一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法与流程

技术特征：
1.一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，采用高效液相色谱-串联质谱检测预处理的血浆样品，利用内标法定量，检测样品中阿瑞匹坦和内标阿瑞匹坦-d4的色谱峰，进而得到所述血浆样品中的阿瑞匹坦浓度；其中：高效液相色谱的测试条件为：流动相a：h2o/fa＝100/0.2(v/v)；流动相b：acn/fa＝100/0.2(v/v)；洗液：meoh/h2o＝50/50(v/v)；采用梯度洗脱方式。2.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，血浆样品预处理方法为：s1、以k2edta为抗凝剂，配制血浆样品后取100μl于96深孔板中；s2、添加5μl的1000ng/ml内标标准溶液至上述样品中；s3、添加1000μl acn于96深孔板中并涡旋混合1-5min后，于20℃下，进行离心操作；s4、转移1000μl上清液至装有1000μl acn/h2o/fa＝55/45/0.2(v/v/v)的96深孔板中，涡旋混匀；s5、于20℃下，进行离心操作。3.根据权利要求2所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，阿瑞匹坦标准溶液的配制方法为：称取阿瑞匹坦(分析物)5.032mg，加入meoh溶解至500000ng/ml，依次使用meoh/h2o＝50/50(v/v)溶液稀释配制阿瑞匹坦标准溶液；阿瑞匹坦-d4内标标准溶液的配制方法为：精密称取阿瑞匹坦-d4(内标)1.107mg，加入meoh溶解至100000ng/ml，使用meoh/h2o＝50/50(v/v)溶液稀释配制阿瑞匹坦标准溶液。4.根据权利要求2所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，步骤s3中离心操作的离心转速为3000rpm，离心时间为10min；步骤s5中离心操作的离心转速为3000rpm，离心时间为5min。5.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，高效液相色谱的测定条件为：色谱柱：agilent zorbax xdb-c18，5μm，柱规格为2.1
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50mm；色谱柱温：40℃；进样温度：15℃；流速：0.4000ml/min；进样量：10μl；分析时间3min。6.根据权利要求5所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，梯度洗脱的程序为：总时间(min)流速(ml/min)流动相a(％)流动相b(％)0.000.400045.055.00.600.400045.055.00.610.400020.080.01.200.400020.080.0
1.210.400045.055.03.000.400045.055.07.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，质谱的测定包括阿瑞匹坦的测定和阿瑞匹坦-d4的测定；阿瑞匹坦的测定条件为：离子源采用电喷雾离子源，喷雾电压为5500v，雾化温度为500℃，喷雾气压力为30psi，辅助加热气压力为20psi，气帘气压力为30psi，碰撞气压力为8，去簇电压分别为30ev的阿瑞匹坦；碰撞室入口电压分别为8ev的阿瑞匹坦；碰撞电压分别为30ev的阿瑞匹坦；碰撞室出口电压分别为8ev的阿瑞匹坦；正离子方式检测；扫描方式为多重反应检测；阿瑞匹坦用于定量分析的离子对为：m/z535.1
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m/z277.2；阿瑞匹坦-d4的测定条件为：离子源采用电喷雾离子源，喷雾电压为5500v，雾化温度为500℃，喷雾气压力为30psi，辅助加热气压力为20psi，气帘气压力为30psi，碰撞气压力为8，去簇电压分别为30ev的阿瑞匹坦；碰撞室入口电压分别为8ev的阿瑞匹坦-d4；碰撞电压分别为30ev的阿瑞匹坦-d4；碰撞室出口电压分别为8ev的阿瑞匹坦-d4；正离子方式检测；扫描方式为多重反应检测；阿瑞匹坦-d4用于定量分析的离子对为：m/z539.2
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m/z281.3。8.根据权利要求1所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，采用内标法，以阿瑞匹坦与内标阿瑞匹担-d4的峰面积比值代入标准曲线方程计算所述血浆样品中的阿瑞匹担的浓度。9.根据权利要求8所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，所述标准曲线方程的建立包括以下步骤：取190μl空白血浆9份置于1.5ml离心管中，以储备液的形式添加10μl浓度分别为200ng/ml、400ng/ml、1000ng/ml、4000ng/ml、16000ng/ml、30000ng/ml、50000ng/ml、80000ng/ml、600ng/ml的阿瑞匹坦溶液至标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、标样7、标样8、sst中；分别取标样1、标样2、标样3、标样4、标样5、标样6、标样7、标样8、sst、零浓度样品100μl于96深孔板中；然后添加5μl的1ng/μl内标标准溶液至样品中并混匀；添加1000μl acn于96深孔板中并涡旋混合1分钟。于20℃，3000rpm离心10分钟；然后转移30μl上清液至装有1000μl acn/h2o/fa＝55/45/0.2的96深孔板中，涡旋混匀；最后于20℃，3000rpm离心5分钟后作为测试样品待检测。10.根据权利要求9所述的一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，其特征在于，分别取10μl上述标准样品注入高效液相色谱-串联质谱仪中，检测样品中阿瑞匹坦及阿瑞匹坦-d4的色谱峰，并据此得到标准曲线，以用于计算所述血浆中的阿瑞匹坦的浓度。

技术总结
本发明公开了一种液质联用测定血浆中阿瑞匹坦浓度的方法，采用高效液相色谱-串联质谱检测预处理的血浆样品，利用内标法定量，检测样品中阿瑞匹坦和内标阿瑞匹坦-d4的色谱峰，进而得到所述血浆样品中的阿瑞匹坦浓度；其中：高效液相色谱的测试条件为：流动相A：H2O/FA＝100/0.2(V/V)；流动相B：ACN/FA＝100/0.2(V/V)；洗液：MeOH/H2O＝50/50(V/V)；采用梯度洗脱方式。该方法可以准确，快速测定人血浆中阿瑞匹坦的浓度，不仅可以用于仿制药一致性评价，加快进口药品国产替代的速度，降低患者的治疗成本，提高药品质量。提高药品质量。提高药品质量。


技术研发人员：黄启宽 祝永琴 胡海俊 游亚珍
受保护的技术使用者：上海精翰生物科技有限公司
技术研发日：2022.04.08
技术公布日：2022/7/29