稠合双-(3，4-二氢-1-吡啶基)甲烷及其在药物制剂制备中的应用的制作方法

专利名称：稠合双-(3，4-二氢-1-吡啶基)甲烷及其在药物制剂制备中的应用的制作方法技术领域：本发明涉及稠合双-(3，4-二氢-1-吡啶基)甲烷及其在制备对治疗慢性炎症病变、溃疡性结肠炎与节段性回肠炎用的药物制剂及有抗增生作用制剂中的应用。所述化合物有下列通式Ⅰ 式中，A为苯并基或噻吩并基;R2及R3分别各为氢或(C1-C5)烷基，或者与其所连碳原子一起构成5节或6节碳环;R11为(C1-C4)烷基、卤素(F、Cl、Br、I)、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、硫甲基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的R11取代基共同构成-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;当A为苯并基时，m为0、1、2或3，而当A为噻吩并基时，则为0、1或2;而且D为式Ⅰa所示的一个基团 其中，B为一个苯并基或噻吩并基;R1为氢、(C1-C10)烷基、苯基、苯基(C1-C5)烷基、(C1-C4)烷氧基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基)，R5为氢、(C1-C4)烷基或羟甲基;R6及R7分别各为氢或(C1-C5)烷基，或者共同与其所连碳原子一起构成一个5节或6节碳环;R12为(C1-C4)烷基、卤素(F、Cl、Br、I)、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、硫甲基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的R12取代基共同构成-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;以及当B为苯并基时，n为0、1、2或3，而当B为噻吩并基时，则为0、1或2;本发明还涉及该化合物的药物学可接受的无机酸盐或有机酸盐。对于由R2与R3同其所连碳原子所构成的碳环，或由R6与R7同其所连碳原子所构成的碳环，须首先理解为5节或6节饱和碳环。下面将其中D为式Ⅰa所示基团的式Ⅰ所示化合物，作为式Ⅷ所示的化合物。 其中R5为氢的式Ⅷ化合物，形成式Ⅷa及Ⅷb的互变异构体， 其中R5同样为氢。式Ⅰ或式Ⅷ的定义也包括所述的互变异构体。Kober，Jeno在SzegediTonarkepzoFoiskolaTud.Kozl.1975，第145-153页中(参见Chem.Abstr.87;134980Z)记述了通式Ⅷ的化合物及其制备方法。 其中R1、R2、R3、R5、R6及R7为氢，且取代基A与B为 基团。但该论著中未说明这种化合物的生理作用。在欧洲专利申请288048中，通式Ⅰ所示的化合物被描述为具有保护心脏及/或脑的作用。按本发明，式Ⅷ中的下列化合物尤为重要;-)化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C10)烷基、苯基(C1-C5)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基)，R11及R12分别各为(C1-C4)烷基、羟基、(C1-C4)烷氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的R11或R12共同构成-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;-)化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C10)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基);R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3和/或R6与R7同各自所连的碳原子一起构成一个5节或6节碳环;R11及R12分别各为羟基、(C1-C4)烷氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;-)尤其是那些化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C6)烷基或-NHCOCH3及/或R5为氢、甲基或羟甲基及/或R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3和/或R6与R7同各自所连的碳原子一起成为一个5节或6节碳环及/或R11及R12分别各为羟基、甲氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-。