甘露聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸的制作方法

甘露聚糖酶变体以及编码它们的多核苷酸
1.序列表的引用
2.本技术含有计算机可读形式的序列表，将其通过引用并入本文。
3.发明背景
技术领域
4.本发明涉及表现出甘露聚糖酶活性的甘露聚糖酶变体、包含这些甘露聚糖酶变体的组合物、编码这些变体的多核苷酸、产生这些变体的方法以及使用这些变体的方法。


背景技术：

5.甘露聚糖是具有β-1,4-连接的d-吡喃甘露糖基残基的主链的多糖，它可以包含半乳糖或乙酰基取代，并且可以在主链中具有葡萄糖残基。参与甘露聚糖降解的主要酶类型是内切-1,4-β-甘露聚糖酶(ec 3.2.1.78)，它水解在甘露聚糖主链中的内部糖苷键。
6.甘露聚糖是占软木中高达25％的木材干重的一类半纤维素，但是还发现于其他植物材料中，尤其是各种种子中。含甘露聚糖的瓜尔胶在许多食品中用作稳定剂。
7.因此，在其中需要降解甘露聚糖的应用中使用内切甘露聚糖酶可能是有利的。其中可以使用甘露聚糖酶的实例是在洗涤剂中，以去除含有甘露聚糖的污渍；在由软木(v
á
rnai等人,(2011)“synergistic action of xylanase and mannanase improves the total hydrolysis of softwood[木聚糖酶和甘露聚糖酶的协同作用改善了软木的完全水解]”,bioresource tech.[生物资源技术],102(19),第9096-9104页)和棕榈仁滤饼(等人,(2010)“production of ethanol and feed by high dry matter hydrolysis and fermentation of palm kernel press cake[通过棕榈仁滤饼的高干物质水解和发酵生产乙醇和饲料]”,applied biochem.biotech.[应用生物化学和生物技术],161(1-8),第318-332页)生产生物乙醇中，以用于改善动物饲料(cai等人,(2011),“acidicβ-mannanase from penicillium pinophilum c1:cloning,characterization and assessment of its potential for animal feed application[来自嗜松青霉c1的酸性β-甘露聚糖酶：克隆、表征及对其用于动物饲料应用的潜力的评估]”,j.biosci.bioeng.[生物科学与生物工程杂志],112(6),第551-557页)；以及在咖啡提取物的水解中(nunes等人,(2006),“characterization of galactomannan derivatives in roasted coffee beverages[烘焙咖啡饮料中半乳甘露聚糖衍生物的表征]”,j.agricultural food chem.[农业化学与食品化学杂志],54(9),第3428-3439页)。
[0008]
在家用护理工业中，已知在例如衣物洗涤剂中使用甘露聚糖酶。在wo 1999/064619中，披露了一种碱性甘露聚糖酶，当应用于清洁组合物中时，该碱性甘露聚糖酶在碱性ph范围内也表现出甘露聚糖酶活性。
[0009]
根据cazy(azy.org)，内切-1,4-β-甘露聚糖酶已经发现于糖苷水解酶家族5、26和113中。在wo 2019/068715和wo 2019/068713中，披露了表现出β-甘露聚糖酶活性的gh 26家族甘露聚糖酶。
[0010]
然而，替代性甘露聚糖酶对于例如洗涤剂生产工业来说是希望的并且是具有工业实用性的。本发明针对这些以及其他重要目的。


技术实现要素：

[0011]
本文描述了亲本甘露聚糖酶的变体，其中所述变体包含至少两个修饰，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且其中该变体与seq id no:1、seq id no:2的多肽或其具有甘露聚糖酶活性的片段具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0012]
本发明还涉及包含如本文披露的变体的组合物，这种组合物在家庭或工业清洁过程中的用途，编码这些变体的分离的多核苷酸；包含这些多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞；以及产生这些变体的方法，连同使用本文披露的组合物进行洗涤的方法。
[0013]
序列表概述
[0014]
seq id no:1是来自伊利诺斯州类芽孢杆菌(paenibacillus illinoisensis)菌株的、具有cbm35结构域的成熟gh26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
[0015]
seq id no:2是seq id no:1的甘露聚糖酶，其进一步包括稳定化突变。
[0016]
seq id no:3是来自伊利诺斯州类芽孢杆菌菌株的、缺少cbm35结构域的截短的成熟gh26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
[0017]
seq id no:4是来自伊利诺斯州类芽孢杆菌菌株的、缺少cbm35结构域的截短的成熟gh26甘露聚糖酶的氨基酸序列。
[0018]
seq id no:5：从芽孢杆菌属物种(bacillus sp.)获得的成熟多肽
[0019]
seq id no:6：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0020]
seq id no:7：从噬细胞菌属物种(cytophaga sp.)获得的成熟多肽
[0021]
seq id no:8：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0022]
seq id no:9：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0023]
seq id no:10：从枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis)获得的成熟多肽
[0024]
seq id no:11：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0025]
seq id no:12：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0026]
seq id no:13：合成构建体
[0027]
seq id no:14：从迟缓芽孢杆菌(bacillus lentus)获得的成熟多肽
[0028]
seq id no:15：从解淀粉芽孢杆菌(bacillus amyloliquefaciens)获得的成熟多肽
[0029]
seq id no:16：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0030]
seq id no:17：从吉氏芽孢杆菌(bacillus gibsonii)获得的成熟多肽
[0031]
seq id no:18：从迟缓芽孢杆菌获得的成熟多肽
[0032]
seq id no:19：从地衣芽孢杆菌(bacillus licheniformis)获得的成熟多肽
[0033]
seq id no:20：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0034]
seq id no:21：从特异腐质霉(humicola insolens)获得的成熟多肽
[0035]
seq id no:22：从特异腐质霉获得的成熟多肽
[0036]
seq id no:23：从土生梭孢壳霉(thielavia terrestris)获得的成熟多肽
[0037]
seq id no:24：从多粘类芽孢杆菌(paenibacillus polymyxa)获得的成熟多肽
[0038]
seq id no:25：从热白丝菌(melanocarpus albomyces)获得的成熟多肽
[0039]
seq id no:26：从疏棉状嗜热丝孢菌(thermomyces lanuginosus)获得的成熟多肽
[0040]
seq id no:27：从粘琼脂芽孢杆菌(bacillus agaradhaerens)获得的成熟多肽
[0041]
seq id no:28：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0042]
seq id no:29：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0043]
seq id no:30：从秋叶氏芽孢杆菌(bacillus akibai)获得的成熟多肽
[0044]
seq id no:31：从莫哈韦芽孢杆菌(bacillus mojavensis)获得的成熟多肽
[0045]
seq id no:32：从热芽孢杆菌属物种(thermobacillus species)获得的成熟多肽
[0046]
seq id no:33：从类芽孢杆菌属物种(paenibacillus species)获得的成熟多肽
[0047]
seq id no:34：从柯恩氏菌属物种(cohnella species)获得的成熟多肽
[0048]
seq id no:35：从埃吉类芽孢杆菌(paenibacillus elgii)获得的成熟多肽
[0049]
seq id no:36：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0050]
seq id no:37：从芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0051]
seq id no:38：从博戈里亚芽孢杆菌(bacillus bogoriensis)获得的成熟多肽
[0052]
seq id no:39：从类芽孢杆菌属物种获得的成熟多肽
[0053]
seq id no:40：从半解纤维素芽孢杆菌(bacillus hemicellulosilyticus)获得的成熟多肽
[0054]
seq id no:41：从枯草芽孢杆菌获得的成熟多肽
[0055]
seq id no:42：从食物芽孢杆菌(bacillus cibi)获得的成熟多肽
[0056]
seq id no:43：从米曲霉(aspergillus oryzae)获得的成熟多肽
[0057]
seq id no:44是编码seq id no:1的成熟gh26甘露聚糖酶的基因。
[0058]
seq id no:45是编码seq id no:2的成熟gh26甘露聚糖酶的基因。
[0059]
定义
[0060]
根据详细描述，应用下面的缩写和定义。注意，单数形式“一种/个(a/an)”以及“该(the)”包括复数个指示物，除非上下文中另外明确指明。因此，例如，提及“酶”时包括多种此类酶，且提及“该剂量”时包括本领域技术人员已知的一种或多种剂量及其等同物等。
[0061]
等位基因变体：术语“等位基因变体”意指占据同一染色体基因座的基因的两种或更多种替代性形式中的任一种。等位基因变异通过突变而自然产生，并且可以导致群体内部的多态性。基因突变可以是沉默的(所编码的多肽无变化)或可以编码具有改变的氨基酸序列的多肽。多肽的等位基因变体是由基因的等位基因变体编码的多肽。
[0062]
淀粉酶：术语“淀粉酶”(ec 3.2.1)是指催化淀粉、糖原和相关多糖水解为寡糖、麦芽糖或葡萄糖的酶。淀粉酶是糖苷水解酶并且作用于α-1,4-糖苷键。适用于本发明的清洁组合物中的淀粉酶优选为α淀粉酶。α-淀粉酶(ec 3.2.1.1)包括1,4-α-d-葡聚糖葡聚糖水解酶和糖原酶并且是钙金属酶。通过在淀粉链上的随机位置作用，α-淀粉酶分解长链碳水化合物，最终从直链淀粉产生麦芽三糖和麦芽糖，或从支链淀粉产生麦芽糖、葡萄糖和“极限糊精”。本发明的适合的淀粉酶优选地是例如获得自细菌或真菌来源的微生物淀粉酶。术语“α-淀粉酶活性”意指α1,4-葡聚糖4葡聚糖水解酶(e.c.3.2.1.1)的活性，其构成催化淀粉以及其他直链和支链1,4α-糖苷寡糖和多糖的水解的一组酶。α-淀粉酶活性可通过如在本文实例中描述的测定ii来确定。
[0063]
β-葡聚糖酶：如本文所用，术语“β-葡聚糖酶”意指催化连接β-葡聚糖中两个葡糖基残基的β-1,3键、β-1,6键和/或β-1,4键的水解的内切作用酶。
[0064]
如本文所定义，β-葡聚糖酶的亚组(也称为地衣多糖酶(或地衣聚糖酶)(例如，ec 3.2.1.73))也可用于催化β-1,4-糖苷键的水解以产生β-葡聚糖。地衣多糖酶(或地衣聚糖酶)(例如，ec 3.2.1.73)水解含有(1,3)-和(1,4)-键的β-d-葡聚糖中的(1,4)-β-d-糖苷键并且可以作用于地衣多糖和谷类β-d-葡聚糖，但不作用于仅含有1,3-键或1,4-键的β-d-葡聚糖。如本文所用，术语“β-葡聚糖酶活性”包括地衣多糖酶(或地衣聚糖酶)(例如，ec 3.2.1.73)活性。地衣多糖酶活性可以如本文测定vii中来进行确定。
[0065]
当还原基团参与待水解的键的葡萄糖残基在c3处被取代以释放葡萄糖或寡糖时，如本文所定义的β-葡聚糖酶的另外一个亚组(也被称为昆布多糖酶(例如，ec 3.2.1.6、ec 3.2.1.39、和/或ec 3.2.1.58))还可以用于催化β-1,3-糖苷键或β-1,4-糖苷键的水解。如本文所用，术语“β-葡聚糖酶活性”还包括昆布多糖酶(例如，ec 3.2.1.6、ec 3.2.1.39、和/或ec 3.2.1.58)活性。昆布多糖酶活性可以如本文测定vi中来进行确定。
[0066]
生物膜：术语“生物膜”意指在表面上，例如纺织品、餐具或硬表面上，细胞彼此粘附在一起的任何群组的微生物。这些粘附细胞通常嵌入细胞外聚合物(eps)的自生基质中。生物膜eps是一般由细胞外dna、蛋白质和多糖组成的聚合物团块。生物膜可以形成在活的或非活的表面上。在生物膜中生长的微生物细胞与同一生物的浮游细胞(相比之下，浮游细胞是可以在液体介质中漂浮或浮游的单个细胞)在生理上是不同的。
[0067]
生活在生物膜中的细菌通常具有与同一物种的自由漂浮细菌显著不同的特性，因为膜的密集并且受保护的环境允许它们以不同方式协作和相互作用。这一环境的一个作用是增加对洗涤剂和抗生素的抗性，因为，密集的细胞外基质和细胞的外层保护群落的内部。
[0068]
关于产生衣物洗涤生物膜的细菌可以在以下物种中找到：不动杆菌属物种(acinetobacter sp.)、气微菌属物种(aeromicrobium sp.)、短波单胞菌属物种
(brevundimonas sp.)、微杆菌属物种(microbacterium sp.)、滕黄微球菌(micrococcus luteus)、假单胞菌属物种(pseudomonas sp.)、表皮葡萄球菌(staphylococcus epidermidis)以及寡养单胞菌属物种(stenotrophomonas sp.)。
[0069]
碳水化合物结合模块：术语“碳水化合物结合模块”意指提供碳水化合物结合活性的碳水化合物活性酶内的区域(boraston等人,2004,biochem.j.[生物化学杂志]383:769-781)。大多数已知的碳水化合物结合模块(cbm)是具有离散折叠的连续氨基酸序列。碳水化合物结合模块(cbm)典型地发现于酶的n-末端处或c-末端的端点处。已知一些cbm具有针对纤维素的特异性。在一个实施例中，该cbm是家族35cbm(pfam pf16990)，如在tunnicliffe rb,bolam dn,pell g,gilbert hj,williamson mp；j mol biol.[分子生物学杂志]2005；347:287-296中所披露的。
[0070]
催化结构域：术语“催化结构域”意指酶的含有该酶的催化机构的区域。
[0071]
cdna：术语“cdna”意指可以通过从获得自真核或原核细胞的成熟的、剪接的mrna分子进行反转录而制备的dna分子。cdna缺乏可以存在于对应基因组dna中的内含子序列。初始的初级rna转录物是mrna的前体，其要通过一系列的步骤(包括剪接)进行加工，然后呈现为成熟的剪接的mrna。
[0072]
纤维素分解酶或纤维素酶：术语“纤维素分解酶”或“纤维素酶”意指水解纤维素材料的一种或多种(例如，几种)酶。此类酶包括一种或多种内切葡聚糖酶、一种或多种纤维二糖水解酶、一种或多种β-葡糖苷酶、或其组合。用于测量纤维素分解酶活性的两种基本方法包括：(1)测量总纤维素分解酶活性，以及(2)测量个体纤维素分解酶活性(内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶和β-葡糖苷酶)，如在zhang等人,2006,biotechnology advances[生物技术进展]24:452-481中所述的。可使用不溶性底物，包括沃特曼(whatman)
№
1滤纸、微晶纤维素、细菌纤维素、藻类纤维素、棉、预处理的木质纤维素等，测量总纤维素分解酶活性。最常见的总纤维素分解活性测定是将沃特曼
№
1滤纸用作底物的滤纸测定。该测定是由国际纯粹与应用化学联合会(iupac)建立的(ghose,1987,pure appl.chem.[纯粹与应用化学]59:257-68)。
[0073]
可以通过测量在以下条件下，由一种或多种纤维素分解酶进行的纤维素材料水解期间，糖的产生/释放的增加来确定纤维素分解酶活性：与没有添加纤维素分解酶蛋白的对照水解相比，1-50mg的纤维素分解酶蛋白/g于预处理的玉米秸秆(pcs)中的纤维素(或其他预处理的纤维素材料)，在适合的温度(如40℃-80℃，例如50℃、55℃、60℃、65℃或70℃)和适合的ph(如4-9，例如，5.0、5.5、6.0、6.5或7.0)下持续3-7天。典型条件为：1ml反应，洗涤或未洗涤的pcs，5％不溶性固形物(干重)，50mm乙酸钠(ph 5)，1mm mnso4，50℃、55℃、或60℃，72小时，通过hpx-87h柱(伯乐实验室有限公司(bio-rad laboratories,inc.)，赫拉克勒斯，加州，美国)进行的糖分析并且如本文实例中所述。
[0074]
嵌合多肽：术语“嵌合多肽”意指具有甘露聚糖酶活性的多肽，其组成是通过将来自具有甘露聚糖酶活性的一种多肽的氨基酸序列替代为一种或多种具有甘露聚糖酶活性的其他多肽的同源位置的氨基酸而生成的。
[0075]
编码序列：术语“编码序列”意指直接指定多肽的氨基酸序列的多核苷酸。编码序列的边界通常由开放阅读框确定，该开放阅读框以起始密码子(如atg、gtg或ttg)开始并且以终止密码子(如taa、tag或tga)结束。编码序列可为基因组dna、cdna、合成dna或其组合。
[0076]
控制序列：术语“控制序列”意指表达编码本发明的成熟多肽的多核苷酸所必需的核酸序列。每个控制序列对于编码该多肽的多核苷酸来说可以是天然的(即，来自相同基因)或外源的(即，来自不同基因)，或相对于彼此是天然的或外源的。此类控制序列包括但不限于前导序列、多腺苷酸化序列、前肽序列、启动子、信号肽序列和转录终止子。最少，控制序列包括启动子、以及转录和翻译终止信号。出于引入有利于将控制序列与编码多肽的多核苷酸的编码区连接的特异性限制位点的目的，这些控制序列可以提供有多个接头。
[0077]
深度清洁：术语“深度清洁”在本文中定义为意指减少、破坏或去除可以包含在有机物质(例如，生物膜)中的组分，如多糖、蛋白质、dna、污垢或存在于有机物质中的其他组分。有机物质可以被称为包含多于一种有机组分(如淀粉、油脂、蛋白质、dna和甘露聚糖)的聚有机污渍。
[0078]
洗涤剂组分：本文将术语“洗涤剂组分”定义为意指可以用于洗涤剂组合物中的化学品的类型。洗涤剂组分的实例是表面活性剂、水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂(chelator)或螯合试剂(chelating agent)、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂(foam booster)、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。洗涤剂组合物可以包含一种或多种任何类型的洗涤剂组分。
[0079]
洗涤剂组合物：术语“洗涤剂组合物”是指用于从有待清洁的物品(如纺织品、餐具和硬表面)去除不希望的化合物的组合物。该洗涤剂组合物可以用于例如清洁纺织品、餐具和硬表面，用于家用清洁和工业清洁两者。这些术语涵盖选择用于希望的特定类型的清洁组合物和产品的形式(例如，液体、凝胶、粉末、颗粒、糊剂、或喷雾组合物)的任何材料/化合物，并且包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体衣物洗涤剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁配制品，如用于玻璃、木材、陶瓷和金属台面以及窗户；地毯清洁剂；烤箱清洁剂；织物清新剂；织物软化剂；以及纺织品和衣物预洗涤剂，连同餐具洗涤剂)。
[0080]
除了含有本发明的甘露聚糖酶变体之外，该洗涤剂组合物还可以含有一种或多种另外的酶(如淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰基酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、地衣多糖酶、昆布多糖酶、dna酶及其组合，或其任何混合物)，和/或组分，如表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分、聚合物、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、染料、香料、晦暗抑制剂、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、防蚀剂、酶抑制剂或稳定剂、酶活化剂、一种或多种转移酶、水解酶、氧化还原酶、上蓝剂和荧光染料、抗氧化剂和增溶剂。
[0081]
餐具洗涤：术语“餐具洗涤”是指所有形式的洗涤餐具，例如手洗或自动化餐具洗涤。洗涤餐具包括但不限于清洁所有形式的餐用器皿，如盘子、杯子、玻璃杯、碗、所有形式的刀具(如匙、刀、叉)、以及上菜用具连同陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
[0082]
餐具洗涤组合物：术语“餐具洗涤组合物(dish washing composition或dish wash composition)”是指旨在用于清洁盘子、餐桌用具、罐、锅、刀具的组合物和用于清洁厨房中硬表面区域的所有形式的组合物。本发明不限于任何特定类型的餐具洗涤组合物或任何特定的洗涤剂。
[0083]
dna酶：dna酶是具有dna酶(脱氧核糖核酸酶)活性的多肽，该多肽催化dna主链中的磷酸二酯键的水解切割，从而降解dna。外切脱氧核糖核酸酶切下或切割在dna主链末端的残基，其中内切-脱氧核糖核酸酶在dna主链内切割或切下。dna酶可以仅切割双链dna或可以切割双链和单链dna。术语“dna酶”和表达“具有dna酶活性的多肽”在本技术中可以互换地使用。出于本发明的目的，可以根据本文实例的测定iv或测定v中描述的程序来确定dna酶活性。优选地，dna酶选自任何以下酶类别：e.c.3.1，优选地e.c.3.1.21。优选地，具有dna酶活性的多肽从微生物获得，并且该dna酶是微生物酶。dna酶优选地是真菌或细菌来源的。
[0084]
表达：术语“表达”包括涉及多肽产生的任何步骤，包括但不限于：转录、转录后修饰、翻译、翻译后修饰、以及分泌。
[0085]
表达载体：术语“表达载体”意指直链或环状dna分子，其包含编码多肽的多核苷酸并且可操作地连接至提供用于其表达的控制序列。
[0086]
片段：术语“片段”意指从成熟多肽或结构域的氨基和/或羧基末端缺失一个或多个(例如，几个)氨基酸的多肽或者催化或碳水化合物结合模块；其中该片段具有甘露聚糖酶活性。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少90％，如seq id no:1的至少441个氨基酸、seq id no:2的至少441个氨基酸、seq id no:3的至少280个氨基酸、或seq id no:4的至少307个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少92％，如seq id no:1的至少451个氨基酸、如seq id no:2的至少451个氨基酸、seq id no:3的至少287个氨基酸、或seq id no:4的至少314个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少94％，如seq id no:1的至少461个氨基酸、seq id no:2的至少461个氨基酸、seq id no:3的至少293个氨基酸、或seq id no:3的至少321个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少96％，如seq id no:1的至少471个氨基酸、seq id no:2的至少471个氨基酸、seq id no:3的至少299个氨基酸、或seq id no:4的至少28个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少98％，如seq id no:1的至少481个氨基酸、seq id no:2的至少481个氨基酸、seq id no:3的至少305个氨基酸、或seq id no:4的至少335个氨基酸。在一个方面，该片段包含成熟多肽的长度的至少99％，如seq id no:1的至少486个氨基酸、seq id no:2的至少486个氨基酸、seq id no:3的至少308个氨基酸、或seq id no:4的至少338个氨基酸。
[0087]
融合多肽：术语“融合多肽”是其中一种多肽在本发明多肽的n-末端或c-末端融合的多肽。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(cooper等人,1993,embo j.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；dawson等人,1994,science[科学]266:776-779)。融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而
释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：martin等人,2003,j.ind.microbiol.biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；svetina等人,2000,j.biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；rasmussen-wilson等人,1997,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；ward等人,1995,biotechnology[生物技术]13:498-503；和contreras等人,1991,biotechnology[生物技术]9:378-381；eaton等人,1986,biochemistry[生物化学]25:505-512；collins-racie等人,1995,biotechnology[生物技术]13:982-987；carter等人,1989,proteins:structure,function,and genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及stevens,2003,drug discovery world[药物发现世界]4:35-48。
[0088]
硬表面清洁：本文将术语“硬表面清洁”定义为清洁硬表面，其中硬表面可以包括地板、桌子、墙壁、屋顶等，连同硬物体的表面，如汽车(汽车洗涤)和餐具(餐具洗涤)。餐具洗涤包括但不限于清洁盘子、杯子、玻璃杯、碗和刀具(如匙、刀、叉)、上菜用具、陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃及丙烯酸酯。
[0089]
半纤维素分解酶或半纤维素酶：术语“半纤维素分解酶”或“半纤维素酶”意指可对半纤维素材料进行水解的一种或多种(例如，几种)酶。参见例如，shallom和shoham，current opinion in microbiology[微生物学当前观点]，2003,6(3):219-228。半纤维素酶是植物生物质降解中的关键组分。半纤维素酶的实例包括但不限于乙酰甘露聚糖酯酶、乙酰木聚糖酯酶、阿拉伯聚糖酶、阿拉伯呋喃糖苷酶、香豆酸酯酶、阿魏酸酯酶、半乳糖苷酶、葡糖醛酸糖苷酶、葡糖醛酸酯酶、甘露聚糖酶、甘露糖苷酶、木聚糖酶和木糖苷酶。这些酶的底物(半纤维素)是支链和直链多糖的异质性组，这些多糖经由氢键与植物细胞壁中的纤维素微纤维相结合，从而将它们交联成稳健的网络。半纤维素还共价附接至木质素，从而与纤维素一起形成高度复杂的结构。半纤维素的可变结构和组织要求许多酶的协同作用以使其完全降解。半纤维素酶的催化模块是水解糖苷键的糖苷水解酶(gh)，或是水解乙酸盐或阿魏酸侧基团的酯键的碳水化合物酯酶(ce)。这些催化模块基于其一级序列的同源性，可以分配到gh和ce家族。一些家族(具有总体上类似的折叠)可以进一步分组为宗族(clan)，以字母标记(例如，gh-a)。在碳水化合物活性酶(cazy)数据库中可得到这些以及其他碳水化合物活性酶的最详实和最新的分类。半纤维素分解酶活性可根据ghose和bisaria,1987,pure&appi.chem.[纯粹与应用化学]59:1739-1752在适合温度(如40℃-80℃，例如50℃、55℃、60℃、65℃、或70℃)和适合ph(如4-9，例如，5.0、5.5、6.0、6.5、或7.0)下测量。
[0090]
宿主细胞：术语“宿主细胞”意指易于用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体进行转化、转染、转导等的任何细胞类型。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代、连同重组宿主细胞、分离的宿主细胞(例如分离的重组宿主细胞)、异源宿主细胞(例如，不是露湿漆斑菌(myrothecium roridum)宿主细胞的宿主细胞)。
[0091]
杂合多肽：术语“杂合多肽”意指包含来自两种或更多种多肽的结构域的多肽，例如，来自一种多肽的结合结构域和来自另一种多肽的催化结构域。结构域可以在n末端或c末端融合。
[0092]
杂交：术语“杂交”意指使用标准dna印迹程序将核酸的基本上互补的链配对。杂交
可以在中、中-高、高或非常高严格条件下进行。中严格条件意指在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在55℃使用0.2x ssc、0.2％sds洗涤三次，每次15分钟。中-高严格条件意指在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和35％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在60℃使用0.2x ssc、0.2％sds洗涤三次，每次15分钟。高严格条件意指在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在65℃使用0.2x ssc、0.2％sds洗涤三次，每次15分钟。非常高严格条件意指在42℃，于5x sspe、0.3％sds、200微克/ml剪切并变性的鲑鱼精子dna和50％甲酰胺中预杂交和杂交12至24小时，随后在70℃使用0.2x ssc、0.2％sds洗涤三次，每次15分钟。
[0093]
改善的特性：术语“改善的特性”意指与相对于亲本有所改善的变体相关的特征。此类改善的特性包括但不限于洗涤剂内稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性、表面活性剂稳定性、ph稳定性。
[0094]
洗涤剂内稳定性：术语“洗涤剂内稳定性”或“洗涤剂稳定性”是指在洗涤剂中孵育的甘露聚糖酶(无论是野生型、亲本或变体)的稳定性。出于本发明的目的，可以如在实例中，特别地实例6中所示确定洗涤剂内稳定性。
[0095]
分离的：术语“分离的”意指以在自然界中不存在的形式的物质或处于在自然界中不存在该物质的环境中的该物质。分离的物质的非限制性实例包括(1)任何非天然存在的物质，(2)包括但不限于任何酶、变体、核酸、蛋白质、肽或辅因子的任何物质，该物质至少部分地从与其性质相关的一种或多种或所有天然存在的成分中去除；(3)相对于自然界中发现的物质通过人工修饰的任何物质；或(4)通过相对于与其天然相关的其他组分，增加物质的量而修饰的任何物质(例如，宿主细胞中的重组产生；编码该物质的基因的多个拷贝；以及使用比与编码该物质的基因天然相关的启动子更强的启动子)。
[0096]
衣物洗涤：术语“衣物洗涤”涉及家用衣物洗涤和工业衣物洗涤两者并且意指用含有本发明的清洁或洗涤剂组合物的溶液处理纺织品的过程。衣物洗涤过程可以例如使用例如家用或工业洗涤机进行或可以手动进行。
[0097]
脂肪酶：术语脂肪酶包括催化脂肪(脂质)水解的酶。脂肪酶是酯酶的一个亚类。适合于本发明的脂肪酶包括磷脂酶、酰基转移酶或过水解酶，例如与南极假丝酵母(candida antarctica)脂肪酶a具有同源性的酰基转移酶(wo 10/111143)、来自耻垢分枝杆菌(mycobacterium smegmatis)的酰基转移酶(wo 05/56782)、来自ce 7家族的过水解酶(wo 09/67279)、以及耻垢分枝杆菌过水解酶的变体，特别是用于在来自亨斯迈纺织染化私人有限公司(huntsman textile effects pte ltd)的商业化产品gentle power bleach(柔和漂白剂)中使用的s54v变体(wo 10/100028)。适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的突变体酶或蛋白质工程化的突变体酶。实例包括来自嗜热丝孢菌属(thermomyces)，例如来自如ep 258068和ep 305216中描述的疏棉状嗜热丝孢菌(t.lanuginosus)(早先命名为疏棉状腐质霉(humicola lanuginosa))的脂肪酶；来自腐质霉属(humicola)，例如特异腐质霉(h.insolens)(wo 96/13580)的角质酶；来自假单胞菌属的菌株(这些中的一些现在改名为伯克霍尔德菌属(burkholderia))，例如产碱假单胞菌(p.alcaligenes)或假产碱假单胞菌(p.pseudoalcaligenes)(ep 218272)、洋葱假单胞菌
(p.cepacia)(ep 331376)、假单胞菌属菌株sd705(wo 95/06720和wo 96/27002)、威斯康星假单胞菌(p.wisconsinensis)(wo 96/12012)的脂肪酶；gdsl-型链霉菌属(streptomyces)脂肪酶(wo 10/065455)；来自稻瘟病菌(magnaporthe grisea)的角质酶(wo 10/107560)；来自门多萨假单胞菌(pseudomonas mendocina)的角质酶(us 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(thermobifida fusca)的脂肪酶(wo 11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌(geobacillus stearothermophilus)脂肪酶(wo 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(wo 11/084599)；以及来自灰色链霉菌(streptomyces griseus)(wo 11/150157)和始旋链霉菌(s.pristinaespiralis)(wo 12/137147)的脂肪酶。脂肪酶活性可以如本文实例中的测定viii中所述来进行确定。
[0098]
甘露聚糖酶：术语“甘露聚糖酶”意指具有催化甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖中的1,4-β-d-甘露糖苷键的水解的甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶活性(ec 3.2.1.78)的多肽。甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶的别名是：1,4-β-d-甘露聚糖甘露聚糖水解酶；内切-1,4-β-甘露聚糖酶；内切-β-1,4-甘露聚糖酶；β-甘露聚糖酶b；β-1,4-甘露聚糖4-甘露聚糖水解酶；内切-β-甘露聚糖酶；和β-d-甘露聚糖酶。出于本发明的目的，可以使用如本文实例1中所述的还原端测定来确定甘露聚糖酶活性。在一个方面，本发明的多肽具有seq id no:1的多肽的至少50％，例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的甘露聚糖酶活性。在一个方面，本发明的多肽具有seq id no:2的多肽的至少50％，例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的甘露聚糖酶活性。
[0099]
成熟多肽：术语“成熟多肽”意指在翻译和任何翻译后修饰如n-末端加工、c-末端截短、糖基化、磷酸化等之后处于其最终形式的多肽。在一个方面，该成熟多肽是seq id no:1的氨基酸1至491。在一个方面，该成熟多肽是seq id no:2的氨基酸1至491。在一个方面，该成熟多肽是seq id no:3的氨基酸1至312。在一个方面，该成熟多肽是seq id no:4的氨基酸1至342。
[0100]
在本领域中已知的是，宿主细胞可以产生由相同多核苷酸表达的两种或更多种不同的成熟多肽(即，具有不同的c-末端和/或n-末端氨基酸)的混合物。在本领域中还已知的是，不同的宿主细胞不同地加工多肽，并且因此一个表达多核苷酸的宿主细胞当与另一个表达相同多核苷酸的宿主细胞相比时可以产生不同的成熟多肽(例如，具有不同的c-末端和/或n-末端氨基酸)。
[0101]
成熟多肽编码序列：术语“成熟多肽编码序列”意指编码具有甘露聚糖酶活性的成熟多肽的多核苷酸。
[0102]
恶臭：术语“恶臭”意指在清洁物品上不希望的气味。清洁的物品应气味清新并且干净，而没有粘附在该物品上的恶臭。恶臭的一个实例是具有令人不愉快的气味的化合物，这些化合物可以是微生物产生的。另一实例是附着至已经与人类或动物接触的物品的汗水或体味。恶臭的另一实例可以是来自多种香料的气味，例如附着至物品(如一件纺织品)的咖喱或其他外来香料。测量物品附着恶臭的能力的一个方式是通过使用恶臭测定。
[0103]
修饰：在本发明的多肽的上下文中，术语“修饰”意指通过用不同的氨基酸取代、通过插入氨基酸、或通过缺失(优选地通过至少一个缺失)而改变在参考氨基酸序列(即seq id no:1或2)内的一个或多个氨基酸。术语“修饰”、“改变”和“突变”可以互换地使用并且构
成相同的含义和目的。
[0104]
突变体：术语“突变体”意指编码变体的多核苷酸。
[0105]
核酸构建体：术语“核酸构建体”意指单链或双链的核酸分子，该核酸分子是从天然存在的基因中分离的，或以原本不存在于自然界中的方式经修饰成含有核酸的区段，或者是合成的，该核酸分子包含一个或多个控制序列。
[0106]
可操作地连接：术语“可操作地连接”意指如下构型，在该构型中，控制序列被放置在相对于多核苷酸的编码序列适当的位置处，使得该控制序列指导该编码序列的表达。
[0107]
亲本或亲本甘露聚糖酶：如本文所用，术语“亲本”或“亲本甘露聚糖酶”或“亲本多肽”是指对其作出修饰以产生本发明的酶变体的具有甘露聚糖酶活性的任何多肽。在本发明中，应理解的是，亲本多肽是指在一个或多个氨基酸位置处不包括人造取代、插入或缺失的天然存在的多肽。类似地，术语“亲本”相对于多核苷酸，是指不包括人造核苷变化的天然存在的多核苷酸。然而，编码亲本多肽的多核苷酸不限于天然存在的多核苷酸，而是涵盖编码该亲本多肽的任何多核苷酸。亲本甘露聚糖酶可以是与seq id no:1或seq id no:2具有至少60％，如至少62％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％序列同一性的任何甘露聚糖酶。
[0108]
果胶酶：术语“果胶酶”表示根据本领域定义的果胶酶，并且包括切割果胶物质中的多糖和/或寡糖链的酶，例如聚(1,4-α-d-半乳糖醛酸)及其衍生物(参见参考文献sakai等人,pectin,pectinase and protopectinase:production,properties and applications[果胶、果胶酶和原果胶酶：生产、特性和应用],第213-294页于：advances in applied microbiology[应用微生物学进展]第39卷,1993中)。果胶酶的非限制性实例包括水解酶型果胶酶(例如，鼠李半乳糖醛酸聚糖水解酶)和裂解酶型果胶酶(例如，果胶裂解酶)。优选地，本发明的果胶酶是通过反式消去(transelimination)催化果胶酸(又称为聚半乳糖醛酸)中α-1,4-糖苷键的随机切割的果胶酶，如聚半乳糖醛酸裂解酶类(ec 4.2.2.2)(pgl)，又称为聚(1,4-α-d-半乳糖醛酸苷)裂解酶，又称为果胶裂解酶。果胶酶活性可以如本文实例中的测定ix中所述来进行确定。
[0109]
蛋白酶：术语“蛋白酶”包括水解肽键的酶，并且该术语包括肽酶和蛋白酶(proteinase)。丝氨酸蛋白酶(或丝氨酸肽链内切酶)(e.c.3.4.21)是切割蛋白质中肽键的酶，其中丝氨酸作为活性位点的亲核氨基酸。适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的突变体或蛋白质工程化的突变体。用于衣物洗涤的最相关的蛋白酶可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是s1家族的(如胰蛋白酶)或s8家族的(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如m4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自m5、m7或m8家族的那些。术语“枯草杆菌酶”是指根据siezen等人,protein engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和siezen等人,protein science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶k家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、kexin家族和pyrolysin家族。蛋白酶活性可以如本文实例中的测定x中所述来进行确定。
[0110]
ph稳定性：术语“ph稳定性”是指如在洗涤剂组合物中，在特定ph例如在升高的ph
(高于ph 7)，如ph 8-8.5、ph 9-9.5、ph 10-10.5下孵育的甘露聚糖酶(无论是野生型、亲本或变体)的稳定性。出于本发明的目的，可以如实例中所示确定ph稳定性。
[0111]
多肽或酶：术语“多肽”和“酶”可以互换地使用，以指包含由肽键连接的氨基酸残基的任何长度的聚合物。本文使用了常规的氨基酸残基的单字母或三字母密码。该聚合物可以是直链或支链聚合物，它可以包含修饰的氨基酸，并且可以被非氨基酸中断。这些术语还涵盖天然地修饰的或通过干预(例如，通过二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其他操作或修饰，如与标记组分缀合)而修饰的氨基酸聚合物。该定义内还包括例如含有一种或多种氨基酸类似物(包括例如非天然氨基酸等)连同本领域已知的其他修饰的多肽。
[0112]
蛋白酶稳定性：术语“蛋白酶稳定性”是指在蛋白酶的存在下，例如在洗涤剂中的蛋白酶的存在下孵育的甘露聚糖酶(无论是野生型、亲本或变体)的稳定性。出于本发明的目的，可以如实例中所示确定蛋白酶稳定性。示例性蛋白酶是下文详细描述的那些。
[0113]
纯化的：术语“纯化的”意指基本上不含其他组分的核酸或多肽，如通过本领域熟知的分析技术(例如，在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经过密度梯度离心的培养基中，纯化的多肽或核酸可形成离散的条带)所确定。纯化的核酸或多肽是至少约50％纯的，通常是至少约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％、约99.6％、约99.7％、约99.8％或更加纯的(例如，以摩尔计的重量百分比)。在相关意义上，当在应用纯化或富集技术之后存在分子的浓度的大幅度增加时，组合物富集了分子。术语“富集”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他指定材料或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。
[0114]
重组：当用于提及细胞、核酸、蛋白质或载体时，术语“重组”意指已经从其天然状态经修饰。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因，或与在自然界中发现的相比，以不同水平表达或在不同条件下表达天然基因。重组核酸与天然序列的差异在于一个或多个核苷酸和/或与异源序列(例如，表达载体中的异源启动子)可操作地连接。重组蛋白与天然序列的差异可以在于一个或多个氨基酸和/或与异源序列融合。包含编码多肽的核酸的载体是重组载体。术语“重组”与“遗传修饰的”和“转基因的”同义。
[0115]
序列同一性：两个氨基酸序列之间或两个核苷酸序列之间的相关性通过参数“序列同一性”来描述。出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(needleman-wunsch algorithm)(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列同一性，该算法如emboss软件包(emboss：the european molecular biology open software suite[欧洲分子生物学开放软件套件],rice等人,2000,trends genet.[遗传学趋势]16:276-277，优选6.6.0版本或其后的版本)的尼德尔(needle)程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和eblosum62(blosum62的emboss版本)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0116]
(相同的残基
×
100)/(比对长度-比对中的空位总数)
[0117]
出于本发明的目的，使用尼德曼-翁施算法(needleman和wunsch,1970,同上)来确定两个脱氧核糖核苷酸序列之间的序列同一性，如emboss软件包(emboss：the european molecular biology open software suite[欧洲分子生物学开放软件套件],rice等人,
2000,同上)(优选5.0.0版本或其后的版本)的尼德尔程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和ednafull(ncbi nuc4.4的emboss版)取代矩阵。将标记为“最长同一性”的尼德尔的输出(使用非简化选项获得)用作同一性百分比并且计算如下：
[0118]
(相同的脱氧核糖核苷酸
×
100)/(比对长度-比对中的空位总数)
[0119]
子序列：术语“子序列”意指具有从成熟多肽编码序列的5'端和/或3'端缺失的一个或多个(例如，几个)核苷酸的多核苷酸；其中该子序列编码具有甘露聚糖酶活性的片段。
[0120]
表面活性剂稳定性：术语“表面活性剂稳定性”是指在表面活性剂的存在下，例如在洗涤剂中的表面活性剂的存在下孵育的甘露聚糖酶(无论是野生型、亲本或变体)的稳定性。示例性表面活性剂是下文详细描述的那些，并且在特别的实施例中，表面活性剂稳定性是指在阴离子表面活性剂(如las)的存在下的稳定性。出于本发明的目的，可以如实例中所示确定表面活性剂稳定性。
[0121]
纺织品：术语“纺织品”意指任何纺织品材料，该任何纺织品材料包括纱线、纱线中间体、纤维、非机织材料、天然材料、合成材料、以及任何其他纺织品材料，由这些材料制成的织物和由织物制成的产品(例如，服装和其他制品)。该纺织品或织物可以处于针织品、机织物(woven)、牛仔布(denim)、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布的形式。该纺织品可以是基于纤维素的，如天然纤维素，包括棉、亚麻/亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维(lyocell)或其共混物。该纺织品或织物还可以是基于非纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝；或者合成聚合物，如尼龙、芳香族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶/弹性纤维(spandex/elastane)；或其共混物连同基于纤维素和基于非纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳香族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻/亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。织物可以是常规的可洗涤衣物，例如有污渍的家用衣物。当使用术语织物或服装时，旨在也包括广义术语纺织品。
[0122]
热稳定性：术语“热稳定性”是指在升高的温度的存在下孵育的甘露聚糖酶(无论是野生型、亲本或变体)的稳定性。出于本发明的目的，可以使用ndsf(prometheus，纳米温度公司(nanotemper))通过在洗涤剂(例如，标准a)的存在下测量变体的解链温度(tm)来确定热稳定性。制备样品以达到10％的标准a浓度和200ppm的蛋白质浓度。简单混合之后，将样品加载到毛细管中并且置于ndsf样品盘中。样品在tm估计模式下运行，温度范围为25℃-85℃，升温速度为1℃/min。运行完成后，在软件中使用350nm信号估计tm。
[0123]
变体：术语“变体”意指在一个或多个(几个)位置处包含改变(即，一个或多个(几个)氨基酸残基的取代、插入和/或缺失)的具有甘露聚糖酶活性的多肽。取代意指将占据某一位置的氨基酸用不同的氨基酸替代；缺失意指去除占据某一位置的氨基酸；并且插入意指邻近占据某一位置的氨基酸添加1-3个氨基酸。本发明的变体具有seq id no:1或seq id no:2的多肽的至少50％，例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或至少100％的甘露聚糖酶活性。
[0124]
野生型：提及氨基酸序列或核酸序列时术语“野生型”意指该氨基酸序列或核酸序
列是天然或天然存在的序列。如本文所用，术语“天然存在的”是指在自然界中发现的任何物质(例如蛋白质、氨基酸或核酸序列)。相反，术语“非天然存在的”是指在自然界中未发现的任何物质(例如，在实验室中产生的重组核酸和蛋白质序列、或野生型序列的修饰)。
[0125]
变体命名惯例
[0126]
出于本发明的目的，将seq id no:1中披露的多肽用于确定另一种甘露聚糖酶中的对应氨基酸位置。另一种甘露聚糖酶的氨基酸序列与在seq id no:1中披露的多肽进行比对，并且基于该比对，使用尼德曼-翁施算法(needleman和wunsch,1970,j.mol.biol.[分子生物学杂志]48:443-453)来确定对应于seq id no:1中披露的多肽中的任何氨基酸残基的氨基酸位置编号，该算法如emboss软件包(emboss：the european molecular biology open software suite[欧洲分子生物学开放软件套件],rice等人,2000,trends genet.[遗传学趋势]16:276-277，优选5.0.0版本或其后的版本)的尼德尔程序所实施的。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5、和eblosum62(blosum62的emboss版本)取代矩阵。
[0127]
在描述本发明的变体时，为了便于参考，以下描述的命名法经过了调整。采用了已接受的iupac单字母或三字母的氨基酸缩写。
[0128]
取代.对于氨基酸取代，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、取代的氨基酸。相应地，将在位置226处的苏氨酸被丙氨酸取代表示为“thr226ala”或“t226a”。多个突变通过加号(“ ”)分开，例如“gly205arg ser411phe”或“g205r s411f”代表在位置205和位置411处的甘氨酸(g)和丝氨酸(s)分别被精氨酸(r)和苯丙氨酸(f)取代。
[0129]
缺失.对于氨基酸缺失，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、*。相应地，将在位置195处的甘氨酸的缺失表示为“gly195*”或“g195*”。多个缺失通过加号(“ ”)分开，例如“gly195* ser411*”或“g195* s411*”。
[0130]
插入.对于氨基酸插入，使用以下命名法：原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸。相应地，将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸表示为“gly195glylys”或“g195gk”。将多个氨基酸的插入表示为[原始氨基酸、位置、原始氨基酸、插入的氨基酸#1、插入的氨基酸#2；等]。例如，将在位置195处的甘氨酸之后插入赖氨酸和丙氨酸表示为“gly195glylysala”或“g195gka”。
[0131]
在此类情况下，通过将小写字母添加至在所插入的一个或多个氨基酸残基之前的氨基酸残基的位置编号而对所插入的一个或多个氨基酸残基进行编号。在以上实例中，该序列因此会是：
[0132]
亲本：变体：195195 195a 195bgg-k-a
[0133]
多个改变.包含多个改变的变体通过加号(“ ”)分开，例如，“arg170tyr gly195glu”或“r170y g195e”代表在位置170处和位置195处的精氨酸和甘氨酸分别被酪氨酸和谷氨酸取代。
[0134]
不同改变.在可于一个位置处引入不同改变的情况下，这些不同改变通过逗号分开，例如，“arg170tyr,glu”代表在位置170处的精氨酸被酪氨酸或谷氨酸取代。因此，“tyr167gly,ala arg170gly,ala”表示以下变体：
[0135]“tyr167gly arg170gly”、“tyr167gly arg170ala”、“tyr167ala arg170gly”和“tyr167ala arg170ala”。
具体实施方式
[0136]
本发明涉及一种亲本甘露聚糖酶的变体，其中所述变体包含至少两个取代，其中(a)所述第一取代是在选自以下位置的位置中：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二取代是在所述变体的任何其他位置中，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且其中该变体与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、seq id no:4的多肽或其具有甘露聚糖酶活性的片段具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性。
[0137]
变体
[0138]
本发明的发明人已经发现，在上述所列位置之一中的修饰提供了与亲本甘露聚糖酶(即，在所列位置中的任一处不包含修饰的甘露聚糖酶)相比具有改善的稳定性的甘露聚糖酶变体。特别地，可以将稳定性作为洗涤剂组合物中的稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性、表面活性剂稳定性、和/或ph稳定性进行观察。
[0139]
洗涤剂组合物中的稳定性在本文中可以称为“洗涤剂内稳定性”，并且属于本文中别处描述的定义。这些术语可以互换地使用，但构成本发明的相同的含义和目的。如实例中所述已确定了稳定性。
[0140]
因此，当变体具有(a)所列位置中的至少一个时，观察到甘露聚糖酶变体的改善。当将(a)所列位置与任何其他修饰组合时，已经观察到稳定性得到维持。因此，这些位置被认为对于甘露聚糖酶的稳定性是重要的。特别地，可以将稳定性可以作为洗涤剂组合物中的稳定性进行观察。这种洗涤剂稳定性可以如实例3中所述来进行确定，即通过在洗涤剂中孵育变体，然后测量残余活性。该残余活性与在4℃下孵育相同小时数的亲本甘露聚糖酶的残余活性相关/与其进行比较。甘露聚糖酶变体的改善以半衰期改善因子(hif)给出。
[0141]
因此，本发明提供了亲本甘露聚糖酶的变体，其中该变体包含在以下位置的一个或多个中的至少一个取代：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，其中根据seq id no:1进行编号，以及在氨基酸序列的任何其他位置的位置中的至少一个第二(或另外的)修饰。如本文所用，术语“第二修饰”或“另外的修饰”应理解为是在除以下位置的任一个之外的位置中并且不在以下位置的任一个中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491。然而，根据本发明的变体可以包含在以下位置的任一个中的多于一个取代：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、
286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491。此外，术语“第二取代”应理解为“至少一个第二取代”，即第二取代可以在一个或多个位置中。
[0142]
从实例可以看出，所有披露的变体都具有改善的稳定性，特别是在应力下测试时。通过改变(即升高ph)，孵育更长/延长的时间段，改变的(即升高的)温度和/或在蛋白酶的存在下，可以增加根据本发明的这种应力。
[0143]
应理解的是，本发明的变体包含至少两个修饰(如取代)，这意味着这些变体可以在(a)中所列位置之一处包含取代，然后一个或多个第二/另外的取代是在本文披露的任何其他位置中。然而，还应理解的是，本发明的变体可以是在(a)中所列位置的多于一个位置，即在这些位置的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、11个、12个或甚至全部13个中包含取代的变体。
[0144]
本发明还涉及与亲本甘露聚糖酶相比具有多个修饰，例如至少19个突变，如至少20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、或甚至75个突变的变体，使得所得变体与seq id no:1、seq id no:2的多肽或其具有甘露聚糖酶活性的片段具有至少85％但小于96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有至少85％但小于95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有至少85％但小于94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有至少85％但小于93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有至少85％但小于92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有至少85％但小于91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有至少85％但小于90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0145]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置7的位置中包含缺失或取代或者由缺失或取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是7*、7a、7d、7g、7i、7p。在实施例中，该缺失或取代是f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p，优选地f7g。
[0146]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置13的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是13i、13m、13n、13w、13y、13e。在实施例中，该取代是t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e，优选地t13i。
[0147]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置15的位置中包含取代或由取
代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是15k、15c、15d、15m、15q、15t。在实施例中，该取代是s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t，优选地s15q。
[0148]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置20的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是20s、20p、20t、20g、20v。在实施例中，该取代是a20s、a20p、a20t、a20g、a20v，优选地a20p。
[0149]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置26的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是26d、26e、26h。在实施例中，该取代是k26d、k26e、k26h，优选地k26e。
[0150]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置36的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是36a、36c、36d、36e、36m、36t。在实施例中，该取代是k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t，优选地k36e。
[0151]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置46的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是46i、46f、46m、46y。在实施例中，该取代是e46i、e46f、e46m、e46y，优选地e46m或e46y。
[0152]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置64的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是64p。在实施例中，该取代是e64p。
[0153]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置69的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是69p、69r、69s、69t。在实施例中，该取代是q69p、q69r、q69s、q69t，优选地q69p。
[0154]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置70的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是70a、70e、70i、70m、70p、70t。在实施例中，该取代是k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t，优选地k70p。
[0155]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置82的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是82t、82a。在实施例中，该取代是n82t、n82a。
[0156]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置101的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是101r、101c、101e、101i、101l、101n、101q、101v。在实施例中，该取代是a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v，优选地a101r或a101l。
[0157]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置103的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是103r、103a、103c、103d、103e、103i、103l、103n、103q、103v、103y。在实施例中，该取代是s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y，优选地103v。
[0158]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置109的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例
中，该取代是109e、109d。在实施例中，该取代是s109e、s109d。
[0159]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置120的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是120s、120a、120g、120i、120p。在实施例中，该取代是k120s、k120a、k120g、k120i、k120p，优选地k120a或k120p。
[0160]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置141的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是141r、141i、141q、141a。在实施例中，该取代是s141r、s141i、s141q、s141a，优选地141r。
[0161]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置155的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是155h。在实施例中，该取代是y155h。
[0162]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置162的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是162d、162g、162q。在实施例中，该取代是e162d、e162g、e162q，优选地e162d。
[0163]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置163的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是163*、163a、163e、163t、163n。在实施例中，该取代是p163*、p163t、p163a、p163e、p163n，优选地p163a。
[0164]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置166的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例
中，该取代是166e、166g、166i、166l、166n、166p、166q、166r、166v、166w。在实施例中，该取代是t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w，优选地t166p。
[0165]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置167的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是167p、167a、167r、167k。在实施例中，该取代是t167p、t167a、t167r、t167k，优选地t167p。
[0166]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置168的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是168d、168f、168m、168p。在实施例中，该取代是q168d、q168f、q168m、q168p，优选地168d。
[0167]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置172的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是172i。在实施例中，该取代是m172i。
[0168]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置176的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是176n。在实施例中，该取代是s176n。
[0169]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置178的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是178r、178e、178h、178p、178t。在实施例中，该取代是s178r、s178e、s178h、s178p、s178t，优选地s178p。
[0170]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置182的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，
并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是182r、182e。在实施例中，该取代是p182r、p182e。
[0171]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置190的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是190y。在实施例中，该取代是f190y。
[0172]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置197的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是197a、197d、197f、197m、197n、197y。在实施例中，该取代是k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y，优选地k197d。
[0173]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置214的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是214r、214w。在实施例中，该取代是q214r、q214w，优选地q214r。
[0174]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置215的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是215e。在实施例中，该取代是q215e。
[0175]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置219的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是219w。在实施例中，该取代是y219w。
[0176]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置239的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是239a。在实施例中，该取代是s239a。
[0177]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置248的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是248i。在实施例中，该取代是m248i。
[0178]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置253的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是253a、253w。在实施例中，该取代是r253a、r253w，优选地r253a。
[0179]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置258的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是258g。在实施例中，该取代是s258g。
[0180]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置271的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是271g、271y。在实施例中，该取代是s271g、s271y，优选地s271g。
[0181]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置276的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是276c、276n、276y。在实施例中，该取代是h276c、h276n、h276y，优选地h276c。
[0182]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置280的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是280l、280k。在实施例中，该取代是r280l、r280k，优选地r280k。
[0183]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置283的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、
至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是283m、283y。在实施例中，该取代是n283m、n283y。
[0184]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置286的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是285c。在实施例中，该取代是f286c。
[0185]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置299的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是299k、299d、299w。在实施例中，该取代是e299k、e299d、e299w，优选地e299w。
[0186]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置366的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是366n、366h、366i。在实施例中，该取代是g366n、g366h、g366i，优选地g366n。
[0187]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置378的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是378d、378h、378q、378r。在实施例中，该取代是k378d、k378h、k378q、k378r，优选地k378q。
[0188]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置385的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是385a、385f、385h、385p、385s。在实施例中，该取代是d385a、d385f、d385h、d385p、d385s，优选地d385h。
