一种包含蚕茧壳的中药组合物的质量控制方法及其应用与流程

1.本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种包含蚕茧壳的中药组合物的质量控制方法及其应用。


背景技术：

2.慢性肾脏病(chronic kidneydisease，ckd)威胁人类健康的重大疾病。目前并没有很好的办法完全治疗各种慢性肾脏病导致的蛋白尿。而中医认为肾不藏精，精微下注，脾虚不摄精，清气下陷，浊气上泛，肺不主气等，是目前中医界对蛋白尿的公认机制。蛋白尿的发病机理为本虚标实，以本虚为主，兼有外感风邪、湿热及瘀血阻滞等，且可相互影响。而中医药在治疗蛋白尿方面具有标本兼治、改善症状、副作用较小及不易复发等优势。
3.本项目根据中医理论，拟定的蚕茧壳、玉米须、黄芪和川芎组成的中药复方制剂具有补肾活血、清化湿瘀作用，对消除水肿，缓解肾部疾病有明显效果，特别适应于各种慢性肾炎导致的蛋白尿。方中黄芪益气固表，川芎活血祛瘀，玉米须利尿消肿，蚕茧壳益肾填精。整方联用能补肾活血、清化湿瘀，对临床蛋白尿有良好的疗效。本方是基于中医理论指导的复方，是一个有机的整体，其疗效的发挥也不是一个成分或某一味中药所能完全替代的，并且实验研究表明，本方作为一个整体时其疗效最佳，比单味药使用效果有显著的联合增效作用。其中黄芪为《中国药典》(2015 版)所记载的豆科植物黄芪astragalus membranaceus(fisch.)bge.var. mongholicus(bge.)hsiao或膜黄芪astragalus membranaceus(fisch.)bge. 的干燥根。川芎为《中国药典》(2015版)所记载的伞形科植物川芎 (学名：ligusticum chuanxiong hort)的干燥根茎。玉米须是为禾本科植物玉蜀黍(zea mays l.)的花柱和柱头。许多中医药典籍中都有玉米须的记载，玉米须味甘、淡，性平。蚕茧壳为蚕蛾科昆虫家蚕蝶(bombyxmori l.)的茧壳，别名：蚕衣、茧黄、绵蚕、蚕茧壳。味甘、性温。具有止血、止渴和解毒疗疮的作用。
4.中药复方质量控制的研究是中医药现代化和国际化的关键。有效解决中药复方制剂的质量控制问题，对其产业化的关键环节。但目前未见如本技术所述的包含蚕茧壳的中药组合物的质量控制研究，也未见同时测定该组合物中的阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸的方法。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供一种包含蚕茧壳的中药复方的检测方法，包括如下步骤：
6.取中药复方供试品溶液和对照品溶液进行检测，其中该中药复方包括蚕茧壳、玉米须、黄芪和川芎，该对照品为阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸，
7.该检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，流速为0.6～1.5ml/min，柱温为 30～50℃，检测波长为200～360nm；
8.其中，检测该黄芪甲苷的梯度洗脱程序为：0～25min，15％～25％a； 25～30min，
25％～45％a，
9.其中，检测该丝氨酸和该甘氨酸的梯度洗脱程序为：0～10min， 5％～10％a；10～15min，10％～20％a；15～30min，20％～23％a；30～ 35min，23％～55％a，
10.其中，检测该阿魏酸的洗脱程序为：0～40min，15％a；
11.根据检测结果，获得该中药复方的成分信息，或者成分信息和含量信息。
12.进一步地，该信息为根据所记录的该中药复方供试品溶液的色谱图和该对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，按照外标法计算该中药复方中以下成分中一种或多种的含量：阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸。
13.进一步地，该中药复方供试品溶液的制备方法包括：(1)制备中药复方干膏粉；以及(2)将该中药复方干膏粉分别制备成用于丝氨酸和甘氨酸检测的衍生化的供试品溶液、用于阿魏酸检测的供试品溶液和/或用于黄芪甲苷检测的供试品溶液。
14.进一步地，该中药复方干膏粉的制备方法包括以下步骤：
15.(1)按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳25～35份、玉米须25～35份、黄芪6～12份和川芎12～18份；
16.(2)称取上述重量份的黄芪、川芎和玉米须，加水加热提取，过滤，得到第一滤液；
17.(3)称取上述重量份的蚕茧壳，加水加热提取，过滤，得到第二滤液；
18.(4)将该第一滤液和该第二滤液合并，浓缩，得到该中药组合物；以及
19.(5)将该中药组合物与一种或多种药学上可接受的辅料混合，干燥，粉碎过筛，得到该中药复方干膏粉。
20.进一步地，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤(2)和/或步骤 (3)进一步包括该原料药加水浸泡的步骤。
21.进一步地，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为30～180 min。
22.进一步地，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为30～100 min。
23.进一步地，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为90～100 min。
24.进一步地，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为约90min。
25.进一步地，该蚕茧壳加水浸泡的时间为30～180min。
26.进一步地，该蚕茧壳加水浸泡的时间为30～90min。
27.进一步地，该蚕茧壳加水浸泡的时间为60～90min。
28.进一步地，该蚕茧壳加水浸泡的时间为约60min。
