丁酸梭菌在防治植物病害中的应用、生防菌剂及制备方法与流程

本发明涉及微生物，具体涉及一种丁酸梭菌在防治植物病害中的应用、生防菌剂及制备方法。

背景技术：

1、棉花黄萎病是由棉花黄萎病病原菌引起的一种真菌性病害，也是棉花主要病害之一，其直接影响棉花质量、减少棉花产量、降低棉花经济效益，被称为棉花的“癌症”。本世纪90年代以来，棉花黄萎病逐年加重，并造成巨大的经济损失。据不完全统计，每年损失皮棉8万～10万吨。

2、目前，棉农常用化学农药来防治棉花黄萎病，但是化学农药不但影响人类健康还破坏生态环境，长期使用后还会加强植物病原菌的耐药性。近些年来，随着绿色农业、有机农业的蓬勃发展，利用生物防治棉花黄萎病备受人们关注。已有许多学者研究发现细菌、真菌、放线菌都能很好的防治棉花黄萎病。其中，生防细菌中芽孢杆菌是生防细菌中研究最多的属。芽孢杆菌能产生热稳定的内生芽孢，具有繁殖速度快、抗逆能力强、易定殖在植物表面和土壤中、营养要求简单的特点，同时对多种病原真菌、细菌均有较强的抑制作用，已成为越来越受瞩目的生防研究材料之一。

3、然而，不同芽孢杆菌菌株的微生物特性以及结构功能的差异性较大，作用于不同病原菌，其防效也差异明显。而如何筛选出合适的芽孢杆菌，以用于棉花黄萎病的生物防治，现有技术尚未见报道。因此，如何探究一种高效防治棉花黄萎病菌的微生物菌及菌剂以及相配套的施用方法，起到综合干预并降低棉花黄萎病发病率的目的，成为本发明亟需解决的技术问题。

技术实现思路

1、为了解决上述问题，本发明的目的是提供一种丁酸梭菌在防治植物病害中的应用，本发明通过试验证实丁酸梭菌jbh-bd1对棉花黄萎病病菌有明显的抑制作用，具有防治棉花黄萎病的生防潜力，能够解决目前生防制剂对棉花黄萎病预防效果不佳的问题。

2、本发明的目的还在于提供一种丁酸梭菌在制备防治植物病害的生防菌剂中的应用。

3、本发明的目的还在于提供一种用于防治植物病害的生防菌剂，该生防菌剂用于棉花黄萎病防治后，能够达到较高的生物防效。

4、本发明的目的还在于提供上述用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，其操作简单，便于菌剂的制备。

5、本发明的目的还在于提供上述用于防治植物病害的生防菌剂的应用。

6、为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

7、丁酸梭菌在防治植物病害中的应用，所述丁酸梭菌为丁酸梭菌jbh-bd1；所述植物病害为棉花黄萎病。

8、丁酸梭菌在制备防治植物病害的生防菌剂中的应用，所述丁酸梭菌为丁酸梭菌jbh-bd1；所述植物病害为棉花黄萎病。

9、本发明中，丁酸梭菌jbh-bd1保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno：m2022151，保藏日期为2022年2月25日，保藏地址为湖北省武汉市武昌珞珈山。本发明的丁酸梭菌jbh-bd1筛选自健康仔猪的肠道粪便样品，天然、安全，耐酸、耐碱、耐高温，并且产蛋白酶、淀粉酶和有机酸能力强，同时对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌、猪源多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌都具有抑菌作用。

10、由于本发明中涉及的丁酸梭菌(clostridium butyrium)jbh-bd1已经在生物材料样品规定的国际保藏单位进行过生物保藏，且已在专利申请cn116103200a中进行公布，因此本发明对丁酸梭菌jbh-bd1的信息不进行过多特别的介绍。

11、目前，现有技术cn116103200a公开了丁酸梭菌jbh-bd1在铁富集中的应用。但是现有技术中并未报道丁酸梭菌jbh-bd1在作物病害防治上的应用潜力。本发明首次将丁酸梭菌jbh-bd1用于作物病害防治，并通过试验首次证实，相较于常规市售丁酸梭菌，本发明提供的丁酸梭菌jbh-bd1具有较强的产生葡聚糖酶和蛋白酶的能力，并且能够有效抑制棉花黄萎病病菌的生长，显著提升棉花黄萎病的生物防效，因此可用于棉花黄萎病的生物防治或者用于制备生防菌剂，在棉花黄萎病的植物病害防治方面具有突出的应用价值。

