用于治疗产乳热的产奶反刍动物用兽用组合物的制作方法

用于治疗产乳热的产奶反刍动物用兽用组合物
1.本发明涉及兽用组合物(veterinary composition)和通过在干奶期(dry period)期间施用所述组合物来治疗产后低钙血症(post-partum hypocalcemia)的方法。根据本发明的兽用组合物和治疗方法在随后的泌乳期间不影响反刍动物的产乳能力和/或乳质量。
2.在产奶反刍动物中，泌乳通常持续5至20个月。在奶牛中，最常见的是10个月。在这个泌乳期之后，停止挤奶，通常是突然停止挤奶，并且产奶反刍动物应该在产犊之前不再产奶，产犊时随后的泌乳开始。在停止挤奶和随后的泌乳之间的这段时间，后者通常是在分娩时(或对于奶牛来说产犊时)，被称为“干奶期”，在奶牛中通常被设定为约2个月(即56至70天)。
3.尽管干奶期对于确保随后的泌乳期期间的最佳产奶量是必要的，但这一干奶期需要几次饲粮变化和转变，以适应不再产奶的动物的生理需求。这些饲粮变化导致反刍动物的许多生理破坏和应激，如消化菌群的平衡的破坏、胃容量和吸收的降低以及瘤胃和瘤胃粘膜绒毛大小的变化。最后，这一干奶期导致反刍动物的代谢与在泌乳期间观察到的代谢非常不同。因此，在分娩后恢复泌乳期间，反刍动物处于代谢失调状态，导致能量不足，而产奶需求再次达到最大。
4.随着泌乳的开始和持续的产奶量，由于对支持乳汁合成的营养素的需求增加，在奶牛中出现了巨大的适应性变化。除了初乳和随后的乳汁合成对能量和氨基酸的需求增加之外，钙的需求相对于奶牛在产犊前的需求增加了两至三倍。在产犊前不久，奶牛向其胎儿体内沉积了8g/d至10g/d的钙，但当奶牛产犊时，将20g/d至30g/d的钙分泌到初乳和乳汁中。因此，必须进行代谢适应以支持对钙的增加的需求。如果它们发生得不够快或不够大，则血液中的钙的浓度降低到低于临界阈值，并且可导致临床和亚临床低钙血症或产乳热。
5.钙对骨骼组织和平滑肌以及神经功能(包括胃肠动力和骨骼肌力量)至关重要。最低的血钙浓度通常出现在产犊后12至24小时内，并且在健康奶牛中通常在产犊后2至3天内恢复正常。产后低钙血症(也被称为产乳热)是由通常发生在分娩前后的暂时性血钙缺乏引起的，并且是奶牛中最常见的代谢性障碍之一。早期临床或临床前症状(阶段1：反刍动物，并且更具体地说是牛，仍然能够站立)可以包括兴奋性、紧张、体重转移和拖着后脚。产后低钙血症是产奶反刍动物并且尤其是奶牛的难产(poor labor/dystocia)、死胎和明显猝死的常见原因。临床低钙血症是最被奶农认可的奶牛疾病，其中发病率为约5％，有时可以达到20％。随着产奶量的增加和连续泌乳，发病率增加。
6.通过控制膳食钙的吸收以及钙从骨中的释放或摄取，可以严格地调节血液中的钙的浓度。两种激素——甲状旁腺激素(被称为pth)和1,25-二羟基维生素d3控制这些过程。随着血液中的钙浓度的降低，分泌pth，并且起作用以减少尿液中的钙排泄。这种变化仅允许对血钙的浓度进行小的调整。如果需要更大量的钙，如随着泌乳的开始和维持，pth作用于骨，并且钙被重吸收并释放到血液中。此外，pth作用于肾脏，并且导致维生素d代谢物转化为1,25-二羟基维生素d3。于是1,25-二羟基维生素d3可以通过主动转运来调节小肠对钙的吸收。为了使pth分泌并有效地结合至其受体，需要足够的镁和略低的碱性血液ph(被称
为代谢性酸中毒)，因此说明需要在新鲜食物前提供足够量的镁并平衡这些饲粮以提供负的阳离子-阴离子差异(dcad)，从而预防低钙血症。然而，此类特定饲粮可能不足以避免低钙血症。