29.进一步地，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳28～35 份、玉米须28～35份、黄芪8～12份和川芎13～18份。
30.进一步地，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳28.5～31.5 份、玉米须28.5～31.5份、黄芪8.55～9.45份和川芎14.25～15.75份。
31.进一步地，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳约30 份、玉米须约30份、黄芪约9份和川芎约15份。
32.进一步地，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤(2)包括如下的[1] ～[6]项中的任意一项或者多项：
[0033]
[1]该水为蒸馏水或去离子水，优选地该水为冷水，更优选地该冷水没过原料药表面2～5cm；
[0034]
[2]该加热提取的操作重复2～4次，例如2次；
[0035]
[3]该加热为武火加热至沸，文火保持微沸；
[0036]
[4]该水的用量为1～80倍量(l/kg)，优选为5～30倍量，更优选为8～14倍量，例如约12倍量；
[0037]
[5]该加热提取的时间为15～180min，优选为30～120min，例如约 90min；
[0038]
[6]该过滤为100～300目滤布单层过滤，例如300目滤布单层过滤。
[0039]
进一步地，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤(3)包括如下的[1] ～[5]项中的任意一项或者多项：
[0040]
[1]该水为蒸馏水或去离子水，优选地该水为冷水，更优选地该冷水没过原料药表面2～5cm；
[0041]
[2]该加热提取的操作重复2～4次，例如3次；
[0042]
[3]该水的用量为1～80倍量(l/kg)，优选为5～30倍量，更优选为12～16倍量，例如约16倍量；
[0043]
[4]该加热提取的时间为15～180min，优选为30～120min，例如约 60min；
[0044]
[5]该过滤为100～300目滤布单层过滤，例如100目滤布单层过滤。
[0045]
进一步地，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤(4)包括如下的[1] ～[3]项中的任意一项或者多项：
[0046]
[1]该浓缩为减压浓缩；
[0047]
[2]该浓缩的温度为60～90℃，例如约80℃；
[0048]
[3]该浓缩之后的浓缩液的相对密度为1.02～1.35g/ml，例如1.02～ 1.05g/ml。
[0049]
进一步地，在该中药复方干膏粉的制备方法的步骤(5)中，该干燥为喷雾干燥、减压真空干燥或真空冷冻干燥。
[0050]
进一步地，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为60～120℃，进风温度为100～180℃，进样速度为5～25rpm，雾化压力为0.5～3mpa，通针压力为0.5～3mp。
[0051]
进一步地，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为85.5～94.5℃，进风温度为152～168℃，进样速度为19～21rpm，雾化压力为1.9～2.1 mpa，通针压力为1.9～2.1mpa。
[0052]
进一步地，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为约90℃，进风温度为约160℃，进样速度为约20rpm，雾化压力为约2mpa，通针压力为约2mpa。
[0053]
进一步地，该混合的步骤包括将该浓缩之后的浓缩液的重量换算为理论干膏粉的重量，再按该辅料与该理论干膏粉的重量比为0.05～0.25∶1加入该辅料，充分溶解，混合均匀。
[0054]
进一步地，用于丝氨酸和甘氨酸检测的衍生化的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的3～8mol/l盐酸溶液，120～200℃水解0.5～1.5小时，放冷，蒸干，加入0.1～0.5mol/l盐酸溶液溶解，再加入一定量的0.1～0.5mol/l异硫氰酸苯酯的乙腈溶液和 1～5mol/l三乙胺的乙腈溶液，摇匀，室温放置，加40～60％乙腈至刻度，摇匀，加入一定量的正己烷，振摇，放置，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
[0055]
进一步地，用于阿魏酸检测的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的50～80％甲醇，在功率300～800w和频率30～60khz下进行超声处理20～60分钟，放冷，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0056]
进一步地，用于黄芪甲苷检测的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的含1～10％浓氨试液的60～90％甲醇溶液，密塞，称定重量，加热回流1～3小时，放冷，再称定重量，用含 1～10％浓氨试液的60～90％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取一定量的续滤液，蒸干，残渣用60～90％甲醇溶解，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0057]
进一步地，该丝氨酸和甘氨酸的衍生化的对照品溶液的制备方法包括：称取适量的丝氨酸和甘氨酸；添加0.1～0.5mol/l盐酸溶液制成含各成分浓度为10～200μg/ml的混合对照品溶液；吸取适量的该混合对照品溶液，加入一定量的0.1～0.5mol/l异硫氰酸苯酯的乙腈溶液和1～5 mol/l三乙胺的乙腈溶液，摇匀，室温放置，加40～60％乙腈至刻度，摇匀，加入一定量的正己烷，振摇，放置，取下层溶液，滤过，取续滤液，得到该丝氨酸和甘氨酸的衍生化的对照品溶液。
[0058]
