用于治疗肌养蛋白病的肌肉靶向复合物的给药的制作方法

本技术涉及用于将有效量的寡核苷酸分子有效载荷递送至细胞的靶向复合物及其用途，特别是涉及疾病治疗的用途。电子序列表的引用电子序列表(d082470071wo00-seq-cbd.xml；大小：60,636字节；以及创建日期：2022年8月31日)的内容通过引用整体并入本文。

背景技术：

1、肌养蛋白病(dystrophinopathy)是由肌养蛋白(dystrophin)基因中的突变引起的一组独特的神经肌肉疾病。肌养蛋白病包括迪谢内肌营养不良(duchenne musculardystrophy)、贝克肌营养不良(becker muscular dystrophy)和x连锁的扩张型心肌病。肌养蛋白(dystrophin，dmd)是包含79个外显子和约260万总碱基对的大基因。dmd中的许多突变，包括外显子移码、缺失、替换和重复突变，能够降低功能性肌养蛋白的表达，导致肌养蛋白病。

技术实现思路

1、根据一些方面，本公开内容提供了在对象中促进肌养蛋白(例如，截短的肌养蛋白)的表达或活性的方法和/或治疗迪谢内肌营养不良(dmd)的方法。截短的肌养蛋白是功能性的(例如，保留野生型肌养蛋白的活性)。在一些实施方案中，截短的肌养蛋白保留了野生型肌养蛋白的部分功能。在一些实施方案中，本文中所述的方法包括向对象施用包含有效量的肌肉靶向复合物的组合物，每个复合物包含与一个或更多个寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(anti-transferrin receptor 1，tfr1)抗体，其中所述有效量向所述对象提供复合物中的0.5mg至5mg(例如，0.7mg、1.4mg或2.8mg)寡核苷酸/kg对象。在一些实施方案中，本文中所述的方法包括向对象施用包含有效量的肌肉靶向复合物的组合物，每个复合物包含与一个或更多个寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(tfr1)抗体，其中所述有效量向所述对象提供复合物中的5mg至80mg(例如，10mg、30mg或60mg)寡核苷酸/kg对象。在一些实施方案中，所述有效量向所述对象提供复合物中的5mg至40mg(例如，约5mg、10mg、20mg、30mg或40mg)寡核苷酸/kg对象。在一些实施方案中，所述有效量向所述对象提供复合物中的1mg至8mg(例如，1mg、1.5mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg或8mg)抗tfr1抗体(例如fab)/kg对象。在一些实施方案中，所述有效量向所述对象提供复合物中的5mg至120mg(例如，约11mg、22mg、44mg、66mg或88mg)抗tfr1抗体(例如fab)/kg对象。在一些实施方案中，施用是每两周一次至每三个月一次(例如，每两周一次、每四周一次、每两个月一次、或者每三个月一次)。在一些实施方案中，对象具有与迪谢内肌营养不良相关的突变的dmd等位基因(例如，其中突变的dmd等位基因包含适于外显子跳读的突变)。

2、本公开内容的一些方面提供了在对象中促进肌养蛋白的表达或活性的方法，其包括向所述对象施用包含有效量的复合物的组合物，每个复合物包含与一个或更多个寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(tfr1)抗体，其中所述有效量向所述对象提供复合物中的1mg至90mg抗tfr1抗体/kg对象，其中所述抗体包含：含有如seq id no:1、7或12中所示序列的重链互补决定区1(cdr-h1)，含有如seq id no:2、8或13中所示序列的重链互补决定区2(cdr-h2)，含有如seq id no:3、9或14中所示序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，含有如seqid no:4、10或15中所示序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)，含有如seq id no:5或11中所示序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)，以及含有如seq id no:6或16中所示序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)，其中所述寡核苷酸包含ctccaacatcaaggaagatggcatttctag(seq id no：21)的核苷酸序列，并且是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)。

