黄提取物、蓝莓提取物、葡萄籽提取物、穿心莲(andrographis)提取物、大蒜(allium sativum)提取物、百里香提取物(例如thymus vulgaris的提取物)、积雪草(centella asiatica)提取物或在美容化妆用和药物工业中常用的提取物，例如药典、who(世界卫生组织)专题论文或在提纲pdr for herbal medicines,第4版(thomson healthcare)中包括的那些。可用于组合物中的典型的植物提取物浓度为0.001％至5％、最优选0.05-1％的组合物。
[0113]
也可以包括草本治疗和其它天然成分(例如类胡萝卜素、咖啡酸、迷迭香酸、姜黄素)。
[0114]
可以包括在组合物中的其它任选组分是水合剂。水合剂可以定义为改善角质层水合、减少经表皮失水、维持皮肤柔软性和弹性或在干燥和/或发炎时具有普遍的缓解功能的物质。这类水合剂的实例包括丙二醇、甘油、山梨醇、聚乙二醇或us 5,603,943或us 20070190081中记载的其它物质。优选的水合剂包括浓度为0.25-2.5％w/w、更优选0.5-1.5％w/w、更优选1％w/w的右泛醇或泛酸，浓度为0.01-2.5％w/w、优选0.025-0.5％w/w、更优选0.2％w/w的透明质酸或其盐(例如透明酸钠)或浓度为0,001至10％w/w、优选0.01-2％w/w、更优选0.5-1％w/w的ectoin(在数个细菌种属如ectothiorhodospira halochloris中发现的天然化合物)。
[0115]
呼吸道和呼吸系统粘膜相关性病症
[0116]
本发明的方法和组合物可用于治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症。呼吸道和呼吸系统粘膜相关性病症包括具有鼻、支气管和肺粘膜的异常粘液产生、分泌或清除或炎症(细菌性、病毒性、过敏性或自身免疫性)的任意病症或障碍。该疾病的实例包括急性鼻窦炎、复发性急性鼻窦炎、亚急性鼻窦炎、慢性鼻窦炎、慢性鼻窦炎急性加剧、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它上呼吸道和下呼吸道疾病。
[0117]
鼻通道的主要功能是调节呼吸空气流、加热和润湿吸入的空气和消除外来元素(灰尘、微生物病菌)。覆盖鼻粘膜的纤毛上皮在防御感染方面发挥重要作用。该上皮的颤动纤毛浸入它们周围的保护性粘液中，它们的目的是通过它们的运动推动该粘液以及任何外来杂质向后、即朝着咽的方向。
[0118]
鼻窦炎是鼻旁窦的炎症(细菌性、病毒性、过敏性或自身免疫性)。鼻窦炎可以被分成几个类别：急性鼻窦炎—可以持续一直到4周的新感染，根据症状可以分为严重和非严重；复发性急性鼻窦炎—在1年内出现四次或更多次独立的急性窦炎发作；亚急性鼻窦炎—持续4和12周之间的感染，代表了急性和慢性感染之间的过渡；慢性鼻窦炎—当指征和症状
持续多于12周时；和慢性鼻窦炎急性加剧—当慢性鼻窦炎的指征和症状加剧、但是在治疗后返回基线时。鼻窦炎的症状包括鼻充血、面部疼痛、头痛、发烧和全身不适。炎性病症的一些非限制性实例将包括:急性和慢性鼻窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)、其它呼吸道疾病。
[0119]
存在多个成对的鼻旁窦，包括额窦、筛窦、上颌窦和蝶窦。鼻窦炎通常作为影响呼吸道的疾病谱的一部分发生，呼吸系统粘膜相关性病症通常与其它病症如哮喘或囊性纤维化相关。所有形式的鼻窦炎可能导致气道泛化炎症或者是气道泛化炎症的一部分，从而可能伴有气道症状如咳嗽。
[0120]
药物组合物
[0121]
本文提供的组合物还可用作药物组合物用于治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症如鼻窦炎。药物组合物可以包括可药用载体或佐剂或者可以在没有这类载体或佐剂的情况下提供。在一项实施方案中，药物组合物包括离子水性溶液、褐藻提取物和可药用载体或佐剂。在另一项实施方案中，药物组合物包括离子水性溶液、平均分子量高于4kda且包含l-岩藻糖和硫酸酯基团的支链硫酸多糖和可药用载体或佐剂。有用的可药用载体或佐剂是常规的。remington'spharmacital science,e.w.martin,mack publishing co.,easton,pa.,第15版(1975)记载了组合物，本文描述了适于药物递送的组合物。
[0122]