进一步地，该阿魏酸和/或该黄芪甲苷的对照品溶液的制备方法包括：称取适量的阿魏酸和/或黄芪甲苷；以及添加体积百分比浓度为10％～ 100％的甲醇水溶液制成含各成分浓度为10～200μg/ml的该阿魏酸和/或该黄芪甲苷的对照品溶液。
[0059]
进一步地，该流速为0.8～1.2ml/min。
[0060]
进一步地，该柱温为30～35℃。
[0061]
进一步地，该检测波长为200～330nm。
[0062]
进一步地，该检测的进样量为5～20μl。
[0063]
进一步地，该中药复方供试品溶液和该对照品溶液在该检测之前用 0.22μm或0.45μm微孔滤膜过滤。
[0064]
进一步地，该色谱柱的柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5 μm。
[0065]
进一步地，该色谱柱为agilent 5tc-c18(2)色谱柱、waters symmetryc18色谱柱或agilent sb c18色谱柱。
[0066]
进一步地，该色谱柱为agilent 5tc-c18(2)色谱柱。
[0067]
进一步地，该流动相a选自以下的一种或多种：甲醇、乙腈、甲醇﹕乙腈(10﹕90)、甲醇﹕乙腈(20﹕80)、甲醇﹕乙腈(30﹕70)、甲醇﹕乙腈 (40﹕60)、甲醇﹕乙腈(50﹕50)、甲醇﹕乙腈(60﹕40)、甲醇﹕乙腈 (70﹕30)、甲醇﹕乙腈(80﹕20)、甲醇﹕乙腈(90﹕10)。
[0068]
进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的弱酸及其盐、弱碱及其盐中的一种或多种。
[0069]
进一步地，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的甲酸、乙酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸和甲酸铵、乙酸和乙酸钠、乙酸和乙酸铵、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和柠檬酸、柠檬酸和柠檬酸钠、甘氨酸和盐酸、或者邻苯二甲酸和盐酸。
[0070]
进一步地，该酸水溶液为0.05％～0.4％的酸水溶液。
[0071]
进一步地，该酸水溶液为0.05％～0.2％的磷酸或甲酸水溶液。
[0072]
进一步地，该酸水溶液为0.05％～0.1％的磷酸或甲酸水溶液。
[0073]
进一步地，该阿魏酸的对照品溶液的浓度为约20μg/ml。
[0074]
进一步地，该黄芪甲苷的对照品溶液的浓度为约20μg/ml。
[0075]
进一步地，该丝氨酸的对照品溶液的浓度为约130μg/ml。
[0076]
进一步地，该甘氨酸的对照品溶液的浓度为约50μg/ml。
[0077]
根据本发明的另一个方面，提供了一种根据上述检测方法在包含蚕茧壳的中药复方的质量检测和/或质量评价和/或质量控制中的用途。
[0078]
本发明的有益效果：
[0079]
(1)本发明建立了包含蚕茧壳的中药组合物的质量控制方法及其应用中阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸的方法含量测定的方法，并通过对四个指标成分的检测方法进行系统适应性、专属性、线性、精密度、重复性、稳定性的方法学验证，以确定四种指标性成分检测方法的可行性，结果表明该方法具备良好的线性关系，精密度高，稳定性强，重复性好，加样回收率高，简单易行，特别适用于该组合物的产业化中的质量控制。
[0080]
(2)本发明检测方法所涉及的参数是在发明人研究经验的基础上得出的，该检测条件下实现了优异的检测效果。
[0081]
(3)本发明为预防和/或治疗各种慢性肾脏病导致的蛋白尿的复方质量标准的制定提供了依据。
附图说明
[0082]
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。
[0083]
图1为一种包含蚕茧壳的中药复方中的丝氨酸和甘氨酸含量测定色谱图。其中a空白溶剂色谱图；b丝氨酸和甘氨酸对照品溶液色谱图(保留时间21.827min为丝氨酸色谱峰；22.393为甘氨酸色谱峰)；c cjk-yx阴性对照供试品溶液色谱图；d用于丝氨酸和甘氨酸检测的衍生化的供试品溶液色谱图(保留时间21.738min为丝氨酸色谱峰； 22.369为甘氨酸色谱峰)。
[0084]
图2为一种包含蚕茧壳的中药复方中的阿魏酸含量测定色谱图。其中a空白溶剂色谱图；b阿魏酸对照品溶液色谱图(保留时间 22.917min为阿魏酸色谱峰)；c cx-yx阴性对照供试品溶液色谱图；d用于阿魏酸检测的供试品溶液色谱图(保留时间22.718min为阿魏酸色谱峰)。
[0085]
图3为一种包含蚕茧壳的中药复方中的黄芪甲苷含量测定色谱图。其中a空白溶剂色谱图；b黄芪甲苷对照品溶液色谱图(保留时间 22.293min为黄芪甲苷色谱峰)；c hq-yx阴性对照供试品溶液色谱图；d用于黄芪甲苷检测的供试品溶液色谱图(保留时间22.310min 为黄芪甲苷色谱峰)。
具体实施方式
[0086]
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0087]
说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“所述”包括复数指示
物，除非上下文另有明确规定。
[0088]
除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何方法、条件、物质或材料，但本文描述了优选的方法、条件物质或材料。
[0089]
在本发明中，术语“包括”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
[0090]
正如背景技术部分所描述的，尚未见文献报道对包含蚕茧壳的中药复方的化学成分进行全面地分析的含量分析方法。为了解决上述问题，本发明提供了一种包含蚕茧壳的中药复方的检测方法，其包括如下步骤：
[0091]
取中药复方供试品溶液和对照品溶液进行检测，其中该中药复方包括蚕茧壳、玉米须、黄芪和川芎，该对照品为阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸，
[0092]