12、一种用于防治植物病害的生防菌剂，所述生防菌剂的活性成分包括：丁酸梭菌jbh-bd1及其培养产物；所述植物病害为棉花黄萎病。

13、进一步地，所述生防菌剂为液体制剂或粉剂。

14、一种如上所述的用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，包括以下步骤：

15、(1)取保存的丁酸梭菌jbh-bd1在改良cm培养基上进行平板培养以进行菌种活化，得到活化菌种；

16、(2)将活化菌种接种到改良cm培养基中，于32～38℃条件下培养12～18h，得到种子液；

17、(3)以体积比1％～3％的接种量，将步骤(2)所得种子液接种到改良cm培养基中，在30～38℃条件下发酵培养35～40h，所得发酵液即为所述生防菌剂。

18、本发明的上述制备方法工艺简单，制备成本低。并且，采用上述方法制备所得生防菌剂，活性成分包含丁酸梭菌jbh-bd1以及该菌的培养产物，其对于棉花黄萎病病菌具有良好的抑制效果，应用于棉花黄萎病防治后具有优良的防效。

19、进一步地，以每升培养基计，所述改良cm培养基的组成为：葡萄糖1.3～1.6g，玉米淀粉0.4～0.6g，蛋白胨2.5～3.5g，酵母粉2～3g，k2hpo4 0.06～0.09g，mgso4·7h2o 0.04～0.06g，mnso4·h2o 0.004～0.006g，余量为水。

20、进一步地，步骤(1)中，所述菌种活化是在33～37℃活化培养12～18h。

21、进一步地，步骤(1)、(2)、(3)中的培养过程均在厌氧条件下进行。

22、如上所述的生防菌剂的应用，在防治棉花黄萎病中的应用。

23、进一步地，所述生防菌剂在应用时，取液体形式的生防菌剂，稀释至丁酸梭菌jbh-bd1的活菌数为(1～3)×108cfu/ml，然后将稀释所得液体制剂浇灌于棉花根部即可；或者，所述生防菌剂在应用时，先将生防菌剂制成粉剂，然后将粉剂于棉花播种前撒入田中即可。

24、进一步优选地，所述液体制剂中的活菌数为(1～3)×108cfu/ml，液体制剂的施用量为80～120ml/株；所述粉剂的施用量为20～30kg/亩。

25、本发明提供的生防菌剂，为一种高效专一抗棉花黄萎病菌的生物菌剂，该菌剂及其匹配的应用方式，在棉花黄萎病的生物防治中具有极高的应用价值。

技术特征：

1.丁酸梭菌在防治植物病害中的应用，其特征在于，所述丁酸梭菌为丁酸梭菌jbh-bd1；所述植物病害为棉花黄萎病。

2.丁酸梭菌在制备防治植物病害的生防菌剂中的应用，其特征在于，所述丁酸梭菌为丁酸梭菌jbh-bd1；所述植物病害为棉花黄萎病。

3.一种用于防治植物病害的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂的活性成分包括：丁酸梭菌jbh-bd1及其培养产物；所述植物病害为棉花黄萎病。

4.根据权利要求3所述的用于防治植物病害的生防菌剂，其特征在于，所述生防菌剂为液体制剂或粉剂。

5.一种如权利要求4所述的用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

6.根据权利要求5所述的用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，其特征在于，以每升培养基计，所述改良cm培养基的组成为：葡萄糖1.3～1.6g，玉米淀粉0.4～0.6g，蛋白胨2.5～3.5g，酵母粉2～3g，k2hpo4 0.06～0.09g，mgso4·7h2o 0.04～0.06g，mnso4·h2o0.004～0.006g，余量为水。

7.根据权利要求5所述的用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述菌种活化是在33～37℃活化培养12～18h。

8.根据权利要求5所述的用于防治植物病害的生防菌剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)、(2)、(3)中的培养过程均在厌氧条件下进行。

9.如权利要求3所述的生防菌剂或者权利要求5的制备方法制备得到的生防菌剂的应用，其特征在于，在防治棉花黄萎病中的应用。

10.根据权利要求9所述的生防菌剂的应用，其特征在于，所述生防菌剂在应用时，取液体形式的生防菌剂，稀释至丁酸梭菌jbh-bd1的活菌数为(1～3)×108cfu/ml，然后将稀释所得液体制剂浇灌于棉花根部即可；或者，所述生防菌剂在应用时，先将生防菌剂制成粉剂，然后将粉剂于棉花播种前撒入田中即可。

技术总结本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种丁酸梭菌在防治植物病害中的应用、生防菌剂及制备方法。本发明提供的丁酸梭菌在防治植物病害中的应用，丁酸梭菌为丁酸梭菌JBH‑BD1；植物病害为棉花黄萎病。本发明首次将丁酸梭菌JBH‑BD1用于作物病害防治，并通过试验首次证实，丁酸梭菌JBH‑BD1能有效抑制棉花黄萎病病菌的生长，并显著提升棉花黄萎病的生物防效，因此可用于棉花黄萎病的生物防治或者用于制备生防菌剂，在棉花黄萎病的植物病害防治方面具有较强的应用价值。技术研发人员：韩志鹏,朱梦杰,岳永亮,李振,宋璐瑶,徐立科,杜晗笑,韦玥瑞,李克克,李光华,冯利菲,买超梁受保护的技术使用者：河南金百合生物科技股份有限公司技术研发日：技术公布日：2024/6/5