尤其强调的化合物是;-)其中R1与R5为氢，及/或其中R2、R3、R6及R7为氢，或者其中R2与R3或R6与R7各共同为-(CH2)4-;尤其是化合物，其中A及B分别各为一个噻吩并基，首先是2，3-噻吩并基，尤其是未取代的噻吩并基，或者是化合物-)其中A及/或B为一个苯并基，其中m或n为2，优先的是苯并基上的两个取代基R11及/或R12处于基团A或B各连接点的间位或对位上，而优选地这些取代基R11及R12各自分别为羟基、(C1-C4)烷氧基(首先为甲氧基)或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-CH2-O-或-O-CH2-O-。须强调的化合物是，其中R11和R12为甲氧基。本发明有效化合物的实例列于下面各表中，主要的是化合物A 及其药物学可接受的盐。该化合物可按本身已知的方法(例如按EP288048)来制备。形成盐的合适的酸，例如为盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、丙酸、丁酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、乳酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、苯甲酸、肉桂酸、抗坏血酸、甲磺酸。本发明的主题是所述化合物在制造供治疗慢性炎症病变、溃疡性结肠炎与节段性回肠炎的药剂和具抗增生作用药剂中的应用。该化合物的作用可用它对非选择性阳离子通道(UKK)的阻断来解释。慢性支气管性哮喘的病理学，是以活化炎性细胞所促成的炎症病变为基础(BARNES，1987;SEIFERTundSCHULTZ，1991)。受体调节的活化炎性细胞(例如嗜中性粒细胞及肥大细胞或其恒久细胞谱系HL-60细胞或者易致敏的，也即负荷γ-球蛋白E的RBL-细胞)，不受刺激兴奋剂(例如内皮素(Endothelin)、PAF、白三烯(Leukotriene)、化学趋动性的肽fMLP或抗致敏肥大细胞的抗原)，通过非选择性阳离子通道(UKK)的阻断剂而抑制(RINK，1990)。细胞外的钙经这些通道到达细胞内，这对受体参与细胞活化持续进行所必需的(PUTNEY，1990)。如果这种钙供给中断，则炎性细胞的活化受阻抑。常用的二氢吡啶类或苯烷基胺类钙拮抗药既不阻滞UKK，也不抑制炎症病变(WELLS等，1986)。用GRYNKIEWICZ等(1985)所述的方法，荧光定量在负荷Fura-2的细胞中胞质的钙离子浓度动力学，作为细胞活化的量度或以UKK阻断剂对细胞活化阻抑的量度。这种现有方法已证明是本发明范围内寻找UKK阻断剂的可靠筛选方法。所谓的官能性THAPSIGARGIN抑制，适于用来特异表征非选择性阳离子通道阻断剂。THAPSIGARGIN是一种由THASTRUP等(Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)，87，2466-2470，1990)所述的促肿瘤生长物质，它有选择地而不可逆地阻抑细胞间的Ca2+-ATPase的，IP3-敏感的Ca2+-贮存库。所以，Ca2+贮存库迅速排空。正如J.PUTNEY(Calcium，11，611-624，1990)所述，该代谢库的排空，表明了在细胞膜中对开放非选择性阳离子通道的生理刺激。其结果是，Na+和Ca2+大量流入细胞中。基于这些性质，Thapsigargin适宜于作为与促进剂和IP3-无关的，非选择性阳离子通道开启的间接的激化剂。在本发明范围内，成功地在HL60细胞(人白血病细胞)、海马及皮层神精元细胞上，以及在RBL-细胞(大鼠嗜碱性淋巴瘤细胞)上进行过非选择性阳离子通道的Thapsigargin刺激，从而证实了在上述各细胞中，有这些通道存在。在细胞增殖和肿瘤生长时，胞质的Ca2+浓度([Ca2+]i)起着重要作用(概要见L.R.ZACHARSKI，Journal of Medicine 19;145-177，1988)。尤其是那种经以连续的肌醇三磷酸盐(IP3)-调节使受体活化而刺激的Ca2+向细胞内流入，这应当对致肿瘤基因细胞的增殖具有决定性意义(U.KIKKAWA及Y.NISHIZUKA，Ann.REV.CELL.BIOL.2;149-178，1986)。此机理对形成转移灶和“多重抗药性(Multi-Drug-Resistance)”也起一定作用。(概要见上述L.R.ZACHARSKI的论著。)J.Med.19;145-177，1980。这一假说由下列事实所支持;Thapsigargin作为非选择性阳离子通道(UKK)的间接刺激物，既导致细胞中Ca2+超负荷，也是一种高度有效的促肿瘤生长物质。(V.THASTRUP等，Proceedings of the NATL.Acad.Sci(USA)87∶2466-2470，1990.)阻断Ca2+经由UKK流入，导致细胞间Ca离子浓度的正常化，从而导致对肿瘤生长等的阻抑。常规的钙拮抗剂，并不阻断这种UKK。现已意外地确证的是，本发明化合物能阻断钙经由UKK向细胞内流入。正如S.H.MURCH等(Lancet339;381-385，1992.2.15.)所指出的那样，内皮素(Endothelin)I对诸如溃疡性结肠炎与节段性回肠炎之类炎性肠道疾病起着重要作用。借助免疫组织化学法可以确定，在粘膜下层区域患节段性回肠炎的病人，在大肠上皮系膜固有层区域内患溃疡性结肠炎的病人，有着比正常健康人明显大大提高的内皮素I浓度。假定Endothelin的局部堆积，引起大量的血管痉挛，随之引起并发微梗塞和连续扩散性局部缺血，这些都被认为是上述疾病的真正原因。