7.如前所述，一些奶牛可能经历亚临床低钙血症，其不显示临床症状，但通常在产犊后24小时内具有低的血液钙浓度。了解奶牛是否经历亚临床低钙血症的一种方法是在产犊后的前1至2天内分析血液中的钙浓度。血钙浓度为或低于8.8mg/dl(2.2mmol/l)但未显示出临床体征的奶牛被视为具有亚临床低钙血症。据估计，奶牛群中亚临床低钙血症的经济成本是临床病例的成本的四倍，对乳品经营的盈利能力产生重大影响。
8.产后低钙血症影响产后母牛的健康、未来的产奶量和繁殖性能。研究还显示，在具有低血钙浓度的奶牛中免疫功能受损。
9.产后低钙血症的预防通常通过改变新鲜食物前或阴离子饲粮(close-up diet)来实现。这些变化允许动员钙的生理系统被引发(prime)并且为与初乳和乳汁的合成相关联的钙的增加的需求做好准备。然而，此类特定饲粮可能难以实施或可能不足以避免产后低钙血症。
10.需要一种预防反刍动物产后低钙血症的方法。
11.在兽医学中，基于催乳素抑制剂的组合物如(卡麦角林(cabergoline)，法国诗华大药厂(ceva sant
éꢀ
animale))可以作为用于母犬的假妊娠期间泌乳的治疗药物被施用。它们也被开具以便停止反刍动物的产奶和哺乳。以申请人的名义的wo2010040765描述了在妊娠期间向反刍动物施用抗催乳素多巴胺受体激动剂化合物(如卡麦角林)，以便诱导泌乳干涸和促进乳房退化，特别是通过肌内施用。然而，此类卡麦角林的施用从未用于治疗或预防反刍动物的产后低钙血症。
12.本技术人现在已经惊奇地发现，在干奶期期间将包含卡麦角林的兽用组合物施用于产奶反刍动物可以治疗产后低钙血症，并且更具体地预防产后低钙血症。


技术实现要素：

13.本发明涉及包含卡麦角林的兽用组合物，其用于治疗产奶反刍动物的产后低钙血症，其中所述组合物在干奶期期间并且优选地在实施干奶期时(即，在干涸时)被施用于所述产奶反刍动物。
14.根据本发明，在产奶反刍动物的干奶期期间并且优选地在产奶反刍动物的干涸时，以有效治疗量施用所述组合物，以便治疗随后的泌乳期，特别是在分娩时和分娩后的低钙血症。
15.将该组合物向反刍动物施用一次和/或几次，优选地一次。
16.根据本发明的兽用组合物的施用不影响反刍动物在随后的哺乳期间的产奶能力和/或乳质量。
17.本发明还涉及用于治疗反刍动物的产后低钙血症的试剂盒。
18.在一个方面中，本发明提供了卡麦角林在制备用于治疗反刍动物的产后低钙血症的兽用组合物中的用途，其中所述组合物在反刍动物的干奶期期间并且优选地在反刍动物的干涸时被施用于反刍动物。
19.在另一方面中，本发明提供了一种用于治疗反刍动物的产后低钙血症的方法，其
中在反刍动物的干奶期期间并且优选地在反刍动物的干涸时，以治疗有效量施用包含卡麦角林的兽用组合物。
具体实施方式
20.短语“干奶期”包括在泌乳期的最后一次挤奶和下一个泌乳期的下一次泌乳之间的时间，其通常在分娩时开始。在奶牛中干奶期通常持续约2个月，更具体地说是45天至70天。
21.在本发明的上下文中，术语“最后一次挤奶”、“干涸”或“挤奶停止”可以互换使用。它们对应于实施干奶期的时间。
22.术语“产后低钙血症”和“产乳热”可以互换使用，并且更具体地指分娩时(并且更具体地奶牛产犊时)的临床或亚临床低钙血症，并且如上所述。血钙浓度为或低于8.8mg/dl(2.2mmol/l)但未显示出临床体征的奶牛被视为具有亚临床低钙血症。产奶反刍动物的产乳热的临床体征包括但不限于头部和四肢的肌肉震颤、平卧、嗜睡、四肢冰凉或体温过低。