[0189]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置408的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，
并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是408a、408c、408d、408e、408q、408s、408t、408v。在实施例中，该取代是k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v，优选地k408m。
[0190]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置410的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是410l、410m。在实施例中，该取代是d410l、d410m，优选地d410m。
[0191]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置413的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是413q、413a、413t、413v。在实施例中，该取代是l413q、l413a、l413t、l413v，优选地l413t。
[0192]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置473的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是473y。在实施例中，该取代是n473y。
[0193]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置486的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是486e、486k、486v。在实施例中，该取代是d486e、d486k、d486v，优选地d486e。
[0194]
在另一个实施例中，该变体在对应于如下多肽的位置491的位置中包含取代或由取代组成：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是491e、491p、491r。在实施例中，该取代是k491e、k491p、k491r，优选地k491r。
[0195]
在一个实施例中，该修饰是取代。
[0196]
在一个实施例中，该修饰是缺失。
[0197]
在实施例中，该修饰是取代，其中所述在一个位置处的天然存在的氨基酸残基对不同的氨基酸残基的取代产生了甘露聚糖酶变体，该甘露聚糖酶变体对于稳定性量度具有》1.0的改善因子。
[0198]
当改善因子(if)大于1.0时，这意味着与参考酶(例如，亲本甘露聚糖酶或野生型甘露聚糖酶)相比，测试的变体具有改善的特性，如改善的稳定性。
[0199]
在一个实施例中，该改善的稳定性是洗涤剂内稳定性或热稳定性。
[0200]
除非本文明确披露，否则氨基酸残基或位置的编号根据seq id no:1进行。
[0201]
在实施例中，该变体与亲本甘露聚糖酶的氨基酸序列具有至少至少85％，例如至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％的序列同一性。
[0202]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:1的多肽或seq id no:2的多肽具有至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性。
[0203]
在另一个实施例中，该变体与seq id no:3的多肽或seq id no:4的多肽(即，缺少cbm的截短的甘露聚糖酶)具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、如至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性。
[0204]
如上所述，可以如实例中所述确定稳定性，例如洗涤剂内稳定性或热稳定性。特别地，可以在ph 8-8.5下确定稳定性。
[0205]
因此，在一个实施例中，当在ph 8-8.5下测量时，本发明的变体具有改善的稳定性。
[0206]
稳定性不仅可以在ph 8-8.5下测量，而且可以在更碱性或更酸性的ph下测量。测量稳定性时所处的ph可取决于变体(或酶)需要在其中保持稳定的洗涤剂组合物而变化。因此，本发明还涵盖在其他ph(如ph 10-11，例如ph 10.5)下的稳定性。因此，在一个实施例中，当在ph 10-11下测量时，本发明的变体具有改善的稳定性。
[0207]
在一个实施例中，对于在ph 8-8.5和/或ph 10-11下的稳定性量度，本发明的变体的改善的稳定性为至少1.0。
[0208]
在一个实施例中，本发明的变体的改善的稳定性在ph 8-8.5或10-11下测量，或者在两个ph即ph 8和ph 10.8下都可以看到改善的稳定性。因此在一个实施例中，当在ph 8-8.5和/或ph 10-11下测量稳定性时，该变体与亲本甘露聚糖酶相比具有改善的稳定性。
[0209]
在一个实施例中，对于在ph 8和/或ph 10.5下的稳定性量度，该变体具有至少1.1、至少1.2、至少1.3、至少1.4、至少1.5、至少2.0、至少2.5、至少3.0的改善因子。
[0210]
氨基酸改变可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地为1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基末端或羧基末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或小的延伸，其通过改变净电荷或另一功能(如聚组氨酸段、抗原表位或结合结构域)来促进纯化。
[0211]
保守取代的实例是在下组之内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由h.neurath和r.l.hill,1979,于the proteins[蛋白质],academic press[学术出版社],纽约中描述。常见取代为ala/ser、val/ile、asp/glu、thr/ser、ala/gly、ala/thr、ser/asn、ala/val、ser/gly、tyr/phe、ala/pro、lys/arg、asp/asn、leu/ile、leu/val、ala/glu和asp/
gly。
[0212]
可替代地，这些氨基酸改变具有使多肽的物理化学特性发生改变的这样一种性质。例如，氨基酸改变可以改善多肽的热稳定性、改变底物特异性、改变最适ph等。
[0213]
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(cunningham和wells,1989,science[科学]244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在该分子中的每一残基处引入单个丙氨酸突变，并且对所得突变体分子的甘露聚糖酶活性进行测试以鉴定对于该分子的活性至关重要的氨基酸残基。还参见，hilton等人,1996,j.biol.chem.[生物化学杂志]271:4699-4708。酶或其他生物学相互作用的活性位点还可通过对结构的物理分析来确定，如由下述技术确定：核磁共振、晶体学(crystallography)、电子衍射、或光亲和标记，连同对推定的接触位点氨基酸进行突变。参见例如，de vos等人,1992,science[科学]255:306-312；smith等人,1992,j.mol.biol.[分子生物学杂志]224:899-904；wlodaver等人,1992,febs lett.[欧洲生化学会联合会快报]309:59-64。还可以从与相关多肽的比对来推断必需氨基酸的身份。
[0214]
在一个实施例中，与亲本甘露聚糖酶相比，该变体包含在seq id no:1的多肽的以下位置的一个或多个中的第二修饰：1、2、3、4、5、6、8、9、10、11、12、14、17、18、19、21、22、23、25、30、35、37、38、42、45、48、49、53、57、61、63、65、68、72、74、76、78、83、86、89、94、96、97、100、105、110、111、112、115、117、118、121、122、123、126、129、130、134、137、139、142、143、148、160、161、162、164、165、169、170、171、174、179、181、183、184、185、188、189、192、193、195、198、210、213、217、218、228、235、242、249、252、254、259、260、267、270、272、296、301、304、312、315、321、322、323、324、342、344、347、351、352、354、355、358、363、368、377、379、380、391、398、403、414、417、419、422、423、437、438、440、442、443、452、454、462、463、466、467、470、472、477、479、480、482、483、484、487、488、489、490。
[0215]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置1的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是1*、1s、1t、1g、1d、1i、1v、1y。在实施例中，该缺失或取代是a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y。
[0216]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置2的位置中的缺失：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是2*。在实施例中，该缺失或取代是i2*。
[0217]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置3的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且
进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是3*、3a、3e、3g。在实施例中，该缺失或取代是t3*、t3a、t3e、t3g。
[0218]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置4的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是4*、4d、4n、4g、4m、4y。在实施例中，该缺失或取代是v4*、v4d、v4n、v4g、v4m、v4y。
[0219]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置5的位置中的缺失：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失是5*。在实施例中，该缺失是p5*。
[0220]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置6的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是6*、6p。在实施例中，该缺失或取代是g6*、g6p。
[0221]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置8的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是8*、8a、8q、8f、8d、8w。在实施例中，该缺失或取代是v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w。
[0222]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置9的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是9*、9a、9d、9g、9m、9p。在实施例中，该缺失或取代是v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p。
[0223]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置10的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且
进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是10**、10y、10g。在实施例中，该缺失或取代是e10*、e10y、e10g。
[0224]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置11的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是11a、11l、11e、11i、11n。在实施例中，该取代是p11a、p11l、p11e、p11i、p11n。
[0225]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置12的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是12a、12d、12e、12g、12l、12p、12q、12r、12v。在实施例中，该取代是h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v。
[0226]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置14的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是14q、14r、14e、14h、14n、14v。在实施例中，该取代是s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v。
[0227]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置17的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是17k、17a。在实施例中，该取代是q17k、q17a。
[0228]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置18的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是18s。在实施例中，该取代是n18s。
[0229]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置19的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是19n。在实施例中，该取代是q19n。
[0230]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置21的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是21l。在实施例中，该取代是i21l。
[0231]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置22的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是22v、22q、22t。在实施例中，该取代是i22v、i22q、i22t。
[0232]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置23的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是23i、23t、23v、23m、23s。在实施例中，该取代是a23i、a23t、a23v、a23m、a23s。
[0233]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置25的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是25w、25y。在实施例中，该取代是f25w、f25y。
[0234]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置30的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是30l。在实施例中，该取代是i30l。
[0235]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置35的位置中的缺失：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失是35*。在实施例中，该缺失是i35*。
[0236]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置37的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是37v。在实施例中，该取代是k37v。
[0237]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置38的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是38c、38f、38l、38m、38t。在实施例中，该取代是r38c、r38f、r38l、r38m、r38t。
[0238]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置42的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是42e。在实施例中，该取代是t42e。
[0239]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置45的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是45m、45l、45r。在实施例中，该取代是a45l、a45m、a45r。
[0240]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置48的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是48a、48p、48s。在实施例中，该取代是d48a、d48p、d48s。
[0241]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置49的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是49m。在实施例中，该取代是l49m。
[0242]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置53的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是53c、53e、53h、53k、53p、53q。在实施例中，该取代是t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q。
[0243]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置57的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是57p、57r。在实施例中，该取代是s57p、s57r。
[0244]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置61的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是61d。在实施例中，该取代是e61d。
[0245]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置63的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是63c。在实施例中，该取代是d63c。
[0246]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置65的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是65c、65f、65h、65n、65q、65s、65t。在实施例中，该取代是k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t。
[0247]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置68的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是68m、68t。在实施例中，该取代是v68m、v68t。
[0248]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置69的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是69p、69r、69s、69t。在实施例中，该取代是q69p、q69r、q69s、q69t。
[0249]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置72的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少
75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是72f。在实施例中，该取代是s72f。
[0250]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置74的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是74a、74q、74e。在实施例中，该取代是t74a、t74q、t74e。
[0251]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置76的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是76t、76e。在实施例中，该取代是q76t、q76e。
[0252]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置83的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是83e、83s。在实施例中，该取代是g83e、g83s。
[0253]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置86的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是86d。在实施例中，该取代是e86d。
[0254]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置89的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是89f。在实施例中，该取代是l89f。
[0255]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置94的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取
代是94m。在实施例中，该取代是p94m。
[0256]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置96的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是97e、97d、96e、96d、96r。在实施例中，该取代是g96e、g96d、g96r。
[0257]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置97的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是97y。在实施例中，该取代是n97e、n97d、n97y。
[0258]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置100的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是100r。在实施例中，该取代是k100r。
[0259]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置105的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是105v。在实施例中，该取代是s105v。
[0260]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置110的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是110r、110d、110p、110c、110s。在实施例中，该取代是g110r、g110d、g110p、g110c、g110s。
[0261]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置111的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是111l。在实施例中，该取代是a111l。
[0262]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置112的位置中的取代：
seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是112v。在实施例中，该取代是g112v。
[0263]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置115的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是115w、115y、115v、115i、115f。在实施例中，该取代是t115w、t115y、t115v、t115i、t115f。
[0264]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置117的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是117p。在实施例中，该取代是s117p。
[0265]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置118的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是118v。在实施例中，该取代是a118v。
[0266]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置121的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是121a。在实施例中，该取代是p121a。
[0267]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置122的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是122p。在实施例中，该取代是g122p。
[0268]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置123的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是123r。在实施例中，该取代是t123r。
[0269]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置126的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是126d、126s、126t。在实施例中，该取代是a126d、a126s、a126t。
[0270]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置129的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是129r、129l、129m。在实施例中，该取代是k129r、k129l、k129m。
[0271]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置130的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是130i、130v。在实施例中，该取代是m130i、m130v。
[0272]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置134的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是134i、134v、134p、134t。在实施例中，该取代是l134i、l134v、l134p、l134t。
[0273]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置137的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是137a、137d、137w。在实施例中，该取代是s137a、s137d、s137w。
[0274]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置139的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是139i、139k、139a。在实施例中，该取代是n139i、n139k、n139a。
[0275]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置143的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是143t、143s、143r。在实施例中，该取代是q143t、q143s、q143r。
[0276]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置155的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是155h。在实施例中，该取代是y155h。
[0277]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置160的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是160i、160f、160k、160l、160n、160v。在实施例中，该取代是r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v。
[0278]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置161的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是161s、161t。在实施例中，该取代是v161s、v161t。
[0279]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置164的位置中的缺失或取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该缺失或取代是164**、r164q。在实施例中，该缺失是r164**、r164q。
[0280]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置165的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是165e、165d、165t、165l。在实施例中，该取代是i165e、i165d、i165t、i165l。
[0281]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置169的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少
75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是169p、169q、169t、169v。在实施例中，该取代是k169p、k169q、k169t、k169v。
[0282]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置170的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是170e、170h。在实施例中，该取代是t170e、t170h。
[0283]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置171的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是171e、171n、171i、171k、171q。在实施例中，该取代是m171e、m171i、m171k、m171n、m171q。
[0284]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置174的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是174k。在实施例中，该取代是p174k。
[0285]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置179的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是179s、179h、179q、179n、179r。在实施例中，该取代是k179s、k179h、k179q、k179n、k179r。
[0286]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置181的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是181t。在实施例中，该取代是s181t。
[0287]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置183的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是183e。在实施例中，该取代是q183e。
[0288]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置184的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是184t。在实施例中，该取代是a184t。
[0289]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置185的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是184n、185q。在实施例中，该取代是k185n、k185q。
[0290]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置188的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是188f、188i、188y。在实施例中，该取代是m188f、m188i、m188y。
[0291]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置189的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是189s。在实施例中，该取代是k189s。
[0292]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置192的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是192a、192v。在实施例中，该取代是t192a、t192v。
[0293]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置193的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是193w、193s。在实施例中，该取代是n193w、n193s。
[0294]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置195的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是195h。在实施例中，该取代是s195h。
[0295]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置197的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是197a、197d、197f、197m、197n、197y。在实施例中，该取代是k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y。
[0296]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置210的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是210e、210f、210t、210q、210s。在实施例中，该取代是a210e、a210q、a210f、a210t、a210s。
[0297]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置213的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是213k、213q、213r。在实施例中，该取代是y213k、y213q、y213r。
[0298]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置217的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是217q。在实施例中，该取代是g217q。
[0299]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置218的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是218r。在实施例中，该取代是k218r。
[0300]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置228的位置中的取代：
seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是228i。在实施例中，该取代是m228i。
[0301]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置235的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是235l。在实施例中，该取代是v235l。
[0302]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置242的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是242t。在实施例中，该取代是n242t。
[0303]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置249的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是249h、249l、249q。在实施例中，该取代是e249h、e249l、e249q。
[0304]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置252的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是252g、252e。在实施例中，该取代是k252g、k252e。
[0305]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置254的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是254s。在实施例中，该取代是g254s。
[0306]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置259的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一
步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是259v。在实施例中，该取代是l259v。
[0307]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置260的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是260c。在实施例中，该取代是s260c。
[0308]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置267的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是267l。在实施例中，该取代是k267l。
[0309]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置270的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是270c。在实施例中，该取代是g270c。
[0310]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置272的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是272d。在实施例中，该取代是n272d。
[0311]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置285的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是285d。在实施例中，该取代是e285d。
[0312]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置296的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是296a。在实施例中，该取代是n296a。
[0313]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置301的位置中的取代：
seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是301k。在实施例中，该取代是e301k。
[0314]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置304的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是304a、304f、304q、304r、304s。在实施例中，该取代是k304a、k304f、k304q、k304r、k304s。
[0315]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置312的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是312v。在实施例中，该取代是a312v。
[0316]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置315的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是315a、315v。在实施例中，该取代是t315a、t315v。
[0317]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置321的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是321k、321w。在实施例中，该取代是q321k、q321w。
[0318]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置322的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是322r、322a、322d。在实施例中，该取代是e322r、e322a、e322d。
[0319]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置323的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是323a。在实施例中，该取代是h323a。
[0320]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置324的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是324k、324n。在实施例中，该取代是h324n。
[0321]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置342的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是342g。在实施例中，该取代是w342g。
[0322]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置344的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是344c。在实施例中，该取代是a344c。
[0323]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置347的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是347d。在实施例中，该取代是p347d。
[0324]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置351的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是351v。在实施例中，该取代是k351v。
[0325]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置352的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是352q。在实施例中，该取代是k352q。
[0326]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置354的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是354w。在实施例中，该取代是y354w。
[0327]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置355的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是355q。在实施例中，该取代是r355q。
[0328]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置358的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是358w。在实施例中，该取代是y358w。
[0329]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置363的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是363h。在实施例中，该取代是e363h。
[0330]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置364的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是364d、364r、364y。在实施例中，该取代是k364d、k364r、k364y。
[0331]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置368的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是368d。在实施例中，该取代是n368d。
[0332]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置377的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是377e。在实施例中，该取代是v377e。
[0333]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置379的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是379k、379p。在实施例中，该取代是e379k、e379p。
[0334]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置380的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是380t、380d。在实施例中，该取代是e380t、e380d。
[0335]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置391的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是391l。在实施例中，该取代是v391l。
[0336]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置398的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是398f、398e。在实施例中，该取代是p398f、p398e。
[0337]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置403的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是403q、403r。在实施例中，该取代是s403q、s403r。
[0338]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置414的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是414t、414s、414p。在实施例中，该取代是f414t、f414s、f414p。
[0339]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置417的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是417g、417e、417q。在实施例中，该取代是k417g、k417e、k417q。
[0340]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置419的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是419v。在实施例中，该取代是k419v。
[0341]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置422的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是422r、422i。在实施例中，该取代是v422r、v422i。
[0342]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置423的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是423g。在实施例中，该取代是a423g。
[0343]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置437的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是437i、437a。在实施例中，该取代是q437i、q437a。
[0344]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置438的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是438a。在实施例中，该取代是t438a。
[0345]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置440的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是440q。在实施例中，该取代是g440q。
[0346]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置442的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是442n。在实施例中，该取代是h442n。
[0347]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置443的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是443g。在实施例中，该取代是w443g。
[0348]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置452的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是452n。在实施例中，该取代是d452n。
[0349]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置454的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是454i。在实施例中，该取代是l454i。
[0350]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置462的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是462a、462r、462l、462p。在实施例中，该取代是k462a、k462r、k462l、k462p。
[0351]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置463的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是463q。在实施例中，该取代是e463q。
[0352]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置466的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是466f、466h、466n、466q。在实施例中，该取代是k466f、k466h、k466n、k466q。
[0353]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置467的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是467h、467y。在实施例中，该取代是k467h、k467y。
[0354]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置470的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是470y。在实施例中，该取代是n470y。
[0355]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置472的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是472g、472y。在实施例中，该取代是d472g、d472y。
[0356]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置477的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是477f。在实施例中，该取代是l477f。
[0357]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置479的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是479r。在实施例中，该取代是e479r。
[0358]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置480的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、
至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是480i。在实施例中，该取代是l480i。
[0359]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置482的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是482a、482p、482d、482g、482q、482r。在实施例中，该取代是k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r。
[0360]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置483的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是483a、483d。在实施例中，该取代是g483a、g483d。
[0361]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置484的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是484q。在实施例中，该取代是l484q。
[0362]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置487的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是487r、487g。在实施例中，该取代是s487r、s487g。
[0363]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置488的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是488i、488l。在实施例中，该取代是p488i、p488l。
[0364]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置489的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取
代是489f、489k、489n、489p。在实施例中，该取代是r489k、r489f、r489n、r489p。
[0365]
在另一个实施例中，该第二修饰是在对应于如下多肽的位置490的位置中的取代：seq id no:1的多肽或者与seq id no:1的多肽具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％同一性的具有甘露聚糖酶活性的多肽，并且进一步地与seq id no:1的甘露聚糖酶相比，该变体具有改善的稳定性。在一个实施例中，该取代是490a。在实施例中，该取代是w490a。
[0366]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的两个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、
v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0367]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的三个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、
q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0368]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的四个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、
r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0369]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的五个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、
k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0370]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的六个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、
a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0371]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的七个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、
k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0372]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的八个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、
k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0373]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的九个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、
h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0374]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、
t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0375]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十一个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、
l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0376]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十二个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、
e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0377]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十三个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、
k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0378]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十四个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、
t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0379]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十五个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、
s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0380]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十六个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、
k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0381]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十七个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、
t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0382]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十八个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、
d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0383]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的十九个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、
k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0384]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的二十个或更多个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、
y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0385]
在另一方面，变体在对应于以下任一位置的每个位置处包含取代：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r，并且第二修饰是取代或缺失并且是在对应于以下位置的至少一个或多个位置中：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、
k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a。
[0386]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：l413t、k491r、k482d、r489n，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0387]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：q168d l454i、q168d l413a、k26e q168d、e64p q168d、k26h q168d、q17a q168d、a23m q168d、s103v q168d、s103e q168d、q69p q168d、h12a q168d、k65s q168d、n97y q168d、q168d k304f、q168d k179v、m130v q168d、d410m l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0388]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d n296a、q168d d385p l413a、q168d q183e l413a、r38q q168d d385f、k26e q168d n283y、r38q q168d l413t、r38q q168d t192v、r38q q168d s239a、k26e q168d k408t、k26e q168d
k197f、k26e q168d l413t、k26e q168d d385a、k26e q168d r355q、k26e q168d p347d、k26e q168d g483d、k26e q168d t192v、k26e q168d a210e、k26e q168d n193s、k26e q168d s239a、k26e q69p q168d、k26e e61d q168d、k26e k36e q168d、k26e r38m q168d、k26e k36t q168d、k26e e64p q168d、h12d k26e q168d、k26e k70e q168d、k26e t42e q168d、k26e t53c q168d、k26e t53p q168d、k26e k70m q168d、k26e k70p q168d、k26e s72f q168d、k26e a101i q168d、k26e a101l q168d、k26e s103e q168d、k26e s103i q168d、k26e q168d y354w、k26e q168d l413v、k26e q168d e249l、k26e r38l q168d、k26e q168d r489p、k26e q168d l477f、k26e q168d k491p、k26e q168d n283m、k26e q168d y195h、d410m l413t k466f、k408m d410m l413t、d410m l413t n473y，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0389]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：q168d e249q n283y l413a、k26e q168d n283y n296a、k26e q168d q183e l413a、k26e q168d s271y l454i、k26e q168d e249l p347d、k26e q168d l259f s271g、k26e q168d l259f n283y、k26e t53e e61d q168d、k26e t53e e64p q168d、k26e t53e k65n q168d、k26e r38t q168d d385a、k26e s103v q168d d385a、k26e k36t q168d d385a、k26e r38m q168d d385a、k26e k36a q168d d385a、k26e r38l q168d d385a、k26e s103c q168d d385a、k26e k70m q168d d385a、k26e s103i q168d d385a、k26e k70i q168d d385a、k26e r38f q168d d385a、k26e s103q q168d d385a、k26e a101c q168d d385a、k26e k70e q168d d385a、k26e a101l q168d d385a、k26e k36c q168d d385a、k26e s103d q168d d385a、k26e k70t q168d d385a、k26e a101q q168d d385a、k26e k65n q168d d385a、k26e k100r q168d d385a、k26e s103l q168d d385a、k26e k36m q168d d385a、k26e t53p q168d d385a、k26e a101n q168d d385a、k26e k36d q168d d385a、k26e t53c q168d d385a、k26e k65t q168d d385a、k26e r38l k70p q168d、k26e t42e q69p q168d、k26e q168d n283y k408s、k26e k70p q168d d385a、k26e k70p q168d e249l、k26e k70p q168d y354w、k26e k70p q168d l413v、k26e s103e q168d d385a、k26e s103e q168d l413v、k26e q168d n283y d385a、k26e k36e q168d d385a、d410m l413t d472g w490a、d385a k408m d410m l413t、d410m l413t k417q k462p，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0390]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：q168d a210e n283y l413a r489k、k26e q168d s181t k408c k482q、k26e r164a q168d s181t n296a、k26e q168d n283y n296a s403q、k169p q183e s260c n283y l413a、k26e q168d n296a d385f k482q、k26e q168d a210q s271y v377e、k26e q168d a210q s271y l454i、k26e q168d f190y n242t t315a、k26e q168d y213k s260c g366h、k26e q168d k252e r253w k378h、k26e q168d a210e s271g n283y、k26e q168d a210e l259f s271g、k26e r38l k70p a101l q168d、k26e r38c a126s q168d d385a、k26e a101v s103y q168d d385a、v4d k26e k65t k120p q168d、h12d q17a k26e e64p q168d、k26e a101e q168d k197a k408s、k26e t42e q69p q168d d385a、k26e q168d n283y d385a k408s、k26e q168d k197a n283y k408s、k26e k36e e64p q168d d385a、k26e k36e s103v q168d d385a、k26e k36e q168d d385a k417q、k26e k70a s103v q168d d385a、k26e k70m s103v q168d d385a、k26e k70i s103v q168d d385a、k26e s103v k120p q168d d385a、k26e k36e t53p q168d d385a、k26e k36t s103v q168d d385a、k26e r38m s103v q168d d385a、k26e t42e s103v q168d d385a、k26e t53p s103v q168d d385a、k26e k36e k70a q168d d385a、k26e k36e k70p q168d d385a、k26e k36e s72f q168d d385a、k26e k36e a101l q168d d385a、k26e k70p q168d k197f n283y、k26e k70p s103v q168d d385a、n283y d385a k408m d410m l413t、t315v d385a k408m d410m l413t、d385a k408m d410m l413t p488i、d385a k408m d410m l413t p488l、k378q d385a k408m d410m l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列
