一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法

本发明涉及仪器清洗料，尤其涉及一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法。

背景技术：

1、流式细胞仪广泛应用于毒理学、细胞生物学、免疫学以及微生物学等相关领域，已成为众多科研单位不可或缺的仪器设备。分析型流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。流动室和液流系统主要负责将细胞或者颗粒悬液样品通过鞘液约束，使得细胞或颗粒逐一流过激光聚焦的检测点，产生多个不同参数信号，被检测系统收集，从而进行后续分析。

2、对于包括流动室在内的进样端部件而言，洁净度非常重要，很多流式厂商都建立了自己自动清洗程序以方便用户使用，如agilent novocyte、bd facsvia、accuri c6plus、thermofisher attune nxt、amnis flowsight、中生sinocyte、flowcyte等等。

3、novocyte型流式细胞仪因其具备进样体积参数停止条件选项，所以在浓度定量方面应用广泛。无论是哺乳动物细胞系、免疫细胞，亦或是水体或土壤提取微生物，蓝藻，甚至噬菌体病毒等，都有利用novocyte型流式细胞仪体积参数进行浓度定量的需求。然而，虽然每次实验后，仪器管理员都会按厂家说明及时进行自动清洗及冲洗，但是在进行环境水体低浓度微生物定量分析时，结果仍会和预期值不符甚至会明显有悖于对照组目标值。在此情况下，即便对仪器进样超纯水，仍会检测出一定量的颗粒数。基于此种发现推测本现象因进样端（包括进样针、进样管和流动室）残留物所致，进样端有可能已粘附生长生物膜，每次进样，都会随样品液释放出部分颗粒，从而导致在测试过程中检测到一些非样品信号。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明的目的在于提供一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法。本发明提供的进样端清洗方法能尽可能地去除残留，为样品检测提供一个相对更“干净”的检测微环境。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，包括以下步骤：

4、对自动清洗类型流式细胞仪依次进行预清洗、正式清洗和复清洗；所述预清洗与复清洗所使用清洗液均为迪康decon 90清洗剂；所述正式清洗所用清洗液为次氯酸钠溶液。

5、优选地，所述迪康decon 90清洗剂的体积分数独立地为5~10%。

6、优选地，所述预清洗的次数为5次。

7、优选地，所述复清洗的次数为5次。

8、优选地，以活性氯计，所述次氯酸钠溶液的质量分数为0.5~1.0%。

9、优选地，所述正式清洗的次数为15次。

10、优选地，所述次氯酸钠溶液在使用前经0.22μm滤膜过滤。

11、优选地，所述预清洗、正式清洗和复清洗的每次进样为100μl，样本流速为66~120μl/min，样本流直径为16.8~22.7μm。

12、优选地，所述预清洗的时间为4.2~7.5min，所述正式清洗的时间为12.5~22.5min，所述复清洗的时间为4.2~7.5min。

13、本发明提供了一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，包括以下步骤：对自动清洗类型流式细胞仪依次进行预清洗、正式清洗和复清洗；所述预清洗与复清洗所使用清洗液均为迪康decon 90清洗剂；所述正式清洗所用清洗液为次氯酸钠溶液。

14、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

15、本发明旨在建立一种新的进样端清洗方法，尽可能地去除残留，为样品检测提供一个相对更“干净”的检测微环境，本发明中，所述预清洗与复清洗所使用清洗液均为迪康decon 90清洗剂，迪康decon 90清洗液是一种由优质阴离子与非离子表面活化剂、稳定剂、非磷酸盐去垢剂、碱性捕获试剂混合而成的水基乳剂，属于碱性浓缩液(ph值为13+)，不包含酶、乙二胺醋酸/次氮基川三醋酸(edta/nta)和含氯漂白剂，对于粘附难清洗物质效果好，所述正式清洗所用清洗液为次氯酸钠溶液，次氯酸钠溶液具备较强的氧化性，对于有机分子皆有氧化破坏作用；通过预清洗基本清除悬浮颗粒并且附着在进样端，使进样端的生物膜发生活化，正式清洗可以有效地去除进样端内壁附着物，复清洗则使破碎悬浮的生物膜碎片颗粒被充分冲洗去除并且背景颗粒数及荧光值达最低水平。通过本发明新的清洗方法，使得细胞仪处于最好的工况状态下。实施例的数据可见，经过本发明方法清洗后，仪器进样端洁净度明显提升，杂散信号无论是数量还是强度均明显下降。

技术特征：

1.一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述迪康decon 90清洗剂的体积分数独立地为5~10%。

3.根据权利要求1或2所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述预清洗的次数为5次。

4.根据权利要求1或2所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述复清洗的次数为5次。

5.根据权利要求1所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，以活性氯计，所述次氯酸钠溶液的质量分数为0.5~1.0%。

6.根据权利要求1或5所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述正式清洗的次数为15次。

7.根据权利要求1所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述次氯酸钠溶液在使用前经0.22μm滤膜过滤。

8.根据权利要求1所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述预清洗、正式清洗和复清洗的每次进样为100μl，样本流速为66~120μl/min，样本流直径为16.8~22.7μm。

9.根据权利要求1或8所述的自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，其特征在于，所述预清洗的时间为4.2~7.5min，所述正式清洗的时间为12.5~22.5min，所述复清洗的时间为4.2~7.5min。

技术总结本发明提供了一种自动清洗类型流式细胞仪进样端清洗方法，属于仪器清洗料技术领域。本发明对自动清洗类型流式细胞仪依次进行预清洗、正式清洗和复清洗；所述预清洗与复清洗所使用清洗液均为迪康Decon 90清洗剂；所述正式清洗所用清洗液为次氯酸钠溶液。本发明通过预清洗基本清除悬浮颗粒并且附着在进样端，使进样端的生物膜发生活化，正式清洗可以有效地去除进样端内壁附着物，复清洗则使破碎悬浮的生物膜碎片颗粒被充分冲洗去除并且背景颗粒数及荧光值达最低水平。通过本发明新的清洗方法，使得细胞仪处于最好的工况状态下。技术研发人员：饶子渔,康跃惠受保护的技术使用者：中国科学院生态环境研究中心技术研发日：技术公布日：2024/7/18