23.如本文所使用的，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”和“治疗(treat)”被定义为用卡麦角林或包含卡麦角林的组合物作用于产后低钙血症，以降低或消除发生产后低钙血症的风险，或降低或减轻产后低钙血症的一种或多种症状、优选地所有症状。症状包括但不限于头部和四肢的肌肉震颤、平卧、嗜睡、四肢冰凉或体温过低。因此，它包括预防性治疗和/或治愈性治疗。如本文使用的“治疗”包括：(a)降低产奶反刍动物中发生产后低钙血症或产乳热的风险，(b)阻止血钙水平降低的开始，和/或(c)增加血钙水平或将血钙水平维持在正常水平，优选地在反刍动物中达到高于或等于2.1mmol/l或优选地达到2.2mmol/l的血钙浓度。产后低钙血症的治疗，或更具体地预防，包括治疗，或更具体地预防，由于产奶反刍动物的低钙血症引起的头和肢的肌肉震颤、平卧、嗜睡、四肢冰凉或体温过低。
24.本发明涉及一种包含卡麦角林的兽用组合物，其用于治疗产乳热，或更具体地用于预防产乳热，其中所述组合物在干奶期期间并且优选地在干涸时被施用于反刍动物。
25.本发明还涉及一种包含卡麦角林的兽用组合物，其用于治疗产奶反刍动物的产乳热，所述兽用组合物以单次施用和/或以重复施用，优选地以单次施用，在干奶期期间并且优选地在干涸时被施用。
26.根据本发明将所述组合物施用于产奶反刍动物更具体地允许在反刍动物中维持高于或等于2.1mmol/l或优选地2.2mmol/l的血钙浓度。更具体地说，所述施用不需要任何特定的饲粮，并且更具体地说，不需要旨在维持反刍动物中令人满意的血钙浓度的任何饲粮方案(例如具有足够量的镁并平衡这些饲粮以提供dcad的饲粮)。根据本发明使用的组合物允许在干奶期期间并且更具体地在分娩时和在分娩后(即在随后的泌乳时)维持这样的血液浓度。
27.本发明还涉及预防和/或减少产奶反刍动物的产后低钙血症的方法，以及预防产奶反刍动物产乳热的方法，所述方法包括根据有效的治疗方案在干奶期期间并且优选地在干涸时向反刍动物施用包含卡麦角林的兽用组合物。
28.优选地，将所述兽用组合物施用于奶牛。
29.更具体地，根据本发明的用于使用的兽用组合物在最后一次挤奶后被施用。在特
定的实施例中，兽用组合物优选地在最后一次挤奶后的前5小时、前4小时或前2小时内施用，优选地在最后一次挤奶后的前30分钟(如15-20分钟)内施用。
30.根据本发明的兽用组合物和方法对农场主有吸引力，因为它们的使用可以保持令人满意的血钙浓度，而不用担心特定的血钙浓度增加方案，导致简化的畜群管理，并且在恢复泌乳时在疾病治疗费用方面节省。因此，施用本发明的组合物能够在干奶期期间更好地管理饲粮计划。
31.卡麦角林，其化学名称为n-[3-(二甲基氨基)丙基]-n-[(乙基氨基)羰基]-6-(2-丙烯基)-8g-麦角灵-8-甲酰胺，是一种对d2多巴胺受体具有特异性的抗催乳素激动剂化合物。它在专利us 4,526,892中被特别地描述。其化学结构式如下：
[0032][0033]
卡麦角林是以名称和出售的人类药物中的活性成分。此外，它是以名称(用于易发生假妊娠的泌乳的母犬)和名称(用于奶牛中以用于减少奶牛的干奶期期间的乳房退化持续时间)出售的兽用组合物中的基本活性成分并且以单次肌肉注射施用。这些基于卡麦角林的组合物都没有被施用于反刍动物以便治疗产奶反刍动物的产乳热。
[0034]
