一种白屈菜提取物及其制备方法及应用的制作方法

专利名称：一种白屈菜提取物及其制备方法及应用的制作方法技术领域：本发明涉及一种白屈菜提取物，本发明还涉及所述白屈菜提取物的制备方法及其在制备抗癌镇痛药物中的应用。癌性疼痛是一个普遍的世界性问题，大约70％的晚期癌症患者可出现剧烈的疼痛。有效的止痛治疗，尤其对于晚期癌症病人，缓解或减轻患者疼痛是癌症治疗的主要内容。目前，癌痛尚属于一种难于征服的病症。世界卫生组织对癌性疼痛的治疗，推荐使用三阶梯疗法。轻度疼痛，使用非阿片类止痛药，如扑热息痛，阿司匹林及布洛芬、萘普生、炎痛喜康等；中度疼痛，则使用弱阿片类镇痛药，如可待因、氨酚待因，或加入非阿片类镇痛药及辅助性药物等；重度疼痛，则采用强阿片类药，如吗啡、二氢吗啡酮、美沙酮等。这些强阿片类药，可使患者解决暂时痛苦，并使精神得到适当休息，但连续使用易产生蓄积毒性和依赖性等副作用。如果使用不当，失之管理，更会危害人身健康和社会安定。近年来，这类药品的滥用和依赖性的产生明显增加，以及由此而带来的严重社会问题日益突出，使这类药品的临床应用受到严格限制，导致许多癌痛患者至今仍未得到良好治疗，对癌痛的处理仍然是医生们所而临的一个棘手的问题。目前在临床上尚无既有抗癌作用、又有镇痛作用并且不良反应很小的药物。本发明的另一目在于提供该白屈菜提取物的制备方法，该方法工艺过程简单，产品收率大。本发明的目的还在于提供该白屈菜提取物在制备抗癌镇痛药物中的应用，特别是在制备治疗肺癌、胰腺癌和前列腺癌药物中的应用。白屈菜[Chelidonium majus L.]，为罂粟科植物白屈菜的全草。全国大部分地区有分布。具有解毒消肿、镇痛止咳的功能，主要用于胃痛、腹痛、慢性气管炎、百日咳、黄疸、肝炎、水肿等症。植物化学研究结果表明全草含多种生物碱，如白屈菜碱、原阿片碱、血根碱、黄连碱、白屈菜红碱、小檗碱等。本发明提供的白屈菜提取物，其所含活性成分的组成和比例(重量)为白屈菜碱0.5～10、原阿片碱0.1～8、白屈菜总生物碱0.6～200。上述白屈菜提取物的制备方法，包括以下步骤(1)以植物白屈菜为原料，加含水乙醇回流提取，合并提取液，滤过；(2)将上述滤液回收乙醇、浓缩至相对密度为1.05～1.25的清膏；(3)将上述清膏用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至1.5～4.5，于5～10℃冷藏10小时以上，滤过，滤液用5～40％氢氧化钠溶液调pH值至9～11.5，用等量氯仿提取2～8次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，得白屈菜提取物。本发明白屈菜提取物应用在治疗癌症和癌性疼痛方面，可与一种或多种药学上可接受的载体(辅料)配制成药剂。上述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体或辅料，例如稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、糊精、甘露醇、蔗糖、乳糖，微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如甲基淀粉钠，羟丙纤维素，琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，吐温类，十二烷基硫酸钠；吸附载体如高岭土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。上述药剂可通过口服、直肠或肠胃外给药的方式施用于癌症和癌性疼痛患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂等，制成液体制剂如水或油悬浮剂，其它液体制剂如糖浆、合剂、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、粉针、水或油性悬浮剂等。本发明优选的形式是粉针、注射液和片剂、胶囊。本发明白屈菜提取物应用于治疗癌症和癌性疼痛患者，不但具有抗癌作用，而且还有镇痛作用，疗效确切。下面通过实施例及主要药效学试验对本发明作进一步的说明。