内皮素的致血管痉挛效应以脉管肌细胞中Ca2+超负荷来解释。在此情况下，内皮素起初因IP3所促成的细胞内使游离Ca2+释放，之后大量透膜Ca2+通过二氢吡啶不敏感的通道而进入。(M.S.Simonson等，Clin.Invest.Med.14;499-507，1991;T.Masakai，J.Cardiovasc.Pharmacol.13;Suppl.5，第1-4页，1989;D.W.Hay，R.J.Pharmacol.100;383-392，1990)至于这些通道，所涉及的是非选择性阳离子通道，这些通道也存在于结肠粘膜细胞中，不久前已有记载。(Chr.Siemer及H.Gogelein，Europ.J.Physiol.420;319-328，1992)。内皮素刺激的、活化负荷Fura-2的人白血病细胞(HL 60细胞)，已证明是寻找功能性内皮素拮抗药的适宜筛选模型。按照G.GRYNK-IEWITCZ等(J.Biol.Chem.260;340-3450，1985)，可用分光荧光法来测定HL 60细胞(悬浮液)胞质中胞内Ca2+浓度，并通过内皮素定量细胞活化的程度。刺激经添加0.1μM内皮素来进行，用本发明物质可以受剂量影响地抑制这种刺激。本发明物质的功能性内皮素拮抗作用，通过阻断非选择性阳离子通道而促成。因此，证明RBL-hml细胞上功能性Thapsigargin拮抗作用的方法，也适合用作筛选功能性内皮素拮抗药的方法。试验的进行;为筛选起见，在不含Ca2+的培养基中，用0.1μM Thapsigargin刺激负荷Fura-2的粘着RBL-hm 1-细胞。4分钟后，将细胞外的Ca2+加到1.5mM，并根据Fura-2-荧光，纪录胞质的Ca2+浓度因大量透膜Ca2+经非选择性阳离子通道进入而导致过度增多。这种进入是专有的而且依赖剂量地借助非选择性阳离子通道的阻断来抑制。不论是常规的钙拮抗药，还是刺激IP3-更新的特异拮抗药阻断剂，不能阻抑由Thapsigargin间接引起的透膜Ca2+的进入。本发明的化合物以阻抑UKK而超群。各个粘着RBL-hml-细胞胞质中钙的荧光测定，按照相似于KUDO及OGURA(1986)对神经元细胞所记述的方法来进行。使用的是ZEISS公司产的AXIOVERT35荧光显微镜并结合HAMAMATSU公司产的图象系统，该系统由ICMS图象处理系统、带控制单元的余光摄影机及图象放大器DVS3000组成。胞质Ca2+浓度的动力学，在经Thapsigargin(0.1μM)刺激的细胞活化后，以浓度-时间曲线形式连续记录下来。将两份活化细胞培养物在有和没有10μM待试物质存在时所得曲线加以比较。对曲线下的面积(AUC)进行积分，并作为细胞活化的量度记录下来。被试UKK阻断剂的抑制作用强度，按下列关系式算出;％H＝100－ (AUC抑制×100)/(AUC对照)%H＝钙经由被刺激并为10μM被试物质抑制的非选择性阳离子通道进入的百分阻抑率。AUC抑制＝在刺激剂和10μM起抑制作用的被试物质存在下，所记录的曲线下的面积。AUC对照＝仅在添加刺激剂后所记录的曲线下的面积。上面阐述所引用的文献资料BARNESP.J.，I.W.RODGERundN.C.THOMSONPathogenesisofasthma，in"ASTHMA，basicmechanismsandclinicalmanagement"EDbyP.J.BARNES;ACADEMICPRESS，LONDON，1988GRYNKIEWICZG.，M.POENIEundR.Y.TSIENA new generation of Ca2+-indicators with greatlyimprovedfluorescencepropertiesJ.BIOL.CHEM.260;3440-3450，1985HIDE，M.undM.A.BEAVENCalciuminfluxinaratmastcell(RBL-2H3)lineJ.BIOL.CHEM.26615221-15229，1991KUDO，Y.undA.OGURAGlutamate-inducedincreaseinintracellularCa2+-concentration in isolated hippocampal neuronesBR.J.PHARMACOL.89;191-198，1986PUTNEY，J.W.jr.CapacitativeCalciumentryrevisedCELLCALCIUM11;611-624，1990RINK，T.J.Receptor-mediatedcalciumentryFEBSLETT.268;381-385，1990SEIFERT，R.undG.SCHULTZThesuperoxideformingNADPHoxidaseofphagocytes;AnenzymsystemregulatedbymultiplemechanismREV.PHYSIOL.BIOCHEM.PHARMACOL.，Vol.117，SPRINGERVERL.，1991WELLS，E.