同一性。
[0391]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d a210e s271g n283y n296a、k26e q168d a210q e249q s271y n296a、k26e q168d k252e n296a a344c d385p、k26e r164h q168d f190y s271g n296a、k26e q168d f190y s239a s271g n296a、k26e q168d n283y n296a s403q l413t、k26e k36n q168d k198n l413a n473f、q168d q183e k252e r253w k408t l413a、k26e q168d a210q s239a e249q k364y、k26e q168d a184t f190y n242t t315a、k26e q168d k197n k252e r253w k408t、k26e q168d k197n k252e r253w k378h、v4d k26e t53p k120p q168d d385a、k26e k36e s72f q168d d385a w443g、k26e k36e k70p k120p q168d d385a、k26e t42e q69p s103v q168d d385a、k26e k36e s103v q168d f190y d385a、k26e k36e s103v q168d s271g d385a、k26e k36e s103v q168d d385a l413v、k26e k36e s103v q168d d385a k417q、k26e k36e s103v q168d d385a k462l、k26e k36e s103v q168d d385a k408t、k26e k36e s103v k120p q168d d385a、k26e r38l k70p a101l q168d n283y、k26e r38l k70p a101l q168d k408d、k26e r38l k70p a101l q168d l413a、k26e r38l k70p a101l q168d l413t、k26e r38l k70p a101l s109d q168d、k26e r38l k70p a101l q168d d385a、k26e k70p q168d n283y k408s l413t、k26e k70p q168d n283y d385a s403q、k26e k70a s103v q168d k197a d385a、k26e k70a s103v q168d d385a k462p、k26e e64p k70a s103v q168d d385a、k26e k36t k70a s103v q168d d385a、k26e k70a s103v q168d k304r d385a、n283y d385a k408m d410m l413t r489n、n283y d385a k408m d410m l413t k482d、n283y d385a k408m d410m l413t s487g、n283y k378d d385a k408m d410m l413t、n283y k378q d385a k408m d410m l413t、n283y d385a k408m d410m l413t n473y、s271g n283y d385a k408m d410m l413t、k378q d385a k408m d410m l413t n473y、k378q d385a k408m d410m l413t r489n，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0392]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d a210e s260c n283y n296a k482q、k26e q168d a210e s260c s271g n283y n296a、k26e q168d a210q s239a e249q s271y n296a、k26e q168d a184t n242t n296a e380d t438a、k26e r164a q168d s181t n296a k408s l413v、k26e r164a q168d s181t n296a q321w k408s、k26e q168d y213k k252e e285d n296a d385p、k26e q168d t192a y213k n296a a344c
d385p、k26e q168d s271g n296a y354w v377e k408a、k26e q168d n283y n296a d385s s403q k408c、k26e q168d n283y n296a s403q k408c l413t、k26e q168d s181t e249q n283y d385a l413a、k26e q168d a184t f190y n242t e322d h323a、k26e q168d a184t f190y n242t t315a e380d、k26e q168d f190y n242t n283y e322d h323a、k26e q168d a210e n283y d385a l413a r489k、k26e q168d s181t a210e n283y l413a r489k、k26e q168d a210e l259f s271g n283y r489k、k26e q168d n283y d385a k408s d452n k466q、v4d k26e t53p k65q k120p q168d d385a、h12d q17a k26e e64p a111l q168d d385a、h12d q17a k26e e64p v68t q168d d385a、k26e k36e k70p s103v k120p q168d d385a、f25y k36e t53p s103v q168d t192v d385a、k26e r38l k70p a101l a126t q168d e379p、k26e k70p q168d k197a k408s k462l k466q、k26e k70p q168d k197f n283y k408s l413t、h12d k26e r38l t42e k70p a101l q168d、k26e k36e s103v q168d d385a l413v k462l、k26e k36e s103v q168d k197d d385a k462l、n283y k378d d385a k408m d410m l413t k482d、s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、n283y k378q d385a k408m d410m l413t p488l、s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t、k378q d385a k408m d410m l413t h442n n473y、e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y、n283y k378q d385a k408m d410m l413t n473y、n283y e380d d385a k408m d410m l413t g440q、n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442n、g366h k378q d385a k408m d410m l413t n473y，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0393]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d a184t n296a e322d h323a e380d t438a、k26e r164a q168d s181t n296a q321w k408s l413v、k26e q168d k252e e285d n296a a344c g366h d385p、k26e q168d n283y n296a d385s s403q k408c l413t、k26e q168d s181t k197f v235l e249q n283y l413a h12d q17a k26e e64p v68t a111l q168d d385a、h12d k26e t42e e64p k70p s103v q168d d385a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a、k26e k36e t53p k65q q168d f190y k197a d385a、n283y k378d d385a s403q k408m d410m l413t k482d、k378q d385a k408m d410m l413t n473y k482r k491e、s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413a、s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442n、s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至
少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0394]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d a184t n242t n296a e322d h323a e380d t438a、h12d k26e k36e t42e e64p k70p a101l q168d d385a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d t192v n283y d385a、k26e k36e e64p k70p s103v e162d q168d n283y d385a、k26e k36e e64p k70p s103v s109d q168d n283y d385a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197y n283y d385a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l477f、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t、f25y k26e k36e t53p s103v q168d t192v d385a k462l、k26e k36e e64p s103v k120p q168d n283y d385a k462l、k26e k36e e64p k70p s103v k169t n283y d385a l477f、k26e k36e e64p q69p s103v q168d n283y d385a l477f、s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y、s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442d s487r、s271g n283y e299w k378d d385a k408m d410m l413t n473y、s258g 269\ s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t、s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q、m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t、s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0395]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e q168d a184t n242t n296a e322d h323a k364y e380d t438a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d
f190y n283y d385a w443g、k26e k36e e64p k70p s103v q168d f190y n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d s271g n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a k408t l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d t192v n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t k462p、k26e k36e e64p k70p s103v e162d q168d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v s109d q168d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t k466q、v4y k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t、k26e k36e d48a e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v p163e q168d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t k417e、k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t l477f、f25y k36e t53p e64p k70p s103v q168d t192v n283y d385a、k26e k36e t53p e64p k70p s103v q168d t192v n283y d385a、k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385p l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168f k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v q168m k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v k169v k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d q168d n283y d385a l477f、k26e k36e e64p k70p s103v e162q q168d n283y d385a l477f、k26e k36e e64p k70p s103v i165a q168d n283y d385a l477f、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d n283y d385a l477f、k26e k36e e64p k70p s103v k169t n283y d385a l413t l477f、k26e k36e e64p q69t s103v q168d n283y d385a l413t l477f、k26e k36e e64p q69r s103v q168d n283y d385a l413t l477f、k26e k36e e64p k70p s103v q168p n283y d385a l413t l477f、m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442d k482d s487r、s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t、s271g n283y e299w k378d d385a k408m d410m l413t n473y k482q、s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q、m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0396]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：k26e k36e t53p e64p
90％序列同一性。
[0397]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k169q k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p q69p n97y s103v t123r q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410l l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a k408m l413t、h12v k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t、v4y k26e k36e e64p k70p s103v i165l q168d n283y d385a l413t l477f、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171n k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171e k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k179n k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v r164* i165* q168d k197d n283y d385h l413t、s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t、s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q、g217q s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q、s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0398]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：s14n k26e k36e e64p k70p s103v i165a q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v i165l q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t、v4d s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v p163n q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v
g112v t166p q168d k197d n283y d385a l413t、f25y k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t l477f、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d t170h k197d n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y t315v d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408q l413t、h12e k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、h12v k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、s14n k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p q69p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178p k197d n283y d385a d410m l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a k408q l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s271g n283y d385h l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i k197d n283y d385h l413t、k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d m248i n283y d385h l413t、f25y k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t、v4n k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t、s239a m248i s258g s271g r280k n283y w342g k378q d385a k408m d410m l413t g440q、s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r、k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a、q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0399]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：s14n k26e k36e t53p e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d s271g n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e t53p e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163n t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q f190y k197d n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a k408m l413t、k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d t170h s178p k197d n283y d385a d410m l413t、h12r k26e k36e k65h k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e k65h k70p s103v t166p q168d t170h k197d s271g n283y d385a l413t、m248i s258g s271g n283y e299w g366h k378q d385a k408m d410m l413t h442n n473y k491r、q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r、q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0400]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d a210e n283y e322d d385a l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q f190y k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d m248i s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e
k36e e64p k70p s103v i165d q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408e l413t、s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408m l413t、h12r k26e k36e k65h k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103e t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163n t166p q168d k197d s271g n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d s271g n283y d385a s403r d410m l413t、f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y、q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t v422i n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0401]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：h12r k26e k36e e64p k70p s103v k129m e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178p k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e d48s e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163e t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t、s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s258g n283y d385a k408a l413t、v4g s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t g483d、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g
n283y k304r d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y k304s d385a l413t、f7p h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v g110s t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t、h12r k26e k36e e64p k70p s103v g110c t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s258g s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d a210s s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408e l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408v l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103e t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t q437a、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d e249h s271g n283y d385a l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0402]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s239a s258g n283y d385a k408a l413t、h12r a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d q214r s271g n283y k378q d385a l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，
或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0403]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：f7i h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a v391l d410m l413t、h12r s15q a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v y155h t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t d472y、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t k482g、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t d486v、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t p488l、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d i165l t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t、h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d m248i e249l s271g n283y k378q d385a l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t l484q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0404]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：v4d h12r s14n a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y
e64p k70p s103v r160n p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171n k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171q k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160l t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、v4n s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178e k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171q k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、s15m k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y k304q d385a k408m d410m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y k378d d385a k408m d410m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171e k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、a1y s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178h k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178t k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y t315v d385a k408m、s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y t53h e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m188y k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y y358w d385a k408m d410m l413t、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163n t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k179r k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p
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[0405]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1y v4g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、s15q f25y k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a
t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t、f7a s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、v9p s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m、v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m、t3e v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、a1t v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、a1y f7p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、a1t f7g s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1t f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y k378q、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197n m248i s258g s271g n283y d385a、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197n m248i s258g s271g n283y k364r、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d n242t m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y t315v、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y k304q、a1y f7g s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g、v4d v8d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d s239a m248i s258g s271g、
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i r253a s258g、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160n i165e t166p q168d m172i s178p k197d y219w s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s176n s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160k p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160v p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a e162g p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i、t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g、a1s f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a l134p q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g q17a k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7g s15q n18s k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a a126t p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s14n s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q a23s k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7g s15q k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15d k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、a1y f7g s15c k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g、t3e f7g s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214w s239a、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r g217q、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q215e s239a、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p
q168d m172i s178p k197d q214r s239a a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214w g217q、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i、a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i k179n k197d s239a，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0406]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：a1* i2* t3* v4* p5* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a、a1y g6* f7* v8* v9* e10* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d、f7g t3* g6* p5* v4* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0407]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：t3* v9* v8* g7* g6* p5* v4* i2* a1* f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有
85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0408]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：e10* v9* v8* f7* g6* p5* v4* t3* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0409]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0410]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：t3e f7g s15q k26e
k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0411]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0412]
在一个方面，变体在对应于以下位置的位置处包含取代：a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、
88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0413]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0414]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v f7g s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v k120p m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v v8a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1g f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r e162d i165e t166p
q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0415]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3e f7g s15d a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；v4n f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；v4w f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11l s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p q69p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y n368d k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163e t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g p11l s15q i22v k26e k36e
e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r g217q s239a m248i s258g s271g r280k n283y w342g k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；t3g f7g t13i s15q a20v k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3e f7g s15q a20g k26e i30l k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p t74a s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g t13i s15q a20s k26e k36e e46y t53k e64p k70p t74a s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a
m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1y f7g p11e s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g p11i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g t13m s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g t13n s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g t13w s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g t13y s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g s14q s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g s14r s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g s15q i22v k26e k36e a45m e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y g6p f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g v8q s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；a1y f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r p163n i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；f7g t3* g6* p5* v4* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；t3e f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t
v422i n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：v4y g6* f7g v8f s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120s s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p n82t s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y t53p e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v m130i s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v
f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r y155h e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p n82a s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p k185q f190y k197d q214r y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n t192v k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y t315v k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l i35* k36e e46y e64p k70p s103a s141r e162d t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103e s109d s141r e162d t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103a s109d s141r e162d t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103a s141r w148q e162d t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0419]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p n97e s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p k185n f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141a p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d a210e q214r s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t v422i n473y k491r；t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d a210e q214r s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t v422i n473y k491r；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3* v9* v8* g7* g6* p5* v4* i2* a1* f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0420]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g、f7g、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46m、e64p、k70p、q76t、s103v、m130i、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、t13i、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46m、e64p、k70p、s103v、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k482a、k491r；t3g、f7g、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e64p、k70p、s103v、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k304q、t315v、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；a1v、f7g、p11a、s15q、i21l、k26e、k36e、e46y、t53k、e64p、k70p、q76t、s103v、p121a、m130i、q143r、e162d、i165e、t166p、q168d、m171q、k179n、k197d、y219w、s239a、m248i、s258g、s271g、h276y、
r280k、n283y、e299d、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、t438a；a1v、f7g、t13i、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46y、e61d、e64p、q69p、k70p、q76t、s141r、e162d、t166p、q168d、m172i、s178p、f190y、k197n、q214r、y219w、s239a、m248i、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e64p、q69p、k70p、n82t、s103e、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；a1v、f7g、t13i、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46y、e64p、k70p、s103e、s109d、s141r、e162d、t166p、q168d、m172i、s178p、f190y、k197n、q214r、q215e、y219w、s239a、m248i、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0421]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v、f7g、t13i、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46y、e61d、e64p、q69p、k70p、q76t、s109d、s141r、e162d、t166p、q168d、m172i、s178p、f190y、k197n、q214r、y219w、s239a、m248i、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e61d、e64p、q69p、k70p、n82t、s103e、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、
如89％-90％序列同一性。
[0422]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g、f7g、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46m、e64p、k70p、q76t、a101r、s103v、g110r、m130i、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46m、k70p、q76t、a101r、s103v、g110r、m130i、s141q、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；a1v、f7g、t13i、s15q、a20g、k26e、i30l、k36e、e46y、e61d、e64p、q69p、k70p、q76t、s103r、g122p、s141r、e162d、t166p、q168d、m172i、s178p、f190y、k197n、q214r、y219w、s239a、m248i、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、d385a、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e64p、q69p、k70p、n82t、s103e、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e61d、e64p、q69p、k70p、n82t、s103e、k120a、s141r、p163t、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e61d、e64p、q69p、k70p、n82t、s103e、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、i22q、k26e、k36e、e46m、e64p、q69p、k70p、n82t、a101v、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、r280k、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r；t3g、f7g、v9a、s15q、a20g、k26e、k36e、e46m、e64p、q69p、k70p、t74q、q76t、n82t、s103e、k120a、s141r、p163a、t166p、q168d、m172i、s176n、s178p、f190y、k197d、q214r、y219w、s239a、m248i、r253a、s258g、s271g、n283y、e299w、k378q、k408m、d410m、l413t、n473y、k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0423]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g
f7g s15q a20g k26e i30l k36e e46m k70p q76t a101r s103v g110r m130i s141q p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413v n473y d486k k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141a p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w h324n k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197a q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13n s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46y e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141i p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197a q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列
同一性。
[0424]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v f7g p11n s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d k120a p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d k120a p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103e s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p t74e q76t n82t s103e s109d p121a m130i q143r p163a r164q t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q i22v k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e e31q k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；a1v g6p f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96r s103e k120a s141r p163a t166e q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q
d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d t170e m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0425]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n m188f k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p t74e q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a k462r；a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p t74e q76t n82t s103e s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g p11a s15q i21l k26e i30l k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；a1v f7g t13i s15q i21l k26e i30l k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m
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[0426]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v f7g p11a t13i s15q q19n a20g k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；t3g f7g t13i s14n s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a i165d t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h p399a k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103n s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109d k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76t n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g e10y t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p k179h f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p k189s f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s14h s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76t n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g t13i s14n s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a i165t t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v9a s15q a20g k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p k189s f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g e10y t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r r160f e162d t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171k m172i s176n s178p k189s f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e a45m e46y e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r
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在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v9a s15q a20g a23t k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e t115y k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g e10g t13i s15q a20g a23t k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a
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[0430]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r r160n p163a t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a i165d t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s109d k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v9a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v9a s15q a20g a23t k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109d t115y k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v9a s15q a20g a23t k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r
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[0431]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a i165d t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n
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[0432]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109d k120a s141r r160l p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t k462a n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e t115v k120a s137a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a
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[0433]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e i30l e31q k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r t115y k120a s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171k m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82a a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a s15k a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4d f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k304a g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e e31q k36e e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r g110r t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m
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[0434]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r t115y k120a k129r s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d
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87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0435]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q e380t d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g v9p t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a n139i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a a126t s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w h324k g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y
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[0436]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t l89f a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w m228i s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g l259v
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t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182e f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w h324k g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0437]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e k36e a45l e46y e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i p174k s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96d a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r
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[0438]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r w148q p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g 268/ g270c 271/ s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w h324n g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120p l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t t438a n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13e s15q a20p k26e k36e e46m t53p e64p q69p k70p n82a g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i