该检测的色谱条件为：采用填料为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱，流动相a选自乙腈、甲醇和四氢呋喃中的一种或多种，流动相b为酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液，流速为0.6～1.5ml/min，柱温为 30～50℃，检测波长为200～360nm；
[0093]
其中，检测该黄芪甲苷的梯度洗脱程序为：0～25min，15％～25％a； 25～30min，25％～45％a，
[0094]
其中，检测该丝氨酸和该甘氨酸的梯度洗脱程序为：0～10min， 5％～10％a；10～15min，10％～20％a；15～30min，20％～23％a；30～ 35min，23％～55％a，
[0095]
其中，检测该阿魏酸的洗脱程序为：0～40min，15％a；
[0096]
根据检测结果，获得该中药复方的成分信息，或者成分信息和含量信息。
[0097]
在本发明中，比例、当量、浓度、波长、温度、流速、重量份或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“200～360”时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数，并且在上述所公开的范围内均能实现本发明的效果。
[0098]
在一种优选的实施方式中，该信息为根据所记录的该中药复方供试品溶液的色谱图和该对照品溶液的色谱图中的相应峰面积，按照外标法计算该中药复方中以下成分中一种或多种的含量：阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸。
[0099]
在一种优选的实施方式中，该中药复方供试品溶液的制备方法包括：(1)制备中药复方干膏粉；以及(2)将该中药复方干膏粉分别制备成用于丝氨酸和甘氨酸检测的衍生化的供试品溶液、用于阿魏酸检测的供试品溶液和/或用于黄芪甲苷检测的供试品溶液。
[0100]
在一种优选的实施方式中，该中药复方干膏粉的制备方法包括以下步骤：
[0101]
(1)按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳25～35份、玉米须25～35份、黄芪6～12份和川芎12～18份；
[0102]
(2)称取上述重量份的黄芪、川芎和玉米须，加水加热提取，过滤，得到第一滤液；
[0103]
(3)称取上述重量份的蚕茧壳，加水加热提取，过滤，得到第二滤液；
[0104]
(4)将该第一滤液和该第二滤液合并，浓缩，得到该中药组合物；以及
[0105]
(5)将该中药组合物与一种或多种药学上可接受的辅料混合，干燥，粉碎过筛，得到该中药复方干膏粉。
[0106]
在一种优选的实施方式中，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤 (2)和/或步骤(3)进一步包括该原料药加水浸泡的步骤。
[0107]
在一种优选的实施方式中，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为30～180min。
[0108]
在一种优选的实施方式中，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为30～100min。
[0109]
在一种优选的实施方式中，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为90～100min。
[0110]
在一种优选的实施方式中，该黄芪、该川芎和该玉米须加水浸泡的时间为约90min。
[0111]
在一种优选的实施方式中，该蚕茧壳加水浸泡的时间为30～180 min。
[0112]
在一种优选的实施方式中，该蚕茧壳加水浸泡的时间为30～90min。
[0113]
在一种优选的实施方式中，该蚕茧壳加水浸泡的时间为60～90min。
[0114]
在一种优选的实施方式中，该蚕茧壳加水浸泡的时间为约60min。
[0115]
在本发明中，“约”是指一个特定值的
±
5％范围的值。例如，“约90”包括90的
±
5％，即从85.5到94.5；“约60”包括60的
±
5％，即从57到 63。
[0116]
在一种优选的实施方式中，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳28～35份、玉米须28～35份、黄芪8～12份和川芎13～18份。
[0117]
在一种优选的实施方式中，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳28.5～31.5份、玉米须28.5～31.5份、黄芪8.55～9.45份和川芎 14.25～15.75份。
[0118]
在一种优选的实施方式中，按照以下重量份配比分别称取各原料药：蚕茧壳约30份、玉米须约30份、黄芪约9份和川芎约15份。
[0119]
在本发明中，“约”是指一个特定值的
±
5％范围的值。例如，“约30”包括30的
±
5％，即从28.5到31.5；“约9”包括9的
±
5％，即从8.55到 9.45；“约15”包括15的
±
5％，即从14.25到15.75。
[0120]
在一种优选的实施方式中，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤 (2)包括如下的[1]～[6]项中的任意一项或者多项：
[0121]
[1]该水为蒸馏水或去离子水，优选地该水为冷水，更优选地该冷水没过原料药表面2～5cm；
[0122]
[2]该加热提取的操作重复2～4次，例如2次；
[0123]
[3]该加热为武火加热至沸，文火保持微沸；
[0124]
[4]该水的用量为1～80倍量(l/kg)，优选为5～30倍量，更优选为8～14倍量，例如约12倍量；
[0125]
[5]该加热提取的时间为15～180min，优选为30～120min，例如约 90min；
[0126]
[6]该过滤为100～300目滤布单层过滤，例如300目滤布单层过滤。
[0127]
