一种用于表征SD大鼠耳部微循环的方法

本发明涉及生物。更具体地，本发明涉及一种用于表征sd大鼠耳部微循环的方法

背景技术：

1、传统生物理论认为，生命物质的传输主要是由心血管构成的血液循环系统和淋巴管、淋巴结、淋巴液构成的淋巴循环系统完成。其中，心脏的节律性舒缩提供动力，驱动血液在动静脉之间循环流动。动脉和静脉之间的毛细血管将一部分血浆和其中的物质滤出到组织间隙，与组织细胞物质交换后，再通过毛细血管和毛细淋巴管回到循环系统中。

2、间质液(interstitia lfluid)，是指存在于细胞外间质空间中的液体，它包围着细胞并填充细胞之间的空隙，是维持细胞功能和整体身体机能所必需的。间质液在维持细胞内外环境的稳定性、运输营养物质和代谢产物、以及维持细胞结构和功能等方面发挥着重要作用，维持身体的正常生理功能。间质液与血液循环系统之间通过毛细血管壁进行物质交换，以确保身体各部位细胞的供氧、排泄废物等需求得到满足。近年来，随着间质液流动重要性的认识不断深化，人们越来越关注间质液在机体内的流动。特别是在一些缺乏毛细血管的结缔组织中，比如韧带或腱，间质液的流动对于细胞的物质交换和新陈代谢显得尤为重要。因此，在微循环领域，对组织局部血管和淋巴管分布特征、间质液运动规律等的研究具有重要的研究意义；但迄今相关研究主要通过离体组织的组织形态学研究来实现。

3、基于此，间质液在体研究存在诸多挑战。与血液在血管中的流动相比，间质液的流动更微观更复杂，且无明确边界、无类管道结构约束；采用常规解剖和组织形态学实验方法进行研究，极易导致间质结构的破坏和空间塌陷，无法还原间质液周边组织真实的结构和间质组织液的生物流变特性。

4、鉴于此，提供一种直接针对活体无损检测间质液循环规律的技术方案，对研究血管、淋巴管和间质液的分布特性和物质在其间流通特性具有重要意义。

技术实现思路

1、为了至少解决如上所提到的一个或多个技术问题，本发明的实施例中提供了一种用于表征sd大鼠耳部微循环的方法，包括将经过麻醉处理的sd大鼠利用保温材料包裹，放置在显微镜的载物台上；将所述sd大鼠的耳朵固定在位于显微镜物镜下的载玻片上；向所述sd大鼠的尾静脉静脉注射血管标记物；向所述sd大鼠的耳朵皮下注射淋巴管标记物；通过时间序列成像记录所述血管标记物和所述淋巴管标记物的动态变化过程，以表征sd大鼠耳部微循环。

2、根据本发明的一个实施方式，所述麻醉处理包括：通过腹腔注射麻药乌拉坦对sd大鼠进行麻醉。

3、根据本发明的一个实施方式，在将所述sd大鼠的耳朵固定在位于显微镜物镜下的载玻片上之前，利用脱毛膏去除所述sd大鼠的耳朵背面毛发。

4、根据本发明的一个实施方式，将所述sd大鼠的耳朵固定在位于显微镜物镜下的载玻片上包括：将耳朵利用生物胶固定在载玻片上，再将载玻片固定在显微镜的物镜下方。

5、根据本发明的一个实施方式，所述血管标记物选用70kd－2000kd的异硫氰酸荧光素－葡聚糖，质量浓度为1－3％。

6、根据本发明的一个实施方式，所述血管标记物的激发光的波长为488nm。

7、根据本发明的一个实施方式，所述淋巴管标记物选用亚甲基蓝，质量浓度为0.5－1.5％。

8、根据本发明的一个实施方式，所述淋巴管标记物的激发光的波长为633nm。

9、根据本发明的一个实施方式，所述显微镜选用共聚焦显微镜。

10、根据本发明的一个实施方式，用于表征sd大鼠耳部微循环的方法还包括：预先在所述sd大鼠的耳朵标记低电阻位点。

11、在本发明的技术方案中，通过利用血管标记物和淋巴管标记物的双探针共标记，并成像记录其动态变化过程，可以更清晰地呈现sd大鼠耳部微循环。通过将活体大鼠麻醉后固定在载物台上，可以减少sd大鼠躯干对其耳部的牵扯力，提高观测准确性。通过利用保温材料包裹sd大鼠的躯干，可以保证sd大鼠的耳部生理状态正常，实现活体检测。通过采用70kd－2000kd的异硫氰酸荧光素－葡聚糖作为血管标记物，且用亚甲基蓝作为淋巴管标记物，可以实现颜色的高度差异，使时间序列成像的结果更清晰。通过设置时间序列成像的时间间隔为1s，能够清晰呈现异硫氰酸荧光素－葡聚糖的扩散趋势。通过选用共聚焦显微镜进行时间序列成像，可以减少焦距外光影的影响。通过预先标记低电阻位点，可以呈现sd大鼠耳部微循环中间质与脉络之间的对应关系。

技术特征：

1.一种用于表征sd大鼠耳部微循环的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括：

技术总结本发明涉及生物技术领域，公开了一种用于表征SD大鼠耳部微循环的方法，包括：将经过麻醉处理的SD大鼠利用保温材料包裹，放置在显微镜的载物台上。将SD大鼠的耳朵固定在位于显微镜物镜下的载玻片上。向SD大鼠的尾静脉静脉注射血管标记物。向SD大鼠的耳朵皮下注射淋巴管标记物。通过时间序列成像记录血管标记物和淋巴管标记物的动态变化过程，以表征SD大鼠耳部微循环。本发明采用双探针共标记技术，可以更清晰地呈现SD大鼠耳部微循环，具有高观测准确性，可以实现颜色的高度差异，使时间序列成像的结果更清晰。技术研发人员：降雨强,韩荣成,燕飞虹,张维波,宋晓晶受保护的技术使用者：中国科学院遗传与发育生物学研究所技术研发日：技术公布日：2024/6/13