s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e a101r s109d t115y k120a a126d l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i e249h s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e d27n k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t a423g n473y e479r d486e k491r；a1v t3e f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t n97e a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101l s109d t115y k120a a126t k129l s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g v9m t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e a101l s109d t115y k120a k129l s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4d f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e t115y k120a s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a k129l n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e
90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0439]
在一个方面，变体在对应于选自由以下组成的组的位置的位置处包含取代：a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e i30l k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t v422i q437i n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；a1v v4d f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e61d e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e k120a a126t l134i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82a n97e a101r s109d k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82a a101r s109d g112e k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r，并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％
序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[0440]
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的洗涤剂内稳定性。
[0441]
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的热稳定性。
[0442]
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的蛋白酶稳定性。
[0443]
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的表面活性剂稳定性。
[0444]
在实施例中，与亲本酶相比，该变体具有改善的ph稳定性。
[0445]
在一个方面，甘露聚糖酶变体包含以下取代中的至少一个：
[0446]
q168d l454i；
[0447]
q168d l413a；
[0448]
k26e q168d n296a；
[0449]
q168d d385p l413a；
[0450]
q168d e249q n283y l413a；
[0451]
q168d a210e n283y l413a r489k；
[0452]
q168d q183e l413a；
[0453]
k26e q168d；
[0454]
k26e q168d s181t k408c k482q；
[0455]
k26e q168d n283y n296a；
[0456]
k26e q168d a210e s260c n283y n296a k482q；
[0457]
k26e q168d a210e s260c s271g n283y n296a；
[0458]
k26e q168d a210e s271g n283y n296a；
[0459]
k26e q168d a210q s239a e249q s271y n296a；
[0460]
k26e q168d a210q e249q s271y n296a；
[0461]
k26e q168d a184t n242t n296a e380d t438a；
[0462]
k26e q168d a184t n296a e322d h323a e380d t438a；
[0463]
k26e q168d a184t n242t n296a e322d h323a e380d t438a；
[0464]
k26e q168d a184t n242t n296a e322d h323a k364y e380d t438a；
[0465]
k26e r164a q168d s181t n296a q321w k408s l413v；
[0466]
k26e r164a q168d s181t n296a k408s l413v；
[0467]
k26e r164a q168d s181t n296a；
[0468]
k26e r164a q168d s181t n296a q321w k408s；
[0469]
k26e q168d y213k k252e e285d n296a d385p；
[0470]
k26e q168d k252e e285d n296a a344c g366h d385p；
[0471]
k26e q168d t192a y213k n296a a344c d385p；
[0472]
k26e q168d k252e n296a a344c d385p；
[0473]
k26e r164h q168d f190y s271g n296a；
[0474]
k26e q168d s271g n296a y354w v377e k408a；
[0475]
k26e q168d f190y s239a s271g n296a；
[0476]
k26e q168d n283y n296a s403q；
[0477]
k26e q168d n283y n296a d385s s403q k408c；
[0478]
k26e q168d n283y n296a s403q l413t；
[0479]
k26e q168d n283y n296a d385s s403q k408c l413t；
[0480]
k26e q168d n283y n296a s403q k408c l413t；
[0481]
k26e k36n q168d k198n l413a n473f；
[0482]
r38q q168d d385f；
[0483]
q168d q183e k252e r253w k408t l413a；
[0484]
k169p q183e s260c n283y l413a；
[0485]
k26e q168d q183e l413a；
[0486]
k26e q168d s181t e249q n283y d385a l413a；
[0487]
k26e q168d s181t k197f v235l e249q n283y l413a；
[0488]
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[0489]
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[0490]
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[0491]
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[0492]
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[0493]
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[0600]
k26e t42e q69p q168d；
[0601]
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[0602]
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[0603]
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[0604]
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[0605]
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[0607]
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[0608]
v4d k26e t53p k65q k120p q168d d385a；
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k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t k466q；
[0691]
v4y k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t；
[0692]
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[0694]
k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a l413t；
[0695]
k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t k417e；
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k26e k36e e64p k70p s103v q168m k197d n283y d385a l413t；
[0713]
k26e k36e e64p k70p s103v k169v k197d n283y d385a l413t；
[0714]
k26e k36e e64p k70p s103v k169t n283y d385a l477f；
[0715]
k26e k36e e64p q69p s103v q168d n283y d385a l477f；
[0716]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d q168d n283y d385a l477f；
[0717]
k26e k36e e64p k70p s103v e162q q168d n283y d385a l477f；
[0718]
k26e k36e e64p k70p s103v i165a q168d n283y d385a l477f；
[0719]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d n283y d385a l477f；
[0720]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0721]
s14n k26e k36e e64p q69s s103v q168d k197d n283y d385a l413t；
[0722]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k169q k197d n283y d385a l413t；
[0723]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v k169p k197d n283y d385a l413t；
[0724]
k26e k36e e64p q69p n97y s103v t123r q168d k197d n283y d385a l413t；
[0725]
k26e k36e e64p k70p s103v k169t n283y d385a l413t l477f；
[0726]
k26e k36e e64p k70p s103v q168d k169q n283y d385a l413t l477f；
[0727]
h12p k26e k36e e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0728]
k26e k36e e64p q69t s103v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0729]
k26e k36e e64p q69r s103v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0730]
k26e k36e e64p k70p s103v t166l q168d n283y d385a l413t l477f；
[0731]
k26e k36e e64p k70p s103v t166q q168d n283y d385a l413t l477f；
[0732]
k26e k36e e64p k70p s103v t166v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0733]
k26e k36e e64p k70p s103v t166g q168d n283y d385a l413t l477f；
[0734]
k26e k36e e64p k70p s103v t166n q168d n283y d385a l413t l477f；
[0735]
k26e k36e e64p k70p s103v t166i q168d n283y d385a l413t l477f；
[0736]
k26e k36e e64p k70p s103v t166w q168d n283y d385a l413t l477f；
[0737]
k26e k36e e64p k70p s103v t166r q168d n283y d385a l413t l477f；
[0738]
k26e k36e e64p k70p s103v t166e q168d n283y d385a l413t l477f；
[0739]
k26e k36e e64p k70p s103v q168p n283y d385a l413t l477f；
[0740]
k26e k36e s57r e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0741]
k26e k36e s57p e64p k70p s103v q168d n283y d385a l413t l477f；
[0742]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v i165a q168d k197d n283y d385a d410m
l413t；
[0743]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v i165l q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0744]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0745]
v4d s14n k26e k36e e64p k70p s103v q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0746]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v p163n q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0747]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410l l413t；
[0748]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0749]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0750]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a k408m l413t；
[0751]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v g112v t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0752]
h12v k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0753]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0754]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197y n283y d385a l413t；
[0755]
f25y k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a l413t l477f；
[0756]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d n283y d385a l413t l477f；
[0757]
v4y k26e k36e e64p k70p s103v i165l q168d n283y d385a l413t l477f；
[0758]
s14n k26e k36e t53p e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0759]
k26e k36e e64p k70p s103v i165d q168d k197d n283y d385a l413t；
[0760]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171n k197d n283y d385a l413t；
[0761]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t；
[0762]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171e k197d n283y d385a l413t；
[0763]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d t170h k197d n283y d385a d410m l413t；
[0764]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0765]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y t315v d385a l413t；
[0766]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t；
[0767]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t；
[0768]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408q l413t；
[0769]
h12e k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0770]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0771]
h12v k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0772]
s14n k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0773]
k26e k36e e64p q69p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0774]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178d k197d n283y d385a l413t；
[0775]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178p k197d n283y d385a d410m l413t；
[0776]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k179n k197d n283y d385a l413t；
[0777]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s271g n283y d385a l413t；
[0778]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a l413t；
[0779]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a k408q l413t；
[0780]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t；
[0781]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d f190y n283y d385a l477f；
[0782]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d t192v n283y d385a l477f；
[0783]
v4d k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d n283y d385a l477f；
[0784]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d s271g n283y d385a d410m l413t；
[0785]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i n283y d385a d410m l413t；
[0786]
s15q k26e k36e t53p e64p k70p s103v t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0787]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163n t166p q168d k197d n283y d385a d410m l413t；
[0788]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s271g n283y d385h l413t；
[0789]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i k197d n283y d385h l413t；
[0790]
k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d m248i n283y d385h l413t；
[0791]
f25y k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t；
[0792]
v4n k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t；
[0793]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385h l413t；
[0794]
k26e k36e e64p k70p s103v r164* i165* q168d k197d n283y d385h l413t；
[0795]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q f190y k197d n283y d385a l413t；
[0796]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d a210e n283y e322d d385a l413t；
[0797]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0798]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d n283y d385a l413t；
[0799]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d n283y d385a k408m l413t；
[0800]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0801]
s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t；
[0802]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d t170h s178p k197d n283y d385a d410m l413t；
[0803]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q f190y k197d s271g n283y d385a l413t；
[0804]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v k129m e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0805]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d m248i s271g n283y d385a l413t；
[0806]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t；
[0807]
h12r k26e k36e k65h k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0808]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0809]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0810]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d s178p k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0811]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0812]
s15q k26e k36e d48s e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0813]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163e t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0814]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v i165d q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[0815]
s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s258g n283y d385a k408a l413t；
[0816]
s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408e l413t；
[0817]
s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408m l413t；
[0818]
v4g s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d n283y d385a k408a l413t；
[0819]
h12r k26e k36e k65h k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0820]
h12r k26e k36e k65h k70p s103v t166p q168d t170h k197d s271g n283y d385a l413t；
[0821]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0822]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t g483d；
[0823]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t；
[0824]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408a l413t；
[0825]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0826]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103e t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0827]
s14n k26e k36e l49m e64p k70p s103v e162d t166p q168d k197d s239a s258g n283y d385a k408a l413t；
[0828]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103d t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0829]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y k304r d385a l413t；
[0830]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g
n283y k304s d385a l413t；
[0831]
f7p h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0832]
f7i h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a v391l d410m l413t；
[0833]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v p163n t166p q168d k197d s271g n283y d385a d410m l413t；
[0834]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d s271g n283y d385a s403r d410m l413t；
[0835]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v g110s t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t；
[0836]
h12r k26e k36e e64p k70p s103v g110c t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408m l413t；
[0837]
v4d h12r s14n a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0838]
h12r s15q a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0839]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s258g s271g n283y d385a l413t；
[0840]
h12r a23s f25w k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t；
[0841]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0842]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v y155h t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0843]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0844]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d a210s s271g n283y d385a l413t；
[0845]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408e l413t；
[0846]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a k408v l413t；
[0847]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t d472y；
[0848]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t k482g；
[0849]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t d486v；
[0850]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y；
[0851]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t p488l；
[0852]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103e t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t；
[0853]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d i165l t166p q168d m171q k197d s271g n283y k378q d385a l413t；
[0854]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d m248i e249l s271g n283y k378q d385a l413t；
[0855]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d q214r s271g n283y k378q d385a l413t；
[0856]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t l484q；
[0857]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0858]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160n p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0859]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171n k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0860]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171q k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0861]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0862]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d s271g n283y d385a l413t q437a；
[0863]
h12r k26e k36e e46y e64p k70p s103v t166p q168d m171q k197d e249h s271g n283y d385a l413t；
[0864]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160l t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y；
[0865]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v r160n t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t n470y；
[0866]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0867]
v4n s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178e k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0868]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171q k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0869]
a1y v4g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d
m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0870]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t k491r；
[0871]
k482r；
[0872]
s15m k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0873]
k482d；
[0874]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0875]
s15q f25y k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0876]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y k304q d385a k408m d410m；
[0877]
r489n；
[0878]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y k378d d385a k408m d410m；
[0879]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m171e k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0880]
a1y s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0881]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178h k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0882]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178t k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0883]
f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0884]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y t315v d385a k408m；
[0885]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0886]
s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v p163a t166p q168d s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0887]
s15q k26e k36e e46y t53h e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0888]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m188y k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0889]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y y358w d385a k408m d410m l413t；
[0890]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163n t166p q168d m172i s178p
k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0891]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t k466f；
[0892]
f7a s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a
[0893]
k408m d410m l413t；
[0894]
d410m l413t d472g w490a；
[0895]
v9p s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0896]
v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m；
[0897]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i k179r k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0898]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213r m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0899]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0900]
t3e v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0901]
v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0902]
v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0903]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p m188i k197d m248i s258g s271g n283y k378r；
[0904]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g n283y d385a；
[0905]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213r s239a m248i s258g s271g；
[0906]
n283y d385a k408m d410m l413t；
[0907]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0908]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178h k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0909]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p f190y k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0910]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p a184t f190y k197d m248i s258g s271g n283y；
[0911]
t3e s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p
k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0912]
v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0913]
t3e v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0914]
v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0915]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y k378q d385a；
[0916]
a1t v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a
[0917]
d410m l413t n473y；
[0918]
v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0919]
v4m s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0920]
s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0921]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q；
[0922]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v a126t p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213r s239a m248i s258g s271g；
[0923]
a1y f7p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0924]
f7p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a d410m l413t k417q k462p；
[0925]
a1t f7g s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0926]
a1t s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0927]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m；
[0928]
a1t f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a；
[0929]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t p488l；
[0930]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197n m248i s258g s271g n283y d385a；
[0931]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i
s178p k197n m248i s258g s271g n283y k364r；
[0932]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d n242t m248i s258g s271g n283y
[0933]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213q m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0934]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d q214r m248i s258g s271g n283y t315v；
[0935]
f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g n283y；
[0936]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d q214r m248i s258g s271g n283y d385a；
[0937]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g n283y d385a；
[0938]
v4n s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g n283y；
[0939]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g n283y k378q；
[0940]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d q215e m248i s258g s271g n283y d385a；
[0941]
m172i k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t
[0942]
v4m s15q k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q m248i s258g s271g；
[0943]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y t315v k378q d385a k408m d410m l413t；
[0944]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0945]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r m248i s258g s271g n283y；
[0946]
t315v d385a k408m d410m l413t；
[0947]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y k304q；
[0948]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0949]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0950]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y；
[0951]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v i165e t166p q168d
m172i s178p k197d m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t p488i；
[0952]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p m188y k197d s239a m248i s258g s271g n283；
[0953]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0954]
s15q k26e k36e e46y e61d e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0955]
s15q k26e k36e e46y k65n k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q n283y d385a k408m d410m l413t r489n；
[0956]
s15q k26e k36e e46y k65n k70p s103v a126t p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213r s239a m248i s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t k482d；
[0957]
n283y d385a k408m d410m l413t s487g；
[0958]
n283y k378d d385a k408m d410m l413t；
[0959]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v a126t p163a t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y k378d d385a s403q k408m d410m l413t k482d；
[0960]
n283y k378d d385a k408m d410m l413t k482d；
[0961]
s15t k26e k36e e46y t53q e64p k70p s103v p121a p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g；
[0962]
n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[0963]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q s239a m248i s258g s271g n283y；
[0964]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213q s239a m248i s258g s271g；
[0965]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v a126t l134t e162d p163e t166p q168d m172i s178p k197d y213r s239a m248i；
[0966]
s258g s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[0967]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v a126t e162d p163e t166p q168d m172i s178p k197d y213r s239a m248i s258g；
[0968]
n283y d385a k408m d410m l413t n473y；
[0969]
v9p s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g；
[0970]
v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163e t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213r s239a m248i s258g；
[0971]
v8w s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a p163e t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213r s239a m248i；
[0972]
t3e s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p
f190y k197d y213r s239a m248i s258g；
[0973]
f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d y213r s239a m248i s258g；
[0974]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y；
[0975]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g
[0976]
n283y k378q d385a k408m d410m l413t p488l；
[0977]
k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[0978]
s15q k26e k36e e46y t53p e64p k70p s103v p121a p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[0979]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g；
[0980]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q s239a m248i s258g ；
[0981]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v e162d t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t r489n；
[0982]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y；
[0983]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[0984]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g；
[0985]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g；
[0986]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v q143r p163a t166p q168d m172i s178p k197d y213q s239a m248i s258g s271g k378q d385a k408m d410m l413t h442n n473y；
[0987]
e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[0988]
k378q d385a k408m d410m l413t n473y k482r k491e
[0989]
v4d v8d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[0990]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442n k466n k482g；
[0991]
s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413a；
[0992]
n283y e380d d385a k408m d410m l413t g440q；
[0993]
n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442n；
[0994]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i r253a s258g；
[0995]
s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442n；
[0996]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g；
[0997]
s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[0998]
g366h k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[0999]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160n i165e t166p q168d m172i s178p k197d y219w s239a m248i；
[1000]
s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1001]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s176n s178p k197d s239a m248i；
[1002]
s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442d s487r；
[1003]
s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t h442d k482d s487r；
[1004]
s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1005]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160k p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1006]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a r160v p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1007]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a e162g p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1008]
a1* i2* t3* v4* p5* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a；
[1009]
m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1010]
a1y g6* f7* v8* v9* e10* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d；
[1011]
s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1012]
e10* v9* v8* f7* g6* p5* v4* t3* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i；
[1013]
s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1014]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i；
[1015]
s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1016]
s271g n283y e299w k378d d385a k408m d410m l413t n473y k482q
[1017]
s271g n283y e299w k378d d385a k408m d410m l413t n473y；
[1018]
a1s f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p
q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1019]
a1y f7d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1020]
a1y f7d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a l134p q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1021]
a1y f7d s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1022]
s258g 269\ s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1023]
a1y f7g q17a k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1024]
a1y f7g s15q n18s k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1025]
s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1026]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1027]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a a126t p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1028]
a1y f7g s14n s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1029]
a1y f7g s15q a23s k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1030]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1031]
s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1032]
a1y f7g s15q k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1033]
a1y f7g s15d k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1034]
a1y f7g s15c k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g；
[1035]
t3e f7g s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a；
[1036]
m248i s258g s271g n283y e299w g366h k378q d385a k408m d410m l413t h442n n473y k491r；
[1037]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r g217q；
[1038]
s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1039]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e
t166p q168d m172i s178p k197d q214w s239a；
[1040]
m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1041]
s239a m248i s258g s271g r280k n283y w342g k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1042]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q215e s239a；
[1043]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a；
[1044]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214w g217q；
[1045]
s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q
[1046]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i k179n k197d s239a；
[1047]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p m188y k197n；
[1048]
g217q s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1049]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r v161t p163a t166p q168d m172i s178p k197d s239a；
[1050]
t3e f7g s15q a20g k26d k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r；
[1051]
s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1052]
t3e f7g s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d；
[1053]
q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1054]
t3e f7g s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r；
[1055]
t3e v9g s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r；
[1056]
t3e v9m s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r；
[1057]
t3e v9a s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r；
[1058]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i；
[1059]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a；
[1060]
m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q
[1061]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d；
[1062]
q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1063]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d；
[1064]
s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1065]
a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n；
[1066]
k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1067]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n；
[1068]
f7g t3* g6* p5* v4* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d；
[1069]
q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[1070]
t3* v9* v8* g7* g6* p5* v4* i2* a1* f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p；
[1071]
f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[1072]
t3g f7g t13i s15q a20v k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n；
[1073]
t3e f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n；
[1074]
q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t v422i n473y k491r；
[1075]
k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197y n283y d385a l413t；
[1076]
s15q k26e k36e e64p k70p s103v t166p q168d k197d m248i s271g n283y d385a d410m l413t；
[1077]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m188y k197d m248i s271g n283y d385a k408m d410m l413t；
[1078]
s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d k197d m248i s271g n283y y358w d385a k408m d410m l413t；
[1079]
a1y f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t；
[1080]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1081]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[1082]
t3e f7g s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r p163a i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1083]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1084]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1085]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1086]
