三氮脒在制备治疗肝纤维化药物中的应用的制作方法

1.本发明属于医药技术领域，具体涉及三氮脒在制备治疗肝纤维化药物中的应用。


背景技术：

2.当肝脏受到损伤时，炎症因子释放，激活肝星状细胞，使其活化为成纤维细胞并大量增殖，同时分泌细胞外基质(extracellular matrix,ecm)如胶原蛋白、纤连蛋白等共同启动愈伤修复反应。然而，当损伤严重或反复发生时，就会导致成纤维细胞持续、过度分泌ecm成分，这些成分因得不到及时降解而不断累积，使组织结构破坏，器官功能障碍甚至衰竭。这种现象发生在肝脏中即为肝纤维化，继续发展即成为肝硬化，甚至肝癌。
3.除了大部分丙肝患者可以治愈以外，其他肝病患者均难以治愈。这些患者均需要用药物控制病情发展，目前世界上尚无有效的药物来治疗肝纤维化，因此发现新的治疗肝纤维化的药物将产生极大的经济效益和社会效益。
4.三氮脒为一种用于治疗动物锥虫病的药物，近年来的研究表明它具有调节血管紧张素转换酶2(ace2)活性的作用，有研究发现三氮脒能通过激活ace2 /ang-(1-7)/mas轴来实现抑制细胞的炎症反应，同时具有增加抗氧化剂及抗炎因子的水平等作用。所述三氮脒的结构式为：
[0005][0006]
cas号：536-71-0，分子式：c
14h15
n7，分子量：281.316。