组合物可以以适当的量包含在适宜的载体物质中，通常以基于药物组合物的总重量计算1-99％重量的量存在。药物组合物可以按照常规药物实践进行配制(参见例如remington:science and practice of pharmacy(第20版),a.r.gennaro,lippincott williams&wilkin,2000和encyclopedia of pharmaceutical technology,编者j.swarbrick和j.c.boylan,1988-1999,marcel dekker,纽约)。
[0123]
除了生物学中性载体外，待施用的药物组合物可以含有最少量的无毒辅助物质如润湿或乳化剂、防腐剂和ph缓冲剂等，例如乙酸钠或山梨坦单月桂酸酯。
[0124]
用于鼻施用的组合物的示例性实施方案可以包括在水性溶液内呈现出相当于10至约99,9％重量含量的对等渗而言250-350mosm/l、对高渗而言》350mosm/l和对低渗而言《250mosm/l的摩尔渗透压浓度值[相应的nacl含量为0.9％、》0.9％和《0.9％nacl或nacl当量]的海水/盐水溶液、平均分子量高于4kda且具有l-岩藻糖和硫酸酯基团的支链硫酸多糖和任选的蓝/绿藻提取物和基于半乳糖的多糖如角叉菜胶中的一者或两者。
[0125]
用于鼻施用的组合物的另一个示例性实施方案可以包括海水/盐水溶液、褐藻提取物和蓝/绿藻提取物如螺旋藻属(spirulina)和任选的红藻提取物如角叉菜胶。
[0126]
在某个实施方案中，组合物可以被包装在具有使用说明书的装配有自动灭菌喷嘴的加压容器中。
[0127]
递送方法
[0128]
如上所述的药物组合物可以经由不同的方法、包括喷雾、冲洗系统(例如洗鼻壶(neti pot))、注射器等来递送。组合物可以以适于鼻气雾剂或吸入施用途径的剂量形式来提供。组合物的示例性施用方法可以包括喷雾气化的或在活性动态压力下喷洒的散布微粒。
[0129]
适用的气雾分配器对于本领域技术人员将是显而易见的，可以从类似于香水分配器的简单装置到加压喷雾罐和甚至更复杂的例如可用于医院的装置。不管使用哪种装置，
通常优选其包含某些种类的计量仪器以控制一喷所施用的溶液量。相当于具有喷嘴的分配器的一个装置有效地加入了该计量器而不必需任何专门的修改，可压喷雾剂头的限制器固定了一次可分配的最大单次溶液量。特别开发的喷雾装置可以用包含组合物储存器的手持装置制成。
[0130]
提供了适于分配喷雾、优选气雾剂形式的装置。实例包括由空气作用加压的装置和采用被加压通过导向储存器内的管开口的加压气体以产生气雾剂的装置和其中按钮当按下时在存储器内的液体表面产生压力压迫其上升至管和通过细小喷嘴以将溶液分配为气雾喷雾剂的按钮型装置。其它实例包括气雾剂分配器、吸入器、泵式喷雾器、喷洒器(例如正压喷洒器)等。在一些实施方案中，所有装置预填充了本文所述的组合物。
[0131]
一个实施方案将包括多剂量计量喷雾泵，其允许喷雾固定体积的溶液。或者，在铝或塑料(或任意其它类型)瓶中将组合物与抛射剂分开的气体驱动(例如氮气)装置如系统。当与不同执行器组合时，这些装置以可变的扩散流和角度递送溶液。优选的扩散流将以0-60℃的角度每喷秒递送0.5-10ml溶液。
[0132]
上述组合物可以根据医师的指导和根据病症进行施用。优选的(鼻)施用方式将包括1-5喷/鼻孔，每天1-5次；这将根据待治疗的病症或症状(例如在过敏中)延至多个星期。
[0133]
治疗
[0134]
本文所述的方法提供了治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症或其症状，包括急性和慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它上呼吸道和下呼吸道疾病。在一项实施方案中，该方法包括在需要其的个体中通过将药物组合物在个体的鼻通道中雾化来治疗呼吸道和/或呼吸系统粘膜相关性病症。这类方法包括给个体施用足以治疗鼻窦炎、例如急性和慢性鼻窦炎、窦炎、过敏性和非过敏性鼻炎、哮喘、囊性纤维化、慢性阻塞性肺疾病(copd)和其它呼吸道疾病的治疗量的本文所述的组合物。
[0135]
本文所述的方法和组合物可以与一种或多种物质组合施用或作为连续治疗分别施用。例如，一个实施方案描述了作为单独治疗与皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂和抗微生物剂中的至少一种组合施用的组合物。在另一项实施方案中，组合物作为独立治疗与包括皮质类固醇、其它甾体化合物、抗组胺药、减充血剂、支气管扩张药、β2-肾上腺素能激动剂和抗微生物剂中的至少一种的另一个连续治疗一起施用。
