新的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物，含有它们的药物组合物及其制备方法

专利名称：新的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物，含有它们的药物组合物及其制备方法技术领域：本发明涉及新的、有治疗活性的式Ⅰ的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物及含有这些化合物的药物组合物。 式中R代表C1-C4烷基或任选取代的芳基(C1-C4烷基)，或任选的取代的芳基;A和B都代表a-氢;或A和B共同形成一化学键。此外，本发明还涉及上述化合物的制备方法。本发明的式Ⅰ化合物是新的，具有有价值的抗氧化作用(脂质过氧化的抑制作用)。因而，本发明也涉及一种治疗方法。该方法是将有效治疗量的式Ⅰ化合物给患者的体内，以抑制脂质的过氧化作用及其后遗症。文献中已知有化合物的结构与式Ⅰ的化合物相关。与式Ⅰ化合物相类似的物质但在1-位未取代或在2-位和/或4-位含羰基的化合物首先由G.de Stevens等制备[J.Org.Chem.27，2457-2462(1962);Record Chem.Progr.(Kresge-Hooker Sci.Lib.23，105-125(1962);Oesterr.Chemiker Ztg.63，177-182(1962)and J.Org.Chem.28，3210-3212(1963)]。这些作者未公布任何有关的生物活性数据。欧洲专利说明书No.18，857叙述了抗缺氧和影响精神的含有羰基的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物。在公开的日本专利申请No.80，104282中叙述了结构类似的同样含有羰基的有抗癫痫活性的化合物。式Ⅰ的新化合物例如可用以下方法制备，将式Ⅱ的1-苄基-3，4-二氢吡啶并[3，4-b]吲哚化合物(或它的碱)与基本上等当量的式Ⅲ的胺(当所述吲哚为碱时，与式Ⅲ胺的盐)在过量的甲醛存在下反应得到式Ⅳ的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]-5-吲哚盐。式中X-为阴离子，R的含义同前，然后，(a)用碱处理上面得到的式Ⅳ化合物，得到式Ⅰ化合物，式中R的含义同上，A和B共同形成化学键;或(b)如果不需要分离上面得到的式Ⅳ化合物，就用复合的金属氢化物处理，得到式Ⅰ化合物，式中R的含义同前，A和B代表a-氢。在式Ⅰ到Ⅳ中R是C1-C4烷基时，可为直链或支链烷基，例如甲基，乙基，正丙基，异丙基，正丁基，仲丁基或叔丁基;R是任选取代的芳基(C1-C4烷基)时，可为芳环上被不多于2个C1-C4烷基或烷氧基或卤素取代的芳基(C1-4烷基)，R是任选的取代的芳基时，芳环上也可有同样的取代基。芳基本身可为苯基或萘基。X-作为阴离子可以是卤离子，优选为碘离子。用于原料的式Ⅱ化合物，即1-苄基-3，4-二氢吡啶并[3，4-b]吲哚是已知的[J.Pharm.Soc.Jap.，No.534，64(1926]。式Ⅲ的胺也是已知的并可买到。式Ⅳ的产物是新化合物，也属本发明的范围。下文将详细叙述本发明式Ⅰ的新化合物的制备方法。用作原料的式Ⅱ的1-苄基-3，4-二氢吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物在至少2摩尔当量甲醛的存在下与基本上等摩尔量的式Ⅲ的胺反应。该反应优选于室温下在C1-C4醇中进行。反应时间约30-60分钟，生成的式Ⅳ亚铵盐自反应混合物中沉出。该反应也可用式Ⅱ的游离碱作为原料进行;此时另一个反应试剂是式Ⅲ胺的盐。式Ⅰ的碱按已知的方式从式Ⅳ的盐中游离出来，式中A和B共同构成一化学键。可将盐溶解于悬浮于水或者水与同水不相混的溶剂组成的混合液中使碱游离出来，溶剂例如是任选的卤代脂肪烃或芳香烃和开链醚或环状醚，例如二氯甲烷，氯仿，乙醚，甲苯等等;然后将得到的溶液或悬浮液用无机碱碱化，例如用碱金属的碳酸盐，例如碳酸钾或碳酸钠，或氨水，如若需要，用上面提及的同水不相混的溶剂将碱萃取。为了得到式Ⅰ中A和B为a-氢的化合物，起始化合物的反应如上所述。反应终止后，由反应混合物中沉出的式Ⅳ的亚铵盐不要分离出，而将反应混合物用至少一摩尔当量的复合金属氢化物如硼氢化钠处理。该还原反应在温度为0-30℃进行，优选于冰水冷却的大约0℃下进行。反应时间大约1小时。由反应混合物中沉出的式Ⅰ化合物可经过滤方法从反应混合物中分离。该还原反应是立体选择性的，C-1与C-12b上连接的氢原子相互之间呈顺式;在每种情况下反应生成的是消旋顺式化合物。式Ⅰ的新化合物具有显著的抗氧化作用(脂质过氧化的抑制作用)。已知有许多种病理过程蓄积反应性能极强的氧自由基(O )。