技术实现要素：

[0007]
本发明的目的是提供三氮脒的新用途，即在制备治疗肝纤维化药物中的新应用。
[0008]
本发明提供了三氮脒在制备治疗肝纤维化药物中的应用。研究发现，三氮脒能显著降低炎症相关因子水平，同时纤维化相关蛋白如胶原、α-sma表达量也随之降低，表明其具有治疗肝纤维化的作用。
[0009]
所述治疗肝纤维化药物为血管紧张素转换酶2(ace2)活性调节剂。它可以通过该通路调节机体炎症水平，进而达到治疗肝纤维化的效果。
[0010]
所述治疗肝纤维化药物三氮脒的给药剂量为1～50mg/kg，优选给药剂量为5～ 30mg/kg。
[0011]
所述治疗肝纤维化药物剂型包括口服剂型和注射给药剂型。
[0012]
本发明的有益效果如下：
[0013]
本发明提供了三氮脒在动物体内降低肝纤维化的应用，三氮脒能够降低机体的炎症水平，延缓或抑制肝纤维化的进程，具有治疗肝纤维化的作用，可用于制备治疗肝纤维化药物，促进了治疗肝纤维化药物的研究及开发，对解决肝纤维化难题具有重大意义。
附图说明
[0014]
图1是实施例1中24h和96h时血清中谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast) 浓度变化柱形图。
[0015]
图2是实施例2中注射给药4周后血清中炎性因子浓度变化柱形图。
[0016]
图3是实施例2中肝组织切片masson染色结果。
[0017]
图4是实施例3中口服给药4周后肝组织切片a-sma蛋白免疫组化结果。
[0018]
图5是实施例3中口服给药4周后肝组织切片胶原蛋白免疫组化结果。
具体实施方式
[0019]
为使本发明的技术方案、目的及优势更加清楚的明白，下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，该领域的技术人员可以根据上述本发明内容对发明做出一些非本质的改进和调整。
[0020]
实施例1
[0021]
注射三氮脒对急性肝炎作用
[0022]
将24只雄性c57bl/6小鼠(6～8周龄，20g左右)随机分为三组，分别为空白对照组、模型组和给药组，每组8只。实验中采用1mg/kg三氮脒作为给药剂量，以注射用水溶解三氮脒制备成浓度为0.4mg/ml三氮脒溶液，以0.025ml/10g的剂量注入小鼠臀肌内。按照下表安排进行操作：
[0023][0024]
参照检测试剂盒说明检测血清中谷谷丙转氨酶(alt)和谷草转氨酶(ast) 浓度变化，如图1所示，在给予7％ccl4造模后，血清中ast和alt的浓度较空白对照组显著升高，表明急性肝炎模型造模成功，而给药组两者浓度均有所下降，与模型组比较差异显著，表明三氮脒对急性肝炎有一定的治疗作用。96h后的血清检测结果趋势与24h一致。
[0025]
实施例2
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注射三氮脒对长期肝纤维化小鼠模型治疗作用
[0027]
将雄性c57bl/6小鼠(6～8周龄，20g左右)随机分为3组，分别为空白组、模型组、肌肉注射组，于第一周内分三次腹腔注射5％ccl
4-橄榄油溶液(剂量为 0.1ml/kg)进行造模，第二周起各组在持续造模的同时，分别开始给药，每周三次，其中肌肉注射组给予5mg/kg三氮脒(以注射用水溶解三氮脒制备成浓度为2mg/ml三氮脒溶液，以0.025ml/10g的剂量注入小鼠臀肌内)，模型组及空白组以 0.025ml/10g的剂量注射生理盐水，持续给药四周后，处死小鼠血清进行炎症检测，同时取肝组织切片分别进行he和masson染色。验证炎因子检测结果如图2所示，血清中的il1β、tnf-α、il6、il17在造模后较正常组均呈现上升趋势，而在持续给予三氮脒四周后，各因子水平均有所下降。表明三氮脒可以降低机体体内炎症水平，有潜在的治疗肝纤维化的作用。病理切片结果见图3，各组肝组织切片masson 染色结果，该染料可以特异性与胶原蛋白结合而使其显蓝色，从肝组织masson染色结果来看，对照组肝组织无明显的胶原沉积，而模型组胶原沉积显著增强，三氮脒给药组较模型组胶原沉积明显减少，表明三氮脒可以显著降低胶原沉积，对纤维化有潜在的治疗作用。
[0028]
实施例3
[0029]
口服三氮脒对长期肝纤维化小鼠模型治疗作用
[0030]
将雄性c57bl/6小鼠(6～8周龄，20g左右)随机分为6组，分别为空白组、模型组、口服给药低剂量组(5mg/kg三氮脒)，口服给药中剂量组(30mg/kg三氮脒)，口服给药高剂量组(50mg/kg三氮脒)及阳性药组(100mg/kg水飞蓟素混悬液)，溶液配制方法如下：
[0031]
1、5mg/kg三氮脒：临用前，将三氮脒以注射用水配制成浓度为0.5mg/ml三氮脒溶液，以0.1ml/10g灌胃到小鼠胃中。
[0032]
2、30mg/kg三氮脒：临用前，将三氮脒以注射用水配制成浓度为3mg/ml三氮脒溶液，以0.1ml/10g灌胃到小鼠胃中。
[0033]
3、50mg/kg三氮脒：临用前，将三氮脒以注射用水配制成浓度为5mg/ml三氮脒溶液，以0.1ml/10g灌胃到小鼠胃中。
[0034]
4、水飞蓟素混悬液配制(100mg/kg)：先配制0.5％羧甲基纤维素钠溶液，称取5g羧甲基纤维素钠粉末加入到1000ml水中，50℃加热搅拌至透明状，即成0.5％羧甲基纤维素钠溶液，静置3天取上清液溶解水飞蓟素，制备成浓度为10mg/ml水飞蓟素混悬液，以0.1ml/10g灌胃到小鼠胃中。
[0035]
空白组每周一、三、五，三次腹腔注射橄榄油，模型组、给药组、阳性药组腹腔注射5％ccl
4-橄榄油溶液，剂量均为0.1ml/kg；造模一周后，各组分别开始给药，给药组每周连续三次进行口服给药(灌胃)三氮脒溶液，阳性药组以0.1ml/10g每天灌胃水飞蓟素混悬液，空白组与模型组给予等体积生理盐水灌胃；给药四周后，处死所有小鼠，取血清、肝脏组织进行免疫组化检测。结果显示，模型组肝脏组织中a-sma蛋白(图4中颜色较深部分)较空白组表达量明显增多，呈强阳性，而口服给药各组及阳性药组肝脏组织中的a-sma蛋白表达量明显降低(图4)；col1 的免疫组化结果也呈现同样的结果(图5)。表明口服三氮脒可以降低肝脏纤维化过程中的主要蛋白a-sma及胶原蛋白的表达，对于肝纤维化有潜在的治疗作用。