[0136]
可以理解，虽然未预先排除，但是治疗鼻窦炎不要求鼻窦炎或与其相关症状被完全消除。
[0137]
本文所述的治疗方法(包括预防性治疗)通常包括给需要其的个体(例如动物、人)、包括哺乳动物、特别是人施用治疗有效量的本文的组合物。这类治疗将被适宜地施用于患有、具有、易感或处于鼻窦炎或其炎性病症或症状的个体、特别是人。这些“处危”个体的确定可以由个体或健康护理提供者的诊断测试或观点来主观或客观地确定。
[0138]
除了药物化学和制剂的上述标准方法外，本文所述的组合物和方法的实施可以采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术良好地在本领域技术人员的范围之内，另有指示除外。这类技术在文献中进行了充分的解释，例如“molecular cloning:laboratory manual”,第2版(sambrook,1989)；“oligonucleotide synthesis”(gait,1984)；“animal cell culture”(freshney,1987)；“methods in enzymology”“handbook of experimental immunology”(weir,1996)；“gene transfer vectors for mammalian cells”(miller和calo,1987)；“current protocols in molecular biology”(ausubel,1987)；“pcr:polymerase chain reaction”,(mulli,1994)；“current protocols in immunology”(coligan,1991)。这些技术可应用于本发明的聚核苷酸和多肽的产生，照此在制备和实施本发明中被考虑。在随后章节中将讨论对于特定实施方案特别有用的技术。
[0139]
实施例
[0140]
给出以下实施例以便给本领域技术人员提供完整的如何制备和使用本发明的分析、筛选和治疗方法的公开内容和说明，它们不意欲限制发明人视为是本发明的范围。
[0141]
实施例1:本发明的制剂能够减少炎性标志物的分泌
[0142]
图1给出了在三维重构人气道上皮模型(可从epithelix,geneva,ch购买获得)中用制剂1-4中所述的溶液获得的数据。气道上皮从鼻活组织中新鲜分离并完全分化。由于细胞分化本质和性质，该模型被认为是研究所应用的物质的作用、包括细胞毒性和炎性的高度生理学模型。因此，在图1给出的实验中，在密切模拟天然鼻组织的三维培养物中，将完全分化的人鼻上皮细胞用由14个不同正常供体的鼻息肉分离的细胞的混合物进行重构(huang s等人,use of in vitro 3d cell models in drug development for respiratory disease,intech.2011isbn:978-953-307-615-7)。在实验之前3天，将所用的每个患者细胞插入物用细胞培养物冲洗顶端，以除去蓄积的粘液和使实验干扰的风险最小。为了证明所有所选择的插入物在使用测试物质之前都满足适当的质量控制，将插入物在显微镜下检查以检验适当的纤毛功能和相关的经上皮电阻(teer)。随后，在存在和不存在不同溶液(10μl，顶端应用，每天两次，8小时内)的情况下将lps以0.3mg/ml加入培养介质中，总计4天。在第0、1、2、3和4天收集培养介质，通过elisa测定il-8(气道上皮细胞分泌的充分确定的炎性标志物)。
[0143]
如预期的那样，未经处理的培养物未显示出il-8分泌的任何显著变化。lps以时间依赖性方式极大地刺激了il-8表达，在第3天达峰。包含2.3％nacl的高渗海水溶液能够减少lps引起的il-8释放。令人感兴趣的是，包含海水2.3％nacl和所指成分(up:裙带菜提取物、sp:钝顶螺旋藻提取物)(制剂1-4)的溶液优于单独的海水2.3％nacl(*p《0.05,**p《0.01,student’s t-检验)，表明藻成分以统计学显著的方式增强了海水2.3％nacl的作用。应当注意，所有测试溶液对所培养的细胞都是无细胞毒性的(如通过在介质中缺乏ldh释放所测定)。
[0144]
实施例2:在来自过敏性供体的培养上皮细胞中，本发明的制剂减轻炎症和改善鼻细胞功能
[0145]