在一种优选的实施方式中，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤 (3)包括如下的[1]～[5]项中的任意一项或者多项：
[0128]
[1]该水为蒸馏水或去离子水，优选地该水为冷水，更优选地该冷水没过原料药表面2～5cm；
[0129]
[2]该加热提取的操作重复2～4次，例如3次；
[0130]
[3]该水的用量为1～80倍量(l/kg)，优选为5～30倍量，更优选为12～16倍量，例如约16倍量；
[0131]
[4]该加热提取的时间为15～180min，优选为30～120min，例如约 60min；
[0132]
[5]该过滤为100～300目滤布单层过滤，例如100目滤布单层过滤。
[0133]
在一种优选的实施方式中，该中药复方干膏粉的制备方法的步骤 (4)包括如下的[1]～[3]项中的任意一项或者多项：
[0134]
[1]该浓缩为减压浓缩；
[0135]
[2]该浓缩的温度为60～90℃，例如约80℃；
[0136]
[3]该浓缩之后的浓缩液的相对密度为1.02～1.35g/ml，例如1.02～ 1.05g/ml。
[0137]
在一种优选的实施方式中，在该中药复方干膏粉的制备方法的步骤 (5)中，该干燥为喷雾干燥、减压真空干燥或真空冷冻干燥。
[0138]
在一种优选的实施方式中，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为 60～120℃，进风温度为100～180℃，进样速度为5～25rpm，雾化压力为0.5～3mpa，通针压力为0.5～3mp。
[0139]
在一种优选的实施方式中，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为 85.5～94.5℃，进风温度为152～168℃，进样速度为19～21rpm，雾化压力为1.9～2.1mpa，通针压力为1.9～2.1mpa。
[0140]
在一种优选的实施方式中，该喷雾干燥的条件为：料液预热温度为约90℃，进风温度为约160℃，进样速度为约20rpm，雾化压力为约2 mpa，通针压力为约2mpa。
[0141]
在一种优选的实施方式中，该混合的步骤包括将该浓缩之后的浓缩液的重量换算为理论干膏粉的重量，再按该辅料与该理论干膏粉的重量比为 0.05～0.25∶1加入该辅料，充分溶解，混合均匀。
[0142]
在一种优选的实施方式中，用于丝氨酸和甘氨酸检测的衍生化的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的3～ 8mol/l盐酸溶液，120～200℃水解0.5～1.5小时，放冷，蒸干，加入0.1 ～0.5mol/l盐酸溶液溶解，再加入一定量的0.1～0.5mol/l异硫氰酸苯酯的乙腈溶液和1～5mol/l三乙胺的乙腈溶液，摇匀，室温放置，加40～ 60％乙腈至刻度，摇匀，加入一定量的正己烷，振摇，放置，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
[0143]
在一种优选的实施方式中，用于阿魏酸检测的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的50～80％甲醇，在功率 300～800w和频率30～60khz下进行超声处理20～60分钟，放冷，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0144]
在一种优选的实施方式中，用于黄芪甲苷检测的供试品溶液的制备方法包括：称取适量的中药复方干膏粉，加入一定量的含1～10％浓氨试液的60～90％甲醇溶液，密塞，称定重量，加热回流1～3小时，放冷，再称定重量，用含1～10％浓氨试液的60～90％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取一定量的续滤液，蒸干，残渣用60～90％甲醇溶
解，定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0145]
本发明的1-10％的浓氨水试液配制方法为取市售的氨水(浓度25％～ 28％)1-10ml加水稀释至100ml。市售的氨水可以市场上销售的任意的氨水溶液，例如来源于国药集团化学试剂上海有限公司。
[0146]
在一种优选的实施方式中，该丝氨酸和甘氨酸的衍生化的对照品溶液的制备方法包括：称取适量的丝氨酸和甘氨酸；添加0.1～0.5mol/l盐酸溶液制成含各成分浓度为10～200μg/ml的混合对照品溶液；吸取适量的该混合对照品溶液，加入一定量的0.1～0.5mol/l异硫氰酸苯酯的乙腈溶液和1～5mol/l三乙胺的乙腈溶液，摇匀，室温放置，加40～60％乙腈至刻度，摇匀，加入一定量的正己烷，振摇，放置，取下层溶液，滤过，取续滤液，得到该丝氨酸和甘氨酸的衍生化的对照品溶液。
[0147]
在一种优选的实施方式中，该阿魏酸和/或该黄芪甲苷的对照品溶液的制备方法包括：称取适量的阿魏酸和/或黄芪甲苷；以及添加体积百分比浓度为10％～100％的甲醇水溶液制成含各成分浓度为10～200μg/ml的该阿魏酸和/或该黄芪甲苷的对照品溶液。
[0148]
在一种优选的实施方式中，该流速为0.8～1.2ml/min。
[0149]
关于本发明的流速，对比0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、 0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min、 1.5ml/min进行筛选，结果流速为0.6ml/min、0.7ml/min、0.8ml/min、 0.9ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min、1.2ml/min、1.3ml/min、1.4ml/min、1.5ml/min时均能满足检测要求，但流速为0.8～1.2ml/min时，峰分布较均匀，分离效果最好，最终确定0.8～1.2ml/min为最佳流速，可选流速为0.7ml/min、1.3ml/min。
[0150]
在一种优选的实施方式中，该柱温为30～35℃。
[0151]
