一种从石斛中提取毛兰素的方法

专利名称：一种从石斛中提取毛兰素的方法技术领域：本发明涉及一种从石斛中提取毛兰素的工艺方法。本发明工艺方法是先将石斛干燥粉碎成细粉，再将干燥的石斛细粉适量投入到超临界CO2萃取釜中(这种超临界CO2萃取釜为常规专用设备)，使用无水乙醇，或氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂为夹带剂，所述的夹带剂按石斛细粉投料量的20-55％注入到萃取釜中，以CO2或者丙烷为提取介质，在满足超临界状态的前提条件下，以适当的气体压力和适当的温度条件下萃取1-4小时，收集萃取物，挥干作为夹带剂的有机溶剂，即得毛兰素粗提物；该粗提物再经硅胶柱柱层析分离即得纯度在95％以上的毛兰素。这种提取分离出的毛兰素达供人体注射用标准。为了获得精提取物，再要经过以下工艺步骤，即，将所得的毛兰素粗提物用醋酸乙酯进行溶解，再与100-200目的硅胶混合拌样，挥干醋酸乙酯，得上样样品，称重；另外，称取8至11倍于(以重量计)上样样品重量的100-200目硅胶，用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液溶胀之，除去气泡，随之将其装入层析柱(层析的一种装置)内，保留12小时以上，再将上述制备的上样样品装入层析柱内，随后用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液为洗脱液进行洗脱，洗脱5个柱体积，弃去过柱洗液；然后另用8∶2的石油醚、醋酸乙酯洗脱液进行洗脱，收集含有毛兰素的过柱洗脱液，浓缩结晶，得较纯的毛兰素结晶粉末；再用适量的8∶2的石油醚、醋酸乙酯溶液为冲洗液冲洗该结晶粉末，使之溶解，重结晶，得白色不定形结晶粉末，即毛兰素，其纯度在95％以上，成为精提取物。实施例1将石斛粉碎成30-60目的细粉，在65℃烘箱中进行干燥。再将干燥的石斛细粉适量置于1立升的超临界CO2萃取釜中，设定萃取温度为30-55℃，尤以40℃为最佳，压力以20-50Mpa为宜，26Mpa为佳；以无水乙醇为夹带剂，用注射泵将无水乙醇注入萃取釜中，注入量(以重量计)为石斛投料量的20-55％，一般为50％；待系统达到设定温度后，打开CO2钢瓶阀门，使CO2进入萃取釜，待系统压力平衡后开始萃取，萃取1-3小时，以3小时最好。萃取完毕后收集萃取物，萃取物为墨绿色稠膏物。将萃取物置于水浴锅上，挥干乙醇，即得毛兰素粗提物。取上述粗提物适量，经色谱仪分析检测，结果得知石斛中毛兰素的总含量为1.79克/公斤，本方法萃取得率为90％。实施例2以氯仿为夹带剂，重复实施例1的过程，结果基本一致。根据毛兰素易溶于乙醇、氯仿、丙酮、甲醇等有机溶剂的性质可以得知，以丙酮、甲醇等有机溶剂为夹带剂，本发明从石斛中提取毛兰素同样是可行的。不过，作为夹带剂的有机溶剂在萃取之后是要挥发掉的，因此，从环境保护角度讲，以乙醇为夹带剂是最有利的，而且成本也较低。实施例3将上述所得的毛兰素粗提物用经硅胶柱柱层析分离，即得毛兰素药物，其具体工序为将上述所得的毛兰素粗提物用适量的醋酸乙酯溶解，再与2倍于(以重量计算)毛兰素粗提物的100-200目的硅胶混合拌样，挥干醋酸乙酯，挥干醋酸乙酯后所得之物料即为上样样品，称重。再用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液将约10倍于上述上样样品重量的100-200目硅胶予以溶胀，除去气泡，随之将其装入层析柱(层析的一种装置)内，保留12小时。再将上述制备的上样样品装入层析柱内，随后用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液为洗脱液，洗脱5个柱体积，弃去过柱洗脱液(主要为洗脱的杂质)，然后另用8∶2的石油醚、醋酸乙酯洗脱液洗脱，收集含有毛兰素的过柱洗脱液，浓缩结晶，得较纯的毛兰素结晶粉末。对该结晶粉末再用适量的8∶2的石油醚、醋酸乙酯溶液冲洗、溶解、重结晶即得白色不定形粉末状的毛兰素，其纯度在95％以上。必要时可以重复最后一步，可得到更高纯度的毛兰素。本发明也可以改用丙烷为提取介质。使用本发明方法从石斛中提取毛兰素，与现有的有机溶媒提取方法相比，在本发明中使用的有机溶剂只是作为夹带剂，用量少(仅为投料量的50％左右)，无水乙醇毒性低，而且工艺简单，成本低，对环境污染小。提取的毛兰素可达到供人体注射标准，可单用或与其他药物合用制成供注射用或口服用的乳剂、混悬剂、胶丸剂、滴丸剂等用于治疗肿瘤或用于抑制新生血管形成、收缩血管减少组织血流量等相关疾病的药物。权利要求1.一种从石斛中提取毛兰素的方法，其特征是将干燥石斛细粉投入到超临界CO2萃取釜中，再注入适合超临界萃取的有机溶剂作为夹带剂，通入CO2或者丙烷气体为提取介质，在气体压力为20-50Mpa，温度为30-55℃下进行萃取，经1-3小时萃取后，收集萃取物，挥干有机溶剂，即得毛兰素粗提物。2.一种如权利要求1所述的从石斛中提取毛兰素的方法，其特征在于作为夹带剂的有机溶剂为乙醇或氯仿或丙酮、或甲醇。3.一种如权利要求1所述的从石斛中提取毛兰素的方法，其特征在于作为夹带剂的无水乙醇，其注入量(以重量计)为石斛投料量的20-55％。4，一种如权利要求1所述的从石斛中提取毛兰素的方法，其特征在于作为提取介质CO2气体的压力为20-35Mpa；提取温度为35-45℃；提取时间为1-3小时。5，一种如权利要求1或2或3或4是所述的从石斛中提取毛兰素的方法，其特征为再将所得的毛兰素粗提物用醋酸乙酯进行溶解，再与100-200目的硅胶混合拌样，挥干醋酸乙酯，得上样样品，称重；另外，称取8至11倍于(以重量计)上样样品重量的100-200目硅胶，用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液溶胀之，除去气泡，随之将其装入层析柱(层析的一种装置)内，保留12小时以上，再将上述制备的上样样品装入层析柱内，随后用9∶1的石油醚、醋酸乙酯溶液为洗脱液进行洗脱，洗脱5个柱体积，弃去过柱洗液；然后另用8∶2的石油醚、醋酸乙酯洗脱液进行洗脱，收集含有毛兰素的过柱洗脱液，浓缩结晶，得较纯的毛兰素结晶粉末；再用适量的8∶2的石油醚、醋酸乙酯溶液为冲洗液冲洗该结晶粉末，使之溶解，重结晶，得白色不定形结晶粉末，即毛兰素，其纯度在95％以上。全文摘要本发明涉及一种从石斛中提取毛兰素的方法。本发明包括应用超临界CO文档编号C07C41/34GK1435404SQ0311575公开日2003年8月13日 申请日期2003年3月12日 优先权日2003年3月12日发明者陈立钻, 杨兵勋, 孙继军 申请人:浙江天皇药业有限公司