在图2给出的实验中，在密切模拟天然鼻组织的三维培养物中，将完全分化的人鼻上皮细胞用来自过敏性供体(女性，35岁)的插入物的混合物进行重构(huang s等人,use of in vitro 3d cell models in drug development for respiratory disease,intech.2011isbn:978-953-307-615-7)。在实验之前3天，将细胞用细胞培养物顶端冲洗，以除去蓄积的粘液和使实验干扰的风险最小。在实验开始前，对细胞进行显微镜分析和相关的经上皮电阻(teer)测定证实纤毛功能是适当的。
[0146]
在上述细胞制备后的实验设计如下：在第0天，将细胞未经处理(阴性对照)或用10μl制剂1、盐水对照或cytomix(il-1β、tnf-α和ifn-γ的混合物，预期对鼻上皮发挥细胞毒性作用)应用于上皮顶表面进行处理。24小时后(第1天)，采用连接至dmire2显微镜(leica)的ds-5mc照相机(nikon)监测溶液对粘膜纤毛清除(mcc)的作用。具体而言，当细胞培养物与制剂1(或盐水对照)一起孵育时，将5μμ微珠加在细胞培养物的顶表面上，录制了显示微珠运动的1分钟动画。随后采用成像软件image pro plus(mediacy)分析追踪了微珠的运动，计算每个粒子的速率以确定mcc的速度(μμ/秒)。在mcc测定后，将30μl 20mm hcpt(六氯铂酸铵；强的呼吸敏化剂)或盐水加入存在制剂1或盐水对照的细胞中。暴露16小时后(第2天)，移去hcpt溶液，向细胞中加入新的含有制剂1或盐水对照的细胞培养介质。在整个第2天和在第3天，每天两次继续用溶液进行处理；在第4天期间移去溶液(用细胞培养介质替换)。在此期间(第1-4天)，收集细胞培养介质用于通过elisa分析炎性标志物il-8。在第4天，通过包括照相机(sony xcd v60 firewire)、pci卡和相关软件的专用设备进行纤毛摆动频率(cbf)测定(以hz表示)。
[0147]
图2、a板显示，制剂1与盐水相比显著增加了粘膜纤毛清除(结果以追踪的200-500个粒子的均值表示)。如预期那样，cytomix对鼻上皮具有不利的作用，导致mcc与基线相比显著减少。b板给出了第1-4天的il-8分泌数据。如预期那样，hcpt有效地引起了炎症，il-8分泌在第4天达峰。在接受盐水而非hcpt的细胞中或在未经处理的培养物中未观察到il-8分泌。在来自过敏性供体的这些三维培养物中，制剂1能够减轻呼吸变应原hcpt引起的炎症。c板显示了第4天的cbf测定。如预期那样，用hcpt处理的细胞培养物具有受损的功能，如通过cbf与对照相比减少所测定的那样。相反，已经接受了制剂1的用hcpt处理的培养物具有增加的cbf值，这与在il-8分析中观察到的保护性质和对mcc施加的改善的功能一致。总之，这些结果提示：制剂1改善了由过敏性供体产生的细胞小岛的三维培养物中的鼻功能参数和减轻了由呼吸变应原引起的炎症。应当注意，在这些实验过程中进行的ldh释放(在细胞培养物中)的特定测定证明制剂1对所培养的细胞是没有细胞毒性的(数据未显示)。
[0148]
实施例3：材料和方法
[0149]
可以制得以下实施例制剂：
[0150]
制剂1
[0151]
海水溶液，包含：
[0152][0153]
制剂2
[0154]
海水溶液，包含：
[0155][0156]
制剂3
[0157]
海水溶液，包含：
[0158]
海水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
71.6g
[0159]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.1g
[0160]
纯化/蒸馏/过滤水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量至100.0g
[0161]
制剂4
[0162]
海水溶液，包含：
[0163]
海水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
71.6g
[0164]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3g
[0165]
纯化/蒸馏/过滤水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量至100.0g
[0166]
制剂5
[0167]
