一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法

本发明属于植物育种，具体涉及一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法。

背景技术：

1、利用组织培养结合化学试剂来诱导培育植物多倍体，以达到改良植物品种，丰富种质资源，已被国内外育种学家广泛应用，植物多倍体育种可以改善作物经济性状、培育无籽果实和筛选无融合生长材料等。多倍体育是一种行之有效的育种方式，其完成时间短，且易于操作，并能有效提高利用率。抗有丝分裂剂是治疗癌症的主要细胞毒性药物之一，其基本原理是破坏微管蛋白与许多天然或合成分子的结合靶点，从而抑制纺锤体的形成，阻止染色体向细胞两极移动，破坏细胞周期，达到细胞内染色体加倍的效果。在植物育种领域，常见的抗有丝分裂剂有秋水仙素和一些除草剂。

2、目前，对芋多个品种的多倍体诱导育种主要采用秋水仙素，但秋水仙素含有剧毒，会对植物产生致死性损伤，致使多倍体诱导率降低，同时还会危害操作者的健康。

3、氟乐灵、氨磺乐灵、炔苯酰草胺、戊炔草胺、二甲戊乐灵和异丙甲草胺等除草剂可用于多倍体诱导。cn103053414b的专利公开了利用除草剂加倍玉米单倍体的方法及其专用除草剂，所述专用除草剂的有效成分为任意一种如下化合物：甲基胺草磷、炔苯酰草胺和氟乐灵；

4、cn107980620b的专利公开了一种玉米单倍体幼苗染色加倍的组合物，该组合物由复合加倍剂、助剂、解毒剂、生长调节剂组成；所述复合加倍剂单品为诺考达唑、甲基胺草磷、安磺灵、氯苯胺灵、氟乐灵、戊炔草胺、二甲戊乐灵；所述助剂为二甲亚砜和乙二醇；所述解毒剂为磷酸二氢钾和尿素；所述植物生长调节剂为abt生根粉6号。

5、但上述公开多倍体育种的育种对象并非芋头。在芋品种多倍体育种中，很少见到利用除草剂进行育种的报道。

6、公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，包括以下步骤：

4、s1.处理外植体

5、选取当年生且健壮的芋单芽，用75％酒精浸泡消毒60-80s后再用0.1％升汞浸泡消毒20-25min，取出后用无菌水冲洗8-10min，接着用无菌滤纸吸干芋单芽表面水分备用；

6、s2.多倍体诱导

7、将经过消毒处理的芋单芽于诱导剂液体培养基中震荡培养72-96h，获得多倍体芋单芽；其中，所述诱导剂液体培养基为：ms基本培养基、3-5μmol/l除草剂组合物，所述除草剂组合物由甲基胺草磷与氨磺乐灵复配而成；

8、培养条件为：震荡频率150-200r/min、光照时间12h/d、光照强度1600-1800lx、温度25℃；

9、s3.继代培养

10、将多倍体芋单芽接种到分离培养基中培养45-60d，然后将形态上发生明显变异的多倍体芋单芽分离出来，并将其接种到继代培养基中连续进行3-4次继代培养，得到多倍体丛生芽；

11、s4.生根诱导

12、当多倍体丛生芽长至2-3cm时，将芋单芽剪下并接种于生根培养基中培养，即得到芋头组培苗。

13、作为优选，步骤s2中，甲基胺草磷与氨磺乐灵的质量比的1.5：1。

14、作为优选，步骤s3中，所述分离培养基和继代培养基为：ms基本培养基、0.2mg/lnaa、3.0mg/l 6-ba、30.0g/l蔗糖；

15、培养条件为：光照时间12h/d、光照强度1600-1800lx、温度25℃。

16、作为优选，步骤s4中，所述生根培养基为：1/2ms基本培养基、1.0mg/lnaa、2.0mg/labt-6；

17、培养条件为：光照时间12h/d、光照强度1600-1800lx、温度25℃。

18、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

19、(1)本发明利用诱导剂液体培养基对芋单芽进行诱导，然后利用分离培养基进行培养，从中分离出形态上发生明显变异的多倍体芋单芽，接着用继代培养基进行继代培养获得多倍体丛生芽，最后利用生根培养基对多倍体丛生芽上的芋单芽进行生根培养，最终获得芋头组培苗。操作简单，易于实现。

20、(2)本发明的除草剂组合物由甲基胺草磷与氨磺乐灵复配而成，与单一使用甲基胺草磷、氨磺乐灵相比，利用本发明的除草剂组合物处理芋单芽后，可以诱导产生多倍体芋苗，且具有较高的诱导率。

21、(3)本发明利用除草剂诱导获得的芋头组培苗对芋疫病表现出较高抗性，可以丰富芋头种质资源，促进芋产业的发展。

技术特征：

1.一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，其特征在于，步骤s2中，甲基胺草磷与氨磺乐灵的质量比的1.5：1。

3.根据权利要求1所述的利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，其特征在于，步骤s3中，所述分离培养基和继代培养基为：ms基本培养基、0.2mg/lnaa、3.0mg/l 6-ba、30.0g/l蔗糖；

4.根据权利要求1所述的利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，其特征在于，步骤s4中，所述生根培养基为：1/2ms基本培养基、1.0mg/lnaa、2.0mg/labt-6；

技术总结本发明属于植物育种技术领域，具体涉及一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法。一种利用除草剂诱导芋头组培苗的方法，包括以下步骤：S1.处理外植体；S2.多倍体诱导；S3.继代培养；S4.生根诱导。本发明利用诱导剂液体培养基对芋单芽进行诱导，然后利用分离培养基进行培养，从中分离出形态上发生明显变异的多倍体芋单芽，接着用继代培养基进行继代培养获得多倍体丛生芽，最后利用生根培养基对多倍体丛生芽上的芋单芽进行生根培养，最终获得芋头组培苗。操作简单，易于实现。另外，本发明利用除草剂诱导获得的芋头组培苗对芋疫病表现出较高抗性，可以丰富芋头种质资源，促进芋产业的发展。技术研发人员：董伟清,何芳练受保护的技术使用者：广西壮族自治区农业科学院技术研发日：技术公布日：2024/6/13