一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法

本发明属于生物种子(种苗)培养，具体而言，涉及一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法。

背景技术：

1、条斑紫菜是一种生活在潮间带的广盐性海藻，属于红毛菜科紫菜属的植物。其藻体呈现紫红色或略带蓝绿色，形状为卵形或长卵形，通常高12-70厘米以上。基部可以是圆形、心脏形或楔形，边缘有皱褶，细胞排列整齐且平滑无锯齿。条斑紫菜在中国北方沿岸是常见的种类，尤其在长江以北地区，它是主要的栽培藻类。目前条斑紫菜自由丝状体已经成为生产中种苗(种子)的主要来源。条斑紫菜自由丝状体是紫菜在海水中悬浮生长的丝状体，条斑紫菜自由丝状体按照发育的阶段可分为营养藻丝阶段、膨大藻丝阶段和壳孢子囊形成放散阶段，其中营养藻丝能够钻入贝壳的珍珠层进行生长，而膨大藻丝和壳孢子囊阶段均无法钻入珍珠层，丝状体钻入贝壳方能进行下一步的生产，因此条斑紫菜自由丝状体的培养需要保持在营养藻丝阶段。

2、目前主要进行的丝状体培养方法，是通过将丝状体培养在三角瓶等容器中，如申请公布号为cn114793876a的中国专利公开了一种条斑紫菜丝状体营养藻丝快速培养方法，在采用该培养方法在实际培养过程中，发现操作难度较大，丝状体生长速度缓慢，而且对环境温度波动的适应能力较差。除此之外，在培养过程中，常常遇到绿藻、硅藻等杂藻污染，这些藻类的主要吸收光谱位于蓝光和红光区，因此采用自然光培养时，这些杂藻会与条斑紫菜自由丝状体产生竞争，导致丝状体生长受明显抑制。

技术实现思路

1、本发明提供一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，该方法操作简便、效果佳、丝状体纯度高且处于营养生长阶段、生产成本低。具体技术方案如下：

2、一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，具体步骤如下：

3、(1)将清洗干净后并采用高温高压灭菌处理后的容器，作为丝状体培养用容器，容器可以采用透明玻璃瓶或者三角瓶；

4、(2)将比重为1.016～1.018的海水，先经200目双层尼龙筛绢过滤，再经高温高压进行灭菌，降温至室温后，在每升海水中添加pes母液10ml，作为培养用海水备用；

5、(3)将藻丝放入步骤(1)中的培养容器中，加入步骤(2)中的培养海水，藻丝长度为200～300μm，藻丝在海水中的接种密度为0.50～1.00g鲜重/l；

6、由于在实际培养过程中，藻丝过短，容易导致其恢复生长速率的时间延长，而且会出现一定的藻体衰亡；藻丝长度过长则对样品有所浪费，设定藻丝长度为200～300μm兼顾了生长和种藻的使用效率。

7、由于藻丝的接种密度过小，容易浪费种植空间，降低了培养效率；藻丝的接种密度过大，容易导致藻丝竞争有限的营养物质、二氧化碳以及光照，生长速率下降，甚至导致生长停滞的情况，因此藻丝在海水中的接种密度为0.50～1.00g鲜重/l。

8、(4)在照光的第3小时至第5小时，照光的第10小时至第12小时，利用气泵，将气体沿着硅胶软管送入0.22μm孔径滤膜滤器过滤后充入培养容器中，所述空气首先经1％硫酸铜溶液过滤，软管接可调节气流开关，使用时调节至气泡在培养容器底海水中逐个涌出，气流大小控制在紫菜自由丝状体缓慢悬浮流动；控制培养条件为16℃～22℃，光强2500lx～3000lx，光质为橙光：蓝光：红光＝7:2:1，光周期14l:10d，其中采用橙光、蓝光、红光单色led灯作为光源，每隔7天，在每升海水中添加pes母液10ml。

9、在培养7天期间，加入10mlpes母液的藻体能够维持良好的生长状态和速率，如果加入较少的营养液，在培养5天左右生长速率有所下降，容易影响藻丝的生长。

10、光照强度增强，可以为紫菜丝状体提供更多的光能，从而加速其光合作用的速率，提高光能转化为化学能的效率，能够促进丝状体的生长，提高生长速率，同时丝状体在适当低温的条件下，可以减缓丝状体的细胞代谢速率，有助于紫菜丝状体更好地利用光能进行生长，而不是过度消耗能量，重要的是能够更好的维持在营养生长(营养藻丝状态)阶段，达到生产的要求。