海水溶液，包含：
[0168][0169]
制剂6
[0170]
海水溶液，包含：
[0171][0172]
制剂7
[0173]
海水溶液，包含：
[0174][0175]
制剂8
[0176]
海水溶液，包含：
[0177][0178][0179]
制剂9
[0180]
海水溶液，包含：
[0181][0182]
制剂10
[0183]
海水溶液，包含：
[0184][0185]
制剂11
[0186]
海水溶液，包含：
[0187]
[0188]
制剂12
[0189]
海水溶液，包含：
[0190][0191][0192]
制剂1-12产生了约2.2-2.5％nacl的高渗海水溶液。
[0193]
制剂13
[0194]
海水溶液，包含：
[0195][0196]
制剂14
[0197]
海水溶液，包含：
[0198][0199]
制剂15
[0200]
海水溶液，包含：
[0201][0202]
制剂16
[0203]
海水溶液，包含：
[0204]
[0205][0206]
制剂17
[0207]
海水溶液，包含：
[0208][0209]
制剂18
[0210]
海水溶液，包含：
[0211][0212]
制剂13-18产生了约0.9％nacl的等渗海水溶液。
[0213]
制剂1-18的溶液的制备
[0214]
制剂1-18通过在混合器中加入如下成分和剩余的纯化水并混合15分钟直至获得澄清均匀的溶液而制得：
[0215][0216]
制剂19
[0217]
海水溶液，包含：
[0218]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3g
[0219]
钝顶螺旋藻提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5g
[0220]
海水(电透析至2.2％nacl) 适量至100.0g制剂20
[0221]
海水溶液，包含：
[0222]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3g
[0223]
海水(电透析至2.2％nacl)适量至100.0g
[0224]
制剂21
[0225]
海水溶液，包含：
[0226][0227]
制剂22
[0228]
海水溶液，包含：
[0229]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3g
[0230]
钝顶螺旋藻提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.5g
[0231]
海水(电透析至0.9％nacl)
ꢀꢀꢀꢀ
适量至100,0g
[0232]
制剂23
[0233]
海水溶液，包含：
[0234][0235]
制剂24
[0236]
海水溶液，包含：
[0237][0238]
制剂25
[0239]
海水溶液，包含：
[0240]
裙带菜提取物
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
0.3g
[0241]
右泛醇
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1.0g
[0242]
海水(电透析至2.2％nacl)
ꢀꢀꢀꢀ
适量至100.0g
[0243]
制剂26
[0244]
海水溶液，包含：
[0245][0246]
制剂27
[0247]
海水溶液，包含：
[0248][0249]
制剂28
[0250]
海水溶液，包含：
[0251][0252][0253]
制剂19-28的溶液的制备
[0254]
按照us 6,451,352的方法，这些制剂可以通过将海水电透析至预期的渗透含量、然后加入另外的成分并混合而制得。供选的方法是将所有成分一起混合、然后进行电透析。
[0255]
制剂29
[0256]
海水溶液，包含：
[0257]
[0258]
制剂30
[0259]
海水溶液，包含：
[0260][0261]
制剂31
[0262]
海水溶液，包含：
[0263][0264]
制剂32
[0265]
海水溶液，包含：
[0266][0267]
制剂29-32的溶液的制备
[0268]
如下制得制剂29-32：在混合器中加入下述成分以形成第一混合料：
[0269]
含有如下成分的第二混合料(在小体积的纯化水中)：
[0270]
0.0075g