该自由基的形成导致不饱和脂肪酸的氧化(脂质过氧化)，不饱和脂肪酸是膜的重要成分。这是一个特异性不高的，改变或损坏生物分子的细胞破坏过程。这个过程会使细胞、器官或整个机体的不同程度的功能受到损伤。自由基反应所起的作用很可能是缺血引起损伤的病理过程的起因，例如缺血性肠疾患，心肌缺血，出血性休克，伴有缺血的脑血管功能障碍和肾缺血[R.J.Korthuis等“Physiology of Oxygen Radicals”，17章，217-249页(1986)]。抗氧化化合物因具有脂质过氧化的抑制作用，对缺血和缺氧状态下自由基引起的损伤有保护作用。因此，抗氧化剂作为抗缺血和抗缺氧化合物可用来治疗这些临床症候。可以考虑证实自由基参与了中枢神经系统的创伤性损伤的发展过程[J.M.Braughler等“Drug of the Future”，14143-152(1989)]。可以考虑证实在结缔组织疾患的症候的发展过程中，自由基反应起部分作用，对风湿性关节炎起主要的病因作用[J.Lunec等“Cellular Antioxidant Defense Mechanisms”33章143-159(1988)]。已知有一些引起肝脏毒性的物质，其肝损伤作用大概是病理学上自由基反应的结果。因此，抗氧化化合物可对急性和慢性肝疾患有保护作用[J.Feher和A.Vereckei“The Importance of Free Radical Reactions in the Medicine”(匈牙利文)，99-104页(1985)]。已基本上证明了自由基反应在某些临床血液病如镰型细胞性贫血和β-地中海贫血起着作用。由于防御能力的减低，在O2治疗或光照治疗时，分别会使新生儿或早产儿进一步增加氧化损伤的危险。在治疗这类临床疾病时，已经证明应用某些抗氧化剂是有利的。式Ⅰ化合物的抗氧化作用经如下研究得到证明。抗氧化作用用大鼠脑制备的微粒体[T.J.Player和A.A.Horton的方法J.Neurochem.37，422-426(1981)]和用大鼠脑均浆来研究[J.M.Braughler等的方法J.Biol.Chem.262，10438-10440(1987)]。对脑微粒体中NADPH诱导的脂质过氧化作用的影响。用体重150-250g雄性Hannover-Wistar大鼠制取微粒体，大鼠断头后，整个脑取出后在10倍体积的冰冷却的0.25M蔗糖溶液均化。均浆于日立CR26H仪上于4℃15000×g离心10分钟，然后收集上清液于4℃在日立SCP85H仪上以78000×g值离心60分钟。将沉淀悬浮于0.15MKCl溶液，得到的微粒体于干冰-丙酮混合液中冷冻，用前贮存于-70℃。温育混合物的组分是50mM Tris.HCL(pH6.8)，0.2mM FeCl3，1mMKH2PO4，0.5mM ADP，0.2mg微粒体以及待测化合物。温育液的最终体积为1ml，温育时间为20分钟，温度为37℃。加入0.4mM NADPH诱发脂质过氧化(空白样品不含NADPH)。加入0.375ml的含有40%三氯乙酸和5M HCl(2∶1)的中止液使反应停止。用硫代巴比土酸测定生成的丙二醛。反应停止后，每个样品中加入1ml1%硫代巴比土酸，然后放到100℃水浴中10分钟。最后将样品于4℃下在Janetzki K70仪上以2000×g值离心10分钟。带色的上清液用日立150-20分光光度计在535nm波长处测定消光值。根据受试化合物的浓度-效应关系，确定IC50值，结果列于表1。对脑均浆中Fe2诱发的脂质过氧化的影响。体重200-300g Wistar大鼠断头后，整脑与9体积的冰冷却的Krebs-Ringer缓冲液[含有15mM HEPES(pH7.4)140mM NaCl，3.6mM KCl，1.5mM CaCl2，0.7mM MgCl2，1.4mM KH2PO4和10mM葡萄糖]均化。测定溶液中蛋白质含量后调整到10mg/ml。将待试抑制剂加到最终体积为5μl至200μl的冰冷却的均浆中后，于37℃将温育混合液温育20分钟，随着加入5μl的8mMFe(NH4)2(SO4)2溶液，使Fe2诱发的脂质过氧化作用完成。温育时间过后，加入含有0.8M HCl和12.5%三氯乙酸的中止溶液使反应停止，然后将样品在JanetzkiK70仪上于4℃以200xg值离心10分钟。将1ml1%硫代巴比土酸加到0.5ml的上清液中，放到100℃水浴中20分钟。用日立150-20分光光度计测定535nm的色强度，用丙二醛双(二乙基缩醛)作为参比物。基于受试化合物的浓度-效应关系，确定IC50值，结果列于表1。 由表1的数据可看出，受试的式Ⅰ的各个化合物均有抗氧化(脂质过氧化抑制)活性。该抗氧化活性用酶促的(NADPH诱导的)和非酶性的(Fe2诱导的)脂质过氧化试验进行了研究。