，C.G.JACKSON，S.T.HARPER，J.MANNandR.P.EAOYCharacterization of primate bronchoalveolar mast cells Ⅱ，inhibition of histamine LTC4and PGF2αreleasefromprimatebronchoalveolarmastcellsandacomparisonwithratperitonealmastcellsJ.IMMUNOL.137;3941-3945，1986.测量结果给出了在RBL-hm 1细胞中用Thapsigargin刺激(0.1μM Thapsigargin)后，对UKK的百分阻抑率。被试物质的单位浓度为10-5Mol)。RBL-hm1细胞-Thapsigargin(0.1μM)-刺激化合物A %H;44.59化合物B %H;75.75化合物C %H;73.01化合物D IC50;9.1.10-7M根据下列各试验，可证明功能性抗炎效应;使用了粘着有RBL-2H3细胞(一种肥大细胞同族的肿瘤细胞系)的玻璃板。RBL-2H3细胞的培养和粘着，用HIDE与BEAVEN(1991)所述的方法来进行。为使粘着的RBL-2H3细胞致敏，将细胞用1;2000稀释的市购γ-球蛋白E溶液，在室温下对二硝基酚-牛血清清蛋白复合物(DNP-BSA-抗原)保温2小时。接着，洗涤细胞。经添加0.1mlDNP-BSA溶液(10μg/ml)，进行因胞质Ca2+过负荷引起的大量免疫学细胞活化。以相似于KUDO与OGURA(1986)对神经元细胞所述的方法，在各个粘着的RBL-2H3细胞胞质中进行荧光法钙测定，该方法在本说明书上文中已予述及。在这些试验中，对比物质使用(10μM)chromoglycat，对抗原诱导的细胞活化约有50%的阻抑率。在该试验中，表明了上面提及的各化合物呈现可与上述各值相比的%H值。借助于四唑测定法，对各种不同人肿瘤细胞微量培养物进行测试，以确定本发明物质的抗增殖效应，出乎意料之外地表明，所试化合物较对比较物质戊脉安(Verapamil)的作用强5至100倍。 基团。但该论著中未说明这种化合物的生理作用。在欧洲专利申请288048中，通式Ⅰ所示的化合物被描述为具有保护心脏及/或脑的作用。按本发明，式Ⅷ中的下列化合物尤为重要;-)化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C10)烷基、苯基(C1-C5)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基)，R11及R12分别各为(C1-C4)烷基、羟基、(C1-C4)烷氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的R11或R12共同构成-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;-)化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C10)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基);R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3和/或R6与R7同各自所连的碳原子一起构成一个5节或6节碳环;R11及R12分别各为羟基、(C1-C4)烷氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;-)尤其是那些化合物Ⅷ，其中R1为氢、(C1-C6)烷基或-NHCOCH3及/或R5为氢、甲基或羟甲基及/或R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3和/或R6与R7同各自所连展情况。如果以100nM内皮素浓度进行灌注，则冠动脉灌注流量从11ml/min降到5ml/min。该灌注量缩减可因本发明物质而消除。关于Thapsigargin对负荷Fura-2的RBL-hm1细胞的抑制作用或内皮素对负荷Fura-2的HL60细胞的抑制效率，本发明化合物的作用强度明确与Langendorff制剂上所证明的被试物质的血管痉挛效率相关。由此可以得出结论;非选择性阳离子通道的阻断，是基于被试物质的血管解痉挛性内皮素拮抗作用。这些化合物既可肠内给药，也可非肠道给药。口服药的剂量为每次0.1-500mg有效物质，静脉内用药剂量为每次0.05-150mg剂量。所需的治疗性剂量取决于症状和给药途径，可经实验确定。有效化合物的实例，概括于下列各表表1 表2 表3 药物学应用的实施例a)糖锭剂一粒糖衣丸含;通式Ⅰ所示有效物质30.0mg乳糖100.0mg玉米淀粉75.0mg明胶3.0mg硬脂酸镁2.0mg210.0mg制法将有效物质与乳糖和玉米淀粉的混合物，用10%明胶水溶液通过1mm筛孔的筛子制成颗粒，40℃下干燥，再次过筛。将所得颗粒和硬脂酸镁混合并压制。将所得药心以常规方法包上一层由蔗糖、二氧化钛、滑石及阿拉伯树胶在水中的悬浮液的糖衣外壳。制成的糖衣丸用蜂蜡加以抛光。b)片剂通式Ⅰ所示的有效物质30.0mg乳糖100.0mg玉米淀粉70.0mg可溶性淀粉7.0mg硬脂酸镁3.0mg210.0mg制法用可溶性淀粉的水溶液使有效物质和硬脂酸镁成粒，干燥颗粒，并使之与乳糖及玉米淀粉充分混合。