关于本发明的柱温，对比30℃、35℃、40℃、45℃和50℃进行筛选，结果柱温为30℃、35℃、40℃、45℃和50℃时均能满足检测要求，但柱温为30～35℃时，峰分布较均匀，各主要峰分离效果最好，最终确定30～35℃为最佳柱温，可选柱温为40℃、45℃。
[0152]
在一种优选的实施方式中，该检测波长为200～330nm。
[0153]
在一种优选的实施方式中，该检测的进样量为5～20μl。
[0154]
在一种优选的实施方式中，该中药复方供试品溶液和该对照品溶液在该检测之前用0.22μm或0.45μm微孔滤膜过滤。
[0155]
在一种优选的实施方式中，该色谱柱的柱长为25cm，内径为4.6 mm，粒径为5μm。
[0156]
在一种优选的实施方式中，该色谱柱为agilent 5tc-c18(2)色谱柱、 waters symmetry c18色谱柱或agilent sb c18色谱柱。
[0157]
在一种优选的实施方式中，该色谱柱为agilent 5tc-c18(2)色谱柱。
[0158]
关于本发明的色谱柱，分别对比agilent 5tc-c18(2)、waterssymmetry c18、agilent sb c18进行筛选，结果所选用的色谱柱均能满足检测要求，但色谱柱为agilent 5tc-c18(2)时，峰分布较均匀，峰分离效果较好，性能参数最佳，最终确定agilent 5tc-c18(2)为最佳色谱柱，可选色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱(柱长25cm，内径为 4.6mm，粒径为5μm)。
[0159]
在一种优选的实施方式中，该流动相a选自以下的一种或多种：甲醇、乙腈、甲醇﹕乙腈(10﹕90)、甲醇﹕乙腈(20﹕80)、甲醇﹕乙腈 (30﹕70)、甲醇﹕乙腈(40﹕60)、甲醇﹕乙腈(50﹕
50)、甲醇﹕乙腈 (60﹕40)、甲醇﹕乙腈(70﹕30)、甲醇﹕乙腈(80﹕20)、甲醇﹕乙腈 (90﹕10)。
[0160]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的弱酸及其盐、弱碱及其盐中的一种或多种。
[0161]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液、碱水溶液和/或缓冲盐水溶液选自不同浓度的甲酸、乙酸、磷酸、三氟乙酸、甲酸和甲酸铵、乙酸和乙酸钠、乙酸和乙酸铵、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾、磷酸氢二钠和柠檬酸、柠檬酸和柠檬酸钠、甘氨酸和盐酸、或者邻苯二甲酸和盐酸。
[0162]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为0.05％～0.4％的酸水溶液。
[0163]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为0.05％～0.2％的磷酸或甲酸水溶液。
[0164]
在一种优选的实施方式中，该酸水溶液为0.05％～0.1％的磷酸或甲酸水溶液。
[0165]
在一种优选的实施方式中，该阿魏酸的对照品溶液的浓度为约20 μg/ml。
[0166]
在一种优选的实施方式中，该黄芪甲苷的对照品溶液的浓度为约20 μg/ml。
[0167]
在一种优选的实施方式中，该丝氨酸的对照品溶液的浓度为约130 μg/ml。
[0168]
在一种优选的实施方式中，该甘氨酸的对照品溶液的浓度为约50 μg/ml。
[0169]
根据本发明的另一个方面，提供了一种根据上述检测方法在包含蚕茧壳的中药复方的质量检测和/或质量评价和/或质量控制中的用途。
[0170]
需要说明的是，在不冲突的情况下，本技术中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
[0171]
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本技术所要求保护的范围。
[0172]
实施例
[0173]
实施例1含蚕茧壳的中药复方干膏粉的制备
[0174]
玉米须、黄芪与川芎合煎工艺为：取黄芪90g、川芎150g、玉米须 300g，置5l圆底烧瓶中，加水12倍，浸泡时间90分钟，武火加热至沸，文火保持微沸90分钟，300目滤布单层过滤，滤液备用；滤渣加水 12倍，武火加热至沸，文火保持微沸90分钟，300目单层趁热滤过，合并滤液，备用。
[0175]
蚕茧壳单煎工艺为：取蚕茧壳300g，加16倍水，浸泡60分钟，煎煮三次，每次1小时，滤过，合并滤液，备用。
[0176]
将玉米须、黄芪与川芎合煎后，再与蚕茧壳单煎液混合，再80℃减压浓缩与喷雾干燥(具体条件为：取浓缩液，流膏密度1.02～1.05g/ml，根据出膏率，将浓缩液重量换算为理论干膏的重量，再按辅料与理论干膏粉比为0.15∶1加入麦芽糊精，搅拌使麦芽糊精充分溶解、混合均匀后，料液预热温度为90℃，干燥参数(进风温度为160℃，进样速度为20rpm，雾化压力为2mpa，通针压力为2mpa))，制备提取物组合物2(zhw
‑ꢀ
2，即中药复方干膏粉)，且平行制备3个批号样品，批号分别为：zhw
‑ꢀ
2-20220601，zhw-2-20220602，zhw-2-20220603，备用。
[0177]
实施例2含蚕茧壳的中药复方干膏粉阴性对照的制备
[0178]
按照“实施例1”处方和制备方法，分别制备不含蚕茧壳、黄芪和川芎的阴性对照提取物，分别命名为：cjk-yx、hq-yx和cx-yx，备用。
[0179]
实施例3含蚕茧壳的中药复方干膏粉的含量测定方法研究
[0180]
3.1仪器设备与材料
[0181]
仪器设备：高效液相色谱仪waters 2695色谱系统，包括四元梯度输液泵(alliance 2695型)、120位高性能自动进样器、原装进口色谱柱温箱、waters 2996型dad二极管阵列检测器、empower 3色谱管理系统；电子天平：shimadzu(岛津)auw120d、sartorius(赛多利斯) bsa124s、fa2004b(上海佑科仪器仪表有限公司)jy2002(上海浦春) js6-01(上海浦春)jl070718r(台湾樱花)；超声波清洗机：kq-500de 型昆山市超声仪器有限公司；电子恒温水浴锅：hh-6上海力辰邦西仪器科技有限公司；电热套：dztw型天津工兴实验室仪器有限公司；色谱柱：agilent 5tc-c18(2)250
