使用微流体隔室化快速多路复用基于CRISPR的诊断的制作方法

技术特征：
1.一种用于确定样品是否包含多个不同核酸靶序列中的至少一个的测定法，其包括：(a)获得包含源自所述样品的多核苷酸的组合物；(b)将所述组合物的至少一部分分配到多个微流体隔室中的每一个中，其中每个隔室包含所述组合物的等分试样；(c)将用于进行核酸测定的试剂引入各个隔室，其中所述试剂包括：具有靶激活的旁切切割活性的crispr相关(cas)蛋白，报道系统，其包含用于所述靶激活的旁切切割活性的核酸底物；以及与所述多个不同核酸靶序列中的至少一个靶序列互补的向导rna；其中所述向导rna与所述cas蛋白缔合以形成rna:cas复合物，以及其中至少两个隔室具有与不同靶序列互补的不同向导rna；(d)将(c)中的所述隔室维持在导致以下情形的条件下：在每个隔室中的所述rna:cas蛋白复合物识别如果存在的所述多个不同靶序列中的靶序列，导致所述靶激活的旁切切割活性的激活，和所述隔室中的所述核酸底物的切割；(e)检测所述隔室中所述靶激活的旁切切割活性的激活。2.根据权利要求1所述的测定法，其中所述样品是来自患者的临床样品。3.根据权利要求1所述的测定法，其中步骤(a)中的所述组合物中的多核苷酸是来自样品的核酸的扩增产物。4.根据权利要求1所述的测定法，其中至少一个靶序列来自微生物。5.根据权利要求4所述的测定法，其中所述微生物是致病的。6.根据权利要求1所述的测定法，其中在步骤(c)中，在所述引入之前将cas蛋白和报道系统组合。7.根据权利要求6所述的测定法，其中在步骤(c)中，在所述引入之前将所述cas蛋白、报道系统和所述组合物的所述等分试样组合。8.根据权利要求1所述的测定法，其中在步骤(c)中，将所述向导rna与包含所述cas蛋白、报道系统和所述组合物的所述等分试样的混合物组合。9.根据权利要求1所述的测定法，其中，所述向导rna被预沉积到孔或隔室中。10.根据权利要求1所述的测定法，其中所述向导rna是sgrna。11.根据权利要求1所述的测定法，其中所述向导rna包括crrna和tracrrna。12.根据权利要求1所述的测定法，其中所述cas蛋白是cas12a、cas13或cas14。13.根据权利要求1所述的测定法，其中，所述靶激活的旁切切割活性的底物是rna。14.根据权利要求1所述的测定法，其中，所述靶激活的旁切切割活性的底物是dna。15.前述权利要求中任一项所述的测定法，其中所述隔室是微流体隔室、微流体室或微孔。16.根据权利要求15所述的测定法，其中隔室的数量为10至106。

技术总结
本发明提供了一种检测多种不同靶核酸存在的方法，其包括以下步骤：将包含核酸的组合物的一部分分配到多个微流体隔室的每一个中，将Cas核酸内切酶反应溶液引入各个隔室中,并且检测隔间中的信号变化。且检测隔间中的信号变化。且检测隔间中的信号变化。


技术研发人员：江媛 龚剑 裴少宁 张永卫
受保护的技术使用者：深圳华大基因科技有限公司
技术研发日：2021.01.13
技术公布日：2022/8/26