a1v f7g s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1087]
a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v k120p m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1088]
a1v v8a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1089]
a1g f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1090]
a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1091]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1092]
t3e f7g s15d a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1093]
v4n f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1094]
v4w f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1095]
a1v f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1096]
a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1097]
a1v f7g p11l s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1098]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1099]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p q69p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1100]
a1v f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y n368d k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1101]
t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163e t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1102]
a1v f7g p11l s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1103]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r g217q s239a m248i s258g s271g r280k n283y w342g k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1104]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1105]
t3g f7g t13i s15q a20v k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1106]
t3e f7g s15q a20g k26e i30l k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1107]
t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1108]
a1v f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p t74a s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1109]
a1v f7g t13i s15q a20s k26e k36e e46y t53k e64p k70p t74a s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1110]
a1y f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1111]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1112]
a1v f7g p11a s15q i21l k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1113]
a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a m130i q143r i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1114]
a1y f7g p11e s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1115]
a1y f7g p11i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1116]
a1y f7g t13m s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1117]
a1y f7g t13n s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1118]
a1y f7g t13w s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1119]
a1y f7g t13y s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1120]
a1y f7g s14q s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1121]
a1y f7g s14r s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1122]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e a45m e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1123]
a1y g6p f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1124]
a1y f7g v8q s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a q143r i165e t166p q168d m172i s178p k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q k378q d385a k408m d410m l413t g440q；
[1125]
a1y f7g t13i s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r p163n i165e t166p q168d m171q k179n k197d s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1126]
f7g t3* g6* p5* v4* i2* a1* s15q k26e k36e e46y e64p k70p s103v p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y；
[1127]
t3e f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t v422i n473y k491r；
[1128]
v4y g6* f7g v8f s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1129]
t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1130]
a1y f7g s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p q76t s103v p121a q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n f190y k197d q214r s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1131]
a1v f7g p11a s15q i22v k26e k36e e46y t53k e64p k70p s103v p121a m130i q143r e162d i165e t166p q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1132]
t3g f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1133]
a1v f7g t13i s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p k70p s103v s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1134]
t3g f7g t13i s15q a20g k26e k36e e46y e64p k70p s103v k120a s141r p163a t166p q168d m172i s178p f190y k197n q214r y219w s239a m248i s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1135]
t3g f7g s15q a20g k26e k36e e46m e64p k70p s103v k120s s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r s239a m248i r253a s258g s271g n283y e299w k378q d385a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1136]
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[1137]
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[1180]
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t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
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[1218]
t3g f7g v9a s15q k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1219]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76e s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1220]
a1v f7g p11a t13i s15q q19n a20g k26e k36e e46y t53k e64p q69p k70p q76t n82t s103v s109d p121a m130i q143r e162d i165e t166p t167a q168d m171q k179n k197d y219w s239a m248i s258g s271g r280k n283y k304q e363h k378q d385a k408m d410m l413t t438a；
[1221]
t3g f7g t13i s14n s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a i165d t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h p399a k408m d410m l413t n473y k491r；
[1222]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103n s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1223]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1224]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1225]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109d k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1226]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76t n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1227]
t3g f7g e10y t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1228]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p k179h f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1229]
t3g f7g t13i s14n s15q a20g k26e k36e e46y e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h
k408m d410m l413t n473y k491r；
[1230]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y s487r k491r；
[1231]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e k120a s141r r160f e162d t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1232]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a i165d t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1233]
t3g f7g v9a s15q k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r r160f e162d t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1234]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1235]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p e86d s103e k120a s141r v161s p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1236]
t3g f7g v9a s15q i22t k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1237]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76e s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1238]
s-17g t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280l n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1239]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w
s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w k304q a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1240]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a k129r s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1241]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163e t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w k304q a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1242]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76e s103e k120a s141r v161s p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1243]
t3g f7g v9a s15q k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k364d k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1244]
t3g f7g v9a s15q k26e k36e e46y d48a e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1245]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p k189s f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1246]
t3g f7g t13i s14h s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76t n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1247]
t3g f7g t13i s14n s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1248]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a i165t t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1249]
t3g f7g h12q t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p k65q q69p k70p k78e
n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1250]
t3g f7g t13e s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e s109d k120a s141r p163a t166p q168d m171q m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1251]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82a s103e s109d k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1252]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1253]
t3g f7g t13i s14h s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p q76t n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1254]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e i30l k36e e46y e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1255]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e e31q k36e e46y e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1256]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e e31q k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e s109e k120a s141r p163a t166p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
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s-17g t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p k78e n82t s103e k120a n139k s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g r280k n283y e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1260]
t3g f7g v9a s15q a20g k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p q76e s103e k120a s141r p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p k179q f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1261]
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[1263]
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[1264]
t3g f7g e10y t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a r164q t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276n r280k n283y e299w a312v k378q k408m d410m l413t n473y k491r；
[1265]
t3g f7g v9a s15q k26e k36e e46y d48a e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i k252g r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
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a1v v4m f7g s15q a20g a23v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
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t3g f7g v9a s15q a20g a23v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82a s103e k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1268]
t3g f7g v9a s15q a20g a23v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82a a101r k120a s141r p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k378q
d385h k408m d410m l413t n473y k491r；
[1269]
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[1270]
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[1271]
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[1275]
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[1276]
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[1278]
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[1280]
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[1284]
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[1289]
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[1290]
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[1291]
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[1292]
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[1294]
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[1310]
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[1313]
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[1314]
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q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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[1320]
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[1321]
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[1323]
t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a i165d t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1324]
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[1325]
t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p q168d k169p m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t k462a n473y d486e k491r；
[1326]
t3g f7g v9a s15q a20g a23t k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e t115y k120a s141r v161t p163a t166p q168d m171k m172i s176n s178p f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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[1343]
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[1344]
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[1346]
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[1348]
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[1349]
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[1350]
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[1351]
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[1352]
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[1353]
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[1354]
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[1355]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r t115y k120p s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1356]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a s141r r160i p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y
k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1357]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82a a101r g110r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1358]
a1d f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p q69p k70p a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197f q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398e k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1359]
t3g f7g v8a t13i s15q i22v k26e i30l e31q k36e e46m e64p q69p k70p n82t s103e k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1360]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r t115y k120a s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1361]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171k m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1362]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1363]
t3g f7a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82a a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1364]
t3g f7g v8a s15k a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1365]
a1v v4d f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w k304a g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1366]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e e31q k36e e46y t53k e64p q69p k70p
n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1367]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r g110r t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1368]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1369]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1370]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d a210t q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1371]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115i k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1372]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y n193w k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1373]
a1d t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p q69p k70p a101r k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197f q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398e k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1374]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r t115y k120a k129r s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1375]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c
r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1376]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120p s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1377]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1378]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r g110r t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1379]
t3g f7g h12e t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1380]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1381]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r g110r t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1382]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163* t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1383]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115i k120a k129l s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p
p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1384]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1385]
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[1386]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e i30l k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1387]
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[1388]
t3g f7g v8a t13i s15q k26e k36e a45m e46y e64p v68m q69p k70p n82a a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182e f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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[1401]
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[1404]
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[1406]
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[1409]
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[1410]
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[1411]
a1d f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1412]
t3g f7g v8a t13i s15q a20g k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1413]
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[1414]
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a1i f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45r e46y e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1416]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115i k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253w s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1417]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115i k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1418]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p v68m q69p k70p q76e a101r s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182e f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1419]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p v68m q69p k70p n82a a101l s109d t115v k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182e f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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t3g f7g p11a t13i s15q k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82t a101i s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167r q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1421]
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[1422]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n
s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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[1425]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t l89f a101r s109d t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w m228i s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
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[1428]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1429]
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[1431]
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[1432]
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[1434]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i s141r q143r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e301k g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1435]
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[1437]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101l s109d t115y k120a k129l s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1438]
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[1439]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1440]
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[1441]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p q76t n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1442]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d g122p l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1443]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q e379k d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1444]
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[1445]
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d486e k491r；
[1446]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143s y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1447]
a1v v4n f7g t13i s14e s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1448]
a1v v4n f7g t13i s14e s15q a20g k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1449]
t3g f7g v9p t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1450]
t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e k36e e46y e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1451]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45l e46y e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t f414s n473y d486e k491r；
[1452]
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[1453]
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[1455]
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[1458]
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[1459]
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[1460]
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[1461]
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[1464]
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[1465]
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[1467]
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[1468]
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[1469]
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[1470]
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[1471]
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[1472]
a1v t3e f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1473]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1474]
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[1475]
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[1476]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d g122p l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1477]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e t115y k120a s141r e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1478]
a1v v4n f7g t13i s14e s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e t115y k120a s141r y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y k482p d486e k491r；
[1479]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q e379k d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1480]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1481]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p k65n q69p k70p n82t a101r s109e k120a a126t l134i s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253w s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1482]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45r e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a s109e t115y k120a s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1483]
t3g f7g p11a t13i s15q k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a k129l s141r q143t y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1484]
t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p q76t k78s a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t
n473y d486e k491r；
[1485]
t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a n97d a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1486]
t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e i30l k36e e46m e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1487]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45l e46y e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d k198g q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t v422r n473y d486e k491r；
[1488]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46i t53k e64p q69p k70p n82a a101r s109d k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1489]
t3g f7g v8a t13i s15q k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a k129l s141r q143t y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1490]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p v68m q69p k70p n82t a101l s109d t115v k120a a126d s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182e f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1491]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1492]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a
s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1493]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101r s109d t115y k120a s141r w148q p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g 268/ g270c 271/ s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1494]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w h324n g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1495]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120p l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t t438a n473y d486e k491r；
[1496]
a1v v4n f7g t13e s15q a20p k26e k36e e46m t53p e64p q69p k70p n82a g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1497]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e a101r s109d t115y k120a a126d l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i e249h s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1498]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e d27n k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1499]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t a423g n473y e479r d486e k491r；
[1500]
a1v t3e f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t n97e a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h p163a t166p t167p
q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1501]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t a101l s109d t115y k120a a126t k129l s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g n272d h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1502]
a1v v4n f7g v9m t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e a101l s109d t115y k120a k129l s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1503]
a1v v4d f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1504]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e t115y k120a s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1505]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a k129l n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1506]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1507]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45r e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e t115y k120a s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1508]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p
n82a a101r s109d k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1509]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a k129l n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299k g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1510]
t3g f7g v8a t13i s15q q17k a20g k26e i30l k36e e46m e64p k65n q69p k70p q76e n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1511]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e t115y k120a s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1512]
s-6p a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t n97e s109d t115y k120a a126d l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1513]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e i30l k36e e46m t53k e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1514]
a1v v4n f7g t13i s15q a20p k26e k36e e46m e64p q69p k70p n82t g96e a101r s109d t115y k120a l134v s141r q143t y155h p163a t166p t167p q168d m171i m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t v422i q437i n473y d486e k491r；
[1515]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1516]
a1v v4d f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e e46m t53k e61d e64p q69p k70p n82t a101r s109d k120a a126t l134i n139i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1517]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101r s109e k120a a126t l134i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1518]
t3g f7g v8a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53p e64p k65n q69p k70p n82a a101l s109e k120a a126t l134i s141r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w e363h g366n k378q d385h k408m d410m l413t n473y d486e k491r；
[1519]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82a n97e a101r s109d k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；
[1520]
t3g f7g p11a t13i s15q a20p k26e k36e a45m e46y t53k e64p q69p k70p n82a a101r s109d g112e k120a k129l s141r q143r y155h e162g p163a t166p t167p q168d m172i s176n s178p p182r f190y k197d q214r q215e y219w s239a m248i r253a s258g s271g h276c r280k n283y f286c e299w g366n k378q d385h p398f k408m d410m l413q n473y d486e k491r；并且其中该变体与seq id no:1的多肽具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[1521]
亲本甘露聚糖酶
[1522]
在一方面，该亲本甘露聚糖酶是与seq id no:1的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、
至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽，其具有甘露聚糖酶活性。在一个方面，该亲本的氨基酸序列与seq id no:1的多肽相差多达20个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在另一方面，该亲本包含seq id no:1的氨基酸序列或由其组成。在一个方面，该亲本是seq id no:1的多肽的片段，该片段含有seq id no:1的至少441个氨基酸，如seq id no:1的至少451个氨基酸、seq id no:1的至少461个氨基酸、seq id no:1的至少471个氨基酸、seq id no:1的至少481个氨基酸、或seq id no:1的至少486个氨基酸。
[1523]
在一方面，该亲本甘露聚糖酶是与seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽，其具有甘露聚糖酶活性。在一个方面，该亲本的氨基酸序列与seq id no:2的多肽相差多达20个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在另一方面，该亲本包含seq id no:2的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，该亲本是seq id no:2的多肽的片段，该片段含有seq id no:2的至少441个氨基酸，如seq id no:2的至少451个氨基酸、seq id no:2的至少481个氨基酸、seq id no:2的至少486个氨基酸。
[1524]
在一方面，该亲本甘露聚糖酶是与seq id no:3的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽，其具有甘露聚糖酶活性。在一个方面，该亲本的氨基酸序列与seq id no:3的多肽相差多达20个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在另一方面，该亲本包含seq id no:3的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，该亲本是seq id no:3的多肽的片段，该片段含有seq id no:3的至少280个氨基酸、seq id no:3的至少287个氨基酸、seq id no:3的至少293个氨基酸、seq id no:3的至少299个氨基酸、seq id no:3的至少305个氨基酸、seq id no:3的至少308个氨基酸。
[1525]
在一方面，该亲本甘露聚糖酶是与seq id no:4的多肽具有至少60％，例如至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％的序列同一性的多肽，其具有甘露聚糖酶活性。在一个方面，该亲本的氨基酸序列与seq id no:4的多肽相差多达20个氨基酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个。在另一方面，该亲本包含seq id no:4的氨基酸序列或由其组成。在另一方面，该亲本是seq id no:4的多肽的片段，该片段含有seq id no:4的至少307个氨基酸、seq id no:4的至少314个氨基酸、或seq id no:4的至少328个氨基酸、seq id no:4的至少335个氨基酸、seq id no:4的至少338个氨基酸。
[1526]
亲本多肽可以是杂合多肽，其中一种多肽的区域在另一种多肽的区域的n-末端或c-末端处融合。
[1527]
亲本可以是融合多肽或可切割的融合多肽，其中另一种多肽在本发明的多肽的n-末端或c-末端处融合。通过将编码另一种多肽的多核苷酸融合于本发明的多核苷酸来产生融合多肽。用于产生融合多肽的技术是本领域已知的，并且包括连接编码多肽的编码序列使得它们符合读框，而且融合多肽的表达处于一个或多个相同的启动子和终止子的控制之
下。还可以使用内含肽技术构建融合多肽，其中在翻译后产生融合多肽(cooper等人,1993,embo j.[欧洲分子生物学学会杂志]12:2575-2583；dawson等人,1994,science[科学]266:776-779)。
[1528]
融合多肽可进一步包含两个多肽之间的切割位点。在融合蛋白分泌之时，位点被切割，从而释放出这两种多肽。切割位点的实例包括但不限于在以下文献中披露的位点：martin等人,2003,j.ind.microbiol.biotechnol.[工业微生物生物技术杂志]3:568-576；svetina等人,2000,j.biotechnol.[生物技术杂志]76:245-251；rasmussen-wilson等人,1997,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]63:3488-3493；ward等人,1995,biotechnology[生物技术]13:498-503；和contreras等人,1991,biotechnology[生物技术]9:378-381；eaton等人,1986,biochemistry[生物化学]25:505-512；collins-racie等人,1995,biotechnology[生物技术]13:982-987；carter等人,1989,proteins:structure,function,and genetics[蛋白质：结构、功能以及遗传学]6:240-248；以及stevens,2003,drug discovery world[药物发现世界]4:35-48。
[1529]
亲本可以从任何属的微生物中获得。出于本发明的目的，如本文中与给出的来源结合使用，术语“从
……
获得”应当意指由多核苷酸编码的亲本是由该来源或由其中已经插入来自该来源的多核苷酸的菌株产生的。在一个方面，该亲本是细胞外分泌的。
[1530]
在一个方面，该多肽是来自芽孢杆菌纲(bacilli)的细菌的甘露聚糖酶，如来自芽孢杆菌目(bacillales)、来自类芽孢杆菌科(paenibacillaceae)、来自类芽孢杆菌属(paenibacillus)、或者来自伊利诺斯州类芽孢杆菌物种或类芽孢杆菌属物种。
[1531]
应理解的是，对于前述物种，本发明涵盖完全和不完全阶段(perfect and imperfect states)以及其他分类学等同物，例如无性型，而与它们已知的物种名无关。本领域的技术人员会容易地识别适当等同物的身份。
[1532]
这些物种的菌株可容易地在许多培养物保藏中心为公众所获得，如美国典型培养物保藏中心(american type culture collection，atcc)、德国微生物菌种保藏中心(deutsche sammlung von mikroorganismen und zellkulturen gmbh，dsmz)、荷兰菌种保藏中心(centraalbureau voor schimmelcultures，cbs)、以及美国农业研究服务专利培养物保藏中心北方地区研究中心(agricultural research service patent culture collection,northern regional research center，nrrl)。
[1533]
可以使用以上探针，从其他来源(包括从自然界(例如，土壤、堆肥、水等)分离的微生物或从天然材料(例如，土壤、堆肥、水等)直接获得的dna样品)中鉴定亲本并获得亲本。用于从天然生境中直接分离微生物和dna的技术是本领域熟知的。然后可以通过类似地筛选另一种微生物或混合dna样品的基因组dna或cdna文库来获得编码亲本的多核苷酸。一旦已经用一种或多种探针检测到编码亲本的多核苷酸，则可以通过利用对本领域的普通技术人员来说已知的技术来分离或克隆该多核苷酸(参见例如，sambrook等人,1989,同上)。
[1534]
变体的制备
[1535]
本发明还涉及用于获得一种具有甘露聚糖酶活性的变体的方法，这些方法包括：(a)向亲本甘露聚糖酶中引入至少两个修饰，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、
280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性；以及(b)回收该变体。
[1536]
可以使用本领域已知的任何诱变程序，如定点诱变、合成基因构建、半合成基因构建、随机诱变、改组等制备变体。
[1537]
定点诱变是在编码该亲本的多核苷酸中的一个或多个限定位点处引入一个或多个突变的技术。
[1538]
可以通过pcr在体外实现定点诱变，该pcr涉及使用含有希望的突变的寡核苷酸引物。也可以通过盒式诱变进行体外定点诱变，该盒式诱变涉及由限制酶在包含编码亲本的多核苷酸的质粒中的位点处切割并且随后将含有突变的寡核苷酸连接在多核苷酸中。通常，消化质粒和寡核苷酸的限制酶是相同的，从而允许质粒和插入物的粘性末端彼此连接。参见例如，scherer和davis,1979,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]76:4949-4955；和barton等人,1990,nucleic acids res.[核酸研究]18:7349-4966。
[1539]
还可以通过本领域中已知的方法在体内实现定点诱变。参见例如，美国专利申请公开号2004/0171154；storici等人,2001,nature biotechnol.[自然生物技术]19:773-776；kren等人,1998,nat.med.[自然医学]4:285-290；以及calissano和macino,1996,fungal genet.newslett.[真菌遗传学时事通讯]43:15-16。
[1540]