在酶促诱导的脂质过氧化试验中，大多数化合物的脂质过氧化抑制活性达到了艾地苯醌的效果，化合物No.017706和017709的抗氧化作用甚至超过艾地苯醌的效果，艾地苯醌是已知有治疗效果的抗氧化剂。受试的各个分子对非酶性诱导的脂质过氧化作用的抑制作用都比艾地苯醌强。化合物No.07704，07705和07709对两种方法诱导的脂质过氧化的抑制作用均最强;这些化合物的抗氧化作用超过了艾地苯醌。式Ⅰ的有效药物可与常用于非经肠和经肠给药治疗的无毒的、惰性的固体或液体载体和/或其它辅料混合制成药物组合物。适用的载体例如是水，明胶，乳糖，淀粉，果胶，硬脂酸镁，硬脂酸，滑石，植物油，例如花生油，橄榄油等等。活性试剂可配制成通常的药物组合物，特别是固体组合物，例如，圆片或带边片剂，糖锭剂或胶囊例如明胶胶囊，丸剂，栓剂等等。固体载体的用量可变动很大，优选的是在25mg-1g之间。这些组合物还可任选地含有常用的其它药用助剂，例如稳定剂，防腐剂，湿润剂，乳化剂等等。组合剂可用已知的方法制备，例如当组合物为固体时，采用过筛，混合，制粒、压片的方法。可对组合物进行制药工艺中其它常用的处理，例如灭菌。本发明涉及抑制脂质过氧化及其后果的方法。该方法包括给患者服用有效治疗量的式Ⅰ活性试剂。成人每日的平均剂量是每公斤体重0.1-50mg。下面非限制性的实施例对本发明作详细的说明。实施例1制备碘化3-苄基-1-苯基-1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚鎓盐(式Ⅳ的化合物)3.9g(0.01mole)1-苄基-3，4-二氢吡啶并〔3，4-b〕吲哚氢碘酸盐悬浮于40ml甲醇后，加1.1ml(0.01mole)苄胺和2ml(0.027moles)37%甲醛水溶液。搅拌30分钟后，滤集沉淀，甲醇洗涤，空气中干燥，得到本标题化合物3.67g(71%)，mp170-172℃。分别用甲胺或苯胺代替苄胺，可制备如下的化合物碘化3-甲基-1-苯基-1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚鎓盐，mp207-208℃，碘化1，3-二苯基-1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚鎓盐，mp190-192℃。实施例2制备1，3-二苯基-2，3，4，6，7，12-六氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚(式Ⅳ化合物转变成式Ⅰ化合物，式中A和B共同形成一化学键;化合物№07341)。将6.27g(0.012moles)碘化1，3-二苯基-1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚鎓盐悬浮于150ml氯仿之后，加入150ml 1mole/升浓度的碳酸钠水溶液，搅拌该混合物直到固相溶解。两相分开后，用无水硫酸钠干燥氯仿层，减压蒸除氯仿。剩余物用乙醚完全研碎，过滤，空气中干燥，得本标题化合物3.0g(64%)，mp119-120℃(乙醇重结晶后)。用上述同样的方法可由碘化3-苄基-1-苯基-1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕-5-吲哚鎓盐制备3-苄基-1-苯基-2，3，4，6，7，12，-六氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(化合物№07979)，mp134-135℃(自乙醇中重结晶)。实施例3制备(±)-3-〔2-(3，4-二甲氧苯基)乙基〕-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(由式Ⅳ化合物转变成式Ⅰ中A和B代表氢的化合物;化合物№07339)。7.8g(0.02moles)1-苄基-3，4-二氢吡啶并〔3，4-b〕吲哚碘氢酸盐悬浮于100ml甲醇中后，加入3.4ml(0.02moles)2-(3，4-二甲氧苯基)乙胺和4ml(0.05moles)37%甲醛水溶液。室温下将混合物搅拌30分钟后，冰水冷却下分次加入1.8g(0.048moles)硼氢化钠。室温下搅拌此混合液一小时，滤集沉淀，用少量甲醇和大量水洗涤，空气中干燥，得本标题化合物7.7g(82%)，mp108-109℃(自甲醇中重结晶)。