一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗的方法与流程

本发明属于植物组织培养，具体涉及一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗方法。

背景技术：

1、位于秦巴腹地的安康市具有大量的山坡地和撂荒地，种植粮食作物的条件非常差，成为猕猴桃产业发展的新区域。

2、安康市可种植猕猴桃的土地多表现为零星不成片，土层浅薄不肥沃，土质坚硬透气差的普遍特征，严重影响了猕猴桃种植效益。安康市农科院通过多年对山地猕猴桃栽培技术的研究，以及田间调查与试验，发现猕猴桃果树的根系属于肉质根系，根系的伸展能力很弱，在坚硬土壤中难以深扎和拓展，遇到干旱容易失水，遇到积水容易腐烂，对土壤的疏松度、透气性要求很高。因此，筛选并快速繁育出具有高抗旱抗涝性的猕猴桃砧木对秦巴山区山坡地猕猴桃栽培与推广有重要作用。

技术实现思路

1、鉴于此，为了筛选、繁育出具有高抗旱抗涝性的猕猴桃砧木本发明提供一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗方法。

2、为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗方法，包括以下步骤：

4、s1、挑选32～37℃高温下连续20～30天不浇水仍然表现优良的单株，将果实中的种子取出，晾干备用；

5、s2、将上述种子置于0.15mg/l赤霉素溶液中浸泡24～48h，取出后冲洗、消毒；

6、s3、将消毒后的种子置于培养基中进行培养，待培育出幼苗后进行驯化、移栽，即可。

7、进一步地，步骤s2中所述消毒步骤具体为：先将种子加入到75％的乙醇溶液消毒1～2min，用无菌水冲洗，然后加入4％次氯酸钠溶液，消毒7～9min，用无菌水冲洗，再用3％过氧化氢溶液浸泡5min，最后用无菌水冲洗后倒入无菌滤纸上吸干水分，即完成消毒过程。

8、进一步地，步骤s1中的种子包括幼嫩种子和成熟种子，所述幼嫩种子取自猕猴桃生长到9月-10月时期果实中的种子，所述成熟种子取自猕猴桃生长到11月-12月时期果实中的种子。

9、进一步地，当所述种子为幼嫩种子时，步骤s3中具体培养过程如下：

10、靠近种子顶端0.1～0.3mm处将顶胚切除，保留胚乳；将胚乳接种到愈伤培养基中，培养出愈伤组织；将愈伤组织接种到丛芽培养基中，培养出丛芽；当丛芽长至多片嫩叶时，将芽纵向切割分离，保证每个芽基部都带有愈伤组织，并接种至增殖培养基中，增殖分化出大量嫩芽；当嫩芽长至4～5cm时，从节间剪成约2cm带芽茎段接种至生根培养基中，待每苗长出4～6条根、根长2～3cm时，即得幼苗；

11、当所述种子为成熟种子时，步骤s3中具体培养过程如下：

12、靠近种子顶端0.1～0.2mm处纵向切出0.05～0.1mm的切口，将其接种至培养基ⅰ中，待萌芽率达到90％以上，再转接至培养基ⅱ中，待每苗长出4～6条根、根长2～3cm时，即得幼苗；

13、进一步地，所述愈伤培养基配方如下：ms+tdz(0.25～1mg/l)+6-ba(0.5～2.0mg/l)+naa(0.05～1.0mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

14、所述丛芽培养基配方如下：ms+zt(0.1～1mg/l)+6-ba(1.0～3.0mg/l)+iba(0.2～1.0mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

15、所述增殖培养基配方如下：ms+ga3(0.1～1.5mg/l)+6-ba(1.0～2.0mg/l)+iba(0.1～0.5mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

16、所述生根培养基配方如下：1/2ms+iba(0.2～1.0mg/l)+naa(0.1～0.5mg/l)+iaa(0.01～0.15mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

17、所述培养基ⅰ配方如下：ms+tdz(0.25～1mg/l)+6-ba(0.5～2.0mg/l)+naa(0.05～1.0mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

18、所述培养基ⅱ配方如下：1/2ms+iba(0.2～1.0mg/l)+naa(0.1～0.5mg/l)+iaa(0.01～0.15mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)。

19、进一步地，所述幼嫩种子在愈伤培养基、丛芽培养基、增殖培养基中培养条件为：光照2000～2500lx、空气湿度60％、恒温25℃，光照时间14h/d；

20、在生根培养基中培养条件为：先进行弱光培养，光照强度400lx，光照时间12h/d，温度20～24℃，培养13～16d后光照强度转为3000～3200lx，继续培养；