有效量或治疗剂量可能根据待治疗的反刍动物而变化。剂量(也被称为治疗方案)可以容易地通过基于以下实例的系统测试来确定，并且在本领域技术人员的能力范围内。根据本发明的特定实施例，根据本发明的有效治疗剂量在1μg/kg和50μg/kg之间，或在5μg/kg至11μg/kg之间，并且更优选地约6μg/kg至9μg/kg。
[0035]
更优选地，被施用的卡麦角林的量为每个产奶反刍动物0.25mg至7mg，优选地0.3mg至6mg，并且更具体地1mg至6mg。
[0036]
更优选地，被施用的卡麦角林的量为每头乳牛2mg至7mg，优选地3mg至6mg，并且更具体地5mg至6mg。
[0037]
根据本发明，术语“反刍动物”是指草食哺乳动物，如例如牛科动物(bovines)、绵羊科动物(ovines)、山羊科动物(caprines)、骆驼科动物(camelids)或牛科动物(bovids)。本发明的产奶反刍动物优选地为妊娠反刍动物。将根据本发明的组合物施用于产奶的妊娠反刍哺乳动物，优选地如奶牛、绵羊和山羊，并且更优选地奶牛。
[0038]
有利地，本发明的兽用组合物可以与用于治疗和/或预防反刍动物的乳房内炎症和乳房内感染(例如乳腺炎)的标准治疗药物联合施用。乳腺炎的标准护理或预防组合物的
实例是乳房的局部消毒剂、抗生素如m组的青霉素类、头孢菌素、庆大霉素或者甚至酶如溶菌酶或胞壁酶，以及乳头封闭剂。
[0039]
如前所述，产后低钙血症(也被称为产乳热)是由通常在分娩前后(更具体地说是在奶牛产犊时)发生的暂时性血钙缺乏引起的。产乳热通常发生在分娩后的接下来12至24小时内。根据特定的实施例，产后低钙血症在分娩后的接下来12至24小时内治疗。
[0040]
根据本发明的特定实施例，本发明的产后低钙血症的治疗包括降低或缓解发生产后低钙血症的风险，尤其是在分娩后的接下来12至24小时内。
[0041]
根据本发明的特定实施例，预防和/或减少产奶反刍动物的产后低钙血症是指这样的治疗，其中反刍动物呈现或达到令人满意的血钙浓度，该血钙浓度通常高于或等于2.1mmol/l，优选地2.2mmol/l。
[0042]
根据本发明使用的兽用组合物可以根据本领域熟知的多种施用方式被施用，并且适于治疗这些动物中的每一种。它们优选地被口服或肠胃外施用。甚至更优选通过肌内或皮下注射或通过乳房内施用来施用它们。根据特定的实施例，它们是乳房内施用的或优选地肌肉内施用的。
[0043]
因此，它们可以是口服、乳房内或可注射的液体溶液或悬浮液的形式，或者是固体或半固体形式。
[0044]
根据所使用的组合物的制剂，它们可以进一步包括在用于制备用于乳房内施用的液体制剂的药学中常规使用的成分。
[0045]
通过将如上所述的有效治疗量的卡麦角林与溶剂、ph调节剂、缓冲剂、悬浮剂、增溶剂、稳定剂、张力剂和/或防腐剂混合，并通过根据常规方法将混合物转化为皮下或肌肉注射来制备可注射制剂。
[0046]
作为溶剂，可以提及二甲基亚砜(dmso)，油性溶剂如中链甘油三酯，或癸酸、辛酸和甘油三酯的混合物，如以名称812销售的。根据需要，可注射制剂可以根据常规方法冻干。悬浮剂的实例包括甲基纤维素、聚山梨醇酯80、羟乙基纤维素、黄原胶、羧甲基纤维素钠和聚乙氧基化脱水山梨醇单月桂酸酯。增溶剂的实例包括聚氧乙烯硬化蓖麻油、聚山梨醇酯80、烟酰胺、聚氧乙烯脱水山梨醇单月桂酸酯、聚乙二醇和蓖麻油脂肪酸乙酯。此外，稳定剂包括亚硫酸钠、金属亚硫酸钠和乙醚，而防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯甲醇、苯酚、甲酚和氯甲酚。张力剂的实例是甘露醇。在可注射溶液或悬浮液的制备期间，需要确保它们与血液等渗。
