血红素的提取与纯化方法

专利名称：血红素的提取与纯化方法技术领域：本发明涉及一种生物制品的的生产方法，具体地说是一种血红素的提取与纯化方法。背景技术： 现用的生产血红素的方法丙酮盐酸法，是在动物血液中加入丙酮盐酸水解，过滤除去沉淀物后，再在滤液中加入醋酸钠的碱性溶液处理，静置析出血红素沉淀后，提取后得到血红素结晶，经洗涤干燥后得血红素成品，但这种生产方法所得到的血红素纯度不高。发明内容本发明要解决的技术问题是针对上述不足，研制出一种血红素的提取与纯化方法。本发明的实施方案是(1)将动物鲜血收集到加有抗凝剂的容器内，搅拌均匀后，静置放至血液分层，滤去上层血清，留下血浆备用；(2)在血浆中加入抗氧化剂并搅拌，再加入丙酮盐酸溶液，搅拌水解后过滤，除去沉淀物，留下滤液备用；(3)在备用的滤液中加入碱性溶液调节PH值，使溶液的PH值在3-5之间；(4)在已调节好PH值的上述溶液中加入乙酸钠溶液并搅拌，在有沉淀析出后，静置放至沉淀基本析出，滤去滤液，得到的血红素沉淀物；(5)把得到的血红素沉淀物用乙醇和蒸馏水洗涤，干燥后得到血红素粗品；(6)得到的血红素粗品再用有机溶剂溶解，然后加入含有阳离子表面活性剂的水溶液，得到血红素溶液；(7)将血红素溶液加热，再逐步加入盐酸，并溶液的使PH值在0.5-2.5之间，待有结晶析出后，静置放置到结晶基本析出，滤去滤液，将得到的湿结晶用水洗涤，然后干燥，最后得到血红素精品。本发明的优点是得到的血红素成品纯度高，能产生较好的经济效益。具体实施例方式本发明所述的一种血红素的提取与纯化方法，其生产工艺是将动物鲜血收集到加有抗凝剂柠檬酸三钠的容器内，并使动物鲜血中柠檬酸三钠的重量百分比浓度维持在约1.0％，搅拌均匀后，静置放至血液分层，一般这们阶段需要4-6个小时，然后通过抽滤，滤去上层血清，留下血浆备用。在备用的血浆中加入抗氧化剂亚硫酸氢钠，并使血浆中亚硫酸氢钠的重量百分比浓度维持在约0.2％；并搅拌，然后加入丙酮盐酸溶液，所加的丙酮盐酸的量，以体积比计算是丙酮盐酸的体积是血浆体积的5倍，搅拌，在水解后过滤，除去沉淀物，留下滤液备用。在备用的滤液中加入1N氢氧化钠溶液调节PH值，使滤液的PH值维持在3-5之间。再在已调节好PH值的上述溶液中加入乙酸钠溶液并搅拌，所加的乙酸钠该溶液中的浓度维持在约1.0％，在有沉淀析出后，静置放至沉淀基本析出，滤去滤液，得到血红素沉淀物。把得到的血红素沉淀物用乙醇和蒸馏水洗涤，干燥后得到血红素粗品。上述血红素粗品再用有机溶剂二甲基甲酰胺溶解，然后加入氯化苄基十二烷基二甲胺水溶液，所用的氯化苄基十二烷基二甲胺水溶液中氯化苄基十二烷基二甲胺的百分比浓度为5％，这样就得到血红素溶液。将该血红素溶液在90度下加热约10分钟，随后逐步加入重量百分浓度为20％的盐酸，使之酸化，让溶液的使PH值在处于0.5-2.5之间，待有结晶析出后，静置放置到结晶基本析出，滤去滤液，将得到的湿结晶用水洗涤，然后干燥，最后得到血红素精品。上述的血红素的提取与纯化过程中，动物鲜血中柠檬酸三钠的重量百分比浓度可以在0.8％-1.5％之间；血浆溶液中亚硫酸氢钠的重量百分比浓度可以在0.1％-0.3％；所加入的丙酮盐酸的体积与血浆体积之比在4-6倍之间。