11、将光质设置为橙光：蓝光：红光＝7:2:1，是因为紫菜丝状体对光的吸收峰位于橙光波段，橙光能够最大限度地被其吸收利用，为光合作用提供足够的能量。因此，在光照配置中，橙光占主导地位，确保了紫菜丝状体能够获得足够的光能进行光合作用。而且蓝光和红光在紫菜丝状体的生长过程中发挥着光信号的作用，能够调控藻体的新陈代谢过程。虽然红光对光合作用的直接贡献几乎可以忽略，但对于维持藻体的正常生长和发育是必不可少的。因此，在光照配置中，需要加入适量的蓝光和红光，以发挥它们的光信号作用。

12、设置上述光质比例能够在保证紫菜丝状体光合作用效率的同时，充分发挥蓝光和红光的光信号作用，促进藻体的正常生长和发育。这个比例既保证了紫菜丝状体对光能的高效利用，又减少了杂藻光合作用对蓝光和红光的利用，从而抑制了杂藻的生长。

13、由于条斑紫菜进行光合作用时，会消耗水中的二氧化碳并释放氧气。随着光照时间的推移，水中二氧化碳浓度逐渐降低，氧气浓度逐渐升高。因此，确定合适的充气时间对于维持水中二氧化碳和氧气的平衡至关重要。所以将照光的时间设置在第3小时至第5小时、第10小时至第12小时，是为了更好地满足条斑紫菜光合作用的生理需求，提高生长效率和生物量积累，同时避免不必要的能量消耗和生长阶段转变，有助于提高条斑紫菜自由丝状体快速扩繁方法的科学性和实用性。

14、在一个具体的可实施方案中，其中0.22μm孔径滤膜滤器的滤膜每七天更换一次；从而实现长期对空气进行过滤。

15、在一个具体的可实施方案中，当培养瓶中丝状体生物量超过8g/l时，可分瓶继续培养。

16、本发明有益技术效果：

17、1.本发明通过施加营养盐等技术措施，提高条斑紫菜自由丝状体的生长速度，同时还能够维持丝状体处于营养生长阶段；

18、2.本发明通过设定光质为橙光：蓝光：红光＝7:2:1，可以有效抑制杂藻或杂菌的生长，从而保证紫菜自由丝状体的纯度，能够为条斑紫菜生产需要提供大量种源；

19、3.本发明的方法进行了系统研究和长期应用，形成了成熟的条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，为条斑紫菜种质资源的开发和利用提供了科学的、规范的培养方法，也为满足生产上对条斑紫菜优良品种的种苗(种子)需求提供了充分的种源保障；

20、4.本发明的方法简单易操作，成本低，能够保障丝状体处于营养藻丝阶段快速生长，且无杂藻污染。

技术特征：

1.一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，其特征在于：在所述步骤(3)中，藻丝长度为200～300μm。

3.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，所述定时为：在照光的第3小时至第5小时、照光的第10小时至第12小时进行充气培养。

4.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，其特征在于：当培养瓶中丝状体生物量超过8g/l时，可分瓶继续培养。

5.根据权利要求1所述的一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，采用橙光、蓝光、红光单色led灯作为光源。

技术总结本发明涉及一种条斑紫菜自由丝状体快速扩繁的方法，其具体步骤：(1)选择灭菌处理后的容器，作为丝状体培养用容器；(2)将比重为1.016～1.018的海水，进行过滤，再进行灭菌处理，添加营养盐，作为培养用海水备用；(3)将藻丝放入步骤(1)中的培养容器中，加入步骤(2)中的培养海水，藻丝在海水中的接种密度为0.50～1.00g鲜重/L；(4)以空气作为气体来源，由管道通过过滤器送气到培养容器，出气口外接可调节气流开关，使用时调节至气泡在培养容器底海水中逐个涌出；控制培养条件为16℃～22℃，光强2500Lx～3000Lx，光质为橙光：蓝光：红光＝7:2:1，光周期14L:10D；本发明具有效果在于简单易操作，成本低，能够保障丝状体处于营养藻丝阶段快速生长，且无杂藻污染。技术研发人员：张涛,陶菊红受保护的技术使用者：常熟理工学院技术研发日：技术公布日：2024/6/5