21、所述成熟种子在培养基ⅰ中培养条件为：光照2000～2500lx、空气湿度60％、恒温25℃，光照时间14h；

22、在培养基ⅱ中培养条件为：先进行弱光培养，光照强度400lx，光照时间12h/d，温度20～24℃，培养13～16d后光照强度转为3000～3200lx，继续培养。

23、进一步地，所述驯化过程如下：将所述幼苗连同培养基一起置于温度20～24℃、遮光率50％～70％的条件下，培养5～7天，然后洗去培养基将幼苗转移至基质中培养，控制含水量80％，正常光照条件下培养15～25天，即完成驯化。

24、进一步地，所述基质由沙土、腐殖土和珍珠岩按照质量比为2：5：1混合制备而成。

25、与现有技术相比，本发明的有益效果为：

26、(1)传统的猕猴桃组培过程中，大部分选择用猕猴桃茎段、叶片和成熟的种子进行组织培养，但是猕猴桃茎段和叶片容易携带溃疡病的病毒，成熟的种子分化能力较弱。本发明收集两个阶段的猕猴桃种子，通过处理，得到幼嫩的种子和成熟的种子，幼嫩的种子分化和增殖能力最旺盛，用来进行组织诱导培养，可以快速的得到大量的猕猴桃耐旱性砧木幼苗；成熟的种子可以通过优化后的培养基进行一步成苗培养，缩短繁育时间。

27、(2)通过本发明诱导方法，幼嫩种子的愈伤诱导率可高达到98.36％、丛芽分化率可高达98.10％、增殖系数可高达9.32、生根率可高达99.12％；成熟种子的萌芽率最高达到99.33％、生根率可高达97.72％。

28、(3)本发明繁育出的幼苗经驯化移栽后在夏季高温季节，连续20～30天不浇水的情况下，根系仍然发达，树体长势健壮，不萎蔫、存活率高。

技术特征：

1.一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s2中所述消毒步骤具体为：先将种子加入到75％的乙醇溶液消毒1～2min，用无菌水冲洗，然后加入4％次氯酸钠溶液，消毒7～9min，用无菌水冲洗，再用3％过氧化氢溶液浸泡5min，最后用无菌水冲洗后倒入无菌滤纸上吸干水分，即完成消毒过程。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤s1中的种子包括幼嫩种子和成熟种子，所述幼嫩种子取自猕猴桃生长到9月～10月时期果实中的种子，所述成熟种子取自猕猴桃生长到11月～12月时期果实中的种子。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，当所述种子为幼嫩种子时，步骤s3中具体培养过程如下：

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述愈伤培养基配方如下：ms+tdz(0.25～1mg/l)+6-ba(0.5～2.0mg/l)+naa(0.05～1.0mg/l)+蔗糖(20g/l)+琼脂(5g/l)；

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述幼嫩种子在愈伤培养基、丛芽培养基、增殖培养基中培养条件为：光照2000～2500lx、空气湿度60％、恒温25℃，光照时间14h/d；

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述驯化过程如下：将所述幼苗连同培养基一起置于温度20～24℃、遮光率50％～70％的条件下，培养5～7天，然后洗去培养基将幼苗转移至基质中培养，控制含水量80％，正常光照条件下培养15～25天，即完成驯化。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基质由沙土、腐殖土和珍珠岩按照质量比为2：5：1混合制备而成。

技术总结本发明提供一种耐旱性猕猴桃砧木实生种子快速繁育幼苗方法，包括以下步骤：S1、挑选32～37℃高温下连续20～30天不浇水仍然表现优良的单株，将果实中的种子取出，晾干备用；S2、将上述种子置于0.15mg/L赤霉素溶液中浸泡24～48h，取出后冲洗、消毒；S3、将消毒后的种子置于培养基中进行培养，待培育出幼苗后进行驯化、移栽，即可。经过本发明方法培育的猕猴桃砧木，在夏季高温季节，连续20～30天不浇水的情况下，根系仍然发达，树体长势健壮，不萎蔫，不死亡，大力促进了土壤贫瘠、灌溉条件差的猕猴桃适生区进行猕猴桃产业的推广，提高经济效益。技术研发人员：唐晓东,张文慧,马婷婷,贾玮受保护的技术使用者：安康市农业科学研究院技术研发日：技术公布日：2024/6/11