实施例1 白屈菜提取物的制备取白屈菜3500g，切成0.5cm段，加10倍量的75％乙醇，加热回流提取4次，每次1.5小时，合并醇提取液，减压回收乙醇并浓缩至相对密度为1.12，用1mol/L磷酸溶液调pH值至3.5，于5℃冷藏72小时，滤过，滤液用30％氢氧化钠溶液调pH值至11，用等量氯仿提取5次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，即得。实施例2 白屈菜提取物粉针剂的制备实施例1白屈菜提取物 8克甘露醇 25克取实施例1白屈菜提取物，置适宜容器中，加注射用水约800ml，用1.2mol/L磷酸溶液调pH值至3.2，滤过，滤液加入甘露醇搅拌均匀，再加注射用水至1000ml，混匀，用0.22um的微孔滤膜过滤，滤液在无菌条件下，灌装于西林瓶中，部分塞上丁橡胶塞，装盘，冷冻干燥。冻干结束后压塞、压盖即得。实施例3 白屈菜提取物注射液的制备实施例1白屈菜提取物 14g吐温-80 10ml氯化钠3.5g苯甲醇8ml注射用水 加至1000ml。取实施例1白屈菜提取物，加注射用水800ml，搅拌使溶解，用1mol/L磷酸溶液调pH值至3.5.，滤过，滤液加入吐温-80、苯甲醇、氯化钠，混匀，用微孔滤膜滤过，补加注射用水至1000ml，灌封，灭菌，即得。实施例4 白屈菜提取物胶囊剂的制备实施例1白屈菜提取物25g糊精 200g 淀粉 100g羧甲基纤维素钠15g硬脂酸镁 10g取实施例1白屈菜提取物、糊精、淀粉、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁混合均匀，过80目筛，用干式制粒机制粒，用60目筛整粒，灌于胶囊中，即得。以上实施例仅为了对本发明作进一步的说明，而本发明的范围不受所举实施例的局限。本发明提供的是一种新型的具有抗癌和镇痛双重作用的天然药物---白屈菜提取物及其药剂，为证明其抗癌镇痛效果及安全性，发明者使用按上述实施例中提供的方法制备得到的白屈菜提取物及其注射液进行了毒理和药效学试验，研究结果如下一、动物急性毒性试验白屈菜提取物按不同的剂量注射小鼠或大鼠，观察1周。给药后动物的活动减少，俯卧少动，高剂量组动物死亡前出现呼吸困难、紫绀、抽搐、等症状。小鼠ip、iv的LD50为156.7mg/kg及39.4mg/kg，大鼠ip的LD50为117.6mg/kg。二、白屈菜提取物注射液镇痛试验将小鼠放在55±1℃的热板上，以小鼠舔后足时间作为正常痛阈值。重复测定二次，取平均值为正常痛阈值(给药前痛阈值)，筛选痛阈值在5-30s内的小鼠供实验用。选出合格小鼠60只，随机分组。肌肉注射不同剂量白屈菜提取物注射液(分为10、20、40mg/kg共3个剂量组)、等溶量生理盐水(空白对照组)、曲马多注射液50mg/kg(阳性对照组)，然后各组按相应剂量给药。各组均于给药后15、60、120、240min分别测定痛阈值一次。小鼠在热板上停留60s仍不舔后足时，则立即取出小鼠，以防汤伤，其痛阈值以60s计算。计算痛阈提高百分率。结果白屈菜提取物注射液镇痛作用在给药后15min起效，2h后镇痛作用达高峰，4h后尚有镇痛作用。与曲马多相比，白屈菜镇痛强度虽然比曲马多弱，但镇痛持续时间比曲马多长。三、白屈菜提取物注射液(以下简称SQC)抗癌试验1细胞培养和制备用常规方法复苏胃癌SGC7901细胞后，用含10％胎牛血清的DMEM培养基培养，培养条件为5％CO2、37℃。每2天换液1次，当细胞生长到80％覆盖面时，用0.25％胰酶消化传代。小鼠S180肉瘤细胞、小鼠SRS-82细胞用含10％胎牛血清的RPMI-1640培养基悬浮培养，培养条件为5％CO2、37℃，每2天更换一次培养液。将生长至对数期的胃癌细胞培养液弃掉，用3ml 0.25％预热的胰酶消化约2-5min(在显微镜观察下进行，直到细胞形态开始变圆，彼此粘附消失)，弃掉消化液，加含10％FCS的DMEM培养液10ml，用毛吸管吹打瓶壁收集细胞，并反复吹打，直到细胞分散后移入10ml的离心管中，1000r/min离心5min，弃上清，加6ml培养液重新悬浮细胞，计数细胞后再离心收集细胞，用预热至37℃的生理盐水1000r/min离心3min洗涤1次，再用生理盐水重新悬浮细胞，将各管细胞收集到一起，调整细胞数1.0×107/ml，立即皮下接种裸鼠。小鼠肉瘤细胞及腹水瘤细胞体外培养至对数生长期后收集细胞，用预热的生理盐水洗涤2次，重新悬浮在生理盐水中，调细胞数1.0×107/ml，每只小白鼠腹腔接种0.2ml，培养8天后，自腹水瘤小鼠腹腔中抽取腹水约5ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml，用于小鼠的腹股沟皮下或腹腔接种。