可以在本发明中使用任何定点诱变程序。存在可用于制备变体的许多可商购的试剂盒。
[1541]
合成基因构建需要设计的多核苷酸分子的体外合成以编码目的多肽。基因合成可以利用多种技术来进行，例如由tian等人(2004,nature[自然]432:1050-1054)所述的基于多路微芯片的技术、以及其中在光可编程的微流芯片上合成并组装寡核苷酸的类似技术。
[1542]
可以使用已知的诱变、重组和/或改组方法，随后进行相关的筛选程序做出单或多氨基酸取代、缺失和/或插入并对其进行测试，该相关的筛选程序例如由reidhaar-olson和sauer,1988,science[科学]241:53-57；bowie和sauer,1989,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]86:2152-2156；wo95/17413；或wo 95/22625披露的那些。其他可以使用的方法包括易错pcr、噬菌体展示(例如lowman等人,1991,biochemistry[生物化学]30:10832-10837；美国专利号5,223,409；wo 92/06204)以及区域定向诱变(derbyshire等人,1986,gene[基因]46:145；ner等人,1988,dna 7:127)。
[1543]
诱变/改组方法可以与高通量、自动化的筛选方法组合以检测由宿主细胞表达的克隆的、诱变的多肽的活性(ness等人,1999,nature biotechnology[自然生物技术]17:893-896)。可从宿主细胞回收编码活性多肽的诱变的dna分子，并使用本领域的标准方法快速测序。这些方法允许快速确定多肽中各个氨基酸残基的重要性。
[1544]
通过组合合成基因构建、和/或定点诱变、和/或随机诱变、和/或改组的多方面来实现半合成基因构建。半合成构建典型地是利用合成的多核苷酸片段的过程结合pcr技术。因此，基因的限定区域可以从头合成，而其他区域可以使用位点特异性诱变引物来扩增，而还有其他区域可以进行易错pcr或非易错pcr扩增。然后可以对多核苷酸子序列进行改组。
[1545]
多核苷酸
[1546]
本发明还涉及编码本发明的变体的分离的多核苷酸。因此，在一个方面，本发明涉及编码包含至少两个修饰的变体的多核苷酸，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性。
[1547]
核酸构建体
[1548]
本发明还涉及包含编码本发明的变体的、可操作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸的核酸构建体，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中表达。因此，在一个方面，本发明涉及编码包含至少两个修饰的变体的多核苷酸，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列在与控制序列相容的条件下指导编码序列在适合的宿主细胞中表达。
[1549]
可以按多种方式来操作多核苷酸以提供变体的表达。取决于表达载体，在多核苷酸插入载体之前对其进行操作可能是希望的或必需的。用于利用重组dna方法修饰多核苷酸的技术是本领域熟知的。
[1550]
该控制序列可以是启动子，即，被宿主细胞识别以对编码本发明的变体的多核苷酸进行表达的多核苷酸。启动子含有介导变体的表达的转录控制序列。启动子可以是在宿主细胞中显示转录活性的任何多核苷酸，包括突变型、截短型和杂合型启动子，并且可以获得自编码与宿主细胞同源或异源的细胞外或细胞内多肽的基因。
[1551]
用于指导本发明的核酸构建体在细菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下基因中获得的启动子：解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyq)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因(amyl)、地衣芽孢杆菌青霉素酶基因(penp)、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amym)、枯草芽孢杆菌果聚糖蔗糖酶基因(sacb)、枯草芽孢杆菌xyla和xylb基因、苏云金芽孢杆菌cryiiia基因(agaisse和lereclus,1994,molecular microbiology[分子微生物学]13:97-107)、大肠杆菌(e.coli)lac操纵子、大肠杆菌trc启动子(egon等人,1988,gene[基因]69:301-315)、天蓝链霉菌(streptomyces coelicolor)琼脂水解酶基因(daga)和原核β-内酰胺酶基因(villa-kamaroff等人,1978,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:3727-3731)连同tac启动子(deboer等人,1983,proc.natl.acad.sci.usa[美国
国家科学院院刊]80:21-25)。其他启动子描述于gilbert等人,1980,scientific american[科学美国人]242:74-94的“useful proteins from recombinant bacteria[来自重组细菌的有用的蛋白质]”；和sambrook等人,1989,同上。串联启动子的实例披露于wo 99/43835中。
[1552]
用于指导本发明的核酸构建体在丝状真菌宿主细胞中的转录的适合启动子的实例是从以下的基因中获得的启动子：构巢曲霉(aspergillus nidulans)乙酰胺酶、黑曲霉(aspergillus niger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉或泡盛曲霉(aspergillus awamori)葡糖淀粉酶(glaa)、米曲霉taka淀粉酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉磷酸丙糖异构酶、尖孢镰孢(fusarium oxysporum)胰蛋白酶样蛋白酶(wo 96/00787)、镶片镰孢(fusarium venenatum)淀粉葡糖苷酶(wo 00/56900)、镶片镰孢daria(wo00/56900)、镶片镰孢quinn(wo 00/56900)、米黑根毛霉(rhizomucor miehei)脂肪酶、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶、里氏木霉(trichoderma reesei)β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶i、里氏木霉纤维二糖水解酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶i、里氏木霉内切葡聚糖酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶iii、里氏木霉内切葡聚糖酶v、里氏木霉木聚糖酶i、里氏木霉木聚糖酶ii、里氏木霉木聚糖酶iii、里氏木霉β-木糖苷酶和里氏木霉翻译延伸因子，连同na2-tpi启动子(来自曲霉属中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已用来自曲霉属磷酸丙糖异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列；非限制性实例包括来自黑曲霉中性α-淀粉酶基因的修饰的启动子，其中已用来自构巢曲霉或米曲霉磷酸丙糖异构酶基因的未翻译的前导序列替代未翻译的前导序列)；及其突变型、截短型及杂合型启动子。其他启动子在美国专利号6,011,147中描述。
[1553]
在酵母宿主中，有用的启动子从以下的基因中获得：酿酒酵母(saccharomyces cerevisiae)烯醇酶(eno-1)、酿酒酵母半乳糖激酶(gal1)、酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh1、adh2/gap)、酿酒酵母磷酸丙糖异构酶(tpi)、酿酒酵母金属硫蛋白(cup1)和酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶。酵母宿主细胞的其他有用的启动子由romanos等人,1992,yeast[酵母]8:423-488描述。
[1554]
控制序列也可为由宿主细胞识别以终止转录的转录终止子。该终止子可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的3'末端。在宿主细胞中有功能的任何终止子可用于本发明中。
[1555]
细菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：克劳氏芽孢杆菌(bacillus clausii)碱性蛋白酶(aprh)、地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(amyl)和大肠杆菌核糖体rna(rrnb)。
[1556]
丝状真菌宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：构巢曲霉乙酰胺酶、构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉taka淀粉酶、尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶、里氏木霉β-葡糖苷酶、里氏木霉纤维二糖水解酶i、里氏木霉纤维二糖水解酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶i、里氏木霉内切葡聚糖酶ii、里氏木霉内切葡聚糖酶iii、里氏木霉内切葡聚糖酶v、里氏木霉木聚糖酶i、里氏木霉木聚糖酶ii、里氏木霉木聚糖酶iii、里氏木霉β-木糖苷酶和里氏木霉翻译延伸因子。
[1557]
酵母宿主细胞的优选终止子从以下的基因中获得：酿酒酵母烯醇酶、酿酒酵母细胞色素c(cyc1)和酿酒酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶。酵母宿主细胞的其他有用的终止子由romanos等人(1992,同上)描述。
[1558]
控制序列还可以是启动子下游和基因的编码序列上游的mrna稳定子区域，其增加该基因的表达。
[1559]
适合的mrna稳定子区域的实例从以下中获得：苏云金芽孢杆菌cryiiia基因(wo 94/25612)和枯草芽孢杆菌sp82基因(hue等人,1995,journal of bacteriology[细菌学杂志]177:3465-3471)。
[1560]
控制序列也可以是前导序列，即对宿主细胞翻译很重要的mrna的非翻译区域。该前导序列可操作地连接至编码该变体的多核苷酸的5'末端。可以使用在宿主细胞中有功能的任何前导序列。
[1561]
丝状真菌宿主细胞的优选前导序列从以下的基因中获得：米曲霉taka淀粉酶和构巢曲霉磷酸丙糖异构酶。
[1562]
酵母宿主细胞的适合的前导序列从以下的基因中获得：酿酒酵母烯醇酶(eno-1)、酿酒酵母3-磷酸甘油酸激酶、酿酒酵母α-因子和酿酒酵母醇脱氢酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(adh2/gap)。
[1563]
控制序列还可以是多腺苷酸化序列，一种可操作地连接至该多核苷酸的3’末端并且当转录时由宿主细胞识别为将多腺苷酸残基添加至所转录的mrna的信号的序列。可以使用在宿主细胞中有功能的任何多腺苷酸化序列。
[1564]
丝状真菌宿主细胞的优选多腺苷酸化序列从以下的基因中获得：构巢曲霉邻氨基苯甲酸合酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、黑曲霉α-葡糖苷酶、米曲霉taka淀粉酶和尖孢镰孢胰蛋白酶样蛋白酶。
[1565]
酵母宿主细胞的有用的多腺苷酸化序列由guo和sherman,1995,mol.cellular biol.[分子细胞生物学]15:5983-5990描述。
[1566]
控制序列还可以是信号肽编码区域，该编码区域编码与变体的n-末端连接的信号肽，并且指导该变体进入细胞的分泌途径。多核苷酸的编码序列的5'-端可以固有地包含信号肽编码序列，该信号肽编码序列在翻译阅读框中与编码该变体的编码序列的区段天然地连接在一起。可替代地，编码序列的5'-末端可以包含对编码序列是外源的信号肽编码序列。在编码序列天然地不含有信号肽编码序列的情况下，可能需要外源信号肽编码序列。可替代地，外源信号肽编码序列可以简单地替代天然信号肽编码序列，以便增强变体的分泌。然而，可以使用指导表达的变体进入宿主细胞的分泌途径的任何信号肽编码序列。
[1567]
细菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因中获得的信号肽编码序列：芽孢杆菌ncib 11837产麦芽糖淀粉酶、地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶、地衣芽孢杆菌β-内酰胺酶、嗜热脂肪芽孢杆菌α-淀粉酶、嗜热脂肪芽孢杆菌中性蛋白酶(nprt、nprs、nprm)和枯草芽孢杆菌prsa。其他信号肽由simonen和palva,1993,microbiological reviews[微生物评论]57:109-137描述。
[1568]
丝状真菌宿主细胞的有效信号肽编码序列是从以下的基因中获得的信号肽编码序列：黑曲霉中性淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米曲霉taka淀粉酶、特异腐质霉纤维素酶、特异腐质霉内切葡聚糖酶v、疏棉状腐质霉脂肪酶和米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶。
[1569]
酵母宿主细胞的有用的信号肽从以下的基因中获得：酿酒酵母α-因子和酿酒酵母转化酶。其他的有用的信号肽编码序列由romanos等人(1992,同上)描述。
[1570]
控制序列还可以是编码位于变体的n-末端处的前肽的前肽编码序列。所得多肽被
称为前体酶(proenzyme)或多肽原(或在一些情况下被称为酶原(zymogen))。多肽原通常是无活性的并且可以通过从该多肽原上催化切割或自动催化切割前肽而被转化成活性变体。前肽编码序列可以从以下的基因中获得：枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶(apre)、枯草芽孢杆菌中性蛋白酶(nprt)、嗜热毁丝霉(myceliophthora thermophila)漆酶(wo 95/33836)、米黑根毛霉天冬氨酸蛋白酶和酿酒酵母α-因子。
[1571]
在信号肽和前肽序列两者都存在的情况下，将前肽序列紧邻变体的n-末端定位并且将信号肽序列紧邻前肽序列的n-末端定位。
[1572]
还令人希望的可以是添加相对于宿主细胞的生长来调节变体的表达的调节序列。调节序列的实例是引起基因表达以响应于化学或物理刺激(包括调节化合物的存在)而开启或关闭的那些。原核系统中的调节序列包括lac、tac和trp操纵子系统。在酵母中，可以使用adh2系统或gal1系统。在丝状真菌中，可以使用黑曲霉葡糖淀粉酶启动子、米曲霉taka α-淀粉酶启动子和米曲霉葡糖淀粉酶启动子、里氏木霉纤维二糖水解酶i启动子和里氏木霉纤维二糖水解酶ii启动子。调节序列的其他实例是允许基因扩增的那些序列。在真核系统中，这些调节序列包括在甲氨蝶呤存在下扩增的二氢叶酸还原酶基因以及用重金属扩增的金属硫蛋白基因。在这些情况下，编码该变体的多核苷酸将可操作地连接至该调节序列。
[1573]
表达载体
[1574]
本发明还涉及包含编码本发明的变体的多核苷酸、启动子、以及转录和翻译终止信号的重组表达载体。各种核苷酸和控制序列可以连接在一起以产生重组表达载体，该重组表达载体可以包括一个或多个合宜的限制位点以允许在此类位点处插入或取代编码变体的多核苷酸。可替代地，可以通过将多核苷酸或包含该多核苷酸的核酸构建体插入用于表达的适当载体中而表达该多核苷酸。在产生表达载体时，编码序列位于载体中，使得编码序列与用于表达的适当控制序列可操作地连接。
[1575]
重组表达载体可以是可以方便地经受重组dna程序并且可以引起多核苷酸表达的任何载体(例如，质粒或病毒)。载体的选择将典型地取决于载体与待引入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是直链或闭合环状质粒。
[1576]
载体可以是自主复制载体，即作为染色体外实体存在的载体，其复制独立于染色体复制，例如质粒、染色体外元件、微染色体或人工染色体。载体可以含有用于确保自我复制的任何手段。可替代地，载体可以是这样的载体，当它引入宿主细胞中时整合到基因组中并与其中已整合了它的一个或多个染色体一起复制。此外，可以使用单独的载体或质粒或两个或更多个载体或质粒，其共同含有待引入宿主细胞基因组的总dna，或可以使用转座子。
[1577]
载体优选地含有允许方便地选择转化细胞、转染细胞、转导细胞等细胞的一个或多个选择性标记。选择性标记是一种基因，其产物提供了杀生物剂抗性或病毒抗性、对重金属的抗性、对营养缺陷型的原养型等。
[1578]
细菌选择性标记的实例是地衣芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌dal基因、或赋予抗生素抗性(如氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、或四环素抗性)的标记。酵母宿主细胞的适合的标记包括但不限于ade2、his3、leu2、lys2、met3、trp1和ura3。用于在丝状真菌宿主细胞中使用的选择性标记包括但不限于adea(磷酸核糖酰氨基咪唑-琥珀羧胺合酶)、adeb(磷酸核糖酰-氨基咪唑合酶)、amds(乙酰胺酶)、argb(鸟氨酸氨甲酰基转移酶)、
bar(草丁膦乙酰转移酶)、hph(潮霉素磷酸转移酶)、niad(硝酸还原酶)、pyrg(乳清酸核苷-5'-磷酸脱羧酶)、sc(硫酸腺苷基转移酶)和trpc(邻氨基苯甲酸合酶)连同其等同物。优选的用于在曲霉属细胞中使用的是构巢曲霉或米曲霉amds和pyrg基因以及吸水链霉菌(streptomyces hygroscopicus)bar基因。优选的用于在木霉属细胞中使用的是adea、adeb、amds、hph和pyrg基因。
[1579]
选择性标记可以是如wo 2010/039889中所述的双选择性标记系统。在一个方面，双选择性标记是hph-tk双选择性标记系统。
[1580]
载体优选地含有允许载体整合到宿主细胞的基因组中或载体在细胞中独立于基因组自主复制的一个或多个元件。
[1581]
为了整合到宿主细胞基因组中，载体可以依赖于编码变体的多核苷酸序列或用于借助同源或非同源重组整合到基因组中的任何其他载体元件。可替代地，载体可以含有用于指导通过同源重组而整合到宿主细胞基因组中的一个或多个染色体中的一个或多个精确位置处的另外的多核苷酸。为了提高在精确位置处整合的可能性，整合元件应当含有足够数目的核酸，如100至10,000个碱基对、400至10,000个碱基对、和800至10,000个碱基对，这些核酸与对应的靶序列具有高度序列同一性以增强同源重组的概率。整合元件可以是与宿主细胞基因组内的靶序列同源的任何序列。此外，整合元件可以是非编码或编码的多核苷酸。另一方面，载体可以通过非同源重组整合到宿主细胞的基因组中。
[1582]
为了自主复制，载体可以进一步包含复制起点，该复制起点使得载体在讨论中的宿主细胞中自主复制成为可能。复制起点可以是在细胞中发挥作用的介导自主复制的任何质粒复制子。术语“复制起点”或“质粒复制子”意指使质粒或载体能够在体内复制的多核苷酸。
[1583]
细菌复制起点的实例是允许在大肠杆菌中复制的质粒pbr322、puc19、pacyc177和pacyc184的复制起点，以及允许在芽孢杆菌属中复制的质粒pub110、pe194、pta1060和pamβ1的复制起点。
[1584]
用于在酵母宿主细胞中使用的复制起点的实例是2微米复制起点、ars1、ars4、ars1与cen3的组合以及ars4与cen6的组合。
[1585]
在丝状真菌细胞中有用的复制起点的实例是ama1和ans1(gems等人,1991,gene[基因]98:61-67；cullen等人,1987,nucleic acids res.[核酸研究]15:9163-9175；wo 00/24883)。可根据wo 00/24883中披露的方法完成ama1基因的分离和包含该基因的质粒或载体的构建。
[1586]
可以将多于一个拷贝的本发明的多核苷酸插入宿主细胞中以增加变体的产生。通过将序列的至少一个另外的拷贝整合到宿主细胞基因组中或者通过包括与该多核苷酸一起的可扩增的选择性标记基因可以获得多核苷酸的提高的拷贝数目，其中通过在适当的选择性试剂的存在下培养细胞可以选择含有选择性标记基因的扩增的拷贝以及由此该多核苷酸的另外的拷贝的细胞。
[1587]
用于连接上述元件以构建本发明的重组表达载体的程序是本领域的技术人员熟知的(参见例如，sambrook等人,1989,同上)。
[1588]
宿主细胞
[1589]
本发明还涉及重组宿主细胞，这些重组宿主细胞包含编码本发明的变体的、可操
作地连接至一个或多个控制序列的多核苷酸，该一个或多个控制序列指导本发明的变体的产生。因此，在一个方面，本发明涉及包含如下多核苷酸的重组宿主细胞，该多核苷酸编码包含至少两个修饰的变体，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列指导包含至少两个修饰的变体的产生，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性。
[1590]
将包含多核苷酸的构建体或载体引入宿主细胞中，这样使得该构建体或载体作为染色体整合体或作为自主复制的染色体外载体维持，如较早前所述。术语“宿主细胞”涵盖由于复制期间出现的突变而与亲本细胞不同的亲本细胞的任何后代。宿主细胞的选择在很大程度上将取决于编码变体的基因及其来源。
[1591]
宿主细胞可以是在变体的重组产生中有用的任何细胞，例如原核细胞或真核细胞。
[1592]
原核宿主细胞可以是任何革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌。革兰氏阳性细菌包括但不限于芽孢杆菌属、梭菌属、肠球菌属、土芽孢杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、大洋芽孢杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和链霉菌属。革兰氏阴性细菌包括但不限于弯曲杆菌属、大肠杆菌、黄杆菌属、梭杆菌属、螺杆菌属、泥杆菌属、奈瑟氏菌属、假单胞菌属、沙门氏菌属和脲原体属。
[1593]
细菌宿主细胞可以是任何芽孢杆菌属细胞，包括但不限于嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和苏云金芽孢杆菌细胞。
[1594]
细菌宿主细胞还可以是任何链球菌属细胞，包括但不限于似马链球菌、酿脓链球菌、乳房链球菌和马链球菌兽疫亚种细胞。
[1595]
细菌宿主细胞还可以是任何链霉菌属细胞，包括但不限于不产色链霉菌、除虫链霉菌、天蓝链霉菌、灰色链霉菌和浅青紫链霉菌细胞。
[1596]
将dna引入芽孢杆菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见例
如，chang和cohen,1979,mol.gen.genet.[分子与普通遗传学]168:111-115)、感受态细胞转化(参见例如，young和spizizen,1961,j.bacteriol.[细菌学杂志]81:823-829；或dubnau和davidoff-abelson,1971,j.mol.biol.[分子生物学杂志]56:209-221)、电穿孔(参见例如，shigekawa和dower,1988,biotechniques[生物技术]6:742-751)、或缀合(参见例如，koehler和thorne,1987,j.bacteriol.[细菌学杂志]169:5271-5278)。将dna引入大肠杆菌细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化(参见例如，hanahan,1983,j.mol.biol.[分子生物学杂志]166:557-580)或电穿孔(参见例如，dower等人,1988,nucleic acids res.[核酸研究]16:6127-6145)。将dna引入链霉菌属细胞中可以通过以下方式来实现：原生质体转化、电穿孔(参见例如，gong等人,2004,folia microbiol.(praha)[叶线形微生物学(布拉格)]49:399-405)、缀合(参见例如，mazodier等人,1989,j.bacteriol.[细菌学杂志]171:3583-3585)、或转导(参见例如，burke等人,2001,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]98:6289-6294)。将dna引入假单胞菌属细胞中可以通过以下方式来实现：电穿孔(参见例如，choi等人,2006,j.microbiol.methods[微生物学方法杂志]64:391-397)或缀合(参见例如，pinedo和smets,2005,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]71:51-57)。将dna引入链球菌属细胞中可以通过以下方式来实现：天然感受态(natural competence)(参见例如，perry和kuramitsu,1981,infect.immun.[感染与免疫]32:1295-1297)、原生质体转化(参见例如，catt和jollick,1991,microbios[微生物学]68:189-207)、电穿孔(参见例如，buckley等人,1999,appl.environ.microbiol.[应用与环境微生物学]65:3800-3804)、或缀合(参见例如，clewell,1981,microbiol.rev.[微生物学评论]45:409-436)。然而，可以使用本领域已知的将dna引入宿主细胞中的任何方法。
[1597]
宿主细胞还可以是真核细胞，如哺乳动物、昆虫、植物或真菌细胞。
[1598]
宿主细胞可以是真菌细胞。如本文所用，“真菌”包括子囊菌门(ascomycota)、担子菌门(basidiomycota)、壶菌门(chytridiomycota)和接合菌门(zygomycota)连同卵菌门(oomycota)和所有有丝分裂孢子真菌(如由hawksworth等人在以下文献中所定义：ainsworth and bisby’s dictionary of the fungi[安斯沃思和拜斯比真菌字典],第8版,1995,cab international[国际应用生物科学中心],university press[大学出版社],剑桥，英国)。
[1599]
真菌宿主细胞可以是酵母细胞。如本文所用，“酵母”包括产子囊酵母(ascosporogenous yeast)(内孢霉目(endomycetales))、产担子酵母(basidiosporogenous yeast)和属于半知菌类(fungi imperfecti)(芽孢纲(blastomycetes))的酵母。由于酵母的分类可在将来变化，出于本发明的目的，酵母应当如biology and activities of yeast[酵母的生物学与活性](skinner,passmore和davenport编辑，soc.app.bacteriol.symposium series no.9[应用细菌学学会专题论文集系列9],1980)中所描述的那样定义。
[1600]
酵母宿主细胞可以是假丝酵母属(candida)、汉逊酵母属(hansenula)、克鲁维酵母属(kluyveromyces)、毕赤酵母属(pichia)、酵母属(saccharomyces)、裂殖酵母属(schizosaccharomyces)或耶氏酵母属(yarrowia)细胞，如乳酸克鲁维酵母(kluyveromyces lactis)、卡尔酵母(saccharomyces carlsbergensis)、酿酒酵母、糖化酵
母(saccharomyces diastaticus)、道格拉氏酵母(saccharomyces douglasii)、克鲁弗酵母(saccharomyces kluyveri)、诺地酵母(saccharomyces norbensis)、卵形酵母(saccharomyces oviformis)或解脂耶氏酵母(yarrowia lipolytica)细胞。
[1601]
真菌宿主细胞可以是丝状真菌细胞。“丝状真菌”包括真菌门(eumycota)和卵菌门(oomycota)的亚门的所有丝状形式(如由hawksworth等人,1995(同上)所定义的)。丝状真菌通常的特征在于由几丁质、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖和其他复杂多糖构成的菌丝体壁。营养生长是通过菌丝延伸来进行的，而碳分解代谢是专性需氧的。相反，酵母(如酿酒酵母)的营养生长是通过单细胞菌体的出芽(budding)来进行的，而碳分解代谢可以是发酵性的。
[1602]
丝状真菌宿主细胞可以是枝顶孢属(acremonium)、曲霉属、短梗霉属(aureobasidium)、烟管霉属(bjerkandera)、拟腊菌属(ceriporiopsis)、金孢子菌属(chrysosporium)、鬼伞属(coprinus)、革盖菌属(coriolus)、隐球菌属(cryptococcus)、线黑粉菌科(filibasidium)、镰孢属(fusarium)、腐质霉属(humicola)、梨孢菌属(magnaporthe)、毛霉属(mucor)、毁丝霉属(myceliophthora)、新美鞭菌属(neocallimastix)、脉胞菌属(neurospora)、拟青霉属(paecilomyces)、青霉属(penicillium)、平革菌属(phanerochaete)、射脉菌属(phlebia)、瘤胃壶菌属(piromyces)、侧耳属(pleurotus)、裂褶菌属(schizophyllum)、篮状菌属、嗜热子囊菌属(thermoascus)、梭孢壳属(thielavia)、弯颈霉属(tolypocladium)、栓菌属(trametes)、或木霉属细胞。
[1603]
例如，丝状真菌宿主细胞可以是泡盛曲霉、臭曲霉、烟曲霉、日本曲霉、构巢曲霉、黑曲霉、米曲霉、黑刺烟管菌(bjerkandera adusta)、干拟蜡菌(ceriporiopsis aneirina)、卡内基拟蜡菌(ceriporiopsis caregiea)、浅黄拟蜡孔菌(ceriporiopsis gilvescens)、潘诺希塔拟蜡菌(ceriporiopsis pannocinta)、环带拟蜡菌(ceriporiopsis rivulosa)、微红拟蜡菌(ceriporiopsis subrufa)、虫拟蜡菌(ceriporiopsis subvermispora)、狭边金孢子菌(chrysosporium inops)、嗜角质金孢子菌、卢克诺文思金孢子菌(chrysosporium lucknowense)、粪状金孢子菌(chrysosporium merdarium)、租金孢子菌(chrysosporium pannicola)、女王杜香金孢子菌(chrysosporium queenslandicum)、热带金孢子菌、褐薄金孢子菌(chrysosporium zonatum)、灰盖鬼伞(coprinus cinereus)、毛革盖菌(coriolus hirsutus)、杆孢状镰孢、谷类镰孢、库威镰孢、大刀镰孢、禾谷镰孢、禾赤镰孢、异孢镰孢、合欢木镰孢、尖孢镰孢、多枝镰孢、粉红镰孢、接骨木镰孢、肤色镰孢、拟分枝孢镰孢、硫色镰孢、圆镰孢、拟丝孢镰孢、镶片镰孢、特异腐质霉、疏棉状腐质霉、米黑毛霉、嗜热毁丝霉、粗糙脉孢菌、产紫青霉、黄孢原毛平革菌、射脉菌(phlebia radiata)、刺芹侧耳(pleurotus eryngii)、土生梭孢壳霉、长域毛栓菌(trametes villosa)、变色栓菌(trametes versicolor)、哈茨木霉、康宁木霉、长枝木霉、里氏木霉、或绿色木霉细胞。
[1604]
可以将真菌细胞通过涉及原生质体形成、原生质体转化、以及细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。用于转化曲霉属和木霉属宿主细胞的适合的程序描述于以下文献中：ep 238023，yelton等人,1984,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]81:1470-1474以及christensen等人,1988,bio/technology[生物/技术]6:1419-1422。用于转
化镰孢属物种的适合的方法由malardier等人,1989,gene[基因]78:147-156和wo 96/00787描述。可以使用由以下文献描述的程序转化酵母：becker和guarente,在abelson,j.n.和simon,m.i.编辑,guide to yeast genetics and molecular biology[酵母遗传学与分子生物学指南],methods in enzymology[酶学方法],第194卷,第182-187页,academic press,inc.[学术出版社有限公司],纽约；ito等人,1983,j.bacteriol.[细菌学杂志]153:163；以及hinnen等人,1978,proc.natl.acad.sci.usa[美国国家科学院院刊]75:1920。
[1605]
产生方法
[1606]
本发明还涉及产生变体的方法，这些方法包括(a)在有益于产生该变体的条件下培养本发明的重组宿主细胞；以及任选地(b)回收该变体。因此，在一个方面，本发明涉及产生变体的方法，这些方法包括(a)培养包含如下多核苷酸的宿主细胞，该多核苷酸编码包含至少两个修饰的变体，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性，该多核苷酸可操作地连接至一个或多个控制序列，该一个或多个控制序列在适合于表达该变体的条件下指导产生，以及(b)回收该变体。
[1607]
使用本领域已知的方法在适合于产生变体的营养培养基中培养重组宿主细胞。例如，可以通过摇瓶培养，或者在适合的培养基中并在允许该变体表达和/或分离的条件下在实验室或工业发酵罐中进行小规模或大规模发酵(包括连续发酵、分批发酵、分批给料发酵或固态发酵)来培养该细胞。使用本领域中已知的程序，培养发生在包含碳和氮来源及无机盐的适合的营养培养基中。适合的培养基可从商业供应商获得或可以根据公开的组成(例如，在美国典型培养物保藏中心的目录中)制备。如果变体被分泌到营养培养基中，则该变体可以直接从培养基中回收。如果变体没有分泌，则它可以从细胞裂解液中回收。
[1608]
可以使用本领域已知的对甘露聚糖酶变体特异的方法检测这些变体。这些检测方法包括但不限于特异性抗体的使用、酶产物的形成或酶底物的消失。例如，可以使用酶测定来确定变体的活性。
[1609]
可以使用本领域已知的方法回收变体。例如，可以通过多种常规程序从营养培养基中回收变体，这些常规程序包括但不限于收集、离心、过滤、提取、喷雾干燥、蒸发或沉淀。在一个方面，回收全发酵液。
[1610]
可以通过本领域中已知的多种程序来纯化变体以获得基本上纯的变体，这些程序包括但不限于色谱法(例如，离子交换色谱法、亲和色谱法、疏水作用色谱法、色谱聚焦、以及尺寸排阻色谱法)、电泳程序(例如，制备型等电点聚焦)、差别溶解度(例如，硫酸铵沉淀)、sds-page或提取(参见例如，protein purification[蛋白质纯化]，janson和ryden编辑,vch publishers[vch出版社],纽约,1989)。
[1611]
在替代性方面，没有回收变体，而是将表达变体的本发明的宿主细胞用作变体的来源。
[1612]
发酵液配制品或细胞组合物
[1613]
本发明还涉及包含本发明的变体的发酵液配制品或细胞组合物。发酵液产物进一步包括在发酵过程中使用的另外的成分，例如像，细胞(包括包含编码本发明的变体的基因的宿主细胞，这些宿主细胞被用于产生目的变体)、细胞碎片、生物质、发酵介质和/或发酵产物。在一些实施例中，组合物是含有一种或多种有机酸、杀灭的细胞和/或细胞碎片以及培养基的细胞杀灭的全培养液。
[1614]
如本文所用，术语“发酵液”是指由细胞发酵产生的、不经历或经历最少的回收和/或纯化的制剂。例如，当微生物培养物在允许蛋白质合成(例如，由宿主细胞表达酶)并且将蛋白质分泌到细胞培养基中的碳限制条件下孵育生长到饱和时，产生发酵液。发酵液可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的或分级的内容物。典型地，发酵液是未分级的并且包含用过的培养基以及例如通过离心去除微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，发酵液含有用过的细胞培养基、细胞外酶以及有活力的和/或无活力的微生物细胞。
[1615]
在实施例中，发酵液配制品和细胞组合物包含第一有机酸组分(包含至少一种1-5个碳的有机酸和/或其盐)和第二有机酸组分(包含至少一种6个或更多个碳的有机酸和/或其盐)。在特定的实施例中，第一有机酸组分是乙酸、甲酸、丙酸、其盐、或前述两种或更多种的混合物；并且第二有机酸组分是苯甲酸、环己烷羧酸、4-甲基戊酸、苯乙酸、其盐、或前述两种或更多种的混合物。
[1616]
在一个方面，组合物含有一种或多种有机酸，并且任选地进一步含有杀灭的细胞和/或细胞碎片。在一个实施例中，从细胞杀灭的全培养液中去除这些杀灭的细胞和/或细胞碎片，以提供不含这些组分的组合物。
[1617]
这些发酵液配制品或细胞组合物可以进一步包含防腐剂和/或抗微生物(例如，抑菌)剂，包括但不限于山梨醇、氯化钠、山梨酸钾、以及本领域已知的其他试剂。
[1618]
细胞杀灭的全培养液或组合物可以含有在发酵结束时得到的发酵材料的未分级的内容物。典型地，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的培养基以及在微生物细胞(例如，丝状真菌细胞)在允许蛋白质合成的碳限制条件下孵育生长到饱和之后存在的细胞碎片。在一些实施例中，细胞杀灭的全培养液或组合物含有用过的细胞培养基、细胞外酶和杀灭的丝状真菌细胞。在一些实施例中，可以使用本领域已知的方法来使细胞杀灭的全培养液或组合物中存在的微生物细胞透性化和/或裂解。
[1619]
如本文所述的全培养液或细胞组合物典型地是液体，但是可以含有不溶性组分，如杀灭的细胞、细胞碎片、培养基组分和/或一种或多种不溶性酶。在一些实施例中，可以去除不溶性组分以提供澄清的液体组合物。
[1620]
本发明的全培养液配制品和细胞组合物可以通过wo 90/15861或wo 2010/096673中所述的方法来产生。
[1621]
酶组合物
[1622]
本发明还涉及组合物，如包括本发明的甘露聚糖酶变体的洗涤剂组合物。优选地，这些组合物富含这种变体。术语“富含”指示该组合物的甘露聚糖酶活性已经增加，例如，以
至少1.1的富集因数(enrichment factor)增加。
[1623]
酶组合物(如洗涤剂组合物)可以进一步包含一种或多种选自由以下组成的组的组分：水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂、漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂、酶稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。这些组分的实例和优选的量在下文中讨论。
[1624]
这些组合物可以包含本发明的甘露聚糖酶变体作为主要酶组分，例如，单组分组合物。可替代地，这些组合物可以包括多种酶活性，如一种或多种选自由以下组成的组的另外的酶：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰基酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、昆布多糖酶和dna酶。
[1625]
包含甘露聚糖酶变体的颗粒
[1626]
在实施例中，本发明涉及颗粒，该颗粒包含核心粒子和一种或多种包衣，其中该颗粒包含本发明的甘露聚糖酶变体。
[1627]
这些实施例的颗粒可以进一步包含一种或多种配制剂，如以下配制品部分中所讨论的。优选的配制剂是甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉和纤维素或其任何组合。
[1628]
在实施例中，该颗粒可以进一步包含一种或多种选自由以下组成的组的另外的酶：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰基酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、地衣多糖酶、昆布多糖酶和dna酶。
[1629]
包含甘露聚糖酶变体的液体配制品
[1630]
在实施例中，本发明涉及包含多元醇和本发明的甘露聚糖酶变体的液体组合物。
[1631]
在一个实施例中，多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇、丙二醇(mpg)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(peg)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(ppg)，更优选地选自由以下组成的组：甘油、山梨醇和丙二醇(mpg)或其任何组合。
[1632]
在一个实施例中，该液体配制品包含5％-80％的多元醇(即多元醇的总量)，优选地15％-75％的多元醇，更优选地25％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇。在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品
包含5％-80％的多元醇，优选地15％-75％的多元醇，更优选地25％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇，其中该多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇、丙二醇(mpg)、乙二醇、二甘醇、三甘醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、二丙二醇、平均分子量低于约600的聚乙二醇(peg)和平均分子量低于约600的聚丙二醇(ppg)。在第七或第八方面的任一部分的一个实施例中，该液体配制品包含5％-80％的多元醇，优选地15％-75％的多元醇，更优选地25％-70％的多元醇，更优选地35％-65％的多元醇，或最优选地40％-60％的多元醇，其中该多元醇选自由以下组成的组：甘油、山梨醇和丙二醇(mpg)。
[1633]
在一个实施例中，该配制品进一步包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该防腐剂选自由以下组成的组：苯氧基乙醇、1,2-苯并噻唑啉-3(2h)-酮、山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠、苯甲酸钾、甲基异噻唑啉酮、氯甲基异噻唑啉酮、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、季铵盐(如bac/adbac；烷基苄基氯化季铵、二辛基二甲基氯化铵、二癸基二甲基氯化铵、西曲氯铵)、精油和有机酸或其任何组合。在一个实施例中，该液体配制品包含0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选地0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选地0.1％至0.5％w/w的防腐剂。在一个实施例中，该液体配制品包含0.001％至2.0％w/w的防腐剂(即防腐剂的总量)，优选地0.02％至1.5％w/w的防腐剂，更优选地0.05％至1.0％w/w的防腐剂，或最优选地0.1％至0.5％w/w的防腐剂，其中该防腐剂选自由以下组成的组：苯氧基乙醇、1,2-苯并噻唑啉-3(2h)-酮、山梨酸钠、山梨酸钾、苯甲酸钠和苯甲酸钾或其任何组合。
[1634]
在一个实施例中，该甘露聚糖酶变体的剂量为0.0001％至10％w/w的液体配制品，如0.001％至0.1％w/w的多肽、0.01％至1.0％w/w的多肽或0.1％至10％w/w的多肽。
[1635]
在一个实施例中，该液体配制品包含一种或多种配制剂(如本文所述的那些)，优选地选自由甘油、乙二醇、1,2-丙二醇或1,3-丙二醇、氯化钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁、硫代硫酸钠、碳酸钙、柠檬酸钠、糊精、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、乳糖、淀粉、pva、乙酸盐和磷酸盐组成的列表，优选地选自由1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、硫酸钠、糊精、纤维素、硫代硫酸钠、高岭土和碳酸钙组成的列表的配制剂。
[1636]
在一个实施例中，该液体配制品可以进一步包含一种或多种选自由以下组成的组的另外的酶：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰基酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、地衣多糖酶、昆布多糖酶和dna酶。
[1637]
清洁组合物和/或洗涤剂组合物
[1638]
本发明还涉及包含甘露聚糖酶变体的组合物，如清洁组合物和/或洗涤剂组合物，该甘露聚糖酶变体具有至少两个修饰，其中(a)所述第一修饰是在选自以下位置的位置中的取代或缺失：168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、
283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中根据seq id no:1进行编号，其中该变体具有甘露聚糖酶活性并且与seq id no:1的成熟多肽或seq id no:2的多肽具有至少60％，例如至少62％、至少63％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％但小于100％序列同一性。
[1639]
在一个实施例中，本发明涉及清洁组合物和/或洗涤剂组合物，这些清洁组合物和/或洗涤剂组合物包含本发明的甘露聚糖酶变体和适合的表面活性剂。在一个实施例中，该洗涤剂组合物可以适于特定的用途，如衣物洗涤(特别是家用衣物洗涤)、餐具洗涤或硬表面清洁。
[1640]
因此，在一个实施例中，甘露聚糖酶变体、洗涤剂组合物、颗粒或液体配制品可以用于衣物洗涤、洗涤或清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)。在实施例中，该甘露聚糖酶变体具有酶洗涤益处(即，与不存在酶的相同组合物相比，本发明的甘露聚糖酶变体改善了清洁结果)。
[1641]
本发明的洗涤剂组合物可以配制为(例如)手洗或机洗衣物洗涤剂组合物，包括适合于预处理有污渍的织物的衣物洗涤添加剂组合物，和漂洗添加的织物软化剂组合物，或配制为用于在一般家用硬表面清洁操作中使用的洗涤剂组合物，或配制用于手洗或机洗餐具洗涤操作。本发明的洗涤剂组合物可以应用于硬表面清洁，自动餐具洗涤应用，连同化妆品应用，如义齿、牙齿、头发及皮肤中。
[1642]
本发明的洗涤剂组合物可以呈任何方便的形式，例如棒状、片剂、粉末、颗粒、糊剂或液体。液体洗涤剂可以是水性的，典型地包含至多70％的水和0％-30％的有机溶剂，或可以是非水性的。
[1643]
除非另外指出，否则本文提供的所有组分或组合物水平均参照该组分或组合物的活性水平给出，并且不包括可能存在于可商购来源中的杂质，例如残余溶剂或副产品。
[1644]
本发明的甘露聚糖酶通常以按组合物的重量计0.001％至10％的酶蛋白水平掺入洗涤剂组合物(舱(pod)/盖子，液体洗涤剂或粉末洗涤剂)中，如按组合物的重量计0.001％至0.1％、0.01％至1.0％、或0.1％至10％的酶蛋白。
[1645]
本发明的甘露聚糖酶通常以如下量掺入洗涤组合物中，该量使得它们在洗涤水中的浓度水平为0.0001至1ppm酶蛋白，如在洗涤水中的0.0001至0.01ppm、如0.001至0.1ppm、或如0.01至1ppm的酶蛋白。
[1646]
在一些优选的实施例中，本文提供的洗涤剂组合物典型地被这样配制，使得在用于水性清洁操作期间，洗涤水具有如下ph：约5.0至约11.5，或在替代性实施例中，甚至约6.0至约10.5，如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至约7、约6至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9、或约7至约8。在一些优选的实施例中，颗粒或液体衣物洗涤产品被这样配制，使得洗涤水具有约5.5至约8的ph。用于将ph控制在推荐的使用水平的技术包括使用缓冲液、碱、酸等，并且是本领域的技术人员熟知的。
[1647]
酶组分重量基于总蛋白。除非另外指明，否则所有百分比和比率都是按重量计算。除非另外指明，否则所有百分比和比率都是基于总组合物计算。在例示洗涤剂组合物中，通过按总组合物的重量计的纯酶表示酶水平并且除非另外说明，否则按总组合物的重量计表
示洗涤剂成分。
[1648]
本发明的酶还用于洗涤剂添加剂产品中。当例如温度较低，如温度为约40℃或更低，ph在6与8之间并且洗涤时间较短，例如低于30min时，包含本发明的甘露聚糖酶的洗涤剂添加剂产品理想地适于包括在洗涤过程中。
[1649]
该洗涤剂添加剂产品可以是本发明的甘露聚糖酶，并且优选地是一种另外的酶。在一个实施例中，该添加剂被包装于剂型中用于添加至清洁过程中。单一剂量可以包含丸剂、片剂、囊形片(gelcap)或包括粉末和/或液体的其他单一剂量单位。在一些实施例中，包括填料和/或一种或多种载剂材料，适合的填料或载剂材料包括但不限于硫酸盐、碳酸盐和硅酸盐的各种盐连同滑石、粘土等。在一些实施例中，用于液体组合物的填料和/或载剂材料包括水和/或低分子量伯醇和仲醇(包括多元醇和二元醇)。此类醇的实例包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇。
[1650]
在一个特别优选的实施例中，根据本发明的甘露聚糖酶被用于颗粒组合物或液体中，该甘露聚糖酶可以呈胶囊化粒子的形式。在一个实施例中，该胶囊化材料选自由以下组成的组：碳水化合物、天然或合成胶、几丁质和壳聚糖、纤维素和纤维素衍生物、硅酸盐、磷酸盐、硼酸盐、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蜡及其组合。
[1651]
根据本发明的组合物典型地包含一种或多种洗涤剂成分。术语洗涤剂组合物包括制品以及清洁和处理组合物。除非另外指明，否则术语清洁组合物包括片剂、颗粒或粉末形式的全效(all-purpose)或“重垢(heavy-duty)”洗涤剂，尤其是衣物洗涤剂；液体、凝胶或糊剂形式的全效洗涤剂，尤其是所谓的重垢液体类型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻垢餐具洗涤剂，尤其是高起泡类型的那些；机洗餐具洗涤剂，包括用于供家庭和机构使用的不同的片剂、颗粒、液体和漂洗助剂类型。组合物还可以处于单位剂量包装中，包括本领域已知的那些以及水溶性、水不溶性和/或水渗透性的那些。
[1652]
在清洁和/或洗涤剂组分可能与本发明的甘露聚糖酶不相容的实施例中，可以使用适合的方法来分隔清洁和/或洗涤剂组分与该甘露聚糖酶(即，彼此不互相接触)，直到这两种组分的组合适当时。此类分隔方法包括任何本领域中已知的适合的方法(例如，囊形片、包囊、片剂，以及物理分隔，例如通过使用具有一个或多个隔室的水溶性小袋)。
[1653]
在一些实施例中，本文使用的酶由存在于为这些酶提供此类离子的成品组合物中的锌(ii)、钙(ii)和/或镁(ii)离子的水溶性来源，连同其他金属离子(例如，钡(ii)、钪(ii)、铁(ii)、锰(ii)、铝(iii)、锡(ii)、钴(ii)、铜(ii)、镍(ii)和氧钒(iv))来稳定。本发明的洗涤剂组合物的酶还可以使用常规稳定剂，如多元醇(例如，丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸来稳定，并且可以如描述于例如wo 92/19709和wo 92/19708中配制该组合物。还可以通过添加可逆的酶抑制剂，例如，蛋白质类型(如描述于ep 544 777中)或硼酸类型的可逆的酶抑制剂，来稳定本发明的酶。其他酶稳定剂是本领域熟知的，如肽醛和蛋白质水解物，例如可以使用肽醛或酮来稳定根据本发明的甘露聚糖酶，如描述于wo 2005/105826和wo 2009/118375中。
[1654]
如上所提及，可以根据披露于ep 238 216中的方法制备用于包括在本发明的洗涤剂组合物中的受保护的酶。
[1655]
可以用一种或多种试剂来扩充该组合物，用于防止生物膜的形成或去除形成的生物膜。这些试剂可以包括但不限于分散剂、表面活性剂、洗涤剂、其他酶、抗微生物剂和杀生
物剂。
[1656]
本发明的组合物可以被应用于待用于自动定量装置中的定量元件中。包括本发明的组合物的定量元件可以放置进如wo 2007/052004和wo 2007/0833141中所述的递送筒中。定量元件可以具有加长型形状，并且排成形成递送筒的阵列，该递送筒是如在案例wo 2007/051989中所述的自动定量分配装置的替换物。递送筒被放置在自动定量递送装置中，如wo 2008/053191中所述的装置。
[1657]
关于自动定量装置的适合的披露内容可见于wo 2007/083139、wo 2007/051989、wo 2007/083141、wo 2007/083142和ep 2361964中。
[1658]
呈颗粒的甘露聚糖酶的配制品
[1659]
无粉尘颗粒可以例如如在us 4,106,991和us 4,661,452中所披露而产生，并且可以任选地通过本领域已知的方法进行包衣。蜡状包衣材料的实例是平均摩尔重量为1000至20000的聚(环氧乙烷)产品(聚乙二醇，peg)；具有16至50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中该醇含有12至20个碳原子，并且其中存在15至80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯及甘油三酯。适合用于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例在gb 1483591中给出。液体酶制剂可以例如通过根据已确立的方法添加多元醇(如丙二醇)、糖或糖醇、乳酸或硼酸而稳定。受保护的酶可以根据ep 238,216中披露的方法来制备。
[1660]
该甘露聚糖酶可以被配制为颗粒，例如，配制为组合一种或多种酶的共颗粒。然后，每种酶将存在于多种颗粒中，这些颗粒确保酶在洗涤剂中的分布更均匀。这还减少了由于不同的粒度而导致的不同酶的物理隔离。用于生产针对洗涤剂工业的多酶共颗粒的方法披露于www.ip.com公开内容ipcom000200739d中。
[1661]
通过使用共颗粒的酶的配制品的另一个实例披露于wo 2013/188331中，其涉及包含以下的洗涤剂组合物：(a)多酶共颗粒；(b)小于10％w/w的沸石(无水的基础上)；和(c)小于10％w/w的磷酸盐(无水的基础上)，其中所述酶共颗粒包含10％至98％w/w的水分汇组分(sink component)，并且该组合物另外还包含20％至80％w/w的洗涤剂水分汇组分。
[1662]
本发明的实施例涉及包含本发明的甘露聚糖酶的酶颗粒/粒子。该颗粒由核心以及任选地包围该核心的一种或多种包衣(外层)构成。
[1663]
典型地，该颗粒/粒子的粒度(granule/particle size)(测量为当量球径(基于体积的平均粒度))是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
[1664]
该核心可以包含另外的材料如填料、纤维材料(纤维素或合成纤维)、稳定剂、增溶剂、悬浮剂、粘度调节剂、轻球体、增塑剂、盐、润滑剂和芳香剂。
[1665]
该核心可以包括黏合剂，如合成聚合物、蜡、脂肪、或碳水化合物。
[1666]
该核心典型地作为均匀的共混物可以包含多价阳离子的盐、还原剂、抗氧化剂、过氧化物分解催化剂和/或酸性缓冲液组分。
[1667]
该核心可以由惰性粒子组成，其中酶被吸附到该惰性粒子之内，或者被施用(例如通过流化床包衣)到该惰性粒子的表面上。
[1668]
该核心的直径可以是20-2000μm，特别是50-1500μm、100-1500μm或250-1200μm。
[1669]
该核心可以通过粒化成分的共混物来制备，例如通过包括造粒技术的方法，如结晶、沉淀、锅包衣(pan-coating)、流化床包衣、流化床凝集、旋转雾化、挤出、颗粒化
(prilling)、滚圆(spheronization)、粒度减小法、转鼓造粒(drum granulation)和/或高剪切造粒。
[1670]
用于制备核心的方法可在c.e.capes,handbook of powder technology；particle size enlargement[粉末技术手册；粒度增大]；第1卷；1980；elsevier[爱思唯尔公司]中发现。制备方法包括已知的饲料和颗粒配制技术，例如：
[1671]
a)喷雾干燥产品，其中在喷雾干燥塔中雾化液体含酶溶液以形成小液滴，在它们在沿干燥塔下降的过程中干燥形成含酶微粒状材料。非常小的粒子可以通过这种方式产生(michael s.showell(编辑)；powdered detergents[粉状洗涤剂]；surfactant science series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；marcel dekker[马塞尔德克尔出版社])。
[1672]
b)层状产品，其中酶在预形成的惰性核心粒子周围包衣成层，其中含酶溶液典型地在流化床装置中被雾化，在该流化床装置中预形成的核心粒子被流体化并且含酶溶液附着到核心粒子上并干燥，直到使得干的酶层留在核心粒子的表面上。如果可以发现具有希望尺寸的有用核心粒子，则通过这种方式能够获得具有希望尺寸的粒子。这种类型的产品描述于，例如，wo 97/23606中。
[1673]
c)吸收的核心粒子，其中不是将该酶在核心周围包衣成层，而是在核心的表面上和/或表面中吸收该酶。这样的方法描述于wo 97/39116中。
[1674]
d)挤出或丸粒化的产品，其中将含酶糊剂压成丸粒或在压力下通过小的开口挤出并切割为粒子，随后干燥这些粒子。此类粒子通常具有相当大的尺寸，因为开有挤出开口的材料(通常是具有钻孔的平板)限制了通过挤出开口可允许的压力降。此外，当使用小的开口时，非常高的挤出压力增加了酶糊剂中的热生成量，其对酶有害(还参见michael s.showell(编辑)；powdered detergents[粉状洗涤剂]；surfactant science series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；marcel dekker[马塞尔
·
德克尔出版社])。
[1675]
e)颗粒化的产品，其中将含酶粉末悬浮于熔融的蜡中并且，例如通过转盘喷雾器将悬浮液喷射到冷却室中，在此液滴快速地固化(michael s.showell(编辑)；powdered detergents[粉状洗涤剂],surfactant science series[表面活性剂科学系列]；1998；第71卷；第140-142页；marcel dekker[马塞尔
·
德克尔出版社])。所获得的产品是酶均匀分布遍及整个惰性材料而不是集中在其表面上的产品。此外，us 4,016,040和us 4,713,245是与此技术有关的文献。
[1676]
f)混合造粒产品，其中将液体添加至例如常用造粒组分的干燥粉末组合物中，经由液体或粉末或二者引入该酶。将液体和粉末混合，并且因为液体的水分为干燥粉末所吸收，干燥粉末的组分开始附着并凝集，并且粒子将累积，形成包含酶的颗粒。这样的方法描述于us 4,106,991和有关的文献ep170360、ep 304332、ep 304331、wo 90/09440和wo 90/09428中。在其中可以用各种高剪切混合器作为造粒机的此方法的特定产品中，将由作为酶的酶、填料和黏合剂等组成的颗粒与纤维素纤维混合以强化粒子，而得到所谓的t-颗粒(t-granulate)。经强化的粒子更加坚固，酶粉尘释放更少。
[1677]
g)粒度减小，其中通过碾磨或压碎含酶的较大的粒子、丸粒、平片体、坯块(briquette)等产生核心。通过将碾磨或压碎的产物过筛获得所需要的核心粒子级分。可以
回收尺寸过大和尺寸过小的粒子。粒度减小描述于martin rhodes(编辑)；principles of powder technology[粉末技术原理]；1990；第10章；john wiley&sons[约翰威利父子公司]中。
[1678]
h)流化床造粒。流化床造粒涉及将微粒悬浮于空气流中并经喷嘴喷射液体到流体化粒子上。被喷洒的液滴击中的粒子湿润并发粘。发粘的粒子与其他粒子碰撞并附着到其上并形成颗粒。
[1679]
i)这些核心可进行干燥，如在流化床干燥器中。本领域技术人员可以使用其他已知的在饲料或洗涤剂工业中用于干燥颗粒的方法。干燥优选地在从25℃至90℃的产物温度下进行。对于一些酶来说，重要的是包含酶的核心在包衣之前含有少量的水。如果在过量水除去之前水敏性酶被包衣，则水分会截留在核心中并可能消极地影响酶的活性。干燥之后，这些核心优选含有0.1％-10％w/w的水。
[1680]
该酶颗粒/粒子的核心可以被至少一个包衣包围，例如，以改善储存稳定性、以减少在处理过程中的粉尘形成或用于着色该颗粒。一个或多个任选的包衣可以包括盐包衣、或其他适合的包衣材料，如聚乙二醇(peg)、甲基羟基-丙基纤维素(mhpc)以及聚乙烯醇(pva)。具有多种包衣的酶颗粒的实例示于wo 93/07263和wo 97/23606中。
[1681]
可以将该包衣按核心的重量计以至少0.1％(例如，至少0.5％、1％或5％)的量施加。该量至多可以是100％、70％、50％、40％或30％。
[1682]
包衣优选地是至少0.1μm厚，特别是至少0.5μm、至少1μm或至少5μm厚。在特别的实施例中，包衣的厚度低于100μm。在更特别的实施例中，包衣的厚度低于60μm。在甚至更特别的实施例中，包衣的总厚度低于40μm。
[1683]
包衣应当通过形成基本上连续的层来密封该核心单元。基本上连续的层应当理解为具有极少或没有孔洞的包衣，使得密封/封闭的核心单元具有极少或没有未包衣的区域。层或包衣特别应在厚度上是均匀的。
[1684]
包衣可以进一步含有其他本领域已知的材料，例如填料、防粘剂、颜料、染料、增塑剂和/或黏合剂，如二氧化钛、高岭土、碳酸钙或滑石。
[1685]
盐包衣可以包含按重量w/w计至少60％的盐，例如，按重量w/w计，至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％。
[1686]
该盐可以从盐溶液(其中该盐是完全溶解的)中添加，或者从盐悬浮液(其中该细粒子是小于50μm，如小于10μm或小于5μm)中添加。
[1687]
盐包衣可以包含单一盐或者两种或更多种盐的混合物。该盐可以是水溶性的，特别地具有在20℃下在100g水中至少0.1克的溶解度，优选地至少0.5g/100g水，例如，至少1g/100g水，例如，至少5g/100g水。
[1688]
盐可以是无机盐，例如硫酸盐、亚硫酸盐、磷酸盐、膦酸盐、硝酸盐、氯盐或碳酸盐或者简单有机酸(小于10个碳原子，例如6个或更少的碳原子)的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。在这些盐中的阳离子的实例是碱或碱土金属离子、铵离子或第一过渡系的金属离子，如钠、钾、镁、钙、锌或铝。阴离子的实例包括氯、溴、碘、硫酸根、亚硫酸根、亚硫酸氢根、硫代硫酸根、磷酸根、磷酸二氢根、二碱式磷酸根、次磷酸根、焦磷酸二氢根、四硼酸根、硼酸根、碳酸根、碳酸氢根、硅酸根、柠檬酸根、苹果酸根、马来酸根、丙二酸根、琥珀酸根、乳酸根、甲酸根、乙酸根、丁酸根、丙酸根、苯甲酸根、酒石酸根、抗坏血酸根或葡萄糖酸根。特别
地，可以使用硫酸根、亚硫酸根、磷酸根、膦酸根、硝酸根、氯或碳酸根的碱或碱土金属盐或者简单有机酸的盐如柠檬酸盐、丙二酸盐或乙酸盐。
[1689]
在包衣中的盐可以在20℃下具有超过60％的恒定湿度，特别地超过70％、超过80％或超过85％，或者它可以是此盐的另一种水合物形式(例如，无水物)。盐包衣可以如在wo 00/01793或wo 2006/034710中所描述。
[1690]
适合的盐的特定实例是nacl(ch
20℃
＝76％)、na2co3(ch
20℃
＝92％)、nano3(ch
20℃
＝73％)、na2hpo4(ch
20℃
＝95％)、na3po4(ch
25℃
＝92％)、nh4cl(ch
20℃
＝79.5％)、(nh4)2hpo4(ch
20℃
＝93,0％)、nh4h2po4(ch
20℃
＝93.1％)、(nh4)2so4(ch
20℃
＝81.1％)、kcl(ch
20℃
＝85％)、k2hpo4(ch
20℃
＝92％)、kh2po4(ch
20℃
＝96.5％)、kno3(ch
20℃
＝93.5％)、na2so4(ch
20℃
＝93％)、k2so4(ch
20℃
＝98％)、khso4(ch
20℃
＝86％)、mgso4(ch
20℃
＝90％)、znso4(ch
20℃
＝90％)和柠檬酸钠(ch
25℃
＝86％)。其他实例包括nah2po4、(nh4)h2po4、cuso4、mg(no3)2和乙酸镁。
[1691]
盐可以处于无水形式，或者它可以是水合盐，即具有结晶化的一个或多个结合水的结晶盐水合物，例如描述于wo 99/32595中。特定实例包括无水硫酸钠(na2so4)、无水硫酸镁(mgso4)、七水硫酸镁(mgso4.7h2o)、七水硫酸锌(znso4.7h2o)、七水磷酸氢二钠(na2hpo4.7h2o)、六水硝酸镁(mg(no3)2(6h2o))、二水柠檬酸钠和四水乙酸镁。优选地，作为盐溶液使用该盐，例如使用流化床。
[1692]
因此，在另一个方面，本发明提供了颗粒，其包含：
[1693]
(a)包含根据本发明的甘露聚糖酶的核心，和
[1694]
(b)任选地由包围该核心的一个或多个层组成的包衣。
[1695]
其他酶
[1696]
在一个实施例中，将本发明的甘露聚糖酶与一种或多种酶，如至少两种酶，更优选地至少三种、四种或五种酶组合。优选地，该酶具有不同的底物特异性，例如蛋白水解活性、淀粉分解活性、脂肪分解活性、半纤维素分解活性或果胶分解活性。
[1697]
洗涤剂添加剂连同洗涤剂组合物可以包含一种或多种酶，如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶(例如，漆酶)和/或过氧化物酶、地衣多糖酶、昆布多糖酶、dna酶。
[1698]
通常，一种或多种所选酶的特性应与所选的洗涤剂相容(即，最适ph、与其他酶和非酶成分的相容性等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
[1699]
纤维素酶：适合的纤维素酶包括动物、植物或微生物来源的那些。特别适合的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程化的变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、枝顶孢属的纤维素酶，例如披露于us 4,435,307、us 5,648,263、us 5,691,178、us 5,776,757以及wo 89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢产生的真菌纤维素酶。
[1700]
尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于ep 0 495 257、ep 0 531 372、wo 96/11262、wo 96/29397、wo 98/08940中的纤维素酶。其他实例是例如描述于wo 94/07998、ep 0 531 315、us 5,457,046、us 5,686,593、us 5,763,254、wo 95/24471、wo 98/12307和wo 1999/001544中的那些纤维素酶变体。
[1701]
可商购的纤维素酶包括celluzyme
tm
、和carezyme
tm
(诺维信公司(novozymes a/
s))、clazinase
tm
、和puradax ha
tm
(杰能科国际公司(genencor international inc.))、以及kac-500(b)
tm
(花王株式会社(kao corporation))。
[1702]
蛋白酶：适合的蛋白酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如微生物或植物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的变体或蛋白质工程化的变体。它可以是碱性蛋白酶，如丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶。丝氨酸蛋白酶可以例如是s1家族的(如胰蛋白酶)或s8家族的(如枯草杆菌蛋白酶)。金属蛋白酶可以例如是来自例如m4家族的嗜热菌蛋白酶或其他金属蛋白酶，如来自m5、m7或m8家族的那些。
[1703]
术语“枯草杆菌酶”是指根据siezen等人,protein engng.[蛋白质工程]4(1991)719-737和siezen等人,protein science[蛋白质科学]6(1997)501-523的丝氨酸蛋白酶亚组。丝氨酸蛋白酶是特征为在活性位点具有与底物形成共价加合物的丝氨酸的蛋白酶的亚组。枯草杆菌酶可以被划分为6个亚类，即，枯草杆菌蛋白酶家族、嗜热蛋白酶家族、蛋白酶k家族、羊毛硫氨酸抗生素肽酶家族、kexin家族和pyrolysin家族。
[1704]
枯草杆菌酶的实例是源自芽孢杆菌属的那些，如描述于us 7262042和wo 09/021867中的迟缓芽孢杆菌、嗜碱芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和吉氏芽孢杆菌；和描述于wo 89/06279中的枯草杆菌蛋白酶lentus、枯草杆菌蛋白酶novo、枯草杆菌蛋白酶carlsberg、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶bpn’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168以及描述于(wo 93/18140)中的蛋白酶pd138。其他有用的蛋白酶可以是描述于wo 92/175177、wo 01/016285、wo 02/026024和wo 02/016547中的那些。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如猪或牛来源的)和镰孢属蛋白酶(描述于wo 89/06270、wo 94/25583和wo 05/040372中)、以及源自纤维单胞菌属(cellumonas)的糜蛋白酶(描述于wo 05/052161和wo 05/052146中)。
[1705]
另外优选的蛋白酶是来自迟缓芽孢杆菌dsm 5483的碱性蛋白酶(如在例如wo 95/23221中所述)、及其变体(描述于wo 92/21760、wo 95/23221、ep 1921147和ep 1921148中)。
[1706]
金属蛋白酶的实例是如wo 07/044993(杰能科国际公司)中所述的中性金属蛋白酶，如源自解淀粉芽孢杆菌的那些。
[1707]
有用的蛋白酶的实例是描述于以下中的变体：wo 92/19729、wo 96/034946、wo 98/20115、wo 98/20116、wo 99/011768、wo 01/44452、wo 03/006602、wo 04/03186、wo 04/041979、wo 07/006305、wo 11/036263、wo 11/036264，尤其是在以下位置中的一个或多个处具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用bpn’进行编号。更优选的蛋白酶变体可以包括以下突变：s3t、v4i、s9r、a15t、k27r、*36d、v68a、n76d、n87s,r、*97e、a98s、s99g,d,a、s99ad、s101g,m,r、s103a、v104i,y,n、s106a、g118v,r、h120d,n、n123s、s128l、p129q、s130a、g160d、y167a、r170s、a194p、g195e、v199m、v205i、l217d、n218d、m222s、a232v、k235l、q236h、q245r、n252k、t274a(使用bpn’进行编号)。
[1708]
适合的可商购的蛋白酶包括以下列商品名出售的那些：duralase
tm
、durazym
tm
、ultra、ultra、
ultra、ultra、and(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：(诺维信公司)，以下列商品名出售的那些：purafectpreferenz
tm
、purafectpurafectpurafecteffectenz
tm
、、and(丹尼斯克/杜邦公司(danisco/dupont))、axapem
tm
(吉斯特布罗卡德斯公司(gist-brocases n.v.))、blap(序列示于us 5352604的图29中)及其变体(汉高股份(henkel ag))以及来自花王株式会社的kap(嗜碱芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶)。
[1709]
脂肪酶：适合的脂肪酶包括动物、植物或微生物来源的那些。特别适合的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程化的变体。有用的脂肪酶的实例包括来自腐质霉属(与嗜热丝孢菌属同义)，例如来自如ep 258 068和ep 305 216中描述的疏棉状腐质霉(疏棉状嗜热丝孢菌)或来自如wo 96/13580中描述的特异腐质霉的脂肪酶；假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌或假产碱假单胞菌(ep 218 272)、洋葱假单胞菌(ep 331 376)、施氏假单胞菌(gb 1,372,034)、萤光假单胞菌、假单胞菌属物种菌株sd 705(wo 95/06720和wo 96/27002)、威斯康星假单胞菌(wo 96/12012)；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(dartois等人,1993,biochemica et biophysica acta[生物化学与生物物理学报],1131:253-360)、嗜热脂肪芽孢杆菌(jp 64/744992)或短小芽孢杆菌(wo 91/16422)。
[1710]
其他实例是脂肪酶变体，例如在wo 92/05249、wo 94/01541、ep 407 225、ep 260 105、wo 95/35381、wo 96/00292、wo 95/30744、wo 94/25578、wo 95/14783、wo 95/22615、wo 97/04079和wo 97/07202中描述的那些。
[1711]
优选的可商购的脂肪酶包括lipolase
tm
、lipolase ultra
tm
和lipex
tm
(诺维信公司)。
[1712]
淀粉酶：可以与本发明的甘露聚糖酶一起使用的适合的淀粉酶可以是α-淀粉酶或葡糖淀粉酶并且可以是细菌或真菌来源的。包括化学修饰的变体或蛋白质工程化的变体。淀粉酶包括例如获得自芽孢杆菌属、例如地衣芽孢杆菌的特定菌株(更详细地描述于gb 1,296,839中)的α-淀粉酶。适合的淀粉酶包括具有wo 95/10603中的seq id no:3的淀粉酶或其与seq id no:3具有90％序列同一性的变体。优选的变体描述于wo 94/02597、wo 94/18314、wo 97/43424中以及wo 99/019467的seq id no:4中，例如在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408和444。不同的适合的淀粉酶包括具有wo 02/010355中的seq id no:6的淀粉酶或其与seq id no:6具有90％序列同一性的变体。seq id no:6的优选的变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。其他适合的淀粉酶是包含示于wo 2006/066594的seq id no:6中的源自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于wo 2006/066594的seq id no:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列同一性的变体。该杂合α-淀粉酶的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失、或插入的那些：g48、t49、g107、h156、a181、n190、m197、i201、a209和q264。包含示于wo 2006/066594的seq id no:6中的源
自解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和seq id no:4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选的变体是具有以下取代的那些：
[1713]
m197t；
[1714]
h156y a181t n190f a209v q264s；或
[1715]
