一种用于血栓的多指标定量检测试剂卡的制作方法

本技术涉及生物技术诊断，特别涉及一种用于血栓的多指标定量检测试剂卡。

背景技术：

1、血栓是一种起病隐匿、发病突然、致死致残率较高的疾病，可见于几乎各临床科室，其病理过程涉及血管内皮、凝血和纤溶三大系统。急性出血性凝血功能障碍指血液凝结能力受到急性损害的病理生理状态。出血是其最常见的临床表现，也可仅表现为凝血指标异常而无出血。由于止血机制复杂，某些情况下可同时存在血栓形成。

2、凝血七项以及凝血因子筛查基本属于血栓形成后的被动检测，对于血栓形成前却并不敏感。相比于发现血栓后的溶栓治疗，在血栓形成前及时发现血栓风险，并及时采取措施显得尤为重要。

3、《急性出血性凝血功能障碍诊治专家共识(2020)》明确指出，凝血酶-抗凝血酶复合物(tat)、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物(pic)、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂1复合物(tpaic)、血栓调节蛋白(tm)是反应机体血管内皮、凝血和纤溶系统早期改变的有效指标，适用于各临床学科血栓高危人群血栓早期诊断、风险评估和治疗疗效评价及健康人群血栓风险筛查。

4、目前新血栓四项标志物的检测手段十分有限。虽然少数公司开发了磁珠法化学发光免疫产品，但是存在价格昂贵，效率不高，多个指标检测需要各自独立的定标和质控，操作繁琐。相对于已有产品，多指标定量检测试剂的联检在提高效率、降低成本、简便操作等方面具有明显的优势。

5、凝血酶-抗凝血酶复合物(tat)是凝血酶与抗凝血酶ⅲ(atⅲ)1:1结合形成的复合物，可作为凝血酶生成的分子标志物，可灵敏地反映凝血系统的激活程度，直接证实凝血系统的活化，反映凝血酶水平。凝血酶生成是静脉血栓形成的关键环节，是凝血系统激活的标志物。凝血酶在血液中半衰期仅数秒，直接测定困难，因此可以检测凝血酶与抗凝血酶所形成的复合物tat，其半衰期为3～15min。tat有重要的临床检测意义，tat升高可早期预测血栓形成和复发风险，早期预测dic风险。

6、纤溶酶-α2抗纤溶酶复合物(pic)是纤溶酶与抑制因子α2抗纤溶酶以1:1结合形成的复合物，是直接反映纤溶系统激活程度的生物标志物。糖基化的纤溶酶原以封闭构象存在于血流中，不能被纤溶酶原激活剂激活。当糖基化的纤溶酶原结合纤维蛋白或者细胞表面时，会以开放的构象存在。游离的纤溶酶从表面释放出来后，几乎同时与蛋白酶抑制剂α2抗凝血酶形成不可逆的复合物发生中和。它们的相互作用速度是目前已知的最快的作用之一。活化的纤溶酶半衰期极短，体内无法直接测到，而纤溶酶可以和纤溶酶抑制剂形成复合物pic，pic血浆半衰期约6h，可直接测定。纤溶激活程度因弥散性血管内凝血(dic)基础疾病不同而有所差异，且与dic分型密切相关，可用于早期预测高凝状态，也可用于溶栓治疗监测。

7、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂1复合物(tpaic)是当血管内皮细胞损伤时，组织型纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活抑制物-1同时释放到血液中，1:1结合形成的复合物，tpaic能够反映内皮细胞的损伤，是纤溶系统激活的分子标志物。tpaic对dic、动静脉血栓均有提示作用，是静脉血栓栓塞症(vein thromboembolism,vte)及心梗的风险指标，此外该指标对dic诊断具有重要价值，血浆水平升高提示dic可能、血管内皮细胞损伤、血栓形成。

8、血栓调节蛋白(tm)为内皮细胞表面的凝血酶受体，与凝血酶结合后可降低凝血酶的凝血活性，而加强其激活蛋白c的活性。由于被激活的蛋白c具有抗凝作用，因此tm是使凝血酶由促凝转向抗凝的重要的血管内凝血抑制因子，可作为内皮细胞损伤的标志物。当内皮细胞受损或功能障碍时，tm表达降低，部分tm被蛋白酶水解至血浆中。tm升高提示血管内皮损伤，可见于脓毒症、肾功能受损、急性肺损伤等。

