米槁果实生防菌及其应用

本发明属于生物医药领域，具体涉及米槁果实生防菌及其应用。

背景技术：

1、米槁系樟科樟属药用植物，其果实是重要的中药材和中成药原料。在种植和调查中发现米槁受到多种病原真菌的严重威胁。neofusicoccum sp.lh107、小新梭壳孢菌neofusicoccum parvum、葡萄座腔菌botryosphaeria dothidea以及镰刀菌属fusariumsp.yyh2005病原菌均是广泛的致病菌株，会诱发植物干枝、溃疡等病害的发生。上述菌株防治在以往主要使用化学药剂，对环境有一定危害。同时化学药剂使用带来的农残问题会影响临床用药安全，目前尚缺乏针对米槁果实真菌感染生防手段。

2、因此，寻找更加绿色高效的生物防治手段，为后期采用生物预防米槁果实病害是本领域亟需解决的问题。

技术实现思路

1、为弥补现有技术的不足，本发明提供了米槁果实生防菌及其在抑制病原菌中的应用。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明的第一方面提供了生防菌在抑制病原菌或在制备抑制病原菌的试剂中的应用，所述生防菌包括mgf2-4、mgf7-11、mgf14、15、mgf17-19、mgf21-28、mgf30、mgf32-37、mgf39-41、mgf43-45、mgf47-49、mgf51-55、mgf57-61、mgf63、64、mgf66-69中的一种或多种。

4、进一步，所述生防菌包括mgf7、mgf9、mgf10、mgf19、mgf22、mgf23、mgf59、mgf63、mgf65、mgf39或mgf69中的一种或多种。

5、进一步，所述病原菌包括neofusicoccum sp.lh107、neofusicoccum parvum、botryosphaeria dothide、fusarium sp.yyh2005a中的一种或多种。

6、进一步，所述生防菌还包括其培养物。

7、进一步，所述培养物选自发酵液。

8、进一步，所述生防菌还包括生防菌及其培养物的代谢产物。

9、进一步，所述代谢产物选自挥发性代谢产物。

10、进一步，所述病原菌选自植物病原菌。

11、进一步，所述植物选自樟科樟属植物。

12、进一步，所述樟科樟属植物选自米槁。

13、进一步，所述米槁为米槁果实。

14、本发明的第二方面提供了一种抑制病原菌的方法，所述方法包括施用以下一种或几种生防菌：mgf7、mgf9、mgf10、mgf19、mgf22、mgf23、mgf59、mgf63、mgf65、mgf39或mgf69。

15、进一步，所述病原菌包括neofusicoccum sp.lh107、neofusicoccum parvum、botryosphaeria dothide、fusarium sp.yyh2005a中的一种或多种。

16、进一步，所述生防菌还包括其培养物。

17、进一步，所述培养物选自发酵液。

18、进一步，所述生防菌还包括生防菌及其培养物的代谢产物。

19、进一步，所述代谢产物选自挥发性代谢产物。

20、进一步，所述病原菌选自植物病原菌。

21、进一步，所述植物选自樟科樟属植物。

22、进一步，所述樟科樟属植物选自米槁。

23、进一步，所述米槁为米槁果实。

24、本发明的第三方面提供了一种抑制病原菌的试剂，所述试剂包括以下一种或几种生防菌：mgf7、mgf9、mgf10、mgf19、mgf22、mgf23、mgf59、mgf63、mgf65、mgf39或mgf69。

25、进一步，所述病原菌包括neofusicoccum sp.lh107、neofusicoccum parvum、botryosphaeria dothide、fusarium sp.yyh2005a中的一种或多种。

26、进一步，所述生防菌还包括其培养物。

27、进一步，所述培养物选自发酵液。

28、进一步，所述生防菌还包括生防菌及其培养物的代谢产物。

29、进一步，所述代谢产物选自挥发性代谢产物。

30、本发明的第四方面提供了一种抑制病原菌的农用药物，所述农用药物包括以下一种或几种生防菌：mgf7、mgf9、mgf10、mgf19、mgf22、mgf23、mgf59、mgf63、mgf65、mgf39、mgf69，或本发明第三方面所述的试剂。