g48a t49i g107a h156y a181t n190f i201f a209v q264s。
[1716]
另外的适合的淀粉酶是具有wo 99/019467中的seq id no:6的淀粉酶或其与seq id no:6具有90％序列同一性的变体。seq id no:6的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失、或插入的那些：r181、g182、h183、g184、n195、i206、e212、e216和k269。特别优选的淀粉酶是在位置r181和g182或位置h183和g184中具有缺失的那些。可以使用的另外的淀粉酶是具有wo 96/023873的seq id no:1、seq id no:3、seq id no:2或seq id no:7的那些淀粉酶，或其与seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3或seq id no:7具有90％序列同一性的变体。seq id no:1、seq id no:2、seq id no:3、或seq id no:7的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失、或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304和476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184中具有缺失的那些。seq id no:1、seq id no:2、或seq id no:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304和476的一个或多个中具有取代的那些。可以使用的其他淀粉酶是具有wo 08/153815的seq id no:2、wo 01/66712中的seq id no:10的淀粉酶，或其与wo 08/153815的seq id no:2具有90％序列同一性的变体，或其与wo 01/66712中的seq id no:10具有90％序列同一性的变体。wo 01/66712中的seq id no:10的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代、缺失、或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211和264。另外的适合的淀粉酶是具有wo 09/061380的seq id no:2的淀粉酶或其与seq id no:2具有90％序列同一性的变体。seq id no:2的优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有c-末端截短、和/或取代、缺失、或插入的那些：q87、q98、s125、n128、t131、t165、k178、r180、s181、t182、g183、m201、f202、n225、s243、n272、n282、y305、r309、d319、q320、q359、k444和g475。seq id no:2的更优选的变体是在以下位置的一个或多个中具有取代的那些：q87e,r、q98r、s125a、n128c、t131i、t165i、k178l、t182g、m201l、f202y、n225e,r、n272e,r、s243q,a,e,d、y305r、r309a、q320r、q359e、k444e和g475k，和/或在位置r180和/或s181或t182和/或g183中具有缺失的那些。seq id no:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
[1717]
n128c k178l t182g y305r g475k；
[1718]
n128c k178l t182g f202y y305r d319t g475k；
[1719]
s125a n128c k178l t182g y305r g475k；或
[1720]
s125a n128c t131i t165i k178l t182g y305r g475k，其中这些变体是c-末端截短的，并且任选地进一步包含在位置243处的取代和/或在位置180和/或位置181处的缺失。其他适合的淀粉酶是具有wo 01/66712中的seq id no:12的α-淀粉酶或与seq id no:12具有至少90％序列同一性的变体。优选的淀粉酶变体是在wo 01/66712中的seq id no:12的以下位置的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：r28、r118、n174；r181、g182、d183、g184、g186、w189、n195、m202、y298、n299、k302、s303、n306、r310、n314；r320、h324、e345、y396、r400、w439、r444、n445、k446、q449、r458、n471、n484。特别优选的淀粉酶包括具
有d183和g184的缺失并且具有取代r118k、n195f、r320k和r458k的变体，以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体：m9、g149、g182、g186、m202、t257、y295、n299、m323、e345和a339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。其他实例是淀粉酶变体，如在wo 2011/098531、wo 2013/001078和wo 2013/001087中描述的那些。可商购的淀粉酶是duramyl
tm
、termamyl
tm
、fungamyl
tm
、stainzyme tm
、stainzyme plus
tm
、natalase
tm
、liquozyme x和ban
tm
(来自诺维信公司)，以及rapidase
tm
、purastar
tm
/effectenz
tm
、powerase以及preferenz s100(来自杰能科国际公司/杜邦公司)。
[1721]
过氧化物酶/氧化酶：适合的过氧化物酶/氧化酶包括植物、细菌、或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程化的变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自鬼伞属(coprinus)，例如来自灰盖鬼伞(c.cinereus)的过氧化物酶，及其变体，如在wo 93/24618、wo 95/10602和wo 98/15257中描述的那些。
[1722]
可商购的过氧化物酶包括guardzyme
tm
(诺维信公司)。
[1723]
地衣聚糖酶/β-葡聚糖酶：适合的地衣聚糖酶(地衣多糖酶)包括细菌或真菌来源的那些。它们可以经化学修饰或蛋白质工程化。有用的β-葡聚糖酶的实例包括wo 2015/144824(诺维信公司)和wo 99/06516(德国汉高公司(henkel kgaa))中描述的那些。
[1724]
核酸酶：适合的核酸酶包括脱氧核糖核酸酶(dna酶)和核糖核酸酶(rna酶)，它们是分别催化dna或rna主链中磷酸二酯键的水解切割从而降解dna和rna的任何酶。基于活性的位点有两种主要的分类。外切核酸酶从末端消化核酸。内切核酸酶作用于靶分子中间的区域。核酸酶优选为dna酶，其优选可获自微生物，优选真菌或细菌。特别地，可获自芽孢杆菌属的物种的dna酶是优选的；特别地，可获自食物芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的dna酶是优选的。此类dna酶的实例在wo 2011/098579、wo 2014/087011和wo 2017/060475中描述。还特别优选的是可获自曲霉属物种的dna酶；特别是可获自米曲霉的dna酶，如wo 2015/155350中描述的dna酶。
[1725]
可以通过添加含有一种或多种酶的单独添加剂、或通过添加含有所有这些酶的组合添加剂而将一种或多种洗涤剂酶包含于洗涤剂组合物中。本发明的洗涤剂添加剂，即单独的或组合的添加剂，可以配制成例如颗粒、液体、浆液等。优选的洗涤剂添加剂配制品为颗粒，特别是如上所述的无粉尘颗粒；液体，特别是稳定的液体；或者浆液。
[1726]
表面活性剂
[1727]
典型地，该洗涤剂组合物包含(按该组合物的重量计)一种或多种在以下范围内的表面活性剂：0％至50％，优选地2％至40％，更优选地5％至35％，更优选地7％至30％，最优选地10％至25％，甚至最优选地15％至20％。在优选的实施例中，该洗涤剂是液体或粉末洗涤剂，其包含按重量计小于40％，优选地小于30％，更优选地小于25％，甚至更优选地小于20％的表面活性剂。该组合物可以包含1％至15％，优选地2％至12％、3％至10％，最优选地4％至8％，甚至最优选地4％至6％的一种或多种表面活性剂。优选的表面活性剂是阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、兼性离子表面活性剂、两性表面活性剂及其混合物。优选地，该表面活性剂的主要部分是阴离子的。适合的阴离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括脂肪酸羧酸酯(肥皂)，支链、直链和随机链烷基硫酸酯或脂肪醇硫酸酯或伯醇硫酸酯或烷基苯磺酸酯(如las和lab)或苯基链烷磺酸酯(phenylalknesulfonate)或烯基磺酸酯或烯基苯磺酸酯或烷基乙氧基硫酸酯或脂肪醇醚
硫酸酯或α-烯烃磺酸酯或十二烯基/十四烯基(tetradecnyl)琥珀酸。阴离子表面活性剂可以被烷氧基化。该洗涤剂组合物还可以包含1wt％至10wt％的非离子表面活性剂，优选地2wt％至8wt％，更优选地3wt％至7wt％，甚至更优选地小于5wt％的非离子表面活性剂。适合的非离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括醇乙氧基化物、和/或烷基乙氧基化物、和/或烷基酚乙氧基化物、和/或葡糖酰胺(如脂肪酸n-葡糖基n-甲基酰胺)、和/或烷基多聚葡糖苷和/或单-或二乙醇酰胺或脂肪酸酰胺。该洗涤剂组合物还可以包含0wt％至10wt％的阳离子表面活性剂，优选地0.1wt％至8wt％，更优选地0.5wt％至7wt％，甚至更优选地小于5wt％的阳离子表面活性剂。适合的阳离子表面活性剂在本领域是熟知的并且可以包括烷基季铵化合物、和/或烷基吡啶鎓化合物和/或烷基季鏻化合物和/或烷基三元硫鎓化合物。该组合物优选包括在洗涤过程中于洗涤液中提供100ppm至5,000ppm表面活性剂的量的表面活性剂。该组合物当与水接触后典型地形成洗涤液，该洗涤液包含0.5g/l至10g/l洗涤剂组合物。许多适合的表面活性化合物是可获得的并且于文献中充分描述，例如由schwartz、perry和berch描述于“surface-active agents and detergents[表面活性剂与洗涤剂]”,第i卷和第11卷中。
[1728]
助洗剂
[1729]
助洗剂的主要作用在于从洗涤溶液中螯合二价金属离子(如钙离子和镁离子)，该洗涤溶液否则将与表面活性剂系统消极地相互作用。助洗剂还可有效从织物表面去除金属离子和无机污物，从而改进地去除微粒和饮料污渍。助洗剂也是一种碱度来源并且将洗涤水的ph缓冲至9.5至11的水平。缓冲能力也叫做储备碱度，并且应该优选大于4。
[1730]
本发明的洗涤剂组合物可以包含一种或多种洗涤剂助洗剂或助洗剂系统。许多适合的助洗剂系统描述于文献中，例如描述于powdered detergents[粉状洗涤剂],surfactant science series[表面活性剂科学系列],第71卷,marcel dekker,inc[马塞尔
·
德克尔公司]中。按主题组合物的重量计，助洗剂可以包含0％至60％，优选地5％至45％，更优选地10％至40％，最优选地15％至35％，甚至更优选地20％至30％的助洗剂。按主题组合物的重量计，组合物可以包含0％至15％，优选地1％至12％、2％至10％，最优选地3％至8％，甚至最优选地4％至6％的助洗剂。
[1731]
助洗剂包括但不限于聚磷酸盐的碱金属盐、铵盐和链烷醇铵盐(例如，三聚磷酸盐stpp)，碱金属硅酸盐，碱土金属盐和碱金属碳酸盐，铝硅酸盐助洗剂(例如，沸石)以及聚羧酸化合物，醚羟基聚羧酸酯，马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚的共聚物，1,3,5-三羟基苯-2,4,6-三磺酸，和羧基甲氧基琥珀酸，聚乙酸的各种碱金属盐、铵盐和取代的铵盐(如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸)，连同聚羧酸酯，如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧代二琥珀酸(oxydisuccinic acid)、聚马来酸、苯1,3,5-三羧酸、羧基甲氧基琥珀酸及其可溶性盐。乙醇胺(mea、dea和tea)也可以有助于液体洗涤剂中的缓冲能力。
[1732]
漂白剂
[1733]
本发明的洗涤剂组合物可以包括一种或多种漂白剂。特别地，粉状洗涤剂可以包含一种或多种漂白剂。适合的漂白剂包括其他光漂白剂、预形成的过酸、过氧化氢源、漂白活化剂、过氧化氢、漂白催化剂及其混合物。通常，当使用一种漂白剂时，本发明的组合物可以包括按主题清洁组合物的重量计约0.1％至约50％、或甚至约0.1％至约25％的漂白剂。适合的漂白剂的实例包括：
[1734]
(1)其他光漂白剂，例如维生素k3；
[1735]
(2)预形成的过酸：适合的预形成的过酸包括但不限于选自由以下组成的组的化合物：过氧化羧酸及盐、过碳酸及盐、过亚氨酸(perimidic acid)及盐、过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(oxone))及其混合物。适合的过氧化羧酸包括具有式r-(c＝o)o-o-m的疏水性和亲水性过酸，其中r是烷基(任选是支链的)，当该过酸是疏水性的，具有6至14个碳原子或8至12个碳原子，并且当该过酸是亲水性的，具有少于6个碳原子或甚至少于4个碳原子；并且m是平衡离子，例如钠、钾或氢；
[1736]
(3)过氧化氢源，例如无机过氧化氢合物盐，包括碱金属盐，如过硼酸盐(通常是一水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐及其混合物。在本发明的一个方面中，无机过氧化氢合物盐选自由以下组成的组：过硼酸盐、过碳酸盐的钠盐及其混合物。当使用时，无机过氧化氢合物盐典型地以整体组合物的0.05wt％至40wt％或1wt％至30wt％的量存在，并且典型地被掺入此类组合物中作为可以被包衣的结晶固体。适合的包衣包括无机盐，如碱金属硅酸盐、碳酸盐或硼酸盐或其混合物，或有机材料，如水溶性或水分散性聚合物、蜡、油或脂肪皂。有用的漂白组合物描述于美国专利号5,576,282和6,306,812中；
[1737]
(4)具有r-(c＝o)-l的漂白活化剂，其中r是烷基(任选是支链的)，当该漂白活化剂是疏水性的，具有6至14个碳原子或8至12个碳原子，并且当该漂白活化剂是亲水性的，具有少于6个碳原子或甚至少于4个碳原子；并且l是离去基团。适合的离去基团的实例是苯甲酸及其衍生物-尤其是苯磺酸盐。适合的漂白活化剂包括十二烷酰基羟苯磺酸盐(dodecanoyl oxybenzene sulphonate)、癸酰基羟苯磺酸盐、癸酰基羟苯甲酸或其盐、3,5,5-三甲基己酰基羟苯磺酸盐、四乙酰基乙二胺(taed)和壬酰基羟苯磺酸盐(nobs)。适合的漂白活化剂还披露于wo 98/17767中。尽管可采用任何适合的漂白活化剂，但在本发明的一个方面中，主题清洁组合物可以包括nobs、taed或其混合物；以及
[1738]
(5)能够接受来自过氧酸的氧原子并且将该氧原子转移至可氧化底物的漂白催化剂描述于wo 2008/007319中。适合的漂白催化剂包括但不限于：亚胺阳离子和聚离子；亚胺兼性离子；修饰的胺；修饰的氧化胺；n-磺酰基亚胺；n-磷酰基亚胺；n-酰基亚胺；噻二唑二氧化物；全氟亚胺；环状糖酮及其混合物。该漂白催化剂将典型地以按重量计0.0005％至0.2％、0.001％至0.1％、或甚至0.005％至0.05％的水平被包含在该洗涤剂组合物中。
[1739]
当存在时，基于该组合物，该过酸和/或漂白活化剂通常以约0.1wt％至约60wt％、约0.5wt％至约40wt％、或甚至约0.6wt％至约10wt％的量存在于该组合物中。可以将一种或多种疏水性过酸或其前体与一种或多种亲水性过酸或其前体组合使用。
[1740]
可以对过氧化氢源和过酸或漂白活化剂的量进行选择，以使得可用氧(来自过氧化物源)与过酸的摩尔比是1:1至35:1，或甚至2:1至10:1。
[1741]
辅料
[1742]
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。特别地，粉状洗涤剂可以包含分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚的或共聚的酸或其盐，其中聚羧酸包含被不多于两个碳原子彼此分开的至少两个羧基。
[1743]
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺n-氧化物聚
合物、n-乙烯吡咯烷酮与n-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当在主题组合物中存在时，染料转移抑制剂能够以按该组合物的重量计约0.0001％至约10％、约0.01％至约5％、或甚至约0.1％至约3％的水平存在。
[1744]
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地包含另外的组分，这些另外的组分可以给正在清洁的物品着色，如荧光增白剂或光学增亮剂。在本发明的组合物中可以使用适用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和双苯基-联苯乙烯基衍生物。
[1745]
优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(ciba-geigy ag)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(tinopal)dms和天来宝cbs。天来宝dms是4,4'-双-(2-吗啉代-4苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪二磺酸盐的二钠盐。天来宝cbs是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)二磺酸盐的二钠盐。
[1746]
还优选的是荧光增白剂是可商购的parawhite kx，由印度孟买的派拉蒙矿物与化学品公司(paramount minerals and chemicals)供应。适用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-氨烷基香豆素。
[1747]
适合的荧光增亮剂水平包括约0.01wt％、0.05wt％、约0.1wt％或甚至约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
[1748]
织物调色剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如当配制在洗涤剂组合物中时，可以在织物与包括所述洗涤剂组合物的洗涤液接触时沉积在所述织物上从而通过可见光吸收来改变所述织物色彩的染料或颜料。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，当织物调色剂吸收至少部分可见光谱时，它们改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土缀合物，并且还可以包括颜料。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(colour index)(c.i.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红、或其混合物，例如描述于wo 2005/03274、wo 2005/03275、wo 2005/03276以及ep 1 876 226中。洗涤剂组合物优选地包含约0.00003wt％至约0.2wt％、约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包含0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是尤其优选的。
[1749]
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些污垢释放聚合物帮助从织物，如棉和基于聚酯的织物上去除污垢，特别是从基于聚酯的织物上去除疏水性污垢。污垢释放聚合物可以例如是基于非离子或阴离子对苯二甲酸盐的聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如powdered detergents[粉状洗涤剂],surfactant science series[表面活性剂科学系列]第71卷,第7章,marcel dekker,inc.[马塞尔
·
德克尔公司]。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和附接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油脂清洁聚合物。该核心结构可以包含如wo 2009/087523中详细描述的聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构。此外，任意接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于wo 2007/138054、wo 2006/108856以及wo 2006/113314中。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，如修饰的纤维素衍生物，如ep 1 867 808或wo 2003/
040279中描述的那些。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺、及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子修饰的纤维素、非离子修饰的纤维素、阳离子修饰的纤维素、兼性离子修饰的纤维素、及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素、及其混合物。
[1750]
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，如羧甲基纤维素(cmc)、聚乙烯醇(pva)、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚氧乙烯和/或聚乙二醇(peg)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下所描述的基于纤维素的聚合物还可以作为抗再沉积剂起作用。
[1751]
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、黏合剂、载剂、染料、酶稳定剂、织物软化剂、填料、泡沫调节剂、水溶助剂、香料、颜料、抑泡剂、溶剂、用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹力剂。
[1752]
在一个方面，该洗涤剂是压缩流体衣物洗涤剂组合物，其包含：a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选地20％至80％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，约1％至约30％，优选地5％至30％的水；c)按该组合物的重量计，约1％至约15％，优选地3％至10％的非氨基官能溶剂；以及d)按该组合物的重量计，约5％至约20％的性能添加剂，该性能添加剂选自螯合剂、污垢释放聚合物、酶及其混合物；其中该压缩流体衣物洗涤剂组合物包含以下中的至少一种：
[1753]
(i)该表面活性剂具有的阴离子表面活性剂与非离子表面活性剂的重量比为约1.5:1至约5:1，该表面活性剂包含按该组合物的重量计约15％至约40％的阴离子表面活性剂并且包含按该组合物的重量计约5％至约40％的皂；(ii)包含按该组合物的重量计约0.1％至约10％的泡沫促进剂，该泡沫促进剂选自泡沫促进聚合物、阳离子表面活性剂、兼性离子表面活性剂、胺氧化物表面活性剂、两性表面活性剂、及其混合物；以及(ii)(i)和(ii)两者。所有成分都描述于wo 2007/130562中。可用于洗涤剂配制品中的另外的聚合物描述于wo 2007/149806中。
[1754]
在另一方面，该洗涤剂是压缩颗粒状(粉状)洗涤剂，其包含：a)按该组合物的重量计，至少约10％，优选地15％至60％的表面活性剂，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、皂及其混合物；b)按该组合物的重量计，约10％至80％，优选地20％至60％的助洗剂，其中该助洗剂可以是选自以下的助洗剂的混合物：i)磷酸盐助洗剂，优选地少于20％，更优选地少于10％，甚至更优选地少于5％的总助洗剂是磷酸盐助洗剂；ii)沸石助洗剂，优选地少于20％，更优选地少于10％，甚至更优选地少于5％的总助洗剂是沸石助洗剂；iii)柠檬酸盐，优选地0至5％的总助洗剂是柠檬酸盐助洗剂；iv)聚羧酸盐，优选地0至5％的总助洗剂是聚羧酸盐助洗剂；v)碳酸盐，优选地0至30％的总助洗剂是碳酸盐助洗剂以及vi)硅酸钠，优选地0至20％的总助洗剂是硅酸钠助洗剂；c)按该组合物的重量计，约0％至25％的填料，如硫酸盐，按该组合物的重量计，优选地1％至15％，更优选地2％至10％，更优选地3％至5％的填料；以及d)按该组合物的重量计，约0.1％至20％的酶，按该组合物的重量计，优选地1％至15％，更优选地2％至10％的酶。
[1755]
对于洗涤剂配制者而言重要的污垢和污渍由许多不同物质构成，并且已经开发具
有不同底物特异性的一系列不同的酶以用于在涉及衣物和硬表面清洁(如餐具洗涤)两者的洗涤剂中使用。认为这些酶提供酶洗涤益处，因为与不具有酶的同一过程相比，它们在其应用至其中的清洁过程中特异性地改善污渍去除。本领域中已知的去污酶包括以下酶，如糖酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、角质酶以及果胶酶。
[1756]
在本发明的优选的方面中，本发明的甘露聚糖酶可以与至少两种酶组合。这些另外的酶详细描述于“其他酶”部分中，更优选是至少三种、四种或五种酶。优选地，这些酶具有不同的底物特异性，例如碳水化合物分解活性(carbolytic activity)、蛋白水解活性、淀粉分解活性、脂肪分解活性、半纤维素分解活性或果胶分解活性。酶组合可以例如是本发明的甘露聚糖酶与另一种去污酶，例如本发明的甘露聚糖酶与蛋白酶、本发明的甘露聚糖酶与丝氨酸蛋白酶、本发明的甘露聚糖酶与淀粉酶、本发明的甘露聚糖酶与纤维素酶、本发明的甘露聚糖酶与脂肪酶、本发明的甘露聚糖酶与角质酶、本发明的甘露聚糖酶与果胶酶、或本发明的甘露聚糖酶与抗再沉积酶。更特别地优选的是本发明的甘露聚糖酶与具有碳水化合物分解活性的另一种酶，例如纤维素酶如内切葡聚糖酶，尤其是β-葡聚糖酶。
[1757]
更优选地，本发明的甘露聚糖酶与至少两种其他去污酶组合，例如本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶及淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及脂肪酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及纤维素酶如内切葡聚糖酶或β-葡聚糖酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶和纤维素酶如内切葡聚糖酶或β-葡聚糖酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶及纤维素酶如内切葡聚糖酶或β-葡聚糖酶；或本发明的甘露聚糖酶、脂肪酶及半纤维素酶。甚至更优选地，本发明的甘露聚糖酶可以与至少三种其他去污酶组合，例如本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及淀粉酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、淀粉酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、淀粉酶、脂肪酶及半纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及果胶酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及角质酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及纤维素酶；或本发明的甘露聚糖酶、蛋白酶、脂肪酶及半纤维素酶。根据本发明的甘露聚糖酶可以与选自包含以下的非穷尽性列表的任何酶组合：糖酶，如淀粉酶、半纤维素酶、果胶酶、纤维素酶、黄原胶酶或支链淀粉酶、肽酶、蛋白酶或脂肪酶。
[1758]
在优选的实施例中，本发明的甘露聚糖酶与丝氨酸蛋白酶例如s8家族蛋白酶，如组合。
[1759]
在本发明的另一个实施例中，本发明的甘露聚糖酶可以与一种或多种金属蛋白酶(如m4金属蛋白酶，包括或嗜热菌蛋白酶)组合。此类组合可以进一步包含如上概述的其他洗涤剂酶的组合。
[1760]
该清洁过程或纺织品护理过程可以例如是衣物洗涤过程、餐具洗涤过程、或硬表
面(如浴室瓷砖、地板、桌面、排水管、水槽、以及脸盆)清洁。衣物洗涤过程可以例如是家用衣物洗涤，但是它也可以是工业衣物洗涤。此外，本发明涉及用于洗涤织物和/或服装的方法，其中该方法包括用含有洗涤剂组合物和至少一种本发明的甘露聚糖酶的洗涤溶液处理织物。例如，可以在机器洗涤过程中或者在手动洗涤过程中进行清洁过程或纺织品护理过程。洗涤溶液可以是例如含有洗涤剂组合物的水性洗涤溶液。
[1761]
经过本发明的洗涤、清洁或者纺织品护理过程的织物和/或服装可以是常规的可洗涤衣物，例如家用衣物。优选地，衣物的主要部分是服装和织物，包括针织品、机织物、牛仔布、非机织物、毡、纱线、以及毛巾布。这些织物可以是基于纤维素的，如天然纤维素，包括棉、亚麻、亚麻布、黄麻、苎麻、剑麻或椰壳纤维；或者人造纤维素(例如，来源于木浆)，包括粘胶纤维/人造丝、苎麻、醋酸纤维素纤维(三胞)、莱赛尔纤维或其共混物。这些织物还可以是基于非纤维素的，如天然聚酰胺，包括羊毛、骆驼毛、羊绒、马海毛、兔毛和蚕丝；或者合成聚合物，如尼龙、芳香族聚酰胺、聚酯、丙烯酸酯、聚丙烯和氨纶/弹性纤维；或其共混物连同基于纤维素和基于非纤维素的纤维的共混物。共混物的实例是棉和/或人造丝/粘胶纤维与一种或多种伴随材料的共混物，该伴随材料如羊毛、合成纤维(例如聚酰胺纤维、丙烯酸纤维、聚酯纤维、聚乙烯醇纤维、聚氯乙烯纤维、聚亚胺酯纤维、聚脲纤维、芳香族聚酰胺纤维)以及含纤维素的纤维(例如人造丝/粘胶纤维、苎麻、亚麻、亚麻布、黄麻、醋酸纤维素纤维、莱赛尔纤维)。
[1762]
最近几年，人们对替换洗涤剂中的组分的兴趣逐渐增加，这源于用可再生生物组分如酶和多肽替换石油化学品而不损害洗涤性能。当洗涤剂组合物的组分改变新酶活性或新酶与常用洗涤剂酶(如蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶)相比具有替代性和/或改善的特性时，需要新酶来实现与传统洗涤剂组合物相比时类似或改善的洗涤性能。
[1763]
典型的洗涤剂组合物包括除酶之外的各种组分，这些组分具有不同的作用，一些组分像表面活性剂降低洗涤剂的表面张力，这允许正在清洁的污渍被提起和分散并随后被洗涤出来，其他组分像漂白系统通常通过氧化去除颜色并且许多漂白剂还具有强杀菌特性，并且用于消毒和灭菌。又其他组分像助洗剂和螯合剂例如通过从液体中去除金属离子来软化洗涤水。
[1764]
在特别的实施例中，本发明涉及包含本发明的甘露聚糖酶的组合物在衣物洗涤或餐具洗涤中的用途，其中所述酶组合物进一步包含以下中的至少一种或多种：表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分。
[1765]
在本发明的优选的实施例中，表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量与在未添加本发明的甘露聚糖酶的情况下使用的表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的量相比有所减少。优选地，作为表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统和/或漂白组分的至少一种组分以这样的量存在，该量比该组分在未添加本发明甘露聚糖酶的系统中的量(如这种组分的常规量)少1％、例如少2％、例如少3％、例如少4％、例如少5％、例如少6％、例如少7％、例如少8％、例如少9％、例如少10％、例如少15％、例如少20％、例如少25％、例如少30％、例如少35％、例如少40％、例如少45％、例如少50％。在一个方面，将本发明的甘露聚糖酶用于洗涤剂组合物中，其中所述组合物不含至少一种组分，该组分是表面活性剂、助洗剂、螯合剂或螯合试剂、漂白系统或漂白组分和/或聚合物。
[1766]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和淀粉酶的洗涤剂组合物，并且其中该淀粉酶选自由以下组成的组：
[1767]
a)与seq id no 2或seq id no 35具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:5相比在序列区域r180、s181、t182、g183中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:5中的位置；
[1768]
b)与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:5相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1769]
a.r180*、s181*、s243q、g475k；
[1770]
b.r180*、t182*、s243q、g475k；
[1771]
c.r180*、t182*、g183s、s243q、g475k；以及
[1772]
d.r180*、s181*、y242f、s243q、f266y、g475k，其中每个位置对应于seq id no:6中的位置；
[1773]
c)与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:3具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:7相比在序列区域r178、g179、t180、g181中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:7中的位置；
[1774]
d)与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:7相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1775]
i.r178*、g179*、e187p、i203y、g476k；
[1776]
ii.r178*、g179*、e187p、m199l、i203y、g476k；
[1777]
iii.r178*、g179*、e187p、i203y r458n、t459s、d460t、g476k；
[1778]
iv.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、i203y、s241q；
[1779]
v.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、i203y、s241q、s362a、r377y；
[1780]
vi.t38n、n126y、t129i、f153w、r178*、g179*、t180d、e187p、i203y、g476k、g477e；以及
[1781]
vii.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、e187p、i203y、s241q、g476k、g477e，其中每个位置对应于seq id no:7中的位置；
[1782]
e)与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:8具有
至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:8中的位置；
[1783]
f)与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在选自3、4、5、74、118、167、170、177、195、202、204、271、320、330、377、385、445、458、475、476、314、315或316的一个或多个，优选地全部位置处包含改变，其中每个位置对应于seq id no:8中的位置；
[1784]
g)与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:9相比优选地在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:5中的位置；
[1785]
h)与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:9相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1786]
a.d183*、g184*、n195f、y243f；
[1787]
b.d183*、g184*、n195f、v206y、y243f；
[1788]
c.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、g304r、g476k；
[1789]
d.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、g477e；
[1790]
e.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、w284d；
[1791]
f.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、g477e；
[1792]
g.g109a、w140y、n195f、v206y、y243f、e260g；
[1793]
h.t51i、s52q、n54k、g109a、w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、g476e；
[1794]
i.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、w284r、g477k；
[1795]
j.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、w284f、g477r；以及
[1796]
k.h1*、g7a、g109a、w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、n280s、g304r、e391a、g476k，其中每个位置对应于seq id no:9中的位置；
[1797]
i)与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:10相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:10中的位置；
[1798]
j)与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:10具有
至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:10相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1799]
i.r118k、d183*、g184*、n195f、r320k、r458k；
[1800]
ii.m9l、d183*、g184*、r118k、n195f、m202l、r320k、m323t、r458k；
[1801]
iii.m9l、g149a、r118k、g182t、d183*、g184*、g186a、n195f、m202l、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、r458k；
[1802]
iv.m9l、g149a、r118k、g182t、d183*、g184*、g186a、n195f、t246v、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、r458k；以及
[1803]
v.m9l、g149a、g182t、d183*、g184*、g186a、m202l、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、n471e，其中每个位置对应于seq id no:10中的位置；
[1804]
k)与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:11相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:11中的位置；
[1805]
l)与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:11相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1806]
a.d183*、g184*、n195f、v206y、r320k、r458k；
[1807]
b.d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、r320k、r458k；
[1808]
c.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[1809]
d.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、v206l、m246v、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[1810]
e.g149a、g182t、d183*、g184*、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、h471e；以及
[1811]
f.h1a、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、k391a、f473r、g476k，其中每个位置对应于seq id no:11中的位置；
[1812]
m)与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在序列区域r181、g182、h183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:12中的位置；
[1813]
n)与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少
98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:12相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1814]
a.h183*、g184*、i405l、a421h、a422p、a428t；
[1815]
b.r118k、h183*、g184*、n195f、r320k、r458k；
[1816]
c.m9l、h183*、g184*、r118k、n195f、m202l、r320k、s323t、r458k；
[1817]
d.m9l、g149a、r118k、g182t、h183*、g184*、n195f、m202l、t257i、y295f、n299y、a339s、e345r、r458k；
[1818]
e.m9l、g149a、r118k、g182t、h183*、g184*、n195f、t246v、t257i、y295f、n299y、a339s、e345r、r458k；以及
[1819]
f.m9l、g149a、g182t、h183*、g184*、m202l、t257i、y295f、n299y、s323t、a339s、e345r，其中每个位置对应于seq id no:12中的位置；
[1820]
o)与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:13相比在序列区域r181、g182、g182、d183中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:13中的位置；
[1821]
p)与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:13相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1822]
a.h1*、d183*、g184*、n195f、v206y；
[1823]
b.h1*、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、r320k、r458k；
[1824]
c.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[1825]
d.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、v206l、m246v、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[1826]
e.g149a、g182t、d183*、g184*、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r，
[1827]
f.h1*、n54s、v56t、g109a、q169e、q172k、a174*、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1828]
g.g182*、d183*、n195f、w140y、n260g、s304r、r320a、g476k、v410i、v429l、f451w、c474v；
[1829]
h.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、k391a、p473r、g476k；
[1830]
i.h1*、n54s、v56t、g109a、q169e、q172k、a174*、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1831]
j.h1*、n54s、v56t、g109a、r116h、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1832]
k.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、
g184t、n195f、v206l、k391a、p473r、g476k；
[1833]
l.h1*、n54s、v56t、g109a、f113q、r116q、q172n、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、a265g、k391a、p473r、g476k；
[1834]
m.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、w167f、q172r、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1835]
n.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、r116h、t134e、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、g476k；
[1836]
o.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、r116h、t134e、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、q395p、t444q、p473r、g476k；
[1837]
p.h1*、n54s、v56t、g109a、t134e、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1838]
q.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、g476k；
[1839]
r.h1*、n54s、v56t、g109a、w167f、q172e、l173p、a174k、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[1840]
s.h1*、n54s、v56t、g109a、r116q、v120l、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、a422p；以及
[1841]
t.h1*、n54s、v56t、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、a422p，其中每个位置对应于seq id no:13中的位置。
[1842]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和蛋白酶的洗涤剂组合物，并且其中该蛋白酶选自由以下组成的组：
[1843]
a)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶；
[1844]
b)与seq id no:15具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；优选地获得自解淀粉芽孢杆菌的蛋白酶；
[1845]
c)与seq id no:16具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自芽孢杆菌属物种的蛋白酶；
[1846]
d)与seq id no:17具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自吉氏芽孢杆菌的蛋白酶；
[1847]
e)与seq id no:18具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶；
[1848]
f)与seq id no:19具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自地衣芽孢杆菌的蛋白酶；
[1849]
g)或与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含取代t22r或t22a，其中该位置对应于seq id no:14的位置；
[1850]
h)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s3t、v4i、a188p和v199i，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1851]
i)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：n114l、t207a、a226v和e265f，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1852]
j)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s97d、s101a、v102i和g157s，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1853]
k)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s85n、g116v、s126l、p127q和s128a，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1854]
l)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：y161a、r164s和a188p，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1855]
m)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s3t、r19l和a188p，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1856]
n)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s9r、r19l和n60d，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[1857]
o)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于选自下组的位置的位置处包含氨基酸精氨酸(r)，该组由以下组成：seq id no:14的9、42和239；
[1858]
p)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于选自下组的位置的位置处包含氨基酸谷氨酸(e)或天冬氨酸(d)，该组由以下组成：seq id no:14的9、42、60、61、74、157、176、179、182、212、250、253和256；
[1859]
q)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于seq id no:14的位置97的位置处包含氨基酸天冬氨酸(d)或谷氨酸(e)的插入；
[1860]
r)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于seq id no:14的位置99的位置处包含选自下组的氨基酸，该组由以下组成：谷氨酸(e)、天冬氨酸(d)、甘氨酸(g)、精氨酸(r)和甲硫氨酸(m)；
[1861]
s)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于seq id no:14的位置211的位置处包含选自下组的氨基酸，该组由以下组成：谷氨酸(e)、天冬氨酸(d)和谷氨酰胺(q)；
[1862]
t)与seq id no:15具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于seq id no:15的位置217的位置处包含选自下组的氨基酸，该组由以下组成：谷氨酸(e)、天冬氨酸(d)和谷氨酰胺(q)；
[1863]
u)与seq id no:15具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:15相比包含选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：s24g/r、s53g、s78n、s101n、g128a/s和y217q/l，其中这些位置对应于seq id no:15的位置。
[1864]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和纤维素酶的洗涤剂组合物，并且其中该纤维素酶选自由以下组成的组：
[1865]
a)与seq id no:20具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶；
[1866]
b)与seq id no:21具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶；
[1867]
c)与seq id no:22具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶；
[1868]
d)与seq id no:23具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶，
[1869]
e)与seq id no:24具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶，以及
[1870]
f)与seq id no:25具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的纤维素酶。
[1871]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和脂肪酶的洗涤剂组合物，并且其中该脂肪酶是与seq id no:26具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的脂肪酶；或与seq id no:26具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的脂肪酶，该脂肪酶与seq id no:26相比包含选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：d27r、g38a、g91a/q、d96e、g163k、t231r、
n233r、d254s和p256t，其中每个位置对应于seq id no:26中的位置。
[1872]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和β-葡聚糖酶的洗涤剂组合物，并且其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：
[1873]
a)如下β-葡聚糖酶，其中该β-葡聚糖酶优选地包含具有地衣多糖酶活性的β-葡聚糖酶；
[1874]
i.与seq id no:27具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1875]
ii.与seq id no:28具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[1876]
iii.与seq id no:29具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1877]
iv.与seq id no:30具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[1878]
v.与seq id no:31具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1879]
b)如下β-葡聚糖酶，其中该β-葡聚糖酶优选地包含具有昆布多糖酶活性的β-葡聚糖酶；
[1880]
i.与seq id no:32具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1881]
ii.与seq id no:33具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1882]
iii.与seq id no:34具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1883]
iv.与seq id no:35具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[1884]
v.与seq id no:36具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[1885]
vi.与seq id no:37具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶。
[1886]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和另外的甘露聚糖酶的洗涤剂组合物，并且其中该另外的甘露聚糖酶选自由以下组成的组：
[1887]
a)与seq id no:38具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶，或与seq id no:38具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的甘露聚糖酶，该甘露聚糖酶与seq id no:38相比包含选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：a30t、y93q、s95d、d118k、a136p、d139r、n200t、s202r、r210g、w260f、n283h、l288i、l294p和s295v，其中每个位置对应于seq id no:38中的位置；
[1888]
b)与seq id no:39具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少
85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶；以及
[1889]
c)与seq id no:40具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶。
[1890]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和果胶酶的洗涤剂组合物，并且其中该果胶酶与seq id no:41具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
[1891]
在实施例中，提供了包含如本文所述的甘露聚糖酶变体和dna酶的洗涤剂组合物，并且其中该dna酶选自由以下组成的组：
[1892]
a)与seq id no:42具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的dna酶；以及
[1893]
b)与seq id no:43具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的dna酶。
[1894]
洗涤方法
[1895]
本发明的洗涤剂组合物理想地适用于在衣物洗涤应用中使用。相应地，本发明包括用于洗涤织物的方法。该方法包括将有待洗涤的织物与包含根据本发明的洗涤剂组合物的清洁洗衣溶液接触的步骤。织物可以包含在正常消费者使用条件下能够被洗涤的任何织物。溶液优选具有约5.5至约8的ph。可以在溶液中按以下浓度使用这些组合物：约100ppm，优选地500ppm至约15,000ppm。水温的范围典型地是约5℃至约90℃，包括约10℃、约15℃、约20℃、约25℃、约30℃、约35℃、约40℃、约45℃、约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、约70℃、约75℃、约80℃、约85℃以及约90℃。水与织物的比率典型地是约1:1至约30:1。
[1896]
在特别的实施例中，在约5.0至约11.5的ph下进行该洗涤方法，或在替代性实施例中，甚至在约6至约10.5、如约5至约11、约5至约10、约5至约9、约5至约8、约5至约7、约5.5至约11、约5.5至约10、约5.5至约9、约5.5至约8、约5.5至约7、约6至约11、约6至约10、约6至约9、约6至约8、约6至约7、约6.5至约11、约6.5至约10、约6.5至约9、约6.5至约8、约6.5至约7、约7至约11、约7至约10、约7至约9、或约7至约8、优选地约5.5至约9、并且更优选地约6至约8的ph下进行该洗涤方法。
[1897]
在特别的实施例中，在如下硬度下进行该洗涤方法：约0
°
dh至约30
°
dh、如约1
°
dh、约2
°
dh、约3
°
dh、约4
°
dh、约5
°
dh、约6
°
dh、约7
°
dh、约8
°
dh、约9
°
dh、约10
°
dh、约11
°
dh、约12
°
dh、约13
°
dh、约14
°
dh、约15
°
dh、约16
°
dh、约17
°
dh、约18
°
dh、约19
°
dh、约20
°
dh、约21
°
dh、约22
°
dh、约23
°
dh、约24
°
dh、约25
°
dh、约26
°
dh、约27
°
dh、约28
°
dh、约29
°
dh、约30
°
dh。在典型欧洲洗涤条件下，硬度是约15
°
dh，在典型美国洗涤条件下，是约6
°
dh，并且在典型亚洲洗涤条件下，是约3
°
dh。
[1898]
本发明涉及用包含本发明的甘露聚糖酶的洗涤剂组合物清洁织物、餐具或硬表面的方法。
[1899]
优选的实施例涉及清洁方法，所述方法包括以下步骤：在适合于清洁物体的条件下使所述物体与包含本发明的甘露聚糖酶的清洁组合物接触。在优选的实施例中，该清洁组合物是洗涤剂组合物并且该过程是衣物洗涤或餐具洗涤过程。
[1900]
仍另一个实施例涉及用于从织物上去除污渍的方法，该方法包括在适合于清洁物体的条件下使所述织物与包含本发明的甘露聚糖酶的组合物接触。
[1901]
低温用途
[1902]
本发明的一个实施例涉及进行衣物洗涤、餐具洗涤或工业清洁的方法，该方法包括使有待清洁的表面与本发明的甘露聚糖酶接触，并且其中所述衣物洗涤、餐具洗涤、工业或机构清洁在约40℃或更低的温度下进行。本发明的一个实施例涉及甘露聚糖酶在衣物洗涤、餐具洗涤或清洁过程中的用途，其中衣物洗涤、餐具洗涤、工业清洁中的温度是约40℃或更低。
[1903]
在另一个实施例中，本发明涉及根据本发明的甘露聚糖酶在蛋白质去除过程中的用途，其中该蛋白质去除过程中的温度为约40℃或更低。
[1904]
在以上确定的方法和用途的每一者中，洗涤温度是约40℃或更低，例如约39℃或更低、例如约38℃或更低、例如约37℃或更低、例如约36℃或更低、例如约35℃或更低、例如约34℃或更低、例如约33℃或更低、例如约32℃或更低、例如约31℃或更低、例如约30℃或更低、例如约29℃或更低、例如约28℃或更低、例如约27℃或更低、例如约26℃或更低、例如约25℃或更低、例如约24℃或更低、例如约23℃或更低、例如约22℃或更低、例如约21℃或更低、例如约20℃或更低、例如约19℃或更低、例如约18℃或更低、例如约17℃或更低、例如约16℃或更低、例如约15℃或更低、例如约14℃或更低、例如约13℃或更低、例如约12℃或更低、例如约11℃或更低、例如约10℃或更低、例如约9℃或更低、例如约8℃或更低、例如约7℃或更低、例如约6℃或更低、例如约5℃或更低、例如约4℃或更低、例如约3℃或更低、例如约2℃或更低、例如约1℃或更低。
[1905]
在另一个优选的实施例中，洗涤温度在约5℃-40℃的范围内，例如约5℃-30℃、约5℃-20℃、约5℃-10℃、约10℃-40℃、约10℃-30℃、约10℃-20℃、约15℃-40℃、约15℃-30℃、约15℃-20℃、约20℃-40℃、约20℃-30℃、约25℃-40℃、约25℃-30℃或约30℃-40℃。在特别优选的实施例中，洗涤温度是约20℃、约30℃、或约40℃。
[1906]
用途
[1907]
本发明的甘露聚糖酶可以用于其中需要降解甘露聚糖的应用。其中可以使用甘露聚糖酶的实例是在从软木和棕榈仁滤饼生产生物乙醇中，用于改善动物饲料以及在咖啡的水解中。此外，瓜尔胶被用于很多食品中，并且被用于石油和天然气工业中，所以本发明的甘露聚糖酶可以用于洗涤剂中以去除含甘露聚糖污渍，用于水力压裂以产生从钻孔延伸进入岩层的地下压裂，从而增加岩层可以产生的流体的速率或用于清洁钻孔滤饼。因此甘露聚糖可以用于由钻井孔造成的地下地层的压裂中，或甘露聚糖可以被用作钻孔滤饼中的组分。
[1908]
在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖。在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖的过程。
[1909]
在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于控制钻井液的粘度。在一个方面，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五
方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于由钻井孔造成的地下地层的压裂中。
[1910]
本发明的甘露聚糖酶可用于防止、减少或去除物品的恶臭。因此，在一个实施例中，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于防止、减少或去除物品的恶臭。
[1911]
本发明的甘露聚糖酶在防止、减少或去除生物膜方面的用途
[1912]
当物品上存在微生物并且在物品上粘在一起时，生物膜会在纺织品上发展。一些微生物倾向于粘附至物品(如纺织品)的表面。一些微生物粘附至此类表面并且在表面上形成生物膜。生物膜可以是粘性的并且粘附的微生物和/或生物膜会是难以去除的。此外，由于生物膜的粘性性质，生物膜粘附污垢。市场上可获得的商业衣物洗涤剂组合物并不去除此类粘附的微生物或生物膜。
[1913]
本发明涉及第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品用于防止、减少或去除物品的生物膜的用途，其中该多肽获得自真菌来源，并且其中该物品是纺织品。在一个实施例中，第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品可用于防止、减少或去除物品的粘性。
[1914]
本发明的甘露聚糖酶在食品加工和动物饲料方面的用途
[1915]
几种抗营养因素可能会限制特定植物材料在制备动物饲料和人类食品中的使用。例如，含有寡甘露聚糖(如甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖)的植物材料会降低动物对营养化合物(如矿物质、维生素、糖和脂肪)的可消化性和吸收。特别地，这些负面影响是由于含甘露聚糖的聚合物的高粘度以及含甘露聚糖的聚合物吸收营养化合物的能力。使用降解含甘露聚糖的聚合物的酶，即内切-β-甘露聚糖酶(如本文所述的甘露聚糖酶)，可以降低这些作用，这些酶允许在饲料中包含较高比例的含廉价植物材料的含甘露聚糖的聚合物，从而降低了饲料成本。因此，通过本发明的甘露聚糖酶的活性，含甘露聚糖的聚合物被分解成更简单的糖，这些更简单的糖可以更容易地被同化以提供另外的能量。相应地，本发明进一步涉及将本发明的甘露聚糖酶用于食品或动物饲料的加工和/或制造。
[1916]
相应地，本发明涉及包含本发明的甘露聚糖酶的动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品。
[1917]
本发明进一步涉及用于制备这种动物饲料组合物、和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的方法，该方法包括将本发明的甘露聚糖酶与一种或多种动物饲料成分和/或动物饲料添加剂成分和/或宠物食品成分混合。
[1918]
此外，本发明还涉及本发明的甘露聚糖酶在制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品中的用途。
[1919]
本发明的甘露聚糖酶用于发酵饮料的用途
[1920]
在一个方面，本发明涉及制备发酵饮料如啤酒或葡萄酒的方法，该方法包括将第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品与麦芽和/或辅助剂混合。
[1921]
另一个方面涉及提供发酵饮料的方法，该方法包括使醪液和/或麦芽汁与第一方
面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品接触的步骤。
[1922]
在本发明的上下文中，术语“发酵饮料”意在包括通过以下方法生产的任何饮料，如葡萄酒或啤酒，该方法包括发酵过程，如微生物、细菌和/或酵母发酵。
[1923]
在本发明的一方面，该发酵饮料是啤酒。术语“啤酒”意指包括通过发酵/酿造含淀粉的植物材料生产的任何发酵的麦芽汁。通常，啤酒是由麦芽或辅助剂或麦芽和辅助剂的任何组合作为含淀粉的植物材料生产的。如本文所用，术语“麦芽”被理解为任何发芽的谷类谷粒，如发芽的大麦或小麦。
[1924]
如本文所用，术语“辅助剂”是指不是麦芽(如大麦或小麦麦芽)的任何含淀粉和/或糖的植物材料。作为辅助剂的实例，可以提及可用作淀粉来源的材料，如普通玉米糁、精制玉米糁、制啤酒用碾磨酵母、水稻、高粱、精制玉米淀粉、大麦、大麦淀粉、去壳大麦、小麦、小麦淀粉、烘培谷类、谷类片、黑麦、燕麦、马铃薯、树薯、木薯和糖浆(如玉米糖浆、甘蔗糖浆、转化糖浆、大麦和/或小麦糖浆)等。
[1925]
如本文所用，术语“醪液”是指任何含淀粉和/或糖的植物材料如谷粉(例如包括压碎的大麦麦芽、压碎的大麦)和/或其他辅助剂或其组合的水性浆液，随后与水混合以分离成麦芽汁和麦糟(spent grain)。
[1926]
如本文所用，术语“麦芽汁”是指在淀粉糖化(mashing)期间，对谷粉进行提取后，未发酵的液体流出物(run-off)。
[1927]
本发明的甘露聚糖酶用于处理咖啡提取物的用途
[1928]
本发明的甘露聚糖酶也可以用于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖。在某些优选的实施例中，本发明的甘露聚糖酶用于在液体咖啡提取物冷冻干燥期间抑制凝胶形成。提取物粘度的降低减少了干燥期间的能量消耗。在某些其他优选的实施例中，为了减少酶的消耗并避免咖啡提取物的污染，本发明的甘露聚糖酶以固定化形式应用。这种用途进一步披露于ep 676145中。
[1929]
通常，在本发明的分离的甘露聚糖酶或其片段或变体的存在下，在适合于水解液体咖啡提取物中存在的半乳甘露聚糖的条件下孵育咖啡提取物。
[1930]
因此，在一个实施例中，本发明涉及用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
[1931]
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
[1932]
(b)向所述咖啡豆添加水和第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品；
[1933]
(c)孵育以制备水性咖啡提取物；以及
[1934]
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
[1935]
本发明的甘露聚糖酶在烘焙食品中的用途
[1936]
在另一方面，本发明涉及制备烘焙产品的方法，该方法包括将第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品添加至面团，然后烘烤该面团。
[1937]
烘焙产品的实例是本领域技术人员熟知的，并且包括面包、面包卷、千层饼、甜发酵面团、小圆面包、蛋糕、咸饼干、饼干、小面包、华夫饼、威化饼、墨西哥玉米粉圆饼、早餐谷
物、挤出产品等。
[1938]
本发明的甘露聚糖酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中。面包改良剂是含有多种成分的组合物，其改善了面团特性和烘焙产品(例如面包和蛋糕)的质量。面包改良剂通常由于其有益效果(例如面团稳定性以及面包质地和体积)而被添加到工业烘焙过程中。面包改良剂通常含有脂肪和油连同添加剂(像乳化剂、酶、抗氧化剂、氧化剂、稳定剂和还原剂)。除了本发明的甘露聚糖酶之外，面包改良剂中也可能存在其他酶，包括淀粉酶、半纤维素酶、淀粉分解复合物、脂肪酶、蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、支链淀粉酶、非淀粉多糖降解酶和氧化还原酶(像葡萄糖氧化酶、脂氧合酶或抗坏血酸氧化酶)。
[1939]
在一个方面，本发明的甘露聚糖酶可以作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中，该面包改良剂组合物还包含葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖源，如魔芋胶、瓜尔胶、刺槐豆胶(长角豆(ceratonia siliqua))、干椰肉粕、象牙坚果甘露聚糖(象牙椰子(phyteleohas macrocarpa))、海藻甘露聚糖提取物、椰子粕和啤酒酵母的细胞壁(可以是干燥的，或以啤酒酵母提取物的形式使用)。
[1940]
本发明的另一个方面涉及本发明的甘露聚糖酶在面团中用于改善面团耐受性、柔性和粘性的用途。优选地，可以向其中添加本发明的甘露聚糖酶的面团不是纯小麦面粉面团，而是除了纯小麦面粉之外或代替纯小麦面粉，还包含麸皮或燕麦、水稻、小米、玉蜀黍或豆类面粉。
[1941]
本发明的又另一个方面涉及本发明的任何甘露聚糖酶在面团中用于改善瓤结构(crumb structure)并延缓最终烘焙产品如面包的老化的用途。
[1942]
本发明的甘露聚糖酶在乳制食品中的用途
[1943]
在本发明的一个方面，本发明的甘露聚糖酶可以添加到乳或还添加了葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的任何其他乳制品中。典型的葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖源在上文在烘焙方面列出，并包括瓜尔胶或魔芋胶。当在大肠或结肠中以有利的种群密度发现时，本发明的甘露聚糖酶与葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的组合释放甘露聚糖酶水解产物(甘露寡糖(mannooligosaccharide))，该甘露聚糖酶水解产物通过促进通常与良好健康相关的益生菌(特别是双歧杆菌和乳酸杆菌乳酸菌)的选择性生长和增殖来充当可溶性益生元。
