一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法与流程

本发明涉及原位模型建模方法，尤其是一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法。

背景技术：

1、裸鼠主要形态特征:无毛、裸体和无胸腺，裸鼠由于无胸腺，因此缺乏免疫反应，是免疫缺陷动物，适合用来制备原位肿瘤模型。

2、常用的宫颈癌原位手术模型建模方法为手术法，需要对小鼠进行麻醉后，打开腹腔，将2-3mm3大小的肿瘤块用细线缝合于宫颈上，再用缝合线关闭腹腔。此造模方法会造成创伤，且动物有较大痛苦影响动物福利，术后需要一定时间来进行恢复。

3、直接将肿瘤块塞入小鼠阴道，往往会因为肿瘤块无法固定，容易滑落难以成模型，同时由于阴道环境血管较少，肿瘤生长速度较慢。

技术实现思路

1、本发明的主要目的在于提供一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，以解决相关技术中提出的生产效率低，牙颌模型固定时易产生磨损的问题。

2、为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，包括如下步骤：

3、step1:选择8周龄balb/c-nude小鼠若干只，所有小鼠分为无创组和手术组,两组小鼠周龄、质量比较，差异无统计学意义；

4、step2：无创组用直径3mm的棉棒拓宽并擦干阴道，将带有luciferase荧光的肿瘤块没入改性水凝胶，加热使改性水凝胶凝固后，将改性水凝胶中混合硬石膏的组织胶水滴于改性水凝胶表面并迅速塞入阴道内，当有阻塞感时停止深入，停顿30s待组织胶水完全干透，肿瘤块被固定在宫颈处时，为造模完成；

5、step3：手术组首先打开腹腔，将同样大小的肿瘤组织缝合于宫颈上。

6、进一步地，所述balb/c-nude小鼠的体重为24±0.56g。

7、进一步地，所述step3后采用活体成像拍摄法进行评价,比较两组方法成瘤率以及成瘤情况，如小鼠宫颈处能明显看到荧光，则证明模型构建成功。

8、进一步地，所述step3后还采用prime8统计软件进行分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。

9、进一步地，所述改性水凝胶由如下重量份数的原料制成：

10、

11、此配方可加快肿瘤块生长，促进血管连接并通过增加雌激素，促进宫颈癌的侵袭速度。

12、进一步地，所述活体成像拍摄法具体如下：

13、进一步地，将工作液10μl/g的剂量予以裸鼠腹腔注射，10-15分钟后异氟烷麻醉，再使用活体成像仪进行活体成像观察。

14、进一步地，工作液由如下重量份数的原料制成：

15、dpbs                              70-90份；

16、mcherry                           3-6份。

17、通过dpbs配置mcherry形成的工作液在注射后能够直接融合到目标蛋白质上。这样能够有效确保目标细胞的准确成像。

18、进一步地，dpbs的浓度为15-17mg/ml。

19、进一步地，工作液的制备方法如下：选择dpbs(缓冲盐水溶液)溶液后，在3-4℃下将mcherry(mcherry荧光蛋白样本)缓慢加入并轻轻地搅拌混匀，超声波振荡1-3min后冷藏备用。

20、小鼠在造模前先注射泼尼松或甲泼尼龙1-2μl/g。泼尼松或甲泼尼龙能够减少小鼠对移植的异种细胞的排斥反应。使得模型能够粘附更加稳定。

21、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

22、该一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法中，使用无创法替代手术法建立无创伤宫颈癌原位模型，可降低小鼠痛苦，减少实验难度，提升实验速度。

技术特征：

1.一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述balb/c-nude小鼠的体重为24±0.56g。

3.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述step3后采用活体成像拍摄法进行评价,比较两组方法成瘤率以及成瘤情况，如小鼠宫颈处能明显看到荧光，则证明模型构建成功。

4.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述step3后还采用prime8统计软件进行分析，以p＜0.05为差异有统计学意义。

5.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述改性水凝胶由如下重量份数的原料制成：

6.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述活体成像拍摄法具体如下：

7.根据权利要求6所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述工作液由如下重量份数的原料制成：

8.根据权利要求7所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述dpbs的浓度为15-17mg/ml。

9.根据权利要求7所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述工作液的制备方法如下：选择dpbs溶液后，在3-4℃下将mcherry缓慢加入并轻轻地搅拌混匀，超声波振荡1-3min后冷藏备用。

10.根据权利要求1所述的小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，其特征在于，所述小鼠在造模前先注射泼尼松或甲泼尼龙1-2μl/g。

技术总结本发明涉及原位模型建模方法，尤其为一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法，包括选择8周龄BALB/c‑nude小鼠若干只，所有小鼠分为无创组和手术组,两组小鼠周龄、质量比较，差异无统计学意义；无创组用直径3mm的棉棒拓宽并擦干阴道，将带有luciferase荧光的肿瘤块没入改性水凝胶，加热使改性水凝胶凝固后，将改性水凝胶中混合硬石膏的组织胶水滴于改性水凝胶表面并迅速塞入阴道内，当有阻塞感时停止深入，停顿30s待组织胶水完全干透，肿瘤块被固定在宫颈处时，为造模完成；手术组首先打开腹腔，将同样大小的肿瘤组织缝合于宫颈上。该一种小鼠的无创伤宫颈癌原位模型建模方法中，使用无创法替代手术法建立无创伤宫颈癌原位模型，可降低小鼠痛苦，减少实验难度。技术研发人员：陆炜晟,沈如凌,王成稷,范春,王珏,王海杰,陈艳娟受保护的技术使用者：上海实验动物研究中心技术研发日：技术公布日：2024/6/5