然后，将混合物压制成重量为210mg的片剂。c)胶囊剂权利要求1所述的有效物质20.0mg乳糖230.0mg玉米淀粉40.0mg滑石10.0mg300.0mg制法将有效物质、乳糖及玉米淀粉先在混合机中混合，再在破碎机中混合。将混合物再装入混合机中，使之与滑石彻底混合，并用机械将之灌入硬明胶胶囊中。权利要求1.通式Ⅰ所示化合物或其药物学可接受无机酸盐或有机酸盐在制造用于治疗慢性炎症病变、溃疡性结肠炎及节段性回肠炎的药剂及具抗增殖作用药剂中的应用，所述通式Ⅰ为式中，A为一个苯并基或噻吩并基；R2及R3分别各为氢或(C1-C5)烷基，或者两者与其所连碳原子共同构成一个5节或6节碳环；R11为(C1-C4)烷基、卤素(F、Cl、Br、I)、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、硫甲基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的R11取代基共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；当A为一个苯并基时，m为0、1、2或3，而当A为噻吩并基时，则为0、1或2；以及D为式Ⅰa所示的一个基团而且，在式Ⅰa所示基团中，B为一个苯并基或噻吩并基；R1为氢、(C1-C10)烷基、苯基、苯基(C1-C5)烷基、(C1-C4)烷氧基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基；R5为氢、(C1-C4)烷基或羟甲基；R6及R7分别各为氢或(C1-C5)烷基，或者二者与其所连碳原子共同构成5节或6节碳环；R12为(C1-C4)烷基、卤素(F、Cl、Br、I)、羟基、(C1-C4)烷氧基、氨基、硫甲基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或两个相邻的取代基R12共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-；当B为一个苯并基时，n为0、1、2或3，当B为一个噻吩并基时，n为0、1或2。2.按权利要求1的化合物的应用，其中R1为氢、(C1-C10)烷基、苯基(C1-C5)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基);R11及R12分别各为(C1-C4)烷基、羟基、(C1-C4)烷氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;其中R1优先为氢、(C1-C10)烷基或-NHCOX(其中X为(C1-C5)烷基);R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3及/或R6与R7可以与和其相连的碳原子形成一个5节或6节碳环;R11及R12分别各为羟基、(C1-C4)烷氧基、甲基磺酰氧基或甲基磺酰氨基，或者两个相邻取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-或-O-CH2-CH2-O-;其中R1尤其为氢、(C1-C6)烷基或-NHCOCH3及/或R5为氢、甲基或羟甲基及/或R2、R3、R6及R7分别各为氢，或者R2与R3和/或R6与R7与和其相连的碳原子成为一个5节或6节碳环及/或R11及R12分别各为羟基、甲氧基、甲磺酰氧基或甲磺酰氨基，或者两个相邻的取代基R11或R12共同为-O-CH2-O-。3.权利要求1或2所述的任一种化合物的应用，其中R1及R5为氢。4.权利要求1至3中任何一项所述的任何一种化合物的应用，其中，R2、R3、R6及R7为氢。5.权利要求1至3中任何一项所述的任何一种化合物的应用，其中R2与R3或者R6与R7各共同为-(CH2)4-。6.权利要求1至5中任何一项所述的任何一种化合物的应用，其中A及B分别各为一个噻吩并基，优先为2，3-噻吩并基。7.权利要求6所述的任一种化合物，其中A及B为一个未取代的噻吩并基。8.权利要求1至5中任一顶所述任一种化合物的应用，其中A和/或B为一个苯并基，其中m或n为2。9.权利要求8所述任一种化合物的应用，其中，当A和/或B为一个苯并基时，苯并基上的两个取代基R11和/或R12位于基团A或B连接点的间位或对位上。10.权利要求1至5、8及9中任何一顶所述任一种化合物的应用，其中R11及R12分别各为羟基、(C1-C4)烷氧基(优先为甲基)，或者2个相邻的取代基R11或R12共同成为-O-CH2-O-。11.权利要求1所述任一种化合物或其生理上可用盐的应用，所述化合物为全文摘要通式I所示的苯并和噻唑并-3，4-二氢吡啶衍生物及其药物学可接受盐在制造用于治疗慢性炎症病变、溃疡性结肠炎及节段性回肠炎的药剂及具抗增殖作用药剂中的应用，式中D为式Ia所示的一种基团。而且A及B为一个苯并基或噻吩并基；R文档编号C07D221/16GK1082536SQ9310761公开日1994年2月23日 申请日期1993年6月22日 优先权日1992年6月22日发明者迪特里希·阿恩特斯, 沃尔特·洛斯尔, 奥托·鲁斯 申请人:贝林格尔·英格海姆公司