EPB49siRNA及在制备呼吸道病毒病治疗药物上的应用

本发明公开了一种sirna，属于核酸。

背景技术：

1、冠状病毒（coronavirus，cov）广泛存在于自然界，是一类具有囊膜、基因组为线性单股正链的rna病毒，冠状病毒仅感染脊椎动物，与人类和动物的多种疾病有关，可引起人和动物呼吸道、消化道和神经系统疾病。

2、epb49是一种肌动蛋白结合和捆绑蛋白，通过以磷酸化依赖的方式将血影蛋白/肌动蛋白细胞骨架稳定并附着在红细胞膜上，在红细胞中发挥结构作用。这种蛋白质在n末端含有一个核心结构域，在c末端含有一种结合f-肌动蛋白的头段结构域。当从红细胞中纯化时，该蛋白以三聚体的形式存在，三聚体由两个48kda多肽和一个52kda肽组成。不同的亚基来源于头段结构域所在的3'编码区的选择性剪接。该基因的破坏与常染色体显性遗传性marie-unna遗传性低发性疾病相关，而该基因杂合性的丧失被认为在前列腺癌症进展中起作用。选择性剪接导致编码不同异构体的多种转录物变体。目前尚未见epb49与冠状病毒相关的报道。

3、本发明的目的就是提供一种降低易感细胞对于新型冠状病毒的易感性，具体而言，就是提供一种能够降低新型冠状病毒感染性的核酸分子。

技术实现思路

1、基于上述目的，本发明首先提供了一种敲低epb49表达的核酸分子在制备呼吸道病毒病治疗或预防药物中的应用。

2、在一个优选的实施方案中，所述核酸分子为sirna。

3、在一个更为优选的实施方案中，所述sirna的靶序列为seq id no.5所示。所述靶序列位于靶基因cdna序列中1018-1038碱基处。

4、在本发明的一个更为优选的实施方案中，所述sirna为双链rna ，所述双链rna的第一链的序列如seq id no.6所示，所述双链rna的第二链的序列如seq id no.7所示。

5、尤为优选地，所述呼吸道病毒以其spike蛋白与细胞上的受体结合而侵袭细胞。

6、在一个更为优选的实施方案中，所述病毒为冠状病毒。

7、更为优选地，所述冠状病毒为sars-cov-2。

8、尤为优选地，所述sars-cov-2病毒病治疗或预防药物为降低sars-cov-2病毒侵入机体细胞数量的药物。

9、其次，本发明提供了一种含有sirna的组合物，所述sirna为双链rna ，所述双链rna的第一链的序列如seq id no.6所示，所述双链rna的第二链的序列如seq id no.7所示。

10、在一个优选的实施方案中，所述组合物还含有制药学上可接受的载体。

11、更为优选地，所述载体为将sirna转染入哺乳动物细胞的载体。在本发明的一个具体实施方案中，所述载体为rnaimax。

12、本发明的研究发现冠状病毒对细胞的侵袭与epb49蛋白的表达高度相关。通过敲低被侵袭细胞的epb49蛋白的表达从而降低病毒在宿主细胞的载量，具体表现为荧光素酶活性的降低，其中，caco-2细胞荧光素酶活性下降了71%，只有对照sirna的29%，calu3细胞荧光素酶活性下降了68.5%，只有对照sirna的31.5,%，这说明epb49敲低的细胞中感染的假病毒量较处理前明显减少，这一结果体现出epb49敲低能降低sars-cov-2病毒的感染风险，显示了以epb49sirna为手段，通过敲低epb49的表达抑制冠状病毒对机体和细胞的感染，从而达到呼吸道病毒病治疗或预防的应用目的，该技术方案具有治疗和/预防呼吸道病毒感染的应用前景。

技术特征：

1.敲低epb49表达的核酸分子在制备呼吸道病毒病治疗或预防药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸分子为sirna。

3. 根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述sirna的靶序列如seq id no.5所示。

4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述sirna为双链rna ，所述双链rna的第一链的序列如seq id no.6所示，所述双链rna的第二链的序列如seq id no.7所示。

5.根据权利要求1-4任一所述的应用，其特征在于，所述呼吸道病毒病以其spike蛋白与细胞上的受体结合而侵袭细胞。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述呼吸道病毒病为冠状病毒。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述冠状病毒为sars-cov-2病毒。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述呼吸道病毒病治疗或预防药物为降低sars-cov-2病毒侵入机体细胞数量的药物。

9. 一种含有sirna的组合物，其特征在于，所述sirna为双链rna ，所述双链rna的第一链的序列如seq id no.6所示，所述双链rna的第二链的序列如seq id no.7所示。

10.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述组合物还含有制药学上可接受的载体。

技术总结本发明公开了一种敲低EPB49表达的核酸分子在制备呼吸道病毒病治疗或预防药物中的应用。通过使用本发明提供的siRNA敲低被侵袭细胞的EPB49蛋白的表达从而降低的病毒在宿主细胞的载量，显示了以EPB49siRNA为手段，通过敲低及EPB49的表达抑制冠状病毒对机体和细胞的感染，从而达到呼吸道病毒病治疗或预防的应用前景。技术研发人员：程龙,金蕊,叶棋浓,石慧,张宇奇受保护的技术使用者：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院技术研发日：技术公布日：2024/6/13