31、本发明的第五方面提供了生防菌或本发明第三方面所述的试剂在制备抑制病原菌的农用药物中的应用，所述生防菌包括mgf7、mgf9、mgf10、mgf19、mgf22、mgf23、mgf59、mgf63、mgf65、mgf39或mgf69中的一种或多种。

32、进一步，所述病原菌包括neofusicoccum sp.lh107、neofusicoccum parvum、botryosphaeria dothide、fusarium sp.yyh2005a中的一种或多种。

33、进一步，所述农用药物还包括农业上可接受的载体。

34、进一步，所述农用药物还包括一种或多种活性杀真菌、杀昆虫、杀细菌或除草成分。

35、进一步，所述病原菌选自植物病原菌。

36、进一步，所述植物选自樟科樟属植物。

37、进一步，所述樟科樟属植物选自米槁。

38、进一步，所述米槁为米槁果实。

39、本发明的第六方面提供了一种培养生防菌的方法，所述方法包括使用真菌培养基进行培养，所述真菌培养的ph为5.5-11.0。

40、进一步，所述生防菌选自mgf39和mgf69。

41、进一步，所述mgf69培养基的ph为7.2。

42、进一步，所述mgf39培养基的ph为11.0。

43、进一步，所述生防菌生长所使用的培养基还包括碳源、氮源、无机盐、维生素和/或微量元素。

44、进一步，所述碳源包括葡萄糖、蔗糖、麦芽糖或可溶性淀粉中的一种或几种。

45、进一步，生防菌mgf39所使用的碳源选自麦芽糖。

46、进一步，生防菌mgf69所使用的碳源选自蔗糖。

47、进一步，所述真菌培养基包括mga培养基、rbc培养基、sda培养基或pda培养基。

48、进一步，所述真菌培养基选自pda培养基。

49、进一步，所述生防菌生长的光照条件包括24h光照、24h黑暗或12h光暗交替培养。

50、进一步，所述生防菌生长的光照条件选自24h黑暗培养。

51、进一步，所述生防菌的生长温度为4-36℃。

52、进一步，所述生防菌的生长温度为20-28℃。

53、进一步，所述生防菌的生长温度为28℃。

54、本发明的第七方面提供了米槁果实内生真菌的分离方法，所述方法包括：

55、(1)米槁果实消毒；

56、(2)将米槁果实接种于真菌培养基；

57、步骤(1)包括使用乙醇和/或有效氯对米槁果实消毒。

58、进一步，所述乙醇的浓度为75％。

59、进一步，所述有效氯的浓度为5％。

60、进一步，米槁果实消毒的方法为：75％乙醇+无菌水清洗+5％有效氯+75％乙醇3+无菌水清洗。

61、进一步，米槁果实消毒的具体方法为：75％乙醇1min+无菌水清洗3次+5％有效氯3min+75％乙醇30s+无菌水清洗5次。

62、进一步，步骤(2)接种于真菌培养基表面的米槁果实为米槁果实组织块。

63、进一步，所述米槁果实组织块的大小为1-2cm。

64、进一步，所述真菌培养基包括mga培养基、rbc培养基、sda培养基或pda培养基。

65、进一步，所述真菌培养基选自pda培养基。

66、1、分类命名：fusarium equiseti mgf39；

67、保藏单位：中国典型培养物保藏中心(cctcc)；

68、保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，中国.武汉.武汉大学；

69、保藏日期：2023年08月14日；

70、保藏编号：cctcc no：m 20231460。

71、2、分类命名：pseudofusicoccum violaceum mgf69；

72、保藏单位：中国典型培养物保藏中心(cctcc)；

73、保藏地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号，中国.武汉.武汉大学；

74、保藏日期：2023年08月14日；

75、保藏编号：cctcc no：m 20231461。

76、本发明的优点和有益效果：

77、本发明从12个产地米槁果实中分离得到了共计101菌株中筛选得到了对米槁果实4种病原菌具有良好抗菌作用的广谱菌株，为后期采用生物预防米槁果实病害带来新的解决方案。