×
4.6mm sn：573147/563543/547688；甲醇、乙腈、甲酸为色谱纯，水为超纯水。
[0182]
对照品信息：阿魏酸(110773-201915，含量为99.4％，中国食品药品检定研究院)；黄芪甲苷(110781-201717，含量为96.9％，中国食品药品检定研究院)；丝氨酸(140688-202104-01，含量为98％，中国食品药品检定研究院)；甘氨酸(140689-202006-01，含量为97％，中国食品药品检定研究院)。
[0183]
3.2对照品溶液的制备
[0184]
3.2.1丝氨酸和甘氨酸混合对照品溶液的制备及衍生化：
[0185]
混标配制：取丝氨酸对照品、甘氨酸对照品适量，精密称定，加 0.1mol/l盐酸溶液制成每1ml含丝氨酸130μg、甘氨酸50μg的混合溶液，即得。
[0186]
衍生化：精密量取上述对照品溶液5ml，置25ml量瓶中，各加 0.1mol/l异硫氰酸苯酯(pitc)的乙腈溶液2.5ml，1mol/l三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50％乙腈至刻度，摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
[0187]
3.2.2阿魏酸对照品溶液的制备
[0188]
取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加70％甲醇制成每 1ml含20μg的溶液，即得。
[0189]
3.2.3黄芪甲苷对照品溶液的制备
[0190]
取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加80％甲醇制成每1ml含20μg的溶液，即得。
[0191]
3.3供试品溶液的制备
[0192]
3.3.1用于丝氨酸和甘氨酸测定的供试品溶液的制备及衍生化
[0193]
1)供试品水解：取“实施例1”中zhw-2的干膏粉2g，精密稳定，加6mol/l盐酸溶液15ml使溶解并转移至西林瓶中，150℃水解1小时，放冷，移至蒸发皿中，用水10ml分次洗涤西林瓶，洗液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1mol/l盐酸溶液溶解并转移至25ml量瓶中，加0.1mol/l 盐酸溶液至刻度，摇匀，即得。
[0194]
2)供试品水解溶液的衍生化：精密量取丝氨酸和甘氨酸的供试品溶液5ml，置25ml量瓶中，各加0.1mol/l异硫氰酸苯酯(pitc)的乙腈溶液2.5ml，1mol/l三乙胺的乙腈溶液2.5ml，摇匀，室温放置1小时后，加50％乙腈至刻度，摇匀。取10ml，加正己烷10ml，振摇，放置10分钟，取下层溶液，滤过，取续滤液，即得。
[0195]
cjk-yx阴性样品溶液按丝氨酸和甘氨酸供试样品同法制备，备用。
[0196]
3.3.2用于阿魏酸测定的供试品溶液的制备
[0197]
取“实施例1”中zhw-2的干膏粉2g，精密稳定，加70％甲醇 20ml，置25ml容量瓶，超声处理(功率500w，频率40khz)30分钟，放冷，定容至25ml，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0198]
cx-yx阴性样品按阿魏酸供试品溶液制备方法同法制备，备用。
[0199]
3.3.3用于黄芪甲苷的供试品溶液的制备
[0200]
取“实施例1”中zhw-2的干膏粉2g，精密稳定，至具塞锥形瓶，精密加入含4％浓氨试液的80％甲醇溶液(取浓氨试液4ml，加80％甲醇至100ml，摇匀)20ml，密塞，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用含4％浓氨试液的80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，蒸干，残渣用80％甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加80％甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0201]
hq-yx阴性样品按黄芪甲苷供试品溶液制备方法同法制备，备用。
[0202]
3.4色谱条件优化
[0203]
3.4.1丝氨酸和甘氨酸的色谱条件优化
[0204]
照高效液相色谱法(《中国药典》2020版四部通则0512)测定。
[0205]
色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的 agilent 5tc-c18色谱柱(柱长为25cm，内径为4.6mm，粒径为5μm)；以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b。
[0206]
根据丝氨酸和甘氨酸的分离度、理论塔板数和拖尾因子，对色谱洗脱条件按表1中的规定进行梯度洗脱优化；流速为每分钟1.0ml；柱温为 35℃；检测波长262nm。研究发现，采用条件
①
可以实现丝氨酸和苷氨酸的分离度》1.5，理论塔板数》1000，拖尾因子0.9-1.05之间，可以实现丝氨酸和苷氨酸的有效分离，符合药典高效液相色谱法(《中国药典》2020 版四部通则0512)的要求。
[0207]
测定时，分别精密吸取衍生化后的“3.2.1项下”对照品溶液与“3.3.1项下”供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0208]
表1丝氨酸和甘氨酸含量测定的梯度洗脱条件优化比较
[0209]
[0210][0211]
3.4.2阿魏酸含的色谱条件优化
[0212]
照高效液相色谱法(《中国药典》2020版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈：0.1％甲酸溶液(15∶85)为流动相，洗脱40min。按表2中的规定进行梯度洗脱优化；流速为每分钟1ml；柱温为30℃；检测波长为321nm。研究发现，采用条件
①