[0047]
本发明进一步涉及一种用于治疗，更具体地减少或缓解产奶反刍动物的产后低钙血症的用于兽医用途的试剂盒，其中所述试剂盒包括包含如上定义的卡麦角林的兽用组合物，用于治疗产奶反刍动物的产后低钙血症。根据本发明的试剂盒可以包括至少一个用于任选地无菌包装的隔室，所述包装包括用于向反刍动物施用的有效治疗量的如上所述的卡麦角林。所述试剂盒包括使组合物能够通过选择的途径(例如乳房内或肌肉内途径)施用的装置(means)，以及与根据本发明的兽用组合物的施用方式相关的说明书。
[0048]
上面针对组合物和所述组合物的用途描述的所有实施例也适用于本发明的试剂盒和方法。
[0049]
以下描述的是实例。这些实例是说明性的而不是限制性的。
[0050]
实例
[0051]
实例1：卡麦角林对奶牛的产乳热的作用
[0052]
卡麦角林组合物是包含卡麦角林以及作为赋形剂的二甲基亚砜和中链甘油三酯的溶液。它对应于被称为velactis
tm
的产品(卡麦角林1.12mg/ml)。
[0053]
本临床研究的目的是评估在奶牛中最后一次挤奶后、在干涸时、在干奶期和随后的泌乳期间肌肉注射一次如上详述的卡麦角林组合物的长期安全性。这是多中心、平行、随机化、盲法的实验设计，评价了如上详述的卡麦角林组合物相对于阴性对照(安慰剂)在干奶期后产犊时的产乳热影响。
[0054]
对于测试的组，每头奶牛注射5.6mg的卡麦角林组合物(即，5ml/奶牛)。将5ml/奶牛的卡麦角林组合物的媒介物注射到对照组中(即，0mg/ml的卡麦角林)。每只动物在干奶时在最后一次挤奶后4小时内通过肌肉注射来治疗。
[0055]
在研究中包括的奶牛的总数为255头(在测试的组中126头和在安慰剂组中129头)。两组在纳入时的其基线标准方面是可比的。
[0056]
兽医在两组的产犊时评估并记录产乳热。
[0057]
在表1中给出了每组的产乳热的发病率。
[0058]
表1：每组的产乳热
[0059]
产乳热检测测试的组(n＝126)安慰剂组(n＝129)总共(n＝255)否99.18％1(121)289.52％(111)94.31％(232)是0.82％(1)10.48％(13)5.69％(14)错过(4)(5)(9)
[0060]1出现产乳热的症状的奶牛的百分比
[0061]2括号中的奶牛的数量
[0062]
考虑所有的产犊标准(流产、早产、产犊方式、小牛的数量和总体健康状况、产犊并发症和妊娠长度)和所有的繁殖标准(发情同步、第一次发情发生的处理、妊娠诊断、产犊和第一次发情之间以及产犊和受精之间的间隔、
……
)在整个研究中考虑，在测试的组和安慰剂组之间未观察到相关的差异。以同样的方式，在用卡麦角林组合物治疗的奶牛产犊后子宫和卵巢检查的结果与在用安慰剂治疗的动物中获得的结果相当，并且在两组之间在所有泌乳期间记录的产奶量和体细胞计数(scc)相似。与安慰剂组相比，在测试的组中产奶量甚至略高。
[0063]
产犊时的产乳热(10.5％的奶牛)在安慰剂组中记录得最多。与安慰剂组相比，在测试的组中在产犊时患有产乳热的奶牛的百分比显著较低(p《0.05)。它还与约92.2％的产乳热的相对低风险相关，其中ci95％＝[41.2％；99.0％](通过统计分析计算)。
[0064]
总之，包含卡麦角林的兽用组合物以非常令人满意和简单的方式降低了发生产乳热的风险。还重要的是应当注意，此类治疗不影响反刍动物在随后的泌乳期间的产奶能力和/或乳质量(如scc)。