[1944]
在一个方面，本发明涉及制备乳或乳制品的方法，该方法包括向乳或乳制品中添加(a)葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖和(b)第一方面或第二方面的多肽、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品。
[1945]
在本发明的一个方面，在添加到基于乳品的食品中之前或之后，将本发明的甘露聚糖酶与任何葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖组合使用，以产生包含益生元甘露聚糖水解产物的基于乳品的食品。在本发明的另一个方面，如此生产的含甘露寡糖乳制品能够增加有益人肠道菌群中的种群，并且在本发明的又另一个方面，基于乳品的食品可包含本发明的甘露聚糖酶以及葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖和/或半乳葡甘露聚糖的任何来源，并且剂量足以用于接种已知在人类大肠中有益的至少一种细菌菌株(如双歧杆菌或乳酸杆菌)。优选地，所述基于乳品的食品是酸奶或乳饮料。
[1946]
本发明的甘露聚糖酶用于纸浆漂白的用途
[1947]
本发明的甘露聚糖酶可进一步用于纸浆(如化学纸浆、半化学纸浆、牛皮纸浆、机械纸浆或通过亚硫酸盐法制备的纸浆)的酶辅助漂白。因此，本发明涉及漂白纸浆的方法，
该方法包括将纸浆与第一方面或第二方面的多肽、第三方面或第四方面的洗涤剂组合物、第五方面或第六方面的颗粒或第七方面或第八方面的液体配制品一起孵育。
[1948]
在一些实施例中，纸浆是用氧气、臭氧、过氧化物或过氧酸漂白的无氯纸浆。在一些实施例中，本发明的甘露聚糖酶用于展示出低木质素含量的纸浆的酶辅助漂白，该纸浆是通过改良的制浆方法或连续制浆方法生产的。在一些其他实施例中，本发明的甘露聚糖酶单独使用或优选与木聚糖酶和/或内切葡聚糖酶和/或α-半乳糖苷酶和/或纤维二糖水解酶组合使用。
[1949]
在以下段落中进一步定义上述本发明：
[1950]
段落1.一种亲本甘露聚糖酶的变体，其中所述变体包含至少两个修饰，其中(a)所述第一修饰是在选自位置168、168、7、13、15、20、26、36、46、64、69、70、82、101、103、109、120、141、155、162、163、166、167、168、172、176、178、182、190、197、214、215、219、239、248、253、258、271、276、280、283、286、299、366、378、385、408、410、413、473、486、491的位置中的取代或缺失，并且(b)所述至少第二修饰是在所述变体的任何其他位置中，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且其中该变体与seq id no:1、seq id no:2的多肽或其具有甘露聚糖酶活性的片段具有至少85％，例如至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有85％-96％，例如86％-96％、87％-96％、88％-96％、89％-96％、90％-96％、91％-96％、92％-96％、93％-96％、94％-96％、如95％-96％，或具有85％-95％，例如86％-95％、87％-95％、88％-95％、89％-95％、90％-95％、91％-95％、92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有85％-94％，例如86％-94％、87％-94％、88％-94％、89％-94％、90％-94％、91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性，或具有85％-93％，例如86％-93％、87％-93％、88％-93％、89％-93％、90％-93％、91％-93％、如92％-93％，或具有85％-92％，例如86％-92％、87％-92％、88％-92％、89％-92％、90％-92％、如91％-92％，或具有85％-91％，例如86％-91％、87％-91％、88％-91％、89％-91％、如90％-91％，或具有85％-90％，例如86％-90％、87％-90％、88％-90％、如89％-90％序列同一性。
[1951]
段落2.如段落1所述的变体，其中该变体具有甘露聚糖酶活性，并且其中该变体与seq id no:3、seq id no:4的多肽或其具有甘露聚糖酶活性的片段具有至少91％，例如至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％序列同一性但小于100％序列同一性，或具有91％-95％，例如92％-95％、93％-95％、如94％-95％，或具有91％-94％、92％-94％、如93％-94％序列同一性。
[1952]
段落3.如前述段落中任一项所述的变体，其中该至少第二修饰是取代或缺失并且是在对应于seq id no:1的多肽的以下位置的至少一个或多个位置中：1、2、3、4、5、6、8、9、10、11、12、14、17、18、19、21、22、23、25、30、35、37、38、42、45、48、49、53、57、61、63、65、68、72、74、76、78、83、86、89、94、96、97、100、105、110、111、112、115、117、118、121、122、123、126、129、130、134、137、139、142、143、148、160、161、164、165、169、170、171、174、179、181、183、184、185、188、189、192、193、195、198、210、213、217、218、228、235、242、249、252、254、259、260、267、270、272、296、301、304、312、315、321、322、323、324、342、344、347、351、352、354、355、358、363、368、377、379、380、391、398、403、414、417、419、422、423、437、438、440、
442、443、452、454、462、463、466、467、470、472、477、479、480、482、483、484、487、488、489、490。
[1953]
段落4.如前述段落中任一项所述的变体，该变体相对于该亲本具有改善的特性。
[1954]
段落5.如前述段落中任一项所述的变体，其中对于稳定性量度，所述变体相对于该亲本具有≥1.0的改善因子。
[1955]
段落6.如前述段落中任一项所述的变体，其中所述变体具有改善的稳定性，该改善的稳定性是洗涤剂内稳定性或热稳定性。
[1956]
段落7.如前述段落中任一项所述的变体，其中对于在ph 8-8.5下的稳定性量度，所述变体具有≥1.0的改善因子。
[1957]
段落8.如前述段落中任一项所述的变体，其中该第一修饰包含选自由以下组成的组的取代或缺失：q168d、q168f、q168m、q168p、f7*、f7a、f7d、f7g、f7i、f7p、t13i、t13m、t13n、t13w、t13y、t13e、s15k、s15c、s15d、s15m、s15q、s15t、a20s、a20p、a20t、a20g、a20v、k26d、k26e、k26h、k36a、k36c、k36d、k36e、k36m、k36t、e46i、e46f、e46m、e46y、e64p、q69p、q69r、q69s、q69t、k70a、k70e、k70i、k70m、k70p、k70t、n82t、n82a、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、s103r、s103a、s103c、s103d、s103e、s103i、s103l、s103n、s103q、s103v、s103y、s109e、s109d、k120s、k120a、k120g、k120i、k120p、s141r、s141i、s141q、s141a、y155h、e162d、e162g、e162q、p163*、p163t、p163a、p163e、p163n、t166e、t166g、t166i、t166l、t166n、t166p、t166q、t166r、t166v、t166w、t167p、t167a、t167r、t167k、m172i、s176n、s178r、s178e、s178h、s178p、s178t、p182r、p182e、f190y、k197a、k197d、k197f、k197m、k197n、k197y、q214r、q214w、q215e、y219w、s239a、m248i、r253a、r253w、s258g、s271g、s271y、h276c、h276n、h276y、r280l、r280k、n283m、n283y、f286c、e299k、e299d、e299w、g366n、k378d、k378h、k378q、k378r、d385a、d385f、d385h、d385p、d385s、k408a、k408c、k408d、k408e、k408m、k408q、k408s、k408t、k408v、d410l、d410m、l413q、l413a、l413t、l413v、n473y、d486e、d486k、k491e、k491p、k491r、及其组合。
[1958]
段落9.如前述段落中任一项所述的变体，其中该第二修饰包含选自由以下组成的组的取代或缺失：a1*、a1s、a1t、a1v、a1g、a1d、a1i、a1y、i2*、t3*、t3a、t3e、t3g、v4*、v4n、v4d、v4g、v4m、v4y、p5*、g6*、g6p、v8*、v8a、v8q、v8f、v8d、v8w、v9*、v9d、v9a、v9g、v9m、v9p、e10*、e10y、e10g、p11a、p11l、p11e、p11i、p11n、h12a、h12d、h12e、h12g、h12l、h12p、h12q、h12r、h12v、s14q、s14r、s14e、s14h、s14n、s14v、q17k、q17a、n18s、q19n、i21l、i22v、i22q、i22t、a23i、a23t、a23v a23m、a23s、f25w、f25y、i30l、i35*、k37v、r38c、r38f、r38l、r38m、r38t、t42e、a45l、a45m、a45r、d48a、d48p、d48s、l49m、t53c、t53e、t53h、t53k、t53p、t53q、s57p、s57r、e61d、d63c、k65c、k65f、k65h、k65n、k65q、k65s、k65t、v68m、v68t、s72f、t74a、t74q、t74e、q76t、q76e、g83e、g83s、e86d、l89f、p94m、g96e、g96d、g96r、n97e、n97d、n97y、k100r、a101r、a101c、a101e、a101i、a101l、a101n、a101q、a101v、q105v、g110r、g110d、g110p、g110c、g110s、a111l、g112e、g112v、t115w、t115y、t115v、t115i、s117p、a118v、p121a、g122p、t123r、a126d、a126s、a126t、k129r、k129l、k129m、m130i、m130v、l134i、l134v、l134p、l134t、s137a、s137d、s137w、n139i、n139k、n139a、q143t、q143s、q143r、r160i、r160f、r160k、r160l、r160n、r160v、v161s、v161t、r164*、r164q、i165e、i165d、i165t、i165l、k169p、k169q、k169t、k169v、t170e、t170h、m171e、m171n、m171i、m171k、
m171q、p174k、k179s、k179h、k179q、k179n、k179r、s181t、q183e、a184t、k185n、k185q、m188f、m188i、m188y、k189s、t192a、t192v、n193w、n193s、y195h、a210e、a210q、a210f、a210t、a210s、y213k、y213q、y213r、g217q、k218r、m228i、v235l、n242t、e249h、e249l、e249q、k252g、k252e、g254s、l259v、s260c、k267l、g270c、n272d、e285d、n296a、k304a、e301k、k304f、k304q、k304r、k304s、a312v、t315a、t315v、q321k、q321w、e322r、e322a、e322d、h323a、h324n、w342g、a344c、p347d、k351v、k352q、y354w、r355q、y358w、e363h、k364d、k364r、k364y、n368d、v377e、e379k、e379p、e380t、e380d、v391l、p398f、p398e、s403q、s403r、f414t、f414s、f414p、k417g、k417e、k417q、k419v、v422r、v422i、a423g、q437i、q437a、t438a、g440q、h442n、w443g、d452n、l454i、k462a、k462r、k462l、k462p、e463q、k466f、k466h、k466n、k466q、k467h、k467y、n470y、d472g、d472y、l477f、e479r、l480i、k482a、k482p、k482d、k482g、k482q、k482r、g483a、g483d、l484q、s487r、p488i、p488l、r489f、r489k、r489n、r489p、w490a、及其组合。
[1959]
段落10.如前述段落中任一项所述的变体，该变体相对于该亲本具有改善的特性，其中该改善的特性选自由以下组成的组：洗涤剂内稳定性、热稳定性、蛋白酶稳定性、表面活性剂稳定性、ph稳定性及其组合。
[1960]
段落11.一种分离的多核苷酸，该分离的多核苷酸编码如段落1-10中任一项所述的变体。
[1961]
段落12.一种核酸构建体或表达载体，该核酸构建体或表达载体包含如段落11所述的多核苷酸。
[1962]
段落13.一种重组宿主细胞，该重组宿主细胞用如段落11所述的多核苷酸转化。
[1963]
段落14.一种产生甘露聚糖酶变体的方法，该方法包括：在适合于表达该变体的条件下培养如段落13所述的重组宿主细胞；以及回收该变体。
[1964]
段落15.一种洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物包含如段落1-10中任一项所述的变体以及至少一种洗涤剂组分。
[1965]
段落16.如段落15所述的洗涤剂组合物，其中该洗涤剂组分选自表面活性剂、优选地阴离子和/或非离子表面活性剂，助洗剂和漂白组分。
[1966]
段落17.如段落15-16中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种选自由以下组成的组的组分：水溶助剂、助洗剂、共助洗剂、螯合剂、漂白组分、聚合物、织物调色剂、织物调理剂、增泡剂、抑泡剂、分散剂、染料转移抑制剂、荧光增白剂、香料、光学增亮剂、杀细菌剂、杀真菌剂、污垢悬浮剂、污垢释放聚合物、抗再沉积剂、酶抑制剂、酶稳定剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。
[1967]
段落18.如段落15-17中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物进一步包含一种或多种另外的酶。
[1968]
段落19.如段落18所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶选自由以下组成的组：淀粉酶、蛋白酶、蛋白酶、过氧化物酶、纤维素酶、β-葡聚糖酶、木葡聚糖酶、半纤维素酶、黄原胶酶、黄原胶裂解酶、脂肪酶、酰基转移酶、磷脂酶、酯酶、漆酶、过氧化氢酶、芳基酯酶、淀粉酶、α-淀粉酶、葡糖淀粉酶、角质酶、果胶酶、果胶裂解酶、角蛋白酶、还原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂氧合酶、木质酶、角叉菜胶酶、支链淀粉酶、鞣酸酶、阿拉伯糖苷酶、透明质酸酶、软骨素酶、木葡聚糖酶、木聚糖酶、果胶乙酰基酯酶、多半乳糖醛酸酶、鼠李半乳糖醛酸酶、其他
内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶、果胶甲基酯酶、纤维二糖水解酶、转谷氨酰胺酶、地衣多糖酶、昆布多糖酶、dna酶、或其任何组合。
[1969]
段落20.如段落18-19中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是淀粉酶，并且其中该淀粉酶选自由以下组成的组：
[1970]
a)与seq id no 2或seq id no 35具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:5相比在序列区域r180、s181、t182、g183中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:5中的位置；
[1971]
b)与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:5或seq id no:6具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:5相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1972]
i.r180*、s181*、s243q、g475k；
[1973]
ii.r180*、t182*、s243q、g475k；
[1974]
iii.r180*、t182*、g183s、s243q、g475k；以及
[1975]
iv.r180*、s181*、y242f、s243q、f266y、g475k，其中每个位置对应于seq id no:6中的位置；
[1976]
c)与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:3具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:7相比在序列区域r178、g179、t180、g181中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:7中的位置；
[1977]
d)与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:7具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:7相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1978]
i.r178*、g179*、e187p、i203y、g476k；
[1979]
ii.r178*、g179*、e187p、m199l、i203y、g476k；
[1980]
iii.r178*、g179*、e187p、i203y r458n、t459s、d460t、g476k；
[1981]
iv.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、i203y、s241q；
[1982]
v.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、i203y、s241q、s362a、r377y；
[1983]
vi.t38n、n126y、t129i、f153w、r178*、g179*、t180d、e187p、i203y、g476k、g477e；以及
[1984]
vii.n126y、f153w、r178*、g179*、t180h、e187p、i203y、s241q、g476k、g477e，其中每个位置对应于seq id no:7中的位置；
[1985]
e)与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:8中的位置；
[1986]
f)与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:8具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在选自3、4、5、74、118、167、170、177、195、202、204、271、320、330、377、385、445、458、475、476、314、315或316的一个或多个，优选地全部位置处包含改变，其中每个位置对应于seq id no:8中的位置；
[1987]
g)与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:9相比优选地在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:5中的位置；
[1988]
h)与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:9具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:9相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[1989]
i.d183*、g184*、n195f、y243f；
[1990]
ii.d183*、g184*、n195f、v206y、y243f；
[1991]
iii.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、g304r、g476k；
[1992]
iv.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、g477e；
[1993]
v.w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、w284d；
[1994]
vi.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、g477e；
[1995]
vii.g109a、w140y、n195f、v206y、y243f、e260g；
[1996]
viii.t51i、s52q、n54k、g109a、w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、g476e；
[1997]
ix.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、w284r、g477k；
[1998]
x.w140y、n195f、v206y、y243f、e260g、w284f、g477r；以及
[1999]
xi.h1*、g7a、g109a、w140y、d183*、g184*、n195f、v206y、y243f、e260g、n280s、g304r、e391a、g476k，其中每个位置对应于seq id no:9中的位置；
[2000]
i)与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:10相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:10中的位置；
[2001]
j)与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:10具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:10相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[2002]
i.r118k、d183*、g184*、n195f、r320k、r458k；
[2003]
ii.m9l、d183*、g184*、r118k、n195f、m202l、r320k、m323t、r458k；
[2004]
iii.m9l、g149a、r118k、g182t、d183*、g184*、g186a、n195f、m202l、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、r458k；
[2005]
iv.m9l、g149a、r118k、g182t、d183*、g184*、g186a、n195f、t246v、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、r458k；以及
[2006]
v.m9l、g149a、g182t、d183*、g184*、g186a、m202l、t257i、y295f、n299y、m323t、a339s、e345r、n471e，其中每个位置对应于seq id no:10中的位置；
[2007]
k)与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:11相比在序列区域r181、g182、d183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:11中的位置；
[2008]
l)与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:11具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:11相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[2009]
i.d183*、g184*、n195f、v206y、r320k、r458k；
[2010]
ii.d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、r320k、r458k；
[2011]
iii.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[2012]
iv.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、v206l、m246v、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[2013]
v.g149a、g182t、d183*、g184*、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、h471e；以及
[2014]
vi.h1a、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、k391a、f473r、g476k，其中每个位置对应于seq id no:11中的位置；
[2015]
m)与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:8相比在序列区域r181、g182、h183、g184中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:12中的位置；
[2016]
n)与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:12具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:12相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[2017]
i.h183*、g184*、i405l、a421h、a422p、a428t；
[2018]
ii.r118k、h183*、g184*、n195f、r320k、r458k；
[2019]
iii.m9l、h183*、g184*、r118k、n195f、m202l、r320k、s323t、r458k；
[2020]
iv.m9l、g149a、r118k、g182t、h183*、g184*、n195f、m202l、t257i、y295f、n299y、a339s、e345r、r458k；
[2021]
v.m9l、g149a、r118k、g182t、h183*、g184*、n195f、t246v、t257i、y295f、n299y、a339s、e345r、r458k；以及
[2022]
vi.m9l、g149a、g182t、h183*、g184*、m202l、t257i、y295f、n299y、s323t、a339s、e345r，其中每个位置对应于seq id no:12中的位置；
[2023]
o)与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:13相比在序列区域r181、g182、g182、d183中包含两个氨基酸缺失，其中每个位置对应于seq id no:13中的位置；
[2024]
p)与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的淀粉酶，或与seq id no:13具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的淀粉酶，该淀粉酶与seq id no:13相比包含选自下组的改变集合中的一者，该组由以下组成：
[2025]
i.h1*、d183*、g184*、n195f、v206y；
[2026]
ii.h1*、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、r320k、r458k；
[2027]
iii.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[2028]
iv.g149a、g182t、d183*、g184*、n195f、v206l、m246v、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r、r458k；
[2029]
v.g149a、g182t、d183*、g184*、m202l、v206l、t257i、y295f、q299y、a339s、q345r，
[2030]
vi.h1*、n54s、v56t、g109a、q169e、q172k、a174*、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2031]
vii.g182*、d183*、n195f、w140y、n260g、s304r、r320a、g476k、v410i、v429l、f451w、c474v；
[2032]
viii.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、k391a、p473r、g476k；
[2033]
ix.h1*、n54s、v56t、g109a、q169e、q172k、a174*、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2034]
x.h1*、n54s、v56t、g109a、r116h、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2035]
xi.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、k391a、p473r、g476k；
[2036]
xii.h1*、n54s、v56t、g109a、f113q、r116q、q172n、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、a265g、k391a、p473r、g476k；
[2037]
xiii.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、f113q、w167f、q172r、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2038]
xiv.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、r116h、t134e、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、g476k；
[2039]
xv.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、r116h、t134e、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、q395p、t444q、p473r、g476k；
[2040]
xvi.h1*、n54s、v56t、g109a、t134e、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2041]
xvii.h1*、n54s、v56t、k72r、g109a、a174s、g182*、d183*、n195f、v206l、g255a、k391a、g476k；
[2042]
xviii.h1*、n54s、v56t、g109a、w167f、q172e、l173p、a174k、g182*、d183*、n195f、v206l、k391a、g476k；
[2043]
xix.h1*、n54s、v56t、g109a、r116q、v120l、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、a422p；以及
[2044]
xx.h1*、n54s、v56t、g109a、f113q、r116q、w167f、q172g、l173v、a174s、g182*、d183*、g184t、n195f、v206l、a422p，其中每个位置对应于seq id no:13中的位置。
[2045]
段落21.如段落18-20中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是蛋白酶，并且其中该蛋白酶选自由以下组成的组：
[2046]
a)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶；
[2047]
b)与seq id no:15具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性；优选地获得自解淀粉芽孢杆菌的蛋白酶；
[2048]
c)与seq id no:16具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自芽孢杆菌属物种的蛋白酶；
[2049]
d)与seq id no:17具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自吉氏芽孢杆菌的蛋白酶；
[2050]
e)与seq id no:18具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自迟缓芽孢杆菌的蛋白酶；
[2051]
f)与seq id no:19具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性，优选地获得自地衣芽孢杆菌的蛋白酶；
[2052]
g)或与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含取代t22r或t22a，其中该位置对应于seq id no:14的位置；
[2053]
h)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s3t、v4i、a188p和v199i，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2054]
i)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：n114l、t207a、a226v和e265f，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2055]
j)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s97d、s101a、v102i和g157s，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2056]
k)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s85n、g116v、s126l、p127q和s128a，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2057]
l)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶与seq id no:14相比包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：y161a、r164s和a188p，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2058]
m)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s3t、r19l和a188p，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2059]
n)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶包含选自下组的一个或多个，优选地全部取代，该组由以下组成：s9r、r19l和n60d，其中这些位置对应于seq id no:14的位置；
[2060]
o)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的蛋白酶，其中该蛋白酶在对应于选自下组的位置的位置处包含氨基酸精氨酸(r)，该组由以下组成：seq id no:14的9、42和239；
[2061]
p)与seq id no:14具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少
id no:26具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的脂肪酶，该脂肪酶与seq id no:26相比包含选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：d27r、g38a、g91a/q、d96e、g163k、t231r、n233r、d254s和p256t，其中每个位置对应于seq id no:26中的位置。
[2075]
段落24.如段落18-23中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是β-葡聚糖酶，并且其中该β-葡聚糖酶选自由以下组成的组：
[2076]
a)如下β-葡聚糖酶，其中该β-葡聚糖酶优选地包含具有地衣多糖酶活性的β-葡聚糖酶；
[2077]
i.与seq id no:27具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2078]
ii.与seq id no:28具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[2079]
iii.与seq id no:29具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2080]
iv.与seq id no:30具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[2081]
v.与seq id no:31具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2082]
b)如下β-葡聚糖酶，其中该β-葡聚糖酶优选地包含具有昆布多糖酶活性的β-葡聚糖酶；
[2083]
i.与seq id no:32具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2084]
ii.与seq id no:33具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2085]
iii.与seq id no:34具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2086]
iv.与seq id no:35具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；
[2087]
v.与seq id no:36具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶；以及
[2088]
vi.与seq id no:37具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的β-葡聚糖酶。
[2089]
段落25.如段落18-24中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是另外的甘露聚糖酶，并且其中该另外的甘露聚糖酶选自由以下组成的组：
[2090]
a)与seq id no:38具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶，或与seq id no:38具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％但小于100％序列同一性的甘露聚糖酶，该甘露聚糖酶与seq id no:38相比包含选自下组的一个或多个取代，该组由以下组成：a30t、y93q、s95d、d118k、a136p、d139r、
n200t、s202r、r210g、w260f、n283h、l288i、l294p和s295v，其中每个位置对应于seq id no:38中的位置；
[2091]
b)与seq id no:39具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶；以及
[2092]
c)与seq id no:40具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的甘露聚糖酶。
[2093]
段落26.如段落18-25中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是果胶酶，并且其中该果胶酶与seq id no:41具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性。
[2094]
段落27.如段落18-26中任一项所述的洗涤剂组合物，其中该另外的酶是dna酶，并且其中该dna酶选自由以下组成的组：
[2095]
a)与seq id no:42具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的dna酶；以及
[2096]
b)与seq id no:43具有至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％序列同一性的dna酶。
[2097]
段落28.如段落18-27所述的洗涤剂组合物，其中该组合物是液体洗涤剂或固体洗涤剂如粉末。
[2098]
段落29.如段落18-28中任一项所述的洗涤剂组合物，该洗涤剂组合物是衣物洗涤或餐具洗涤组合物，任选地呈单位剂量形式。
[2099]
段落30.如权利要求1-10中任一项所述的变体或如权利要求18-29中任一项所述的洗涤剂组合物用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、支链甘露聚糖或非支链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖、刺槐豆胶、瓜尔胶、他拉胶(tara gum)、肉桂胶(cassia gum)、胡芦巴胶(fenugreek gum)、魔芋胶、和/或改性的瓜尔胶的用途。
[2100]
段落31.如段落1-10中任一项所述的变体或如段落18-29中任一项所述的洗涤剂组合物用于衣物洗涤、洗涤、清洁和/或深度清洁纺织品和/或硬表面(如餐具洗涤)的用途。
[2101]
段落32.如段落30-31中任一项所述的用途，其中该变体具有酶洗涤益处。
[2102]
段落33.一种用于降解甘露聚糖，如直链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖，如直链甘露聚糖、支链甘露聚糖或非支链甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖、刺槐豆胶、瓜尔胶、他拉胶、肉桂胶、胡芦巴胶、魔芋胶、和/或改性的瓜尔胶的方法，该方法包括将如段落1-10中任一项所述的变体或如段落18-29中任一项所述的洗涤剂组合物应用至甘露聚糖。
[2103]
段落34.如权利要求33所述的方法，其中该甘露聚糖在纺织品的表面上或硬表面上，如餐具洗涤。
[2104]
段落35.一种用于制备食物或饲料组合物和/或食物或饲料添加剂的方法，该方法包括将如段落1-10中任一项所述的变体与一种或多种食物或饲料和/或食物或饲料添加剂成分混合。
[2105]
段落36.一种用于产生咖啡提取物的方法，该方法包括以下步骤：
[2106]
(a)提供经烘烤且研磨的咖啡豆；
[2107]
(b)向所述咖啡豆添加水和如权利要求1-10中任一项所述的变体；
[2108]
(c)孵育以制备水性咖啡提取物；以及
[2109]
(d)从提取的咖啡豆分离该咖啡提取物。
[2110]
段落37.一种用于降解纤维素材料的方法，该方法包括：在如权利要求1-10中任一项所述的变体的存在下，用酶组合物处理该纤维素材料。
[2111]
段落38.一种用于产生发酵产物的方法，该方法包括：
[2112]
(a)在如权利要求1-10中任一项所述的变体的存在下，用酶组合物糖化纤维素材料；
[2113]
(b)用一种或多种发酵微生物对糖化的纤维素材料进行发酵，以产生发酵产物；以及
[2114]
(c)从发酵中回收该发酵产物。
[2115]
通过以下实例进一步描述本发明，这些实例不应理解为对本发明的范围进行限制。
[2116]
实例
[2117]
菌株
[2118]
编码gh26甘露聚糖酶基因的dna分离自伊利诺斯州类芽孢杆菌(从2014年在美国弗吉尼亚州收集的土壤样品分离)和类芽孢杆菌属物种(从1991年在美国收集的沙样品分离)并且进行了测序，如在wo 2019/068715中所述。
[2119]
材料
[2120]
用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。
[2121]
标准洗涤剂系统
[2122]
标准a洗涤剂的组成
[2123][2124]
标准a2洗涤剂的组成
[2125][2126][2127]
标准b洗涤剂的组成
[2128][2129]
标准j洗涤剂的组成
[2130][2131][2132]
标准o洗涤剂的组成
[2133]
成分(缩写)说明重量％las(c10-c13)烷基苯磺酸钠4.0sles月桂基乙醚硫酸钠8.0大豆皂 1.0aeo醇乙氧基化物4.0tea三乙醇胺0.4柠檬酸钠二水柠檬酸三钠2.0氯化钙二水氯化钙0.02离子交换水 到100
[2134]
标准t洗涤剂的组成(不含漂白剂)
[2135][2136]
标准t洗涤剂的组成(含漂白剂)
[2137]
[2138][2139]
洗涤性能
[2140]
自动机械应力测定(amsa)
[2141]
使用自动机械应力测定(amsa)来评估衣物洗涤中的洗涤性能。使用amsa，可以检査大量小体积酶洗涤剂溶液的洗涤性能。amsa板具有许多用于测试溶液的槽和盖子，盖子针对所有槽开口强力挤压衣物洗涤样品(待洗涤的纺织品)。在洗涤时间期间，板、测试溶液、纺织品和盖子剧烈振荡以使测试溶液与纺织品接触并以规则的、周期性摆动方式施加机械应力。
[2142]
以洗涤过的纺织品的颜色亮度来测量洗涤性能。也可以将亮度表示为当用白光照射样品时从样品反射的光的强度。当样品带有污渍时，反射光的强度低于干净样品的反射光的强度。因此，反射光的强度可以用来测量洗涤性能。
[2143]
使用专业平板扫描仪(kodak iqsmart，柯达公司(kodak)，midtager 29，dk-2605布隆德比丹麦)进行颜色测量，该扫描仪用于捕获所洗涤纺织品的图像。
[2144]
为了从扫描的图像中提取光强度的值，将来自图像的24-位像素值转化为红色、绿色以及蓝色(rgb)的值。通过将rgb值作为向量进行加和并且然后取所得向量的长度来计算强度值(int)：
[2145][2146]
如在自动机械应力测定(amsa)中针对衣物洗涤方法所描述的，使用1个循环洗涤程序以及表2中指定的实验条件进行实验。
[2147]
表2：amsa洗涤试验的条件
[2148][2149]
标准t洗涤剂和标准b洗涤剂的组成同上。
[2150]
通过向测试系统中添加cacl2、mgcl2及nahco3来调节水硬度。洗涤后，将纺织品在自来水中冲洗并风干。
[2151]
terg-o-tometer(tom)洗涤试验
[2152]
terg-o-tometer是工业标准。在水浴温度受控的环境中孵育1l洗涤溶液。在向每个烧杯中添加1l之前，将溶液混合5min。烧杯中的温度经测量为20.0℃。将洗涤和漂洗的小块布样在干燥箱中干燥过夜，并如下表3所示进行测量。
[2153]
表3：terg-o-tometer洗涤试验的条件
[2154]
洗涤剂剂量3.33g/l或如说明的测试溶液体积1lph未调节的洗涤时间30分钟或如说明的温度20℃或如说明的水硬度15
°
dhca
2
:mg
2
:co
32-比率4:1:7.5机械作用120rpm酶剂量0,001-0,05ppm或如说明的
[2155]
洗涤性能表示为δ反射率(remission)值(δrem)。洗涤并漂洗后，将小块布样摊开铺平并且允许在室温下风干过夜。使用具有大孔径的macbeth color eye 7000反射分光光度计进行小块布样的光反射评估。在入射光中没有uv的条件下进行测量，并提取460nm处的反射率。用coloreye 2测量干燥的小块布样。通过3层(来自同一烧杯的相同类型的小块布样中的3块)进行小孔径测量，在标有烧杯号和小块布样号的正面的每个小块布样上进行2次测量。通过从洗涤的小块布样的反射率值中减去对照的小块布样的反射率值来计算单个小块布样的反射率值。通过取得来自用酶洗涤的小块布样的测量值并且与来自未用酶洗涤的小块布样的测量值相减来计算针对每种污渍的酶效果。将全部酶性能计算为单个δrem
酶
的平均值。
[2156]
launder-o-meter(lom)标准洗涤系统
[2157]
launder-o-meter(lom)是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。lom基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗涤机并且在实验期间，每一个将含有待测试的特定洗涤剂/酶系统的溶液和关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
[2158]
lom标准洗涤系统主要用于在欧洲洗涤条件下洗涤剂和酶的中等规模测试。在lom实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，lom提供了在小规模实验(如amsa和迷你洗涤)与在前装式洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。
[2159]
迷你launder-o-meter(迷你lom)标准洗涤系统
[2160]
迷你lom是launder-o-meter(lom)的修饰的迷你洗涤系统，lom是中等规模标准洗涤系统，它可以应用于同时测试多达20种不同洗涤条件。lom或基本上是大型的具有20个封闭金属烧杯在其中旋转的温度受控的水浴。每个烧杯构成一个小的洗涤机并且在实验期间，每一个将含有待测试的特定洗涤剂/酶系统的溶液和关于其进行测试的弄脏的和未弄脏的织物。机械压力由在水浴中旋转的烧杯并且由包括在烧杯中的金属球实现。
[2161]
lom标准洗涤系统主要用于在欧洲洗涤条件下洗涤剂和酶的中等规模测试。在lom实验中，因素如压载物与污垢的比率和织物与洗涤液的比率可以变化。因此，lom提供了在小规模实验(如amsa和迷你洗涤)与在前装式洗涤机中的更费时的全规模实验之间的联系。
[2162]
在迷你lom中，洗涤是在置于斯图尔特(stuart)旋转器中的50ml试管中进行的。
[2163]
全规模洗涤
[2164]
该测试方法在eu条件下(在前装式洗涤机中洗涤)在全规模洗涤中评估洗涤性能。
[2165]
将真实物品(t恤)和压载物与洗涤剂和酶一起添加至每次洗涤中。洗涤后，干燥这些真实物品(t恤)。干燥后，切下圆形小块布样并在迷你lom中用添加污垢的洗涤剂(脏的洗涤剂)进行洗涤。在macbeth color eye分光光度计上测量色差。
[2166]
基于每次洗涤中洗涤剂剂量的重量百分比来添加这些酶，
[2167]
使用的设备：
[2168]
·
洗涤机：miele softtronic w2445
[2169]
·
水表和自动数据采集系统
[2170]
·
macbeth color eye分光光度计
[2171]
为了水硬度的制备和调节，需要以下成分：
[2172]
·
氯化钙(cacl2·
2h2o)
[2173]
·
氯化镁(mgcl2·
6h2o)
[2174]
·
碳酸氢钠(nahco3)
[2175]
压载物
[2176]
该压载物由干净的白色布料组成，没有由棉、聚酯或棉/聚酯制成的光学增白剂。该压载物的组成是基于重量的棉/聚酯比为65/35的不同物品的混合物。每次洗涤中的压载物重量、干燥度和物品组成必须相同。
[2177]
每次洗涤后，在85℃/15min的工业洗涤器中或在95℃的没有洗涤剂的洗涤(eu机器)中，将该压载物灭活。
[2178]
压载物实例：(标准eu压载物组成，总共3kg)
[2179]
·
3件t恤(100％棉)
[2180]
·
10件衬衫，短袖(55％棉45％聚酯)
[2181]
·
4件枕头套(35％棉，65％聚酯)，110x 75cm
[2182]
·
1件小床单，大小100x 75cm(100％棉)
[2183]
·
3条茶巾(100％棉)
[2184]
·
袜子(80％棉20％聚酯)作为平衡物
[2185]
洗涤条件
[2186]
·
温度：30℃。
[2187]
·
洗涤程序：正常棉洗涤，无预洗涤：“棉”。
[2188]
·
水位13-14l，带“加水”[2189]
·
水硬度：标准eu条件：15
°
dh，ca2 :mg2 :hco3＝4:1:7.5
[2190]
·
gh26甘露聚糖酶变体剂量：0,001-0,05ppm。
[2191]
进行全规模洗涤试验的详细步骤
[2192]
1.按研究计划中选择洗涤程序。
[2193]
2.将洗涤剂和gh26甘露聚糖酶变体置于洗涤滚筒中的“洗涤球”(液体和粉末洗涤剂两者)中。将其放在底部。
[2194]
3.将这些真实物品(t恤)和压载物置于该洗涤滚筒中。
[2195]
4.启动数字水表
[2196]
5.通过按下按钮“开始”启动洗涤器
[2197]
6.洗涤后，取出真实物品(t恤)和压载物，将真实物品放入干燥室。
[2198]
干燥程序
[2199]
将污渍放在托盘上或挂在线上，并且在室温下干燥。该室具有除湿机，每天24小时工作以保持该室干燥
[2200]
测量
[2201]
切下来自t恤(腋窝、前部、后部和边缘)的圆形小块布样并在迷你lom中用添加污垢的脏的洗涤剂进行洗涤。通过测量色差(l值)来评估小块布样，使用color eye(macbeth color eye 7000反射分光光度计)来测量色差。在入射光中没有uv的情况下进行测量，并从cie lab色空间中提取l值。
[2202]
小块布样
[2203]
小块布样包括食物污渍和技术污渍的组合。
[2204]
材料来源kc-h033巧克力冰淇淋与瓜尔胶cftc-s-43瓜尔胶cftc-s-73刺槐豆胶cft
[2205]
以上商业测试材料可从测试材料bv中心(center for testmaterials bv)，stoomloggerweg 11，3133kt，弗拉尔丁恩，荷兰获得。
[2206]
实例1：
[2207]
测定i：用于确定甘露聚糖酶活性的还原端测定
[2208]
为了估计在底物水解后的甘露糖产率，使用了由lever(1972),anal.biochem.[分
析生物化学]47:273-279开发的还原端测定。该测定是基于4-羟基苯甲酸酰肼，它在碱性条件下与糖的还原端反应。产物是强黄色阴离子，在410nm处吸收。
[2209]
方法
[2210]
在pahbah缓冲液中将4-羟基苯酰肼(pahbah)(西格玛公司(sigma)，h9882)稀释至15mg/ml的浓度。pahbah缓冲液含有：50g/l k-na-酒石酸盐(默克公司(merck)，1.08087)和20g/l氢氧化钠(西格玛公司，s8045)。就在使用前制成这一pahbah混合物。
[2211]
在96孔pcr板(赛默科技公司(thermo scientific))中混合70μl pahbah混合物和miliq水。添加来自水解实验的样品。样品和miliq总是达到150μl的总体积，但是样品的稀释度不同。用粘性pcr密封箔片(赛默科技公司)密封该板。在ptc-200热循环仪(mj研究公司(mj research))中将板在95℃孵育10min，冷却并且保持在10℃持续1min。将100μl样品转移至平底96孔微量滴定板(nunctm)中，并且在spectramax 190吸光度酶标仪(分子装置公司(molecular devices))上，在405nm处测量显色。将结果与甘露糖标准品进行比较，这些甘露糖标准品已经经历了与其进行比较的样品相同的处理和稀释。
[2212]
测定ii：α-淀粉酶活性的确定
[2213]
可以通过使用g7-pnp底物的方法确定α-淀粉酶活性。为4,6-亚乙基(g7)-对硝基苯基(g1)-α,d-麦芽庚糖苷的缩写的g7-pnp是一种可以由内切淀粉酶如α-淀粉酶切割的嵌段寡糖。切割之后，试剂盒中所包括的α-葡糖苷酶进一步消化水解底物以释放游离pnp分子，该分子具有黄颜色并且因而可通过可见分光光度法在λ＝405nm(400-420nm)处测量。含有g7-pnp底物和α-葡糖苷酶的试剂盒由罗氏公司/日立公司(roche/hitachi)制造(目录号11876473)。来自这个试剂盒的g7-pnp底物包含22mm 4,6-亚乙基-g7-pnp和52.4mm hepes(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-乙磺酸)，ph 7.0。α-葡糖苷酶试剂含有52.4mm hepes、87mm nacl、12.6mm mgcl2、0.075mm cacl2、≥4ku/l的α-葡糖苷酶。通过将1mlα-葡糖苷酶试剂与0.2ml g7-pnp底物混合，制成底物工作溶液。此底物工作溶液在使用之前立即制成。稀释缓冲液：50mm mops，0.05％(w/v)triton x100(聚乙二醇对-(1,1,3,3-四甲基丁基)-苯基醚(c
14h22
o(c2h4o)n(n＝9-10)))，1mm cacl2，ph 8.0。将待分析的淀粉酶样品稀释于稀释缓冲液中以确保稀释样品中的ph是7。将20μl稀释的酶样品转移至96孔微量滴定板并且添加80μl底物工作溶液来进行测定。将溶液混合并在室温预孵育1分钟并且在od 405nm经5分钟每20秒测量吸收。在给定的一组条件下，时间依赖性吸收曲线的斜率(吸光度/分钟)与所讨论的α-淀粉酶的比活性(活性/mg酶)成正比。淀粉酶样品应稀释至其中斜率为0.4吸光度单位/分钟以下的水平。
[2214]
测定iii：纤维素酶活性的确定
[2215]
使用azcl-he-纤维素(天青蓝染料共价交联的纤维素)测定来检测纤维素酶(内切葡聚糖酶)活性。将azcl-he-纤维素(75mg)悬浮于15ml洗涤剂(例如，标准洗涤剂a)中。向eppendorf管中的1ml该溶液中添加100μl酶(0.09mg酶蛋白/ml)，在预热的热混合器中以1250rpm振荡的同时在40℃下孵育15min，并以13200rpm旋转2min。将250μl的溶液转移至微量滴定板，并测量590nm处的样品吸光度。
[2216]
测定iv：dna酶活性的确定
[2217]
在具有甲基绿(bd公司，富兰克林湖，新泽西州，美国)的dna酶测试琼脂(根据供应商的手册制备)上确定dna酶活性。简言之，将21g琼脂溶解于500ml水中，并且然后在121℃
下高压灭菌15min。将高压灭菌的琼脂在水浴中温和至48℃，并且将20ml的琼脂倒入皮氏培养皿并允许在室温通过孵育过夜来固化。在固化的琼脂板上，添加5μl的酶溶液，并且dna酶活性被观察为斑点酶溶液周围的无色区域。
[2218]
测定v：dna酶活性的确定
[2219]
根据供应商手册，通过使用dnasealert
tm
试剂盒(11-02-01-04，idt整合dna技术有限公司(idt intergrated dnatechnologies))确定dna酶活性。简言之，将95μl dna酶样品与5μl底物在微量滴定板中混合，并立即使用来自bmg莱伯泰科公司(bmg labtech)的clariostar酶标仪(536nm激发、556nm发射)测量荧光。
[2220]
测定vi：β-葡聚糖酶(昆布多糖酶)活性的确定
[2221]
使用azcl-凝胶多糖和azcl-茯苓聚糖(来自麦格酶公司(megazyme)的天青蓝染料共价交联的β-葡聚糖)测定来检测内切葡聚糖酶活性(昆布多糖酶活性)。
[2222]
将azcl-凝胶多糖或azcl-茯苓聚糖(75mg)悬浮于15ml洗涤剂(标准洗涤剂a、x、或adw标准a)中。向eppendorf管中的1ml该溶液中添加100μl酶(0.033mg酶蛋白/毫升)，在预热的热混合器中以1250rpm振荡的同时在40℃下孵育15min，并以13200rpm旋转2min，用包含10μm cacl2的5％triton-x-100稀释5倍或10倍，并将250μl的溶液转移至微量滴定板，并测量590nm处的样品吸光度。
[2223]
测定vii：β-葡聚糖酶(地衣多糖酶或地衣聚糖酶)活性的确定：
[2224]
使用azcl-大麦β-葡聚糖(天青蓝染料共价交联的β-葡聚糖)测定来检测内切葡聚糖酶活性(地衣多糖酶或地衣聚糖酶活性)。
[2225]
将azcl-大麦β-葡聚糖(75mg)悬浮在15ml洗涤剂(标准洗涤剂a、x、z，含有和不含漂白剂和调节的ph，adw标准a)中。向eppendorf管中的1ml该溶液中添加10μl酶(0.33mg酶蛋白/升)，在预热的热混合器中以1250rpm振荡的同时在40℃下孵育15min，并以13200rpm旋转2min，用包含10μm cacl2的5％triton-x-100稀释5倍，并将250μl的溶液转移至微量滴定板，并测量590nm处的样品吸光度。
[2226]
测定viii：脂肪酶活性的确定
[2227]
将脂肪酶用缓冲液(10mm琥珀酸 2mm cacl2 0.02％brij 35，调节至ph 6.5)稀释至指定浓度。添加10ul的100ppm脂肪酶溶液到90ul的洗涤剂组合物中，搅拌5分钟，并且密封。将样品在4℃储存于洗涤剂d002(无应力)并且在47℃储存于洗涤剂d002中(具应力)。储存时间是335.5小时。在储存之后，将可能的冷凝液体通过离心收集。向100ul具应力或无应力样品中添加235ul的缓冲液(0.1m tris-hcl，9mm cacl2，0.0225％brij-30，ph 8.0 0.85％4-fbpa(31.5g/l))，这对应于3.35倍稀释。10分钟搅拌之后，将5ul样品等分试样进一步用相同的缓冲液稀释60倍。然后将一份的此脂肪酶稀释液与四份的0.5mm pnp棕榈酸盐、1mm氯化钙、100mm tris(ph 8.0)、6.5mm脱氧胆酸盐、1.4g/l aos混合，并且持续30分钟，分光光度法测量pnp发色团的释放。这被用于经由该反应的初始线性斜率确定活性。将残余活性计算为具应力样品相比于无应力样品的测量的速度比。基于四个重复计算残余活性的中值，并且将其通过伴随每个实验设定运行的脂肪酶变体参考来标准化。
[2228]
测定ix：果胶酶活性的确定
[2229]
用于果胶裂解酶活性的定量的微量滴定测定
[2230]
果胶裂解酶通过反式消除机制切割聚半乳糖醛酸。这意味着它为每次底物分裂留
下双c-c键。此键在235nm处吸收，从而允许通过测量该波长处的吸光度而直接检测可溶性聚半乳糖醛酸上的果胶裂解酶作用。
[2231]
将酶样品在测定缓冲液(100mm tris-hcl，0.68mm cacl2，ph 8.0)中稀释至5与100ng/ml之间的浓度。如果酶样品含有洗涤剂，则应相对于洗涤剂稀释至少1000倍。将100μl的酶缓冲液稀释液与100μl的底物(1％(w/v)聚半乳糖醛酸，例如来自西格玛公司的p-3850)混合，在测定缓冲液中搅拌至少15min并以2300g离心5min，上清液用于加热板中并在加热块(优选pcr机或具有等效精度和加热速度的设备)中加热至40℃持续10min。
[2232]
将100μl酶/底物溶液与100μl终止试剂(50mm h3po4)在uv-透明微量滴定板中混合。短暂且轻轻地振荡uv板，并在微量滴定光谱仪(例如，分子装置公司，spectramax 190)中测量235nm处的吸光度。通过从所有测量值中减去(在没有添加的酶时运行的)对照样品的吸光度，相对于背景吸光度校正吸光度读数。
[2233]
可替代地，果胶裂解酶的催化活性可以通过粘度测定，apsu确定。
[2234]
粘度测定，apsu
[2235]
apsu单位：apsu测定测量在没有添加的钙离子的情况下聚半乳糖醛酸溶液的粘度变化。将5％w/v聚半乳糖醛酸钠溶液(例如，西格玛公司p-1879)溶解于ph 10的0.1m甘氨酸缓冲液中。将4ml的此溶液在40℃预孵育5min。然后，添加250微升酶(或酶稀释液)，之后将反应物在混合器中以最高速度混合10sec，并在40℃或另一温度下孵育20min。
[2236]
测定x：蛋白酶活性的确定
[2237]
可以通过采用suc-aapf-pna作为底物的方法确定蛋白水解活性。suc-aapf-pna是n-琥珀酰基-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-对硝基苯胺的缩写并且是可以被内切蛋白酶切割的封闭肽。切割之后，释放游离pna分子，该分子具有黄颜色并且因而可通过可见分光光度法在波长405nm处测量。该suc-aapf-pna底物由巴亨公司(bachem)制造(目录号l1400，溶解于dmso中)。将待分析的蛋白酶样品稀释于残余活性缓冲液(100mm tris ph 8.6)中。通过将30μl的稀释的酶样品转移至96孔微量滴定板并添加70μl底物工作溶液(0.72mg/ml于100mm tris ph 8.6中)进行测定。将溶液在室温混合并且在od 405nm处经5分钟每20秒测量吸收。在给定的一组条件下，时间依赖性吸收曲线的斜率(吸光度/分钟)与所讨论的蛋白酶的活性成正比。将蛋白酶样品稀释至斜率为线性的水平。
[2238]
实例2：胡芦巴胶的制备
[2239]
根据修改的程序提取胡芦巴胶(brummer,y.等人food hydrocolloids[食品用亲水胶体]2003,17,229-236)。
[2240]
用70℃的温暖庚烷(880ml)提取124g在当地超市购买(但也可在线购买)的研磨的胡芦巴种子，持续60min，以去除非极性脂质。抽滤后，将残余物在60℃下用96％乙醇(760ml)提取150min，以去除极性脂质。抽滤后，将残余物悬浮在1,200g 60:40(w/w：720:480g)的乙醇:水混合物中，并在环境温度下搅拌60min以去除糖和盐。抽滤后，将残余物在环境温度下干燥过夜。
[2241]
实例3：甘露聚糖酶变体的底物特异性
[2242]
胡芦巴胶和瓜尔胶都是半乳甘露聚糖。胡芦巴胶是半乳甘露聚糖的最大替代物，并且如实例2中所述制备。瓜尔胶被替代较少，购自美国麦格酶公司。
[2243]
在ph 7.5的磷酸盐缓冲液中制备2.5mg/ml的半乳甘露聚糖溶液，并在30℃下用
0.25mg/l甘露聚糖酶或不加酶(空白)孵育30min。mannaway是可从诺维信公司(贝格斯维德(bagsvaerd)，丹麦)获得的可商购的甘露聚糖酶。然后如实例1所述测量还原端。
[2244]
通过减去空白样品(不添加酶，即纯半乳甘露聚糖溶液，在30℃下孵育30min)，计算出405nm处的光密度差(δod)。
[2245]
本文的甘露聚糖酶变体在水解胡芦巴胶和瓜尔胶方面优于商业产品mannaway(数据未示出)。
[2246]
实例4：位点饱和文库生成
[2247]
如别处所述(wo 2019/068715)对编码来自伊利诺斯州类芽孢杆菌的gh26甘露聚糖酶的基因(seq id no:1)进行克隆，表达并纯化。
[2248]
简言之，将甘露聚糖酶基因(seq id no:44)克隆进枯草芽孢杆菌表达盒中并且转化在缺乏碱性蛋白酶(apre)、中性蛋白酶(npre)、α-淀粉酶(amye)、果胶裂解酶(pel)、木聚糖酶(xyna)、小细胞外丝氨酸蛋白酶(epr)、细胞壁相关蛋白酶(wpra)、杆菌肽酶(bacillo peptidase，bpr)、金属蛋白酶(mpr)、小细胞外蛋白酶(vpr)、大细胞外蛋白酶(ispa)的表达宿主，枯草芽孢杆菌bw366-2prsa的衍生物中。通过称为“mega pcr”方法的方法在甘露聚糖酶基因中每个提到的位置生成位点饱和文库，在反向诱变引物中进行nns掺杂。nns是一种熟知的方法，其中“n”表示四个核苷酸碱基中的任何一个，而“s”表示核苷酸“c”和“g”。
[2249]
进行了两次pcr反应，其中1)是使用反向诱变引物和侧翼正向引物生成n-末端片段，并且2)是使用n-末端片段作为正向mega-引物和侧翼c-末端反向引物生成mega pcr产物以形成全长盒。然后将mega pcr产物转化进入芽孢杆菌属宿主中，其中位点特异性同源重组在该芽孢杆菌属染色体中发生。
[2250]
在含氯霉素的lb琼脂培养基中生长18-20小时以进行抗生素选择后，挑出转化的菌落并将其接种到水性生长培养基中，即tb-gly培养基中。生长1天后，汇集来自不同板的培养物并送至ngs进行测序。将基于测序结果的独特位置拾取(hit picked)并递送用于筛选测定。
[2251]
实例5：通过定点诱变生成变体
[2252]
将甘露聚糖酶的基因(seq id no:45)克隆进枯草芽孢杆菌表达盒中并且转化在如实例4中所述的表达宿主，枯草芽孢杆菌中。通过在特异性位点引入突变，进行基于mega pcr的定点诱变(sdm)以生成甘露聚糖酶基因的变体(如实例4中所述)。使用20-30个碱基对的单个诱变引物进行sdm，希望的氨基酸变化(取代/缺失/插入)位于具有足够侧翼残基(9-15个碱基对)的寡核苷酸中间。涉及两次pcr反应，1)使用侧翼n-末端诱变引物和正向侧翼引物生成n-末端片段，2)使用n-末端片段作为正向mega-引物和侧翼c-末端反向引物生成mega pcr产物以形成全长盒。然后将mega pcr产物转化进入芽孢杆菌属宿主中，其中位点特异性同源重组在该芽孢杆菌属染色体中发生。
[2253]
在具有适当抗生素的lb琼脂培养基中生长18-20小时后，挑出转化的菌落并将其接种到水性表达培养基中，并用于筛选测定。将来自筛选测定的命中进行培养物pcr，并送去进行序列确认。用于pcr反应的聚合酶是phusion dna聚合酶(获得自赛默科技公司，目录号：f530l)。
[2254]
实例6：洗涤剂稳定性的确定
[2255]
在如表4所示的条件下，测试了如上所述生成的变体在ph 8下的洗涤剂稳定性。通
过将变体在洗涤剂中孵育不同的时间段和温度(取决于野生型(wt)或主链的稳定性)，并与在4℃孵育相同时间段的对照板上的活性进行比较来进行稳定性测试。
[2256]
通过使用来自麦格酶公司的不溶性偶氮-角豆-半乳甘露聚糖底物，使用甘露聚糖酶测定来测量残余活性。将底物与酶在30℃下一起孵育30min，伴随以800rpm振荡。此后，将反应混合物保持静态10min，以允许不溶性底物沉降。通过读取在590nm处上清液的光密度来测量酶活性。通过取得应力响应与无应力响应的比率并以％ra表示来计算残余活性，然后将其用于通过与野生型的残余活性进行比较来计算改善因子。
[2257]
表4.具有改善的半衰期改善因子(hif)(其测量为与野生型甘露聚糖酶(seq id no:1)相比的改善的稳定性)的本发明的变体
[2258]
[2259]
[2260]
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[2262]
[2263]
[2264]
[2265]
[2266]
[2267]
[2268]
[2269][2270]
实例7：甘露聚糖酶变体的蛋白酶稳定性
[2271]
在如表5-6所示的条件下，测试了如上所述生成的变体在ph 8下的洗涤剂稳定性。向标准洗涤剂中添加seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，浓度为0.8％(w/w)。
[2272]
通过将变体在洗涤剂中孵育不同的时间段和温度(取决于野生型(wt)或主链的稳定性)，并与在4℃孵育相同时间段的对照板上的活性进行比较来进行稳定性测试。
[2273]
通过使用来自麦格酶公司的不溶性偶氮-角豆-半乳甘露聚糖底物，使用甘露聚糖酶测定来测量残余活性。将底物与酶在30℃下一起孵育30min，伴随以800rpm振荡。此后，将反应混合物保持静态10min，以允许不溶性底物沉降。通过读取在590nm处上清液的光密度
来测量酶活性。通过取得应力响应与无应力响应的比率并以％ra表示来计算残余活性，然后将其用于通过与野生型的残余活性进行比较来计算改善因子。
[2274]
表5.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2275]
[2276]
[2277]
[2278]
[2279]
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[2340]
[2341]
[2342]
[2343][2344]
表6.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2345][2346][2347]
表7.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以
下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2348][2349][2350]
表8.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以
下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2351][2352]
表9.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2353]
[2354]
[2355]
[2356][2357]
表10.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2358]
[2359]
[2360][2361][2362]
表11.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以
下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2363][2364]
表12.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2365]
[2366][2367]
表13.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2368]
[2369][2370]
表14.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2371]
[2372][2373]
表15.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2374]
[2375]
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[2500]
[2501][2502]
表16.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：y161a r164s a188p，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2503]
[2504][2505]
表17.在ph 8下的蛋白酶稳定性。该蛋白酶是seq id no:14的变体，该变体具有以下修饰：s9e n43r n76d v205i q206l y209w s259d n261w l262e，以0.8％(w/w)的浓度添加。
[2506]
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实例8：使用terg-o-tometer洗涤试验的甘露聚糖酶变体的洗涤性能
[2548]
使用如上所述的tom洗涤试验方法评估变体的洗涤性能，并进行如下所说明的任何调整。使用单独的gh26甘露聚糖酶变体进行洗涤试验，将其与gh5甘露聚糖酶(seq id no:38，具有突变a30t、y93q、s95d、d118k、a136p、d139r、n200t、s202r、r210g、w260f、n283h、l288i、l294p、s295v)进行比较和/或组合。
[2549]
总酶性能以单个δrem的平均值计算，并示出在下表18中。
[2550]
表18.tom洗涤测定结果
[2551]
[2552]
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本文描述和要求保护的本发明不限于本文披露的特定方面的范围，因为这些方面
旨在作为本发明几个方面的说明。任何等同方面旨在处于本发明的范围之内。实际上，除了本文所示和描述的那些之外，本发明的各种修改因前述说明而对本领域的技术人员变得清楚。此类修改也旨在落入所附权利要求的范围内。在冲突的情况下，以包括定义的本披露为准。