所加的乙酸钠在血浆液中的浓度可以在0.8％-1.5％；所用的有机溶剂也可以是二甲基亚砜。阳离子表面活性剂水溶液中阳离子表面活性剂的重量百分比浓度可以在2％-10％之间，所述的阳离子表面活性剂也可以是氯化十八烷基二甲胺。在血红素溶液中酸化用的盐酸重量百分比浓度为15-20％。丙酮盐酸溶液的配制方法是在每百份丙酮中加入2.0-3.5份浓度为6N的盐酸。权利要求1.一种血红素的提取与纯化方法，其生产工艺如下(1)将动物鲜血收集到加有抗凝剂的容器内，搅拌均匀后，静置放至血液分层，滤去上层血清，留下血浆备用；(2)在血浆中加入抗氧化剂并搅拌，再加入丙酮盐酸溶液，搅拌，水解后过滤，除去沉淀物，留下滤液备用；(3)在备用的滤液中加入碱性溶液调节PH值，使溶液的PH值在3-5之间；(4)在已调节好PH值的上述溶液中加入乙酸钠溶液并搅拌，在有沉淀析出后，静置放至沉淀基本析出，滤去滤液，得到的血红素沉淀物；(5)把得到的血红素沉淀物用乙醇和蒸馏水洗涤，干燥后得到血红素粗品；(6)得到的血红素粗品再用有机溶剂溶解，然后加入含有阳离子表面活性剂的水溶液，得到血红素溶液；(7)将血红素溶液加热，再逐步加入盐酸，并溶液的使PH值在0.5-2.5之间，待有结晶析出后，静置放置到结晶基本析出，滤去滤液，将得到的湿结晶用水洗涤，然后干燥，最后得到血红素精品。2.根据权利要求1所述的血红素的提取与纯化方法，其特征在于所加入的抗凝剂为柠檬酸三钠，动物鲜血中柠檬酸三钠的重量百分比浓度控制在0.8％-1.5％；所用的抗氧化剂为亚硫酸氢钠，血浆中亚硫酸氢钠的重量百分比浓度控制在0.1％-0.3％；所加入的丙酮盐酸的体积是血浆体积的4-6倍；用于调节PH值的碱性溶液是1N氢氧化钠溶液；所加的乙酸钠在血浆中的浓度控制在0.8％-1.5％；所用的有机溶剂是二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，阳离子表面活性剂水溶液中阳离子表面活性剂的重量百分比浓度为2％-10％，所述的阳离子表面活性剂是氯化苄基十二烷基二甲胺或氯化十八烷基二甲胺；在血红素溶液中所加盐酸的重量百分比浓度为18-20％；丙酮盐酸溶液的配制方法是在每百份丙酮中加入2.0-3.5份的浓度为6N的盐酸。全文摘要本发明型公开了一种血红素的提取与纯化方法，其生产工艺是动物鲜血在加入抗凝剂后静置分层，留下备用血浆，再在其中加丙酮盐酸溶液，过滤后得待用滤液，在将该滤液调节好pH值后，加乙酸钠溶液，使沉淀析出，滤去滤液，得到血红素沉淀物，经洗涤干燥后得血红素粗品；将该血红素粗品用有机溶剂溶解，再加入阳离子表面活性剂的水溶液，加热后逐步加入盐酸，在析出结晶后，滤去滤液，把得到的结晶洗涤干燥后得到血红素精品。使用本发明生产血红素具有产出的血红素纯度高，经济效益好的特点。文档编号C07F15/00GK1450073SQ0311635公开日2003年10月22日 申请日期2003年4月11日 优先权日2003年4月11日发明者王利忠 申请人:王利忠