3、本公开内容的一些方面提供了在对象中治疗迪谢内肌营养不良(dmd)的方法，其包括向所述对象施用包含有效量的复合物的组合物，每个复合物包含与一个或更多个寡核苷酸共价连接的抗转铁蛋白受体1(tfr1)抗体，其中所述有效量向所述对象提供复合物中的1mg至90mg抗tfr1抗体/kg对象，其中所述抗体包含：含有如seq id no:1、7或12中所示序列的重链互补决定区1(cdr-h1)，含有如seq id no:2、8或13中所示序列的重链互补决定区2(cdr-h2)，含有如seq id no:3、9或14中所示序列的重链互补决定区3(cdr-h3)，含有如seq id no:4、10或15中所示序列的轻链互补决定区1(cdr-l1)，含有如seq id no:5或11中所示序列的轻链互补决定区2(cdr-l2)，以及含有如seq id no:6或16中所示序列的轻链互补决定区3(cdr-l3)，其中所述寡核苷酸包含ctccaacatcaaggaagatggcatttctag(seq idno：21)的核苷酸序列，并且是磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)。

4、在一些实施方案中，每个复合物包含式(i)：[r1]n1-r2的结构，其中：

5、每个r1包含式(ib)的基团：

6、

7、其中-pn表示磷酸二酰胺吗啉代寡聚物(pmo)的碱基位置，其中-p反映磷酸二酰胺键联，并且其中n对应于腺嘌呤(a)、胞嘧啶(c)、鸟嘌呤(g)或胸腺嘧啶(t)的核碱基，使得pmo具有ctccaacatcaaggaagatggcatttctag(seq id no：21)的碱基序列；

8、r2包含抗tfr1抗体；并且

9、在每个复合物中，n1独立地为一或更大的整数，其表示r1的实例数，其中r1的每个实例经由连接点a与抗tfr1抗体的不同赖氨酸共价连接。在一些实施方案中，组合物中的复合物的n1的平均值为1至5。

10、在一些实施方案中，每个复合物包含式(i)：[r1]n1-r2的结构，其中：

11、每个r1包含式(ic)的基团：

12、

13、r2包含抗tfr1抗体；并且

14、在每个复合物中，n1独立地为一或更大的整数，其表示r1的实例数，其中r1的每个实例经由连接点a与抗tfr1抗体的不同赖氨酸共价连接。在一些实施方案中，组合物中的复合物的n1的平均值为1至5。

15、在一些实施方案中，抗tfr1抗体是fab片段。在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含含有seq id no:17的氨基酸序列的重链可变区(vh)和含有seq id no:18的氨基酸序列的轻链可变区(vl)。在一些实施方案中，抗tfr1抗体包含含有seq id no:19的氨基酸序列的重链和含有seq id no:20的氨基酸序列的轻链。

16、在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的1至8mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的1至2mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的1.5mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的2至4mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的3mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的4至8mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的6mg抗tfr1抗体/kg对象。

17、在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的3至52mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的5至40mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的7至15mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的11mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的15至30mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的22mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的30至59mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的44mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的61至117mg抗tfr1抗体/kg对象。在一些实施方案中，每次施用的有效量向对象提供复合物中的88mg抗tfr1抗体/kg对象。

18、在一些实施方案中，组合物每2周一次、每4周一次、每8周一次或每12周一次施用。在一些实施方案中，组合物每4周一次施用。在一些实施方案中，组合物每8周一次施用。

19、在一些实施方案中，组合物在水溶液中并且还包含组氨酸和蔗糖。在一些实施方案中，组氨酸以25mm的浓度存在于水溶液中。在一些实施方案中，蔗糖以10w/v％的浓度存在于水溶液中。在一些实施方案中，水溶液的ph为6.0。

20、在一些实施方案中，对象具有突变的肌养蛋白等位基因，所述突变的肌养蛋白等位基因包含适于外显子51跳读的突变，或者所述突变的肌养蛋白等位基因包含外显子51中的移码突变。在一些实施方案中，复合物在对象中促进截短的肌养蛋白的表达或活性。

21、在一些实施方案中，对象是人对象。在一些实施方案中，人对象的年龄为2至60岁。