分别用甲胺、苄胺、2-氯苄胺，4-氯苄胺，2-苯乙胺、苯胺、4-甲基苯胺或4-氯苯胺作为制备式Ⅳ化合物的胺成分，可制备如下的化合物(化学名称后括弧内的是编码号，熔点和重结晶溶剂)(±)-3-甲基-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07334，mp111-113℃，甲醇)，(±)-3-苄基-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07335，mp172-173℃，乙醇)，(±)-3-(2-氯苄基)-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07706，mp188-189℃，硝基甲烷)，(±)-3-(4-氯苄基)-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07707，mp98-100℃，甲醇)，(±)-1-苯基-3-(2-苯乙基)-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07705，mp75℃，乙醇;含1摩尔溶剂化乙醇)，(±)-1，3-二苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07337，mp249-250℃，乙腈)，(±)-3-(4-甲苯基)-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07708，mp194-195℃，乙醇)，(±)-3-(4-甲氧苯基)-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07709，mp216-218℃，乙腈)，(±)-3-(4-氯苯基)-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚(№07704，mp152-154℃，甲醇)。权利要求1.制备通式Ⅰ的新的嘧啶并[1′，6′∶1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物的方法，式中R代表C1-C4烷基或任选取代的芳基(C1-C4烷基)，或任选取代的芳基；A和B代表α-位氢；或A和B共同代表一个化学键，其特征在于式Ⅱ的1-苄基-3，4-二氢吡啶并[3，4-b]吲哚化合物在过量甲醛的存在下与基本等摩尔量的式Ⅲ的胺反应，当所述吲哚为其碱形式时，式Ⅲ的胺为盐，得到式Ⅳ的嘧啶并[1′，6′∶1，2]吡啶并[3，4-b]-5-吲哚盐式中X-代表阴离子，R的定义同上，然后a)用碱处理得到的式Ⅳ化合物，得到式Ⅰ化合物，式中R的定义同上，A和B共同形成一个化学键；或b)如果不需要分离出式Ⅳ的化合物时，则用复合金属氢化物处理式Ⅳ化合物，得到式Ⅰ化合物，式中R的含义同前，A和B代表α-位氢。2.按照权利要求1的方法，其特征在于，式Ⅱ化合物与式Ⅲ化合物的反应是于室温下在至少2摩尔当量的甲醛存在下进行。3.按照权利要求1的方法，其特征在于，用复合金属氢化物对式Ⅳ的亚铵盐进行还原反应时，是在0℃下用至少一摩尔当量的硼氢化钠。4.按照权利要求1的方法，其特征在于制得式Ⅰ的新的消旋的顺式-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚衍生物，式中R代表C1-4烷基或任选取代的芳基(C1-4烷基)或任选取代的芳基，A和B代表α-氢。5.按照权利要求1的方法，其特征在于制得(±)-3-苄基-1-苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚。6.按照权利要求1的方法，其特征在于制得(±)-1，3-二苯基-1a，2，3，4，6，7，12，12ba-八氢嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚。7.按照权利要求1的方法，其特征在于制得新的1，2，3，4，6，7-六氢-12H-嘧啶并〔1′，6′1，2〕吡啶并〔3，4-b〕吲哚鎓盐衍生物，式中R为C1-4烷基，或为任选的取代的芳基(C1-4烷基)，或任选的取代的芳基;X-代表阴离子。8.按照权利要求1的方法，其特征在于，将作为有效成分的有效治疗量的式Ⅰ化合物与药物可接受的助剂混合，式中，R代表C1-4烷基，或任选取代的芳基(C1-4烷基)，或任选的取代的芳基;A和B代表a-位氢;或A和B共同成为化学键。全文摘要本发明涉及新的式I的嘧啶并[1′，6′1，2]吡啶并[3，4-b]吲哚衍生物的制备方法。式中R代表C文档编号C07D471/04GK1071926SQ9211246公开日1993年5月12日 申请日期1992年10月23日 优先权日1991年10月31日发明者G·多马尼, I·述恩, C·萨恩塔, B·西格达斯, L·斯仆尼, E·卡帕蒂, Z·佐母巴塞伊, A·格耳, K·索默尔, Z·森体尔迈, S·萨博, C·小萨恩塔, M·比哈里, F·特理叔乐, B·凯斯, E·帕罗斯, A·萨卡蒂, M·包多, J·拉泽, E·拉皮兹, M·皮里奥尼兹 申请人:格德昂·里查德化学工厂股份公司