可以实现阿魏酸的分离度》1.5，理论塔板数 》1000，拖尾因子0.9-1.05之间，可有效分离，且符合药典高效液相色谱法(《中国药典》2020版四部通则0512)的要求。
[0213]
测定时，分别精密吸取“3.2.2项下”对照品溶液与“3.3.2项下”供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
[0214]
表2阿魏酸含量测定的梯度洗脱条件优化比较
[0215][0216][0217]
3.4.3黄芪甲苷的色谱条件优化
[0218]
照高效液相色谱法(《中国药典》2020版四部通则0512)测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以0.05％甲酸溶液为流动相
b，按表3中的规定进行梯度洗脱优化；流速为每分钟0.8ml；柱温为30℃；检测波长220nm。研究发现，采用条件
①
可以实现黄芪甲苷的分离度》1.5，理论塔板数》1000，
[0219]
拖尾因子0.9-1.05之间，可有效分离，且符合药典高效液相色谱法 (《中国药典》2020版四部通则0512)的要求。
[0220]
测定时，分别精密吸取“3.2.3项下”对照品溶液与“3.3.3项下”供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算，即得。
[0221]
表3黄芪甲苷含量测定的梯度洗脱条件优化
[0222][0223]
3.5专属性考察
[0224]
按上述丝氨酸和甘氨酸成分按“3.4.1”的条件
①
的色谱条件、阿魏酸的按“3.4.2”的条件
①
的色谱条件，和黄芪甲苷的色谱条件按“3.4.3”的条件
①
的色谱色谱条件，分别取各自的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样测定，并以空白溶剂作为对照，结果阴性样品在各对照品的位置上无干扰。结果如图1、图2和图3所示。
[0225]
3.6线性关系的考察
[0226]
精密吸取各对照品溶液适量，依次稀释得系列质量浓度溶液。以溶液质量浓度为横坐标(x)，峰面积积分值为纵坐标(y)进行回归，绘制标准曲线，结果见表4。
[0227]
表4四种指标性成分的线性关系考察结果
[0228]
成分名称回归方程r线性范围μg/ml阿魏酸y＝12.11x
–
1.290.99990.42～54.13黄芪甲苷y＝17.11x
–
3.670.99990.08～32.24
甘氨酸y＝23.4x 2.10.99982.24～100.4丝氨酸y＝19.77x 2.330.99991.25～80.77
[0229]
3.7精密度试验
[0230]
取高(h)、中(m)、低(l)质量浓度对照品溶液，同1d内别按在“3.4.1”、“3.4.2”和“3.4.3”项色谱条件(3.4.1的条件
①
，3.4.2的条件
①
和3.4.3的条件
①
)下进样6次、连续测定3天，测得阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸各的峰面积rsd表明仪器日内精密度良好，结果见表5。
[0231]
表5四种指标性成分的精密度考察结果
[0232][0233][0234]
3.8重复性试验
[0235]
分别按“3.3.1”、“3.3.2”、“3.3.3”项下方法制备四种标志性成分供试品溶液，平行6份，在各指标成分的色谱条件(3.4.1的条件
①
， 3.4.2的条件
①
和3.4.3的条件
①
)下进样测定，测得阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸含有量的rsd分别为2.44％、2.69％、2.37％、3.22％，表明方法的重复性良好符合试验要求。
[0236]
3.9稳定性试验
[0237]
分别按“3.3.1”、“3.3.2”、“3.3.3”项下方法制备四种标志性成分供试品溶液，于0、1、4、6、12、16、24h在各指标成分色谱条件 (3.4.1的条件
①
，3.4.2的条件
①
和3.4.3的条件
①
)下进样测定，测得阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸峰面积rsd分别为2.1％、2.6％、 3.51％和2.2％，表明溶液在24h内四种指标性成分的稳定性良好。
[0238]
3.10加样回收率试验
[0239]
精密称取已测定的同一批(zhw-2)样品，共9份，置于10ml容量瓶中，分别加入50％、100％、150％水平的对照品溶液，在各指标成分的色谱条件(3.4.1的条件
①
，3.4.2的条件
①
和3.4.3的条件
①
)下进样测定，计算回收率。结果，阿魏酸、黄芪甲苷、丝氨酸和甘氨酸峰面积rsd分别平均加样回收率分别为101.35％、100.22％、101.76％、101.50，rsd分别为2.56％、2.78％、3.22％、2.76&。结果见表6。
[0240]
表6四种指标性成分含量测定的加样回收率试验
[0241]
[0242]
[0243][0244]
实施例4含蚕茧壳的中药复方干膏粉的含量测定
[0245]
针对zhw-2(zhw-2-20220601，zhw-2-20220602，zhw-2
‑ꢀ
20220603)中的甘氨酸、瓜氨酸、阿魏酸、黄芪甲苷、含量，在色谱条件 (3.4.1的条件
①
，3.4.2的条件
①
和3.4.3的条件
①
)下进样测定，测得含量见表7。
[0246]
表7含蚕茧壳的中药复方干膏粉的含量测定结果(n＝3)
[0247][0248][0249]
以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体构造及特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本技术要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体
实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。
[0250]
以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。