一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液及制备方法

本发明涉及一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液及制备方法，属于食用菌领域。

背景技术：

1、浸渍标本法是通过化学药品对新鲜的生物材料进行浸泡，使生物材料保持原本的颜色和形态结构长期不变的一种保存方法。浸渍标本法是利用不同的固定液和保存液的化学性质，对新鲜生物标本进行处理和保存，防止标本物理化学性质发生改变，从而使生物样本保持原色的良好立体感，是一种在教学、科研、艺术观赏等方面应用广泛的生物保存技术。然而，生物体内不同化学成分的化学规律变化很难掌握，导致生物样本在进行保色时较为困难。

2、不同食用菌的子实体色泽、大小、质地等方面具有自己独特的特点，因此，每种食用菌在做浸渍标本时需要通过大量的试验研究来筛选出最适合的浸渍方法。如，浅色子实体的食用菌宜采用固定和保存同步进行的方法制作浸渍标本，而深色是实体宜采用先固定后保存的制作方法来制作浸渍标本。

3、目前，食用菌浸渍标本都是通过大量的肉眼观察来确定最适合保存样本的固定液配方，缺乏专业严谨性，且没有统一的检验标准，所以样本保存成功与否需要长时间来检验，一旦失败的话，样本(如野外采集的稀有珍稀蕈菌)很难再重复获得，造成试验的失败和损失。

4、针对上述问题，本发明旨在寻找到一种适合深色子实体食用菌的固定液配方。

技术实现思路

1、为了寻找一个有效、且适用面广的固定液配方，本发明提供一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液及制备方法。

2、第一方面，本发明提供一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液，其包括如下体积百分比的组分：质量分数10％的甲醛溶液5～10％、质量分数95％的乙醇溶液55～60％；还包括浓度为0.01～0.05g/ml的氯化钙，余量为蒸馏水，蒸馏水补足至100％。

3、第二方面，本发明还提供一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，具体步骤为：测定甲醛溶液的浓度，再对甲醛溶液进行稀释，获得质量分数为10％的甲醛溶液；依次混合质量分数为95％的乙醇以及氯化钙，并补足蒸馏水。

4、测定甲醛的浓度的具体步骤为：(1)硫酸标准滴定溶液的标定；(2)甲醛标准溶液的标定；(3)甲醛标准曲线的测定，根据标准曲线，测定甲醛的浓度。

5、上述步骤(1)具体为：在配置0.5mol/l的硫酸标准滴定溶液时，取98％的浓硫酸72ml，沿盛有蒸馏水的烧杯壁缓慢注入水中；待溶液温度降至室温，再加蒸馏水定容至1l，摇匀；标定浓度时，称取经60℃烘至恒重的基准无水碳酸钠1.1g，置250ml碘量瓶中，加蒸馏水50ml使溶解；加甲基红-溴甲酚绿混合指示液1～2滴，用配制的硫酸滴定液滴定；待溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2min；冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色时，记录硫酸滴定液的用量；取三次平行测定结果的平均值为最终结果，平行样间的误差不得大于0.1％；

6、以摩尔质量表示的硫酸滴定液浓度c，按下式计算：

7、c(mol/l)＝m/(0.1060×v)

8、式中：m代表无水碳酸钠质量，单位为g；

9、v代表硫酸滴定液体积，单位为ml；

10、0.1060代表1mol/l硫酸滴定液1ml相当于0.1060g无水碳酸钠。

11、上述步骤(2)具体为：甲醛与过量的中性亚硫酸钠溶液反应，生成氢氧化钠，以百里香酚酞作为指示剂，用硫酸标准滴定液滴定；测定时，与250ml锥形瓶中加入50ml亚硫酸钠溶液及2-3滴百里香酚酞指示液，用硫酸标准滴定溶液中和至蓝色刚刚消失；用减量法称取1.3～1.5g甲醛标准溶液，精确至0.0002g，放入上述锥形瓶中，用硫酸标准滴定溶液中和至蓝色刚刚消失为终点；取三次平行测定结果的算术平均值为测定结果；三次平行测定结果的误差不得高于0.1％；

12、以质量百分数表示甲醛含量x按下式计算：

13、x＝v×c×2×100×0.03003/m＝v×c×6.006/m

14、式中：v代表滴定消耗硫酸标准滴定溶液的体积，单位为ml；

15、c代表硫酸标准滴定溶液的试剂浓度，单位为mol/l；

16、m代表试样的质量，单位为g；

17、0.03003代表与1.00ml硫酸标准滴定溶液[c(1/2h2so4)＝1.000mol/l]相当的甲醛质量，单位g。

18、上述步骤(3)具体为：取干净试管6支，取0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.25ml上述甲醛标准液于试管中，补加蒸馏水至5ml，添加乙酰丙酮1ml，55℃水浴中煮沸15min，反应时间需严格控制；以空白管校正零点，于414nm处测定吸光值a，以浓度为横坐标，a值为纵坐标，绘制出标准曲线，根据标准曲线，测定甲醛的浓度。