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
桉树油
[0271]
0.015g
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
留兰香油
[0272]
5gr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
1,3-丙二醇
[0273]
然后在第二混合料中加入甘油：
[0274]
3gr
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
甘油
[0275]
然后在连续剧烈搅拌下历经30分钟将第二混合料加入第一混合料中，加入纯化水至100克的最终重量。
[0276]
制剂33
[0277]
海水溶液，包含：
[0278][0279]
制剂34
[0280]
海水溶液，包含：
[0281][0282]
制剂35
[0283]
海水溶液，包含：
[0284][0285][0286]
制剂36
[0287]
海水溶液，包含：
[0288][0289]
制剂33-36的溶液的制备
[0290]
可以按照us 6,451,352的方法、通过将海水电透析至预期的摩尔渗透压浓度制得这些制剂。然后，通过在电透析水中加入藻成分和百里香提取物制得第一混合料。产生在较小体积的电透析海水中的第二混合料并混合，然后在剧烈搅拌下历经30分钟加入甘油，然后将所有混合料汇合为最终体积，用具有适当摩尔渗透压浓度的电透析海水调节最终摩尔渗透压浓度。
[0291]
用于制备样品的海水
[0292]
用于制备这些溶液的海水溶液优选来源于在以存在强流(其保证了连续补充新鲜水)为特征的区域的5-10米深的专用海水收集位置。收集后，通常可以将海水过滤以除去有机污染物和/或微生物。
[0293]
收集位置位于cancale bay,bretagne,法国，参见ep 0909184。表4列出了在cancale bay收集的海水的说明。
[0294]
表4：海水的说明
[0295]
控制说明方法外观无色澄清液体感官气味特征性感官ph(20℃)7.5-8.5欧洲药典7/2.2.3密度(20℃)0.975-1.078g/ml欧洲药典7/2.2.5砷《2ppm欧洲药典7/2.4.2重金属《1ppm欧洲药典7/2.4.8摩尔渗透压浓度1000-1200mosm/l欧洲药典7/2.2.35toc《50ppm欧洲药典7/2.2.44nacl含量29.0-34.0g/lvolhard法总烃《1mg/lst.方法/503a需氧微生物总计数《1000cfu/ml欧洲药典7/2.6.12酵母和霉菌计数《100cfu/ml欧洲药典7/2.6.12肠杆菌《10cfu/ml欧洲药典7/2.6.13金黄色葡萄球菌不存在/10ml欧洲药典7/2.6.13耐热大肠菌不存在/10ml欧洲药典7/2.6.13铜绿假单胞菌不存在/10ml欧洲药典7/2.6.13
[0296]
制剂37
[0297]
盐水溶液，包含
[0298][0299]
制剂38
[0300]
盐水溶液，包含
[0301][0302]
制剂39
[0303]
盐水溶液，包含
[0304][0305]
制剂40
[0306]
盐水溶液，包含
[0307][0308]
制剂41
[0309]
盐水溶液，包含
[0310][0311]
制剂42
[0312]
盐水溶液，包含
[0313][0314]
制剂43
[0315]
盐水溶液，包含
[0316]
[0317][0318]
制剂44
[0319]
盐水溶液，包含
[0320][0321]
盐水样品(制剂37-44)
[0322]
盐水样品的制备按照us 7,541,052进行(将所有成分在搅拌下混合直至溶液变得澄清和均匀)。
[0323]
在制备任一个制剂后，可以将溶液采用适当的滤器(例如0.22μμ)过滤、通过标准方法灭菌(例如γ-照射)和用于制备递送溶液的装置中。
[0324]
其它实施方案
[0325]
由以上描述将清楚的是，可以对本文所述的发明进行改变和变通以使其适应各种用途和病症。这类实施方案也在随后的权利要求的范围内。
[0326]
本文的变量的任意定义中列出的元素的描述包括该变量作为任意单个元素或所列元素的组合(或亚组合)的定义。本文实施方案的描述包括该实施方案作为任意单个实施方案或与任意其它实施方案或其部分的组合。
[0327]
本说明书中提及的所有专利和出版物以如同每篇独立的专利和出版物被具体地和单独地指示引入作为参考的相同程度引入本文作为参考。