2.SQC对荷瘤裸鼠实体瘤的抑瘤试验裸鼠40只分为模型组(生理盐水)、SQC高剂量组(9.0mg/kg)、SQC中剂量组(3.0mg/kg)、SQC低剂量组(1.0mg/kg)、5-Fu组(5.0mg/kg)，每组8只动物。把培养的胃癌细胞SGC7901用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml，每只小鼠左腹股沟皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。注射组裸鼠腹腔注射给药0.2ml，于接种肿瘤后的第2天开始给药，1次/天，共10天。于接种后的第12天，断颈处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤重量，并按以下公式计算抑瘤率抑瘤率＝(模型组肿瘤重量-该组的肿瘤重量)/模型组肿瘤重量×100％试验结果显示，SQC对荷人SGC7901胃癌裸鼠具有明显的抑制作用，9mg/kg抑制率为74.4％、低剂量组1.0mg/kg抑瘤率为27.6％，见表1。表1SQC对人SGC7901胃癌的抑制作用 3SQC对荷SRS-82肉瘤昆明小鼠肿瘤的抑瘤试验小鼠分为组同前，每组小鼠20只。把培养的SRS-82肉瘤细胞接种昆明小鼠后第8天，自腹水瘤小鼠腹腔中抽取腹水约5ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml，每只小鼠左腹股沟皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。腹腔注射给药，均于接种肿瘤后的第2天开始给药，1/天，共10天。于接种后的第12天，断颈处死各组小鼠，剥离肿瘤块，称取肿瘤重量，并按以下公式计算抑瘤率抑瘤率＝(模型组肿瘤重量-该组的肿瘤重量)/模型组肿瘤重量×100％SQC对荷SRS-82瘤小鼠的表现出明显的抑瘤作用，高、中、低三个剂量组抑瘤率分别为19.7％、40.9％、61.4％，阳性对照药物5-Fu也表现出明显的抗肿瘤作用，抑瘤率48.0％，见表2。表2白屈菜注射液对荷SRS-82肉瘤小鼠肿瘤的抑制作用 4SQC对荷瘤昆明小鼠腹水瘤的抑瘤试验小鼠分为组同前，每组小鼠20只。把培养的S180细胞接种昆明小鼠后第8天，自S180腹水瘤小鼠腹腔中抽取腹水约7ml，用生理盐水稀释成细胞数为1.0×107/ml，每只小鼠腹腔注射0.2ml(2.0×106/只)。高、低剂量组小鼠分别口服给药0.3ml，于接种肿瘤后的第2天开始给药，1/天，共10天。每天记录死亡小鼠数量，并按以下公式计算小鼠存活时间延长比例小鼠存活时间延长率＝(该组小鼠平均存活时间-模型组小鼠平均存活时间)/模型组平均存活时间×100％试验结果表明SQC对S180腹水瘤小鼠存活时间呈现明显的延长作用，高、中、低三个剂量组小鼠的延长率分别为71.7％、47.8％、22.8％，阳性药物组5-Fu生命延长率为57.6％，见表3。表3SQC对S180腹水瘤小鼠存活时间的影响 权利要求1.一种白屈菜提取物，其特征在于所含活性成分组成及比例(重量)为白屈菜碱0.5～10、原阿片碱0.1～8、白屈菜总生物碱0.6～200。2.权利要求1所述的白屈菜提取物的制备方法，包括以下步骤(1)以植物白屈菜为原料，加含水乙醇回流提取，合并提取液，滤过；(2)将上述滤液回收乙醇、浓缩至相对密度为1.05～1.25的清膏；(3)将上述清膏用0.5～1.5mol/L磷酸溶液调pH值至1.5～4.5，于5～10℃冷藏10小时以上，滤过，滤液用5～40％氢氧化钠溶液调pH值至9～11.5，用等量氯仿提取2～8次，合并氯仿液，回收氯仿，残留物真空干燥，得白屈菜提取物。3.权利要求1所述的白屈菜提取物在制备抗癌镇痛药物中的应用。全文摘要本发明公开了一种白屈菜提取物，其所含活性成分组成及比例(重量)为白屈菜碱0.5～10、原阿片碱0.1～8、白屈菜总生物碱0.6～200。本发明还公开了上述白屈菜提取物的制备方法。本发明白屈菜提取物应用于治疗癌症和癌性疼痛患者，不但具有抗癌作用，而且还有镇痛作用，疗效确切。文档编号C07D491/00GK1429611SQ03101200公开日2003年7月16日 申请日期2003年1月21日 优先权日2002年9月13日发明者张平 申请人:张平