19、本发明的有益技术效果为：

20、1.可以省略原先繁琐、耗时的筛选过程，可以直接采用该固定液配方，简单易行，且固定效果好；

21、2.适用于其他深色的生物样本浸渍标本的固定，普适性好。

技术特征：

1.一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液，其特征在于：包括如下体积百分比的组分：质量分数10％的甲醛溶液5～10％、质量分数95％的乙醇溶液55～60％；还包括浓度为0.01～0.05g/ml的氯化钙，余量为蒸馏水，蒸馏水补足至100％。

2.一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：具体步骤为：制备质量分数为10％的甲醛溶液，将质量分数为10％的甲醛溶液与质量分数为95％的乙醇溶液进行混合，再溶入氯化钙，并补足蒸馏水。

3.根据权利要求2所述的一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：制备质量分数为10％的甲醛溶液具体步骤为：测定甲醛溶液的浓度，并对甲醛溶液进行稀释，获得质量分数为10％的甲醛溶液。

4.根据权利要求3所述的一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：测定甲醛的浓度的具体步骤为：步骤一，硫酸标准滴定溶液的标定；步骤二，甲醛标准溶液的标定；步骤三，甲醛标准曲线的测定，根据标准曲线，测定甲醛的浓度。

5.根据权利要求4所述的一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：所述步骤一具体为：在配置0.5mol/l的硫酸标准滴定溶液时，取98％的浓硫酸72ml，沿盛有蒸馏水的烧杯壁缓慢注入水中；待溶液温度降至室温，再加蒸馏水定容至1l，摇匀；标定浓度时，称取经60℃烘至恒重的基准无水碳酸钠1.1g，置250ml碘量瓶中，加蒸馏水50ml使溶解；加甲基红-溴甲酚绿混合指示液，用配制的硫酸滴定液滴定；待溶液由绿色变为紫红色时，煮沸2min；冷却至室温，继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色时，记录硫酸滴定液的用量；取至少三次平行测定结果的平均值为最终结果，平行样间的误差≤0.1％；

6.根据权利要求4所述的一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：所述步骤二具体为：甲醛与过量的中性亚硫酸钠溶液反应，生成氢氧化钠，以百里香酚酞作为指示剂，用硫酸标准滴定液滴定；测定时，与250ml锥形瓶中加入50ml亚硫酸钠溶液及百里香酚酞指示液，用硫酸标准滴定溶液中和至蓝色消失；用减量法称取1.3～1.5g甲醛标准溶液，精确至0.0002g，放入锥形瓶中，用硫酸标准滴定溶液中和至蓝色消失为终点；取三次平行测定结果的算术平均值为测定结果；三次平行测定结果的误差≤0.1％；

7.根据权利要求4所述的一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液的制备方法，其特征在于：所述步骤三具体为：取试管6支，取0、0.05、0.10、0.15、0.20和0.25ml甲醛标准溶液于试管中，补加蒸馏水至5ml，添加乙酰丙酮1ml，55℃水浴中煮沸15min，反应时间需严格控制；以空白管校正零点，于414nm处测定吸光值a，以浓度为横坐标，a值为纵坐标，绘制出标准曲线，根据标准曲线，测定甲醛的浓度。

技术总结本发明涉及一种深色子实体食用菌的浸渍标本固定液及制备方法，其包括如下体积百分比的组分：质量分数10％的甲醛溶液5～10％、质量分数95％的乙醇溶液55～60％；还包括浓度为0.01～0.05g/ml的氯化钙，余量为蒸馏水，蒸馏水补足至100％；其制备方法具体为：制备质量分数为10％的甲醛溶液，将质量分数为10％的甲醛溶液与质量分数为95％的乙醇溶液进行混合，再溶入氯化钙，并补足蒸馏水；本发明具有的效果在于：一方面可以省略原先繁琐、耗时的筛选过程，可以直接采用该固定液配方，简单易行，且固定效果好；另一方面也可以适用于其他深色的生物样本浸渍标本的固定，普适性好。技术研发人员：姚璐晔,巩月,荣朵朵,鲍慧,缪奕受保护的技术使用者：常熟理工学院技术研发日：技术公布日：2024/6/5