9、综上所述，单项生物标志物只能从一个侧面反映部分疾病信息，并不能全面准确地评估血栓的病因、病理和病理生理变化。因此，有必要提供一种多指标的检测试剂卡以提高血栓诊断的准确性和特异性，以解决现有检测的缺陷。

技术实现思路

1、为解决上述技术问题，本实用新型的目的在于提供一种用于血栓的多指标定量检测试剂卡，其检测的指标包括凝血酶-抗凝血酶复合物、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂1复合物和血栓调节蛋白，实现了多项血栓指标的联合检测，可以在15分钟内对上述四个指标进行定量检测，结果准确，适合在医院门急诊及基层医疗机构使用。

2、为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本实用新型通过以下技术方案实现：

3、一种用于血栓的多指标定量检测试剂卡，该检测试剂卡包括底板以及叠设于底板上的样品垫、结合垫、检测垫和吸样垫，其中，样品垫和结合垫设置于检测垫的一侧，吸样垫设置于检测垫的另一侧；所述多指标包括凝血酶-抗凝血酶复合物、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂1复合物、血栓调节蛋白四个指标，所述结合垫上包含有时间分辨荧光微球或量子点荧光技术标记的针对所述四个指标的特异性检测抗体；所述检测垫上分布有四条检测线和一条质控线，所述四条检测线分别包被用于捕捉所述四个指标的特异性捕捉抗体，所述质控线包被能够与特异性检测抗体结合的半抗原或抗体；

4、所述检测试剂卡还包括外壳，所述样品垫、结合垫、检测垫、吸样垫和底板安装于所述外壳中；所述外壳的对应于所述样品垫的位置设有加样孔；所述外壳中还设有可转动的转片，所述转片与一拨动杆连接，该拨动杆位于所述外壳的外侧；拨动所述拨动杆使所述转片转动，以能够露出所述加样孔或使转片遮盖所述加样孔。

5、进一步的，所述外壳上还设有检视窗。

6、进一步的，所述检视窗对应所述四条检测线和一条质控线的上方设置。

7、进一步的，转片的形状为四分之一圆形。

8、进一步的，所述转片的顶端设有凹槽，该凹槽中通过弹簧连接有按钮；所述外壳的侧边设有与所述按钮配合的卡口，当转片通过转动遮盖所述加样孔时，所述按钮卡设于外壳的卡口中。

9、进一步的，所述结合垫的数量为四个，分别包含时间分辨荧光微球或量子点荧光技术标记的针对所述四个指标的特异性检测抗体。

10、进一步的，所述四条检测线和一条质控线相互平行且沿着所述检测垫的长度方向依次设置。

11、更进一步的，所述质控线靠近所述吸样垫；所述四条检测线位于所述质控线的同侧。

12、进一步的，所述样品垫和结合垫为玻璃纤维垫或无纺布垫，所述检测垫的材质为硝酸纤维素膜，所述吸样垫的材质为吸水滤纸，所述底板为pvc板。

13、进一步的，所述检测试剂卡还包括滤血垫，所述样品垫、结合垫、滤血垫、检测垫、吸样垫依次搭接于所述底板之上。

14、本实用新型的有益效果：

15、本实用新型检测的指标包括凝血酶-抗凝血酶复合物、纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物、组织型纤溶酶原激活物-抑制剂1复合物和血栓调节蛋白；本实用新型的检测试剂卡可实现该多项血栓指标的联合检测，避免单一指标不能全面准确地评估血栓的病因、病理和病理生理变化的局限性，可以在15分钟内对上述四个指标进行定量检测，且操作简单，灵敏度高，特异性强，结果准确，适合在医院门急诊及基层医疗机构使用。

16、本实用新型在使用时，通过拨动杆的转动使转片旋转，从而露出或遮盖住外壳上的加样孔，以减少对加样孔中的样本的不必要的接触和污染。此外，在加样后，拨动杆伸出于外壳，可在该检测试剂卡插入检测装置时用于限位，可实现对多个检测试剂卡的检测位置的